способ микроклонального размножения ольхи черной in vitro

Классы МПК:A01H4/00 Разведение растений из тканевых культур
A01G7/00 Ботаника, общие вопросы
A01G23/00 Лесное хозяйство
Автор(ы):, , ,
Патентообладатель(и):Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Воронежская государственная лесотехническая академия" (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2012-12-07
публикация патента:

Изобретение относится к области биотехнологии растений, в частности к микроклональному размножению in vitro. В способе культивируют каллусные культуры из стерильных эксплантов стеблевых сегментов, листьев, листовых черешков. Используют базовые питательные среды Мурасиге-Скуга, Вуди Плант Медиум с содержанием и соотношением регуляторов роста: 6-бензиламинопурин - 0,2-1,5 мг/л, способ микроклонального размножения ольхи черной in vitro, патент № 2515385 -нафтилуксусная кислота - 0,2-0,5 мг/л, индолилмасляная кислота - 2 мг/л. Далее проводят адаптацию при освещенности 2000 люкс и питательном режиме регенерантов в теплице с получением посадочного материала для лесных культур. Способ позволяет получать посадочный материал с высокими наследственными свойствами. 2 табл.

Формула изобретения

Способ микроклонального размножения ольхи черной in vitro, включающий культивирование каллусных культур из стерильных эксплантов стеблевых сегментов, листьев, листовых черешков, используя базовые питательные среды Мурасиге-Скуга, Вуди Плант Медиум с содержанием и соотношением регуляторов роста: 6-бензиламинопурин - 0,2-1,5 мг/л, способ микроклонального размножения ольхи черной in vitro, патент № 2515385 -нафтилуксусная кислота - 0,2-0,5 мг/л, индолилмасляная кислота - 2 мг/л, и дальнейшей адаптацией при освещенности 2000 люкс и питательном режиме регенерантов в теплице, и получением посадочного материала для лесных культур.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области биотехнологии растений.

Ольха черная (Alnus glutinosa (L.) Gaertn.) перспективна для лесного хозяйства страны, она способна выдерживать длительное затопление и произрастать на переувлажненных экотопах там, где другие древесные породы расти не могут, способна произрастать на бедных и бесплодных сухих почвах (гравий, песок) с близко залегающими грунтовыми водами, способна обогащать почву азотом через опад и корневые выделения (до 780 кг/га за 5 лет). Благодаря этому качеству черная ольха при совместных посадках с более ценными породами оказывает на них положительное влияние. Уникальна биосферная роль ольхи черной в болотной экосистеме, что делает ее привлекательной для экологов, лесоводов, селекционеров. Незаменима она при разработке моделей устойчивого и ускоренного повышения продуктивности насаждений, при плантационном лесоводстве для ускоренного получения древесины.

В связи с важностью выращивания селекционных форм и сортов ольхи черной существует необходимость получения посадочного материала с высокими наследственными свойствами. В уровне техники не выявлен способ решения поставленной задачи.

Предлагаемое изобретение решает задачу создания наиболее эффективного способа размножения ольхи черной - микроклональное размножение in vitro.

Сущность изобретения заключается в следующем.

Способ микроклонального размножения ольхи черной in vitro включает культивирование каллусных культур из стерильных эксплантов стеблевых сегментов, листьев, листовых черешков, используя базовые питательные среды Мурасиге-Скуга (MS), Вуди Плант Медиум (WPM) с содержанием и соотношением регуляторов роста: 6-бензиламинопурин (6-БАП) - 0,2÷1,5 мг/л, способ микроклонального размножения ольхи черной in vitro, патент № 2515385 -нафтилуксусная кислота (НУК) - 0,2÷0,5 мг/л, индолилмасляная кислота (ИМК) - 2 мг/л, и дальнейшей адаптацией при освещенности 2000 люкс и питательном режиме регенерантов в теплице, и получением посадочного материала для лесных культур.

Осуществляют способ следующим образом.

Для каллусных культур эксплантами служат стеблевые сегменты без почек, листья, листовые черешки.

В качестве базовых сред используют MS или WPM и их модификации с различным содержанием и соотношением регуляторов роста (6-БАП, ИУК, НУК, ИМК). При прямой регенерации используют 6-БАП (0,2-1,5 мг/л), индукции множества почек и побегов - 6-БАП в сочетании с НУК (0,2-0,5 мг/л). Каллусные культуры получают с помощью ИМК (2 мг/л) в сочетании с 6-БАП (0,2-0,5 мг/л). Исключение ИМК в дальнейшем и увеличение концентрации 6-БАП до 1 мг/л используют для получения морфогенных каллусных культур. Для пролиферации каллуса ольхи черной в питательную среду вносят ИМК (2 мг/л) в сочетании с 6-БАП (0,2-0,5 мг/л). Развитие, удлинение побегов достигается согласно следующим приемам: солевой состав питательной среды разбавляют в 2-3 раза, дополняют ее активированным углем (10-20 г/л), обрабатывают базальные концы побегов раствором ИМК (25 мг/л в течение 10-15 минут).

Адаптационный этап развития регенерированного материала предусматривает следующие варианты:

1 - лабораторный (открытые пробирки в течение 3-5 дней, затем высаживают в грунт стаканчики, доращивают в микротеплице с последующей высадкой в открытый грунт).

2 - прямая высадка в открытый грунт с использованием временного укрытия (пленочные микротеплицы).

В первом варианте экологические условия контролируемые (t 25-26°C, освещенность 2000 люкс при 16-часовом фотопериоде); во втором - естественные условия освещения и температуры. Повышенная влажность достигается поливом и пленочным укрытием.

Эффективность каллусогенеза разных органов ольхи на питательной среде MS+ИМК (2 мг/л) отражена в таблице 1.

Таблица 1
ЭксплантыЭффективность каллусогенеза
Количество культур Темп каллусогенеза (сутки) Объем ткани (см3)
общееС каллусом, %
Ольха черная
стеблевые сегменты 1510021 1,5-2
черешки 1040,030 следы
листья 119,9 30следы

В таблице 2 отражена эффективность морфогенеза у культур различного происхождения (каллусные, стеблевые сегменты) на среде WPM в зависимости от содержания БАП мг/мм:

Таблица 2
БАП мг/ммОльха черная
каллусная культура почки
общее количествоспособ микроклонального размножения ольхи черной in vitro, патент № 2515385 общее количество способ микроклонального размножения ольхи черной in vitro, патент № 2515385
0,1 5-10 -
0,2 5-10 -
0,5 61/16,610 4/40,0
0,6 52/40,0 107/70,0
1,05- 102/20,0
1,55- 10-
2,0 -- 10-

Продолжительность жизни морфогенных культур ольхи по сравнению с другими лиственными (береза) значительно ниже и ограничена 2-3 неделями.

Для их сохранения необходимо повторное рекультивирование. В противном случае независимо от происхождения в культурах отмечен интенсивный рост каллусной ткани, как правило, подавляющий развитие побега.

Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2515385

patent-2515385.pdf

Класс A01H4/00 Разведение растений из тканевых культур

способ регенерации микропобегов hyssopus officinalis l. в условиях in vitro -  патент 2529837 (27.09.2014)
способ получения лапчатки белой (potentilla alba) -  патент 2525676 (20.08.2014)
способ получения форм картофеля in vitro, устойчивых к возбудителям фитофтороза и альтернариоза -  патент 2524424 (27.07.2014)
способ размножения цимбидиума in vitro -  патент 2523604 (20.07.2014)
способ микроклонального размножения подвоев яблони -  патент 2523305 (20.07.2014)
способ длительного хранения in vitro растений осины -  патент 2522823 (20.07.2014)
способ микрочеренкования винограда in vitro -  патент 2521992 (10.07.2014)
способ получения растений-регенерантов земляники (in vitro) -  патент 2516341 (20.05.2014)
способ введения в культуру клеток льна многолетнего -  патент 2506741 (20.02.2014)
способ поверхностной стерилизации эксплантов и апикальных почек земляники садовой, винограда, хурмы сорта "королек" in vitro -  патент 2490871 (27.08.2013)

Класс A01G7/00 Ботаника, общие вопросы

способ подкормки растений, выращиваемых в защищенном грунте -  патент 2527065 (27.08.2014)
способ выращивания эхинацеи пурпурной в защищенном грунте -  патент 2524085 (27.07.2014)
устройство для магнитно-импульсной обработки растений -  патент 2523162 (20.07.2014)
способ обработки садовых деревьев и винограда для защиты от низких температур и весенних заморозков -  патент 2522522 (20.07.2014)
способ повышения продуктивности яровых одно- и многокомпонентных фитоценозов -  патент 2520683 (27.06.2014)
способ определения потерь массы корнеплодов от механических повреждений -  патент 2520129 (20.06.2014)
способ определения поражения селями горной долины -  патент 2519807 (20.06.2014)
способ фитоиндикации с обеспечением благоприятной обстановки на склоновых землях -  патент 2519716 (20.06.2014)
способ обогащения йодом плодов и ягод -  патент 2519231 (10.06.2014)
способ определения поражения горной долины лавинообразным потоком -  патент 2518447 (10.06.2014)

Класс A01G23/00 Лесное хозяйство

Наверх