ПАТЕНТНЫЙ ПОИСК В РФ
НОВЫЕ ПАТЕНТЫ, ЗАЯВКИ НА ПАТЕНТ
БИБЛИОТЕКА ПАТЕНТОВ НА ИЗОБРЕТЕНИЯ

штамм бактерий hafnia alvei, обладающий способностью продуцировать термолабильный лт-энтеротоксин

Классы МПК:C12N1/20 бактерии; питательные среды для них
A61K39/02 бактериальные антигены
Автор(ы):, , , , , , , , , ,
Патентообладатель(и):Идиатуллина Гульнур Азатовна (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2012-11-21
публикация патента:

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения термолабильного энтеротоксина (ЛТ-энтеротоксина) и анатоксина Hafnia alvei при производстве вакцин. Штамм депонирован в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздравсоцразвития России под номером 294. Штамм обладает высокой способностью продуцировать термолабильный ЛТ-энтеротоксин. 1 табл., 2 пр.

Предлагаемое изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения термолабильного энтеротоксина (ЛТ-энтеротоксина) и анатоксина Hafnia alvei при производстве вакцин.

Техническим результатом изобретения является штамм Hafnia alvei № 294, который выделен от больного с кишечной инфекцией в 2011 году в Муниципальном учреждении здравоохранения города Ишимбай республики Башкортостан, депонирован в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздравсоцразвития России под номером 294, обладает высокой способностью продуцировать термолабильный ЛТ-энтеротоксин.

Штамм Hafnia alvei ГКПМ № 294 характеризуется следующими признаками.

По биохимическим свойствам штамм относится к семейству Enterobacteriaceae рода Hafnia alvei, поскольку при тестировании на микробиологическомй тест-системе версии «Vitek 2 Sistems: 04/01» соответствовал биохимическим свойствам этого вида.

Культуральные признаки.

Растет на обычных универсальных плотных питательных средах с образованием характерных изолированных колоний желтоватого оттенка. В мясопептонном бульоне вызывает равномерное помутнение с выпадением осадка.

Изучение факторов вирулентности показало, что штамм является редким, обладающим комплексом факторов патогенности, способным вызывать острую токсическую пневмонию мышей (гибель животных в течение 3 часов), некроз кожи кролика (3,5 см в диаметре), отек лап мышей (с разницей 95 мг), петля тонкого кишечника кролика 1,2(V/L), обладает (альфатиолзависимый, энтерогемолизин), адгезивной (положительная Д-маннозочувствительная и Д-маннозорезистентная реакция с эритроцитами цыпленка), антиинтерфероновой, антилизоцимной активностями, способный в протистоцидном тесте вызывать гибель инфузорий-туфелек в течение 45 секунд.

Данный штамм рекомендуется в качестве суперпродуцента термолабильного ЛТ-энтеротоксина и как штамм, обладающий комплексом факторов патогенности. Штамм можно использовать в производстве анатоксинов и для получения антитоксической сыворотки.

Способы определения активности ЛТ-энтеротоксина.

Субплантарное введение мышам весом 15-16 г 0,05 мл центрифугата 20-часовой бульонной культуры вызывает отек лапки более 100 мг. Аксенова Е.В., 1980 г.

Интраназальное введение 0,05 мл 20-часовой бульонной культуры вызывает острую токсическую пневмонию у белых мышей-самцов весом 15-16 г (гибель в течение 4 часов). Войно-Ясенецкая Н.К., 1957 г.

Внутримышечное введение 300 млн микробных клеток 20-часовой бульонной культуры вызывает некроз кожи кролика диаметром 3 см.

В опыте петля тонкой кишки кролика при введении 80 млн м.т. 20-часовой бульонной культуры дает положительный результат (V/L=l,2).

Гретый при 56°С в течение 45 мин центрифугат 20-часовой бульонной культуры вызывает отек лапки мышей до 30 мг, не вызывая некроза кожи кролика. Гретая при 100°С 20-часовая культура не вызывает накопления жидкости в изолированной петле тонкого кишечника кролика (V/L=0,3).

Условия хранения культуры после лиофильной сушки в ампуле или выращенной при 37°С на 0,3%-ном МПА (рН 7,2-7,4), залитым стерильным вазелиновым маслом, при температуре 4°С.

Среды для размножения - бульон Хоттингера (рН 7,2), мясопептонной агар, содержащий 5% эритроцитов кролика при температуре 37°С в течение 24 часов.

Генетические особенности: HLy+, Ent+, MS+, MR+, LT+, ALA+, AKA+. Устойчив к ампициллину, ампициллину/сульбактам, цефуроксимаксетину, чувствителен к фторхинолону.

Пример 1.

0,1 мл 1 млрд суспензии суточной агаровой культуры в физиологическом растворе сеют в стерильный бульон Хотингера (5 мл рН 7,2), инкубируют в термостате при 37°С в течение 20 часов, центрифугируют при 6000 об/мин в течение 7 минут. Полученную надосадочную жидкость (центрифугат) в объеме 0,05 мл вводят субплантарно в заднюю левую лапку мышей-самцов весом 15-18 г. Через 24 часа животных умерщвляют эфиром и ампутированные по голеностопному суставу лапки взвешивают на торсионных весах, при этом центрифугат штамма Hafnia alvei № 294 давал разницу между левой и правой лапками не менее 100 мг, остальные 20 штаммов, способные продуцировать ЛТ-энтеротоксин от 65 до 90 мг. Контроли - нативный стерильный бульон Хоттингера (рН 7,2) и гретый при 56°С центрифугат 20-часовой бульонной культуры 30-35 мг, соответственно.

Результаты приведены в таблице.

Пример 2.

0,1 мл 1 млрд суспензии суточной агаровой культуры сеют в бульон Хоттингера (рН 7,2), инкубируют в термостате при 37°С в течение 20 ч и 80 млн м.т. суспензию в объеме 1 мл вводят в сегмент изолированной петли тонкого кишечника кролика. Через 16 часов животных умерщвляют воздушной эмболией и рассчитывают соотношение объема экссудата к длине сегмента (V/L). При этом 20-часовая бульонная культура штамма Hafnia alvei № 294 оказалась способной давать накопление жидкости в большом количестве и показатель V/L составил 1,2. У остальных 20 штаммов, способных продуцировать ЛТ-энтеротоксин, показатель V/L колебался в пределах 0,9-1,0. При введении стерильного бульона Хоттингера и гретой при 100°С 20-часовой бульонной культуры отношение объема накопленной жидкости к длине сегмента составило 0,25 и 0,3 соответственно.

Таблица
Сравнительные показатели ЛТ-энтеропродуцирующей активности Hafnia alvei
Номер штамма ВидОтек лапок (мг) Изолированная петля тонкого кишечника (V/L)
6Hafnia alvei № 2941001,3
8-- 740,9
7-- 760,9
3--80 1,0
9 --851,0
1-- 750,8
3-- 700,7
4--78 0,9
Контроль штамм бактерий hafnia alvei, обладающий способностью продуцировать   термолабильный лт-энтеротоксин, патент № 2514656 300,25-0,3
Примечание: в таблице приведены средние данные из пяти отеков.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Штамм бактерий Hafnia alvei, обладающий способностью продуцировать термолабильный ЛТ-энтеротоксин, депонированный в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов III-IV групп патогенности ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздравсоцразвития России под номером 294.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2514656

patent-2514656.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс C12N1/20 бактерии; питательные среды для них

Патенты РФ в классе C12N1/20:
способ определения чувствительности патогенных бактерий к комплексным антибактериальным препаратам -  патент 2529711 (27.09.2014)
бифазная транспортная питательная среда для выделения и выращивания бруцеллезного микроба -  патент 2529364 (27.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528874 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528873 (20.09.2014)
штамм lactobacillus fermentum, обладающий широким спектром антагонистической активности и пробиотический консорциум лактобактерий для изготовления бактериальных препаратов -  патент 2528862 (20.09.2014)
изолированный штамм (варианты), обеспечивающий улучшение состояния здоровья жвачных животных, способ его получения, и способ его введения жвачным животным -  патент 2528859 (20.09.2014)
способ получения миллерита с использованием сульфатредуцирующих бактерий -  патент 2528777 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528744 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528740 (20.09.2014)
питательная среда для культивирования легионелл -  патент 2528101 (10.09.2014)

Класс A61K39/02 бактериальные антигены

Патенты РФ в классе A61K39/02:
вакцины и компоненты вакцин для подавления микробных клеток -  патент 2528854 (20.09.2014)
ранозаживляющее средство на основе штамма trichoderma harzianum rifai -  патент 2528065 (10.09.2014)
вакцина для защиты от lawsonia intracellularis -  патент 2523561 (20.07.2014)
способ профилактики инфекционного конъюнктиво-кератита крупного рогатого скота -  патент 2517119 (27.05.2014)
способ получения препарата на основе вакцинного штамма чумного микроба -  патент 2510825 (10.04.2014)
способ получения протективного антигена и белка s-слоя ea1 из аспорогенного рекомбинантного штамма b. anthracis 55 тпа-1spo- -  патент 2492241 (10.09.2013)
авирулентная адъювантная живая вакцина против mycoplasma hyopneumoniae -  патент 2489164 (10.08.2013)
способ получения бруцеллезного l-антигена -  патент 2486916 (10.07.2013)
способ повышения иммуногенности антигенов b. pseudomallei при экспериментальном мелиоидозе -  патент 2483752 (10.06.2013)
способ получения липополисахарида возбудителя чумы -  патент 2483112 (27.05.2013)


Наверх