Поиск патентов
ПАТЕНТНЫЙ ПОИСК В РФ

способ получения свободного от белка биологически активного препарата высокополимерной рнк из сухих пекарских дрожжей saccharomyces cerevisiae

Классы МПК:C12P19/34 полинуклеотиды, например нуклеиновые кислоты, олигорибонуклеотиды
C07H21/02 с рибозилом в качестве сахаридного радикала
Автор(ы):, , ,
Патентообладатель(и):Общество с ограниченной ответственностью "ВИТАЛАНГ" (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2010-09-06
публикация патента:

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения свободного от белка биологически активного препарата высокополимерной РНК из сухих пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Способ включает суспендирование дрожжей в течение 3 мин в водном растворе олеиновой кислоты, с концентрацией олеиновой кислоты 15 г/л, оттитрованном 2,5 М NaOH, при температуре суспензии не ниже 98°C. Кипятят суспензию в течение 40 мин при 98-100°C при периодическом перемешивании. Через 10, 20 и 30 мин после суспендирования последней порции дрожжей в кипящую суспензию добавляют 2,5 М NaOH. Добавляют по окончании экстракции в суспензию кипяченую воду, перемешивают, отстаивают суспензию при комнатной температуре в течение 22 ч. Разливают слитый с помощью сифона супернатант в виалы с последующим замораживанием и лиофилизацией. Предложенное изобретение позволяет упростить получение препарата высокополимерной РНК из сухих пекарских дрожжей. 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины и может быть использовано для лечения кожных заболеваний вирусной этиологии и ОРВИ, в том числе гриппа.

Наиболее близким к предлагаемому является раствор высокополимерной РНК, полученный из дрожжей путем суспендирования их в водном 1-2%-ном растворе олеиновой кислоты, оттитрованной щелочью до pH 7-8, суспензию выдерживают при 98-102°C в течение 40-60 мин, отстаивают экстракт в течение 20-24 ч при комнатной температуре, к слитой с помощью сифона надосадочной жидкости добавляют NaCl до концентрации 2-3 M, суспензию выдерживают 20-96 ч при комнатной температуре, центрифугируют (2500-3500 g, 5-15 мин, без охлаждения), осадок-шрот промывают 2-мя порциями 2-3 М раствора NaCl и 5-ю порциями 92-96%-ного этанола путем последовательного его ресуспендирования при комнатной температуре и центрифугирования (2500-3500 g, 5-15 мин, без охлаждения), из промытого шрота высокополимерную РНК экстрагируют дистиллированной водой [1].

Данным способом может быть получен раствор биологически активной высокополимерной РНК. Однако этот способ многостадиен и трудоемок.

Предлагаемый способ получения дрожжевого экстракта, не уступающего по лечебным свойствам прототипу, прост и полностью безотходен.

Цель достигается тем, что сухие дрожжи суспендируют порциями в течение 3-5 мин в водном 1-2%-ном растворе олеиновой кислоты, оттитрованной щелочью до pH 7-8, суспензию выдерживают при 98-100°C в течение 40-45 мин, отстаивают экстракт в течение 20-24 ч при комнатной температуре и супернатант, содержащий в качестве основных компонентов, кроме воды, - высокополимерную РНК, низкополимерную РНК и олеат натрия, используют в лечебных целях. Выпавший же в осадок денатурированный белок может быть использован для приготовления белковых коктейлей для спортсменов.

Пример осуществления предлагаемого способа

300 г свежих сухих пекарских дрожжей (Saccharomyces cerevisiae, Новосибирский дрожжевой завод, ГОСТ 28483-90) суспендировали порциями (первые порции по щепотке) в течение 3 мин в 3 л кипящей воды, содержащей 45 г олеиновой кислоты, оттитрованной 20 мл 2,5 М NaOH таким образом, чтобы температура суспензии не опускалась ниже 98°C. Суспензию кипятили 40 мин при 98-100°C, периодически перемешивая. Через 10, 20 и 30 мин после суспендирования последней порции дрожжей в кипящую суспензию добавляли по 10 мл 2,5 М NaOH. По окончании экстракции суспензию доводили кипяченой водой до 4,5 л, перемешивали, переносили в высокий узкий стеклянный сосуд и отстаивали при комнатной температуре в течение 22 ч. Отстоявшийся супернатант (~2,9 л) сливали с помощью сифона в стеклянную емкость, после чего добавляли его в мазь или разливали в виалы по 2-4 мл, замораживали и лиофилизовали. Киселеобразный дрожжевой шлам, собирающийся на дне сосуда и содержащий до 70% денатурированного белка, сушили при 58-62°C обычным способом.

Полученный предлагаемым способом дрожжевой экстракт, содержащий высокополимерную РНК (предполагаемое рыночное название - Виталанг-2и), обладает такими же биологическими и лечебными свойствами, как и полученный по способу - прототипу [1]. Как видно из приведенной ниже таблицы его спектральные характеристики практически не отличаются от таковых для очищенной высокополимерной РНК. По крайней мере белка, способного вызвать аллергию, в препарате Виталанг-2и нет (см. соотношения D280/D260 ).

Источник информации

1. Патент РФ № 2392329.

способ получения свободного от белка биологически активного препарата   высокополимерной рнк из сухих пекарских дрожжей saccharomyces   cerevisiae, патент № 2510854
Спектральные характеристики экстракта высокополимерной (ВП) дрожжевой РНК, полученного нами с помощью олеиновой кислоты, и очищенной по способу-прототипу [1] высокополимерной РНК
Препарат ВП РНКСпектральные отношения
D230/D 260D250/D260 D280/D260
Экстракт0,60 0,910,53
Очищенный препарат 0,450,920,56

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ получения свободного от белка биологически активного препарата высокополимерной РНК из сухих пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae, включающий суспендирование дрожжей в течение 3 мин в водном растворе олеиновой кислоты, с концентрацией олеиновой кислоты 15 г/л, оттитрованном 2,5 М NaOH, при температуре суспензии не ниже 98°C, кипячение суспензии в течение 40 мин при 98-100°C при периодическом перемешивании, добавление через 10, 20 и 30 мин после суспендирования последней порции дрожжей в кипящую суспензию 2,5 М NaOH, добавление по окончании экстракции в суспензию кипяченой воды, перемешивание, отстаивание суспензии при комнатной температуре в течение 22 ч, розлив слитого с помощью сифона супернатанта в виалы с последующим замораживанием и лиофилизацией.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2510854

patent-2510854.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс C12P19/34 полинуклеотиды, например нуклеиновые кислоты, олигорибонуклеотиды

Патенты РФ в классе C12P19/34:
простой способ экстракции из дрожжей высокополимерной рнк -  патент 2522900 (20.07.2014)
способ диагностики коклюша и определения авирулентных мутантов возбудителя и диагностический набор -  патент 2506316 (10.02.2014)
способ получения днк из молок лососевых рыб -  патент 2488634 (27.07.2013)
устройство и способ управления температурой реакционной смеси -  патент 2487944 (20.07.2013)
способ получения и экспрессии кодирующей последовательности изоформы 2 гена реналазы человека -  патент 2482185 (20.05.2013)
синтетические олигонуклеотидные праймеры и способ выявления lactobacillus acidophilus в заквасочных культурах, используемых при производстве кисломолочных продуктов -  патент 2481402 (10.05.2013)
улавливание и характеристика совместно локализованного хроматина -  патент 2478716 (10.04.2013)
олигонуклеотидные праймеры bmvat5-ch2s/bmvat5-ch2as для обнаружения фрагмента дифференциации вмаа0107 штаммов возбудителя сапа -  патент 2474620 (10.02.2013)
биологически активное соединение, содержащее кодирующий олигонуклеотид (варианты), способ его синтеза, библиотека соединений (варианты), способ ее синтеза и способ поиска соединения, связывающегося с биологической мишенью (варианты) -  патент 2470077 (20.12.2012)
способ гомогенной детекции по меньшей мере одного продукта одноцепочечной амплификации -  патент 2460804 (10.09.2012)

Класс C07H21/02 с рибозилом в качестве сахаридного радикала

Патенты РФ в классе C07H21/02:
способ диагностики коклюша и определения авирулентных мутантов возбудителя и диагностический набор -  патент 2506316 (10.02.2014)
iphk-опосредованное ингибирование связанных с фактором некроза опухоли альфа состояний -  патент 2469090 (10.12.2012)
иммуногенные вещества, содержащие адъювант на основе полиинозиновой кислоты-полицитидиловой кислоты -  патент 2462264 (27.09.2012)
рнки-ингибирование репликации вируса гриппа -  патент 2448974 (27.04.2012)
способ получения высокополимерной рнк из отработанных пивных дрожжей -  патент 2435862 (10.12.2011)
высокополимерная рнк из пекарских дрожжей, свободная от примесных ассоциатов рнк с белками и полисахаридами -  патент 2430969 (10.10.2011)
способ получения высокополимерной рнк из дрожжей -  патент 2392329 (20.06.2010)
способ получения солей 5'-трифосфатов природных и модифицированных дезоксирибо- и рибоолигонуклеотидов -  патент 2348643 (10.03.2009)
способ получения солей 5'-трифосфатов дезоксирибо- и рибоолигонуклеотидов -  патент 2326888 (20.06.2008)
антитело, обладающее селективностью по отношению к рецептору лиганда, индуцирующему апоптоз, ассоциированный с фактором некроза опухоли, и его использование -  патент 2298013 (27.04.2007)


Наверх