Поиск патентов
ПАТЕНТНЫЙ ПОИСК В РФ

способ получения средства, обладающего нефропротекторной активностью

Классы МПК:A61K36/74 Rubiaceae (семейство мареновых)
A61K36/21 Amaranthaceae (семейство амарантовых), например марь (лебеда), подсвекольник, цыганка, краснуха, ширица или амарант
A61K36/185 Magnoliopsida (двудольные)
A61P13/12 почек
Автор(ы):, , , ,
Патентообладатель(и):Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт общей и экспериментальной биологии Сибирского отделения Российской академии наук (ФГБУН ИОЭБ СО РАН) (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2012-06-05
публикация патента:

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к способу получения средства, обладающего нефропротекторной активностью, путем экстрагирования сбора лекарственных растений. Способ получения средства, обладающего нефропротекторной активностью, заключается в том, что сбор лекарственных растений, состоящий из корневищ и корней марены красильной (Rubia tinctorum L.), красных листьев бадана толстолистного (Bergenia crassifolia (L.) Fritsch) и надземной части мари остистой (Teloxys aristata (L.) Moq.), взятых в определенном соотношении, экстрагируют этиловым спиртом 3 раза при определенных условиях, после чего извлечение фильтруют, очищают сепарированием, высушивают в вакуумной сушилке и измельчают. Вышеописанный способ обеспечивает повышение активности средства за счет более высокого содержания действующих веществ (флавоноидов). 12 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области фармации и касается способа получения средства из растительного сырья (условное название «флаворен»), обладающего нефропротекторной активностью.

В настоящее время уделяется большое внимание изучению, разработке и внедрению в практику лекарственных препаратов для лечения заболеваний почек, поскольку данные заболевания широко распространены, страдают ими лица различного возраста, нередко они сопровождаются тяжелыми клиническими проявлениями и являются причиной частичной или полной утраты трудоспособности больших контингентов населения.

Несмотря на то, что современный арсенал нефропротекторных лекарственных препаратов насчитывает значительное число, вопрос изыскания новых высокоэффективных нефропротекторных средств, не оказывающих побочного действия, остается весьма актуальным. Это связано с тем, что нет "идеальных" лекарств, не все препараты нефропротекторного действия отвечают высоким требованиям эффективности и безопасности. В качестве прототипа нами был выбран официнальный препарат "Канефрон Н Bionorica" (Германия). Однако фармакотерапевтическая эффективность его не обеспечивает желаемого результата.

Целью изобретения является повышение нефропротекторной активности средства за счет более высокого содержания действующих веществ (сумма флавоноидов).

Для достижения указанной цели растительный материал (сырье) - корневища и корни марены красильной (Rubia tinctorum L) (33%), красные листья бадана толстолистного (Bergenia crassifolia (L.) Fritsch) (33%) и надземную часть мари остистой (Teloxys aristata (L.) Moq.) (33%) экстрагируют 50-60% этиловым спиртом в соотношении сырье-экстрагент, равном 1:(14-16) (с учетом коэффициента водопоглощения), при температуре 55-65°С и постоянном перемешивании. Процесс повторяют трижды. Время экстракции при 1-м и 2-м контактах фаз - 60 мин, при 3-е контакте фаз - 30 мин. Извлечения фильтруют через серошинельное сукно, объединяют, упаривают до 1/3 первоначального объема и очищают сепарированием. Очищенный экстракт доупаривают до 1/5 первоначального объема, высушивают в вакуумной сушилке и измельчают на мельнице пропеллерного типа. Выход готового продукта составляет 27.0±0.5% от массы растительного сырья.

Предложенный способ позволяет получить конечный продукт, представляющий собой мелкодисперсный порошок коричневого цвета с приятным запахом и горьковатым вяжущим вкусом, с содержанием влаги - не более 5%.

Способ иллюстрируется нижеследующими примерами.

Пример 1.

333 г корневищ и корней марены красильной измельчают до размера частиц диаметром 5 мм (сито № 50 ГОСТ 214-83), 333 г красных листьев бадана толстолистного измельчают на мельнице до размера частиц диаметром 1 мм (сито № 10 ГОСТ 214-83) и 333 г надземной части мари остистой измельчают на мельнице до размера частиц диаметром 1 мм (сито № 10 ГОСТ 214-83). Измельченное сырье загружают в экстракционный аппарат с мешалкой и внешним паровым обогревом. Заливают 14 л 50% этилового спирта в соотношении сырье-экстрагент равном 1:14 с учетом коэффициента водопоглощения сырья. Экстрагируют при температуре 60°С и постоянном перемешивании в течение 60 мин. Извлечение фильтруют через серошинельное сукно в сборник. Проводят еще две экстракции в течение 60 и 30 мин, подавая каждый раз в экстрактор 50% спирт в количестве равном объему слитого извлечения (1-й слив - 10.85 л, 2-й слив - 11.05 л, 3-й слив - 9.87 л.). Объединенные извлечения упаривают до 1/3 первоначального объема и очищают сепарированием. Очищенный экстракт доупаривают до 1/5 первоначального объема, высушивают в вакуумной сушилке при температуре 60°С в течение 8 ч и измельчают на мельнице пропеллерного типа. Получают 270.3 г готового продукта, что составляет 27.3% от веса исходного сырья. Сухой экстракт представляет собой мелкодисперсный порошок коричневого цвета с приятным запахом и горьковатым вяжущим вкусом; комкуется, содержание влаги - 4.05%.

Острая токсичность сухого экстракта определялась на белых беспородных мышах-самцах с исходной массой 20.0 ± 1.0 г. при внутрибрюшинном и внутрижелудочном введениях растворенного в воде экстракта. Каждую дозу экстракта испытывали на 10 животных. Наблюдение за животными вели в течение 14 дней. Регистрировали наблюдаемые признаки интоксикации, проводили вскрытие и осмотр погибших животных. Результаты исследований показали, что при внутрибрюшинном введении больших доз сухого экстракта «флаворен» белым мышам наблюдаются признаки интоксикации, выражающиеся в замедлении ориентировочной реакции, резких движениях, появлением тонических, а затем тонико-клонических судорог. Животные погибали при явлениях сердечно-сосудистой недостаточности преимущественно в течение суток от введения экстракта. LD50 по Керберу при внутрибрюшинном введении полиэкстракта «флаворен» 385.5 мг/кг. При внутрижелудочном введении данного средства в максимально возможной дозе, гибели животных не регистрировали, и не наблюдалось явных признаков интоксикации. Эти данные позволяют отнести испытуемый полиэкстракт к группе малотоксичных веществ по классификации Сидорова [3].

Исследования фармакотерапевтической эффективности «флаворена» проведено с использованием моделей почечной недостаточности токсической, ишемической этиологии. Сулемовый некронекроз вызывали однократным внутрибрюшинным введением водного раствора сулемы в дозе 2 мг/кг [4]. Исследования проведены на 55 белых крысах линии Вистар обоего пола с исходной массой 160-180 г, содержащихся на стандартном рационе вивария. Введение водного раствора испытуемого экстракта осуществляли 1 раз в сутки внутрижелудочно, в течение срока опыта, в экспериментально-терапевтической дозе - 20 мг/кг. В качестве препарата сравнения использовали водно-спиртовый настой канефрона в объеме 1,5 мл/кг. Результаты исследования фармакотерапевтической эффективности «флаворена» на фоне токсической (сулемовой) нефропатии представлены в таблице 1.

Таблица 1

Влияние «Флаворена» на функциональное состояние почек, белых крыс на фоне токсической (сулемовой) нефропатии представлены в таблице 1.

Таблица 1
Влияние «Флаворена» на функциональное состояние почек, белых крыс на фоне сулемовой нефропатии
ПоказателиГруппы животных
способ получения средства, обладающего нефропротекторной активностью, патент № 2505309 ИнтактнаяКонтрольная (сулема+Н2О)Опытная 1 (сулема+«флаворен») Опытная 2 (сулема+канефрон)
3 сутки
Креат. сыв.кр. мкмоль/л 87,2±6,52693,2±52,43 321,5±41,25*551,3±47,48
Креат. в моче, мкмоль/л 4296,5±421,32735,4±317,2 5 4985,1±314,35 *3832,4±348,37 *
СКФ, мкл/100/ мин 295,6±24,0415,1±1,14 80,2±7,42*31,3±2,54*
Диурез, мл/100 г/ч 0,36±0,0160,23±0,024 0,21±0,011*0,27±0,036
Белок в моче, г/л0,43±0,026 1,35±0,1150,84±0,052* 1,22±0,131

Введение «флаворена» на фоне сулемовой нефропатии уже через 1 сутки наблюдения оказывало выраженное гипоазотемическое действие, о чем свидетельствует снижение концентрации креатинина в сыворотке и повышение его в моче соответственно на 12 и 18% по сравнению с данными животных применявших препарат сравнения. На 3 и 6 сутки введение «флаворена» способствовало дальнейшему снижению концентрации креатинина в сыворотке, что свидетельствует о более активном купировании азотемического синдрома. Также на фоне введения «флаворена» отмечалось достоверное повышение СКФ, диуреза и снижение протеинурии во все сроки наблюдения, причем по многим показателям испытуемое средство значительно превосходило препарат сравнения.

Пример 2.

333 г корневищ и корней марены красильной измельчают до размера частиц диаметром 5 мм (сито № 50 ГОСТ 214-83), 333 г красных листьев бадана толстолистного измельчают на мельнице до размера частиц диаметром 1 мм (сито № 10 ГОСТ 214-83) и 333 г надземной части мари остистой измельчают на мельнице до размера частиц диаметром 1 мм (сито № 10 ГОСТ 214-83). Измельченное сырье загружают в экстракционный аппарат с мешалкой и внешним паровым обогревом. Заливают 14 л 60% этилового спирта в соотношении сырье-экстрагент равном 1:15 с учетом коэффициента водопоглощения сырья. Экстрагируют при температуре 60°С и постоянном перемешивании в течение 60 мин. Извлечение фильтруют через серошинельное сукно в сборник. Проводят еще две экстракции в течение 60 и 30 мин, подавая каждый раз в экстрактор 60% спирт в количестве равном объему слитого извлечения (1-й слив - 10.95 л, 2-й слив - 11.35 л, 3-й слив - 9.95 л). Объединенные извлечения упаривают до 1/3 первоначального объема и очищают сепарированием. Очищенный экстракт доупаривают до 1/5 первоначального объема, высушивают в вакуумной сушилке при температуре 60°С в течение 8 ч и измельчают на мельнице пропеллерного типа. Получают 27.1 г готового продукта, что составляет 27.1% от веса исходного сырья. Сухой экстракт представляет собой мелкодисперсный порошок коричневого цвета с приятным запахом и горьковатым вяжущим вкусом; комкуется, содержание влаги - 4.12%.

Исследования фармакотерапевтической эффективности «флаворена» проведено с использованием моделей почечной недостаточности токсической этиологии. Сулемовый некронекроз вызывали однократным внутрибрюшинным введением водного раствора сулеемы в дозе 2 мг/кг [4]. Исследования проведены на 55 белых крысах линии Вистар обоего пола с исходной массой 160-180 г, содержащихся на стандартном рационе вивария. Введение водного раствора испытуемого экстракта осуществляли 1 раз в сутки внутрижелудочно, в течение срока опыта, в экспериментально-терапевтической дозе - 20 мг/кг. В качестве препарата сравнения использовали водно-спиртовый настой канефрона в объеме 1,5 мл/кг.

Таблица 2
Влияние «Флаворена» на показатели процессов СРО и состояние антиоксидантной системы белых крыс на фоне сулемовой нефропатии
Показатели Группы животных
способ получения средства, обладающего нефропротекторной активностью, патент № 2505309 Интактная Контрольная (сулема+Н2О)Опытная 1 (сулема+«флаворен»)Опытная 2 (сулема+канефрон)
3 сутки
МДА в го-мог.почек, нмоль/г 15,6±1,1231,0±2,21 14,5±0,83*18,0±2,25*
МДА всыв.кр., мкмоль/л 2,4±0,164,62±0,34 3,15±0,21*3,58±0,34
ДК в сыв.кр., усл.ед. 1,40±0,0524,14±0,232 2,98±0,167*3,57±0,324
Каталаза, мкат/л4,10±0,310 2,13±0,1724,67±0,280* 3,51±0,279*
СОД, мкмоль/л27,0±1,50 19,8±1,1924,2±3,90* 23,8±2,30*
Восст.глу-татион, ммоль/л0,65±0,034 0,23±0,0140,32±0,024* 0,21±0,024

Как следует из данных таблицы 2, интоксикация сулемой вызывает значительную активацию свободнорадикальных процессов, о чем свидетельствуют повышение концентрации продуктов пероксидации липидов в крови и гомогенате почек, сопровождается снижением активности ферментов эндогенной антиоксидантной системы и содержания восстановленного глутатиона в крови.

Курсовое введение «флаворена» на фоне сулемовой нефропатии оказывало выраженное антиоксидантное действие, на что указывает снижение концентрации МДА и диеновых конъюгатов в сыворотке крови, а также МДА в гомогенате почек животных опытной группы по сравнению с аналогичными показателями у крыс контрольной группы во все сроки наблюдения. Также под влиянием испытуемого средства отмечалось повышение активности СОД, каталазы и концентрации восстановленного глутатиона в крови животных опытной группы. При этом нефрозащитная и антиоксидантная активность «флаворена» значительно превосходила таковую у препарата сравнения - канефрона.

Пример 3

333 г корневищ и корней марены красильной измельчают до размера частиц диаметром 5 мм (сито № 50 ГОСТ 214-83), 333 г красных листьев бадана толстолистного измельчают на мельнице до размера частиц диаметром 1 мм (сито № 10 ГОСТ 214-83) и 333 г надземной части мари остистой измельчают на мельнице до размера частиц диаметром 1 мм (сито № 10 ГОСТ 214-83). Измельченное сырье загружают в экстракционный аппарат с мешалкой и внешним паровым обогревом. Заливают 16 л 65% этилового спирта в соотношении сырье-экстрагент равном 1:16 с учетом коэффициента водопоглощения сырья. Экстрагируют при температуре 60°С и постоянном перемешивании в течение 60 мин. Извлечение фильтруют через серошинельное сукно в сборник. Проводят еще две экстракции в течение 60 и 30 мин, подавая каждый раз в экстрактор 65% спирт в количестве равном объему слитого извлечения (1-й слив - 11.85 л, 2-й слив - 11.65 л, 3-й слив - 10.00 л). Объединенные извлечения упаривают до 1/3 первоначального объема и очищают сепарированием. Очищенный экстракт доупаривают до 1/5 первоначального объема, высушивают в вакуумной сушилке при температуре 60°С в течение 8 ч и измельчают на мельнице пропеллерного типа. Получают 26.6. г готового продукта, что составляет 26.6% от веса исходного сырья. Сухой экстракт представляет собой мелкодисперсный порошок коричневого цвета с приятным запахом и горьковатым вяжущим вкусом; комкуется, содержание влаги - 4.05%.

Исследования фармакотерапевтической эффективности «флаворена» проведено с использованием моделей почечной недостаточности ишемической этиологии. Двустороннюю ишемию почек воспроизводили путем выделения почек крыс из жировой капсулы и окклюзии сосудистых пучков обеих почек на 60 минут [6]. Операцию проводили под барбамиловым наркозом (80 мг/ кг внутрибрюшинно). По истечении 60 минут зажимы с почечных ножек снимали и рану ушивали послойно наглухо в асептических условиях. Исследования проведены на 55 белых крысах линии Вистар обоего пола с исходной массой 160-180 г, содержащихся на стандартном рационе вивария. Введение водного раствора испытуемого экстракта осуществляли 1 раз в сутки внутрижелудочно, в течение срока опыта, в экспериментально-терапевтической дозе - 20 мг/кг. В качестве препарата сравнения использовали водно-спиртовый настой канефрона в объеме 1,5 мл/кг.

В таблице 3 представлены результаты исследования влияния «флаворена» на показатели функционального состояния почек на фоне постишемической нефропатии.

Как следует из данных таблицы 3, ишемия почек вызывает выраженные нарушения их функционального состояния, характеризующиеся азотемией, протеинурией, снижением СКФ и диуреза.

Таблица 3
Влияние «Флаворена» на функциональное состояние почек крыс на фоне постишемической нефропатии
ПоказателиГруппы животных
способ получения средства, обладающего нефропротекторной активностью, патент № 2505309 Интактная Контрольная (ишемия+Н2О)Опытная 1 (ишемия+«флаворен») Опытная 2 (ишемия+канефрон)
3 сутки
Диурез, мл/100 г час 0,51±0,0440,34±0,02 0,45±0,02* 0,42±0,01*
Белок в моче, г/л0,38±0,017 1,48±0,1250,72±0,047* 1,12±0,156
Креатинин в крови, мкмоль/л72,4±5,73 278,3±24,16 142,3±12,97*160,6±11,65*
Креатинин в моче, мкмоль/л 4112,2±433,53036,2±252,45 5642,4±347,67* 3652,0±278,50
СКФ мкл/100/мин 482,7±35,7062,2±9,57 297,4±24,82* 159,2±14,67*

Курсовое введение «флаворена» на фоне постишемической острой почечной недостаточности во все сроки исследования сопровождалось снижением содержания креатинина в сыворотке крови и повышением его концентрации в моче. Наряду с этим, в моче крыс опытной группы достоверно снижалось количество белка. Также отмечено увеличение диуреза соответственно срокам наблюдения на 21, 12 и 17% по сравнению с аналогичными показателями у крыс, получавших препарат сравнения «канефрон».

Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что «флаворен» в экспериментально-терапевтической дозе - 20 мг/кг, обладает выраженной фармакотерапевтической эффективностью при нефропатиях токсической, ишемической этиологии, о чем свидетельствует нормализация морфофункциональной состоятельности почек животных на более ранних сроках патологического процесса. В частности, введение животным испытуемого фитоэкстракта сопровождалось нормализацией диуретической функции почек; снижением азотемии, протеинурии, увеличением скорости клубочковой фильтрации, что свидетельствует об улучшении гемодинамики почек, сохранности нефрона. По активности он превосходит действию препарата сравнения - канефрон.

На основании качественного фитохимического анализа в полученном сухом экстракте установлено наличие:

1. Дубильных веществ

0.05 г экстракта растворяют в 5 мл воды дистиллированной. К 2 мл полученного раствора прибавляют 2-3 капли раствора железо-аммониевых квасцов, появляется черно-зеленое окрашивание (дубильные вещества).

2. Фенолкарбоновых кислот

Двумерной восходящей хроматографией на бумаге марки FN-12 в системах растворителей:

А. н-Бутанол- уксусная кислота- вода (4:1:2)

Б. 15% уксусная кислота

При просмотре хроматограммы в УФ-свете, после обработки парами аммиака, идентифицированы со стандартными образцами:

кофейная кислота - R f = 0.80(A), 0.42(Б);

хлорогеновая кислота - Rf =0.67(A), 0.70(Б).

3. Флавоноидов

3.1. 0.1 г экстракта растворяют в 50 мл 50% этилового спирта. К 5 мл полученного раствора прибавляют 3 мл 2% спиртового раствора алюминия хлорида; появляется желто-зеленое окрашивание (флавоноиды).

3.2. Двумерной восходящей хроматографией на бумаге марки FN-12 в системах растворителей:

А. 15% раствор уксусной кислоты

Б. н-Бутанол- уксусная кислота- вода (40:12:28)

При просмотре хроматограммы в УФ-свете до и после проявления 5% спиртовым раствором алюминия хлорида обнаружены шесть веществ флавоноидной природы с Rf 1 = 0,67; Rf 2 = 0,52; Rf 3 = 0,65; Rf 4 = 0.61; Rf 5 = 0.49; Rf 6 = 0. 39 (Б); Rf 1 = 0,56; Rf 2 = 0,68; Rf 3 = 0,78; Rf 4 = 0. 87; Rf 5 = 0. 9; Rf 6 = 0. 85 - (А). По качественным реакциям [5] все 6 веществ отнесены к классу флавоноидов (таблица). По хроматографическому поведению все вещества отнесены к С- гликозидам [7], в частности вещества 1 и 2 - к 3-С-дигликозидам, соединения 3, 4, 5, 6 к 3-С-моногликозидам. После кислотного гидролиза с использованием аутентичных образцов доказано наличие кверцетина и кемпферола в качестве агликонов.

2. Количественное определение

Около 0.05 г (точная навеска) экстракта растворяют в мерной колбе вместимостью 25 мл в 10 мл теплой воды (40-60°С), прибавляют 5.2 мл 96% спирта, доводят объем раствора до метки водой (раствор А). 3 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 2 мл 2% раствора алюминия хлорида в 96% спирте, доводят объем раствора 20% спиртом до метки. Через 40 мин измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 405 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор состоящий из 3 мл раствора А, 1 капли разведенной уксусной кислоты и доведенный 20% спиртом до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл. Параллельно измеряют оптическую плотность государственного стандартного образца (ГСО) цинарозида. 1 мл приготовленного раствора ГСО цинарозида помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 1 мл 2% раствора алюминия хлорида в 95% спирте и доводят объем раствора 20% спиртом до метки. Раствором сравнения является раствор, состоящий из 1 мл ГСО цинарозида, 1 капли разведенной уксусной кислоты и доведенный 20% спиртом до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на цинарозид абсолютно сухой экстракт в процентах (X) рассчитывают по формуле:

способ получения средства, обладающего нефропротекторной активностью, патент № 2505309 способ получения средства, обладающего нефропротекторной активностью, патент № 2505309 способ получения средства, обладающего нефропротекторной активностью, патент № 2505309 ,

где D - оптическая плотность испытуемого раствора;

D0 - оптическая плотность раствора ГСО цинарозида;

m - масса экстракта в граммах;

m0 - масса ГСО цинарозида в граммах;

W - потеря в массе при высушивании экстракта в процентах.

Примечание. Приготовление раствора ГСО цинарозида: около 0.05 г (точная навеска) ГСО цинарозида, предварительно высушенного при температуре 130-135°С в течение 3 ч, растворяют в 85 мл 95% спирта в мерной колбе вместимостью 100 мл при нагревании на водяной бане, охлаждают, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают.

Найдено: 10.72±0.18%.

Предложенный способ получения достаточно прост, не требует сложной схемы очистки, позволяет получать продукт постоянного состава. Технология может быть внедрена на предприятиях, выпускающих лекарственные препараты.

Для выявления оптимальных технологических режимов нами были изучены основные факторы, влияющие на процесс экстрагирования растительного сырья: природа экстрагента, его соотношение с сырьем, температурный режим, степень измельчения сырья, продолжительность и количество экстракций.

Таблица 7
Метрологические характеристики определения экстрактивных веществ и суммы флавоноидов
способ получения средства, обладающего нефропротекторной активностью, патент № 2505309 fспособ получения средства, обладающего нефропротекторной активностью, патент № 2505309 SР tспособ получения средства, обладающего нефропротекторной активностью, патент № 2505309 способ получения средства, обладающего нефропротекторной активностью, патент № 2505309 , %
Содержание экстрактивных веществ927.9 0.944795 2.260.67522.42
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на цинарозид9 10.720.078395 2.260.0559 4.27

Количественная оценка проводилась по выходу экстрактивных веществ [1, 2] и суммы флавоноидов. Метрологические характеристики представлены в таблице 7.

В качестве экстрагентов были использованы вода и этиловый спирт различных концентраций (20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 96%).

Как видно из таблицы 8, 50-55%, спирт является оптимальным экстрагентом, так как позволяет добиться максимального выхода суммы флавоноидов с учетом выхода экстрактивных веществ.

Выявление оптимальной степени измельчения сырья проводили отдельно для каждого вида сырья. Количественную оценку проводили по выходу экстрактивных веществ. На основании полученных данных (таблица 9) и с учетом того, что слишком мелкое измельчение растительного материала ведет к загрязнению извлечения труднофильтруемыми высокомолекулярными соединениями, измельчение каждого вида сырья следует проводить отдельно до размера частиц: для корней и корневищ марены красильной не более 5 мм, для надземных частей бадана толстолистного и мари остистой - не более 3 мм.

Таблица 8
Выход экстрактивных веществ и суммы флавоноидов в перерасчете на цинарозид-стандарт в зависимости от типа и концентрации экстрагента
Экстрагент Выход экстрактивных веществ, %Выход суммы флавоноидов, %
Вода 17.232.74
Спирт этиловый: 20% 18.713.75
30%19.33 4.77
40%20.925.80
50% 21.466.08
60%23.486.07
70% 22.633.91
80%19.303.57
90% 17.022.85
96%16.292.83

Таблица 9
Выход флавоноидов и экстрактивных веществ в зависимости от размера частиц сырья
Наименование сырья Диаметр частиц, мм Выход экстрактивных веществ, %Выход флавоноидов, %, в пересчете на ГСО цинарозид
1. Марь остистая0.5 17.81.25
(надземная1.017.0 1.12
часть) 3.015.6 0.87
способ получения средства, обладающего нефропротекторной активностью, патент № 2505309 5.012.3 0.63
способ получения средства, обладающего нефропротекторной активностью, патент № 2505309 7.010.8 0.52
способ получения средства, обладающего нефропротекторной активностью, патент № 2505309 10.08.90 0.46
Наименование сырьяДиаметр частиц, мм Выход экстрактивных веществ, %Выход флавоноидов, %, в пересчете на ГСО рутин
2. Бадан толстолистный чай (листья)0.5 17.62.12
способ получения средства, обладающего нефропротекторной активностью, патент № 2505309 1.017.8 2.07
способ получения средства, обладающего нефропротекторной активностью, патент № 2505309 3.017.4 2.05
способ получения средства, обладающего нефропротекторной активностью, патент № 2505309 5.017.3 2.03
способ получения средства, обладающего нефропротекторной активностью, патент № 2505309 7.016.5 1.08
способ получения средства, обладающего нефропротекторной активностью, патент № 2505309 10.012.8 1.05
Наименование сырьяДиаметр частиц, мм Выход экстрактивных веществ, %Выход флавоноидов, %, в пересчете на ГСО лютеолин
3. Марена красильная0.5 16.021.15
(корни и1.015.87 1.03
корневища) 3.015.65 0.95
способ получения средства, обладающего нефропротекторной активностью, патент № 2505309 5.015.54 0.91
способ получения средства, обладающего нефропротекторной активностью, патент № 2505309 7.015.41 0.83
способ получения средства, обладающего нефропротекторной активностью, патент № 2505309 10.015.37 0.75

В связи с тем, что в исходном растительном сырье содержатся термолабильные вещества, изучение влияния температуры на процесс экстракции проводили в интервале температур от 20 до 60°С. Данные представлены в таблице 10, оптимальная температура - 60±5°С.

Таблица 10
Выход экстрактивных веществ и суммы флавоноидов в зависимости от температуры экстракции
Температура экстракодции, °СВыход экстрактивных веществ, %Выход суммы флавоноидов, %
2016.52 1.87
30 18.042.96
4021.63 4.03
50 25.415.84
6028.276.18

При изучении влияния соотношения сырье-экстрагент на процесс экстракции установлено (таблица 11), что с увеличением количества экстрагента возрастает выход экстрактивных веществ и суммы флавоноидов, но рост этот для соотношений 1:16 и выше незначителен, поэтому для предотвращения дополнительного расхода экстрагента выбрано соотношение равное 1:(14-16) (с учетом коэффициента водопоглощения).

Таблица 11
Выход экстрактивных веществ и суммы флавоноидов в зависимости от соотношения сырье: экстрагент
Соотношение сырье:экстрагентВыход экстрактивных веществ, %Выход суммы флавоноидов, %
1:8 не смачивается
1 1022.232.12
112 25.863.19
11426.11 6.21
116 27.156.22
118 27.326.24
12027.51 6.28
125 27.626.30

Для определения продолжительности и необходимого количества экстракций установлено время достижения равновесных концентраций экстрактивных веществ и флавоноидов в системе сырье-экстрагент в ходе трехкратной экстракции. Для этого проводили экстракцию измельченного сырья 40% этиловым спиртом в соотношении 1:14 на водяной бане при температуре 60°С и постоянном перемешивании в колбе с обратным холодильником. Извлечения полученные через определенные промежутки времени (15, 30,45, 60, 75, 90 мин) в процессе трех экстракций, анализировали на содержание экстрактивных веществ и флавоноидов. Установлено, что равновесные концентрации устанавливаются при 1-м и 2-м контактах фаз через 60 мин, при 3-м контакте фаз через 30 мин (таблица 12). Трехкратная экстракция обеспечивает достаточно полное истощение сырья - извлекается до 96% действующих веществ.

Таблица 12
Выход экстрактивных веществ и суммы флавоноидов в зависимости от времени экстрагирования
Время, минВыход экстрактивных веществ, %Выход суммы флавоноидов, %
способ получения средства, обладающего нефропротекторной активностью, патент № 2505309 контакт фаз
способ получения средства, обладающего нефропротекторной активностью, патент № 2505309 III IIIIII III
1510.43 5.273.03 1.470.910.31
3012.32 7.803.653.62 1.270.42
4515.08 7.563.585.86 2.250.62
6017.82 6.743.766.02 3.120.81
7518.05 6.873.526.09 3.310.84
9018.07 9.893.646.12 3.340.86

Предлагаемый способ по сравнению с известным позволяет получить препарат постоянного состава с более высокой нефропротекторной активностью за счет более высокого содержания действующих веществ (флавоноидов).

Посчитать экономическую эффективность предлагаемого способа в настоящее время не представляется возможным, однако вышеуказанные преимущества в сочетании с простой схемой получения способствуют рациональному использованию лекарственного растительного сырья и открывают перспективу внедрения данного способа в фармацевтическую промышленность.

Источники информации

1. Государственная Фармакопея СССР. Вып.1. Общие методы анализа /МЗ СССР. - 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1987. - 336 с.

2. Государственная Фармакопея СССР: Вып.2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье /МЗ СССР. - 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1989. - 400 с.

3. Сидоров К.К. О классификации токсичности ядов при парентеральных способах ведения // Токсикология новых промышленных химических веществ. - М. - 1973. - Вып.13. - С.47 - 51.

4. Соколова В.Е., Васильченко Е.А., Любарцева Л.А. Влияние препаратов из видов леспедеци на азотистый обмен у кроликов // Растит, ресурсы. - 1975. - Т.11, № 1. - С.90-94.

5. Химический анализ лекарственных растений. Учебное пособие для фарм. ВУЗов. / Под ред. проф. Н.И.Гринкевич. - М., 1983. - 176 с.

6. Шепотиновский В.И., Микашинович Г.А., Шапиро Г.А. Функционально-биохимические изменения и их фармакологическая корррекция пирроксаном при ишемии почек // Патол. физиол. и экспер. Терапия. - 1989. - № 4. -С.24-27.

7. Mabry T.J., Markham K.R., Thomas М.В. The Systematic Identification of Flavonoids. - Berlin; Heidelberg; New York, 1970. - 355 p.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ получения средства, обладающего нефропротекторной активностью, путем экстрагирования сбора лекарственных растений: корневищ и корней марены красильной (Rubia tinctorum L.), красных листьев бадана толстолистного (Bergenia crassifolia (L.) Fritsch) и надземной части мари остистой (Teloxys aristata (L.) Moq.), отличающийся тем, что сбор, состоящий из 333 г корневищ и корней марены красильной, 333 г красных листьев бадана толстолистного, 333 г измельченной надземной части мари остистой, экстрагируют 50-60% этиловым спиртом в соотношении сырье-экстрагент, равном 1:(14-16)) при температуре 55-65°С два раза по 60 мин, а третий раз - 30 мин, после чего извлечение фильтруют, очищают сепарированием, высушивают в вакуумной сушилке при температуре 60°С в течение 8 ч и измельчают.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2505309

patent-2505309.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс A61K36/74 Rubiaceae (семейство мареновых)

Патенты РФ в классе A61K36/74:
вагинальные суппозитории (варианты) -  патент 2514630 (27.04.2014)
лекарственный сбор растений для лечения сердечно-сосудистых заболеваний -  патент 2484843 (20.06.2013)
экстракт из растительного сырья с высоким содержанием полифенола -  патент 2466736 (20.11.2012)
травяной состав для заживления ран -  патент 2451518 (27.05.2012)
фитосредство для лечения и профилактики мочекаменной болезни -  патент 2445970 (27.03.2012)
способ лечения синдрома хронической усталости (варианты) -  патент 2406525 (20.12.2010)
экстракт коры дерева рода corynanthe и его применение, лекарственные средства, пищевые продукты и фармацевтические композиции, его содержащие -  патент 2399378 (20.09.2010)
лечебно-профилактическая композиция -  патент 2393871 (10.07.2010)
способ разгрузочно-диетической терапии -  патент 2392943 (27.06.2010)
лекарственное средство для снятия токсикоза на ранних стадиях беременности, обладающее иммунокорригирующим, диуретическим действием -  патент 2381032 (10.02.2010)

Класс A61K36/21 Amaranthaceae (семейство амарантовых), например марь (лебеда), подсвекольник, цыганка, краснуха, ширица или амарант

Патенты РФ в классе A61K36/21:
лечебное средство профилактики и лечения хронических заболеваний печени -  патент 2526172 (20.08.2014)
способ приготовления полифенольных экстрактов из листьев шпината -  патент 2519640 (20.06.2014)
мазь для лечения при обморожениях -  патент 2478368 (10.04.2013)
средство, нормализующее митохондрии печени -  патент 2470655 (27.12.2012)
способ прерывания беременности у реципиенток почечного аллотрансплантата -  патент 2438682 (10.01.2012)
способ профилактики и лечения угрозы прерывания беременности у женщин с миомой матки согласно новому взгляду на ее этиопатогенез -  патент 2424817 (27.07.2011)
противоопухолевое средство -  патент 2377008 (27.12.2009)
средство для повышения остроты зрения -  патент 2350345 (27.03.2009)
способ коррекции вегетативного дисбаланса у детей -  патент 2294754 (10.03.2007)
лечебно-профилактический комплекс "бальзам долголетие" общеукрепляющего и тонизирующего действия (варианты) -  патент 2277927 (20.06.2006)

Класс A61K36/185 Magnoliopsida (двудольные)

Патенты РФ в классе A61K36/185:
способ коррекции вторичных иммунодефицитов у телят -  патент 2525426 (10.08.2014)
композиции для лечения гастроэзофагеальной рефлюксной болезни (гэрб) -  патент 2524639 (27.07.2014)
композиция для лечения и предупреждения остеоартрита, остеопороза и остеоартроза суставов -  патент 2521227 (27.06.2014)
сбор лекарственных растений гипотензивного действия -  патент 2519135 (10.06.2014)
композиции для лечения заболеваний верхних дыхательных путей и симптомокомплекса гриппа -  патент 2518738 (10.06.2014)
способ получения водомасляного продукта из древесной зелени лиственных растений -  патент 2518281 (10.06.2014)
композиция на основе диацетата бетулина -  патент 2517157 (27.05.2014)
ранозаживляющий препарат -  патент 2517065 (27.05.2014)
биологически активная добавка к пище, обладающая гепатопротекторными и иммуностимулирующими свойствами -  патент 2516932 (20.05.2014)
вагинальные суппозитории (варианты) -  патент 2514630 (27.04.2014)

Класс A61P13/12 почек

Патенты РФ в классе A61P13/12:
6-замещенные изохинолины и изохинолиноны полезные в качестве ингибиторов rho-киназы -  патент 2528229 (10.09.2014)
фосфатный адсорбент -  патент 2527682 (10.09.2014)
замещенные аминоинданы и их аналоги, и их применение в фармацевтике -  патент 2522586 (20.07.2014)
тетразольные соединения для снижения концентрации мочевой кислоты -  патент 2522458 (10.07.2014)
жирные кислоты и глицериды со средней длиной цепи в качестве нефропротективных средств -  патент 2519215 (10.06.2014)
композиции и способы лечения расстройств почки -  патент 2519124 (10.06.2014)
включающие пируват составы для домашних животных и способы их применения -  патент 2518455 (10.06.2014)
2-пиридилзамещенные имидазолы в качесиве терапевтических ингибиторов alk5 и/или alk4 -  патент 2518069 (10.06.2014)
способ лечения поликистозных заболеваний почек с помощью производных церамида -  патент 2517345 (27.05.2014)
содержащее конденсированную кольцевую структуру производное и его применение в медицине -  патент 2512547 (10.04.2014)

Наверх