ПАТЕНТНЫЙ ПОИСК В РФ
НОВЫЕ ПАТЕНТЫ, ЗАЯВКИ НА ПАТЕНТ
БИБЛИОТЕКА ПАТЕНТОВ НА ИЗОБРЕТЕНИЯ

способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и -глюкана

Классы МПК:A61K31/715  полисахариды, те имеющие больше, чем пять сахаридных радикалов, соединенных друг с другом гликозидными связями; их производные, например простые эфиры, сложные эфиры
A61K31/716 глюканы
A61K36/06 грибы, например дрожжи
Автор(ы):,
Патентообладатель(и):Учреждение Российской академии наук Институт химии твердого тела и механохимии Сибирского отделения РАН (ИХТТМ СО РАН) (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2011-11-14
публикация патента:

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения водорастворимых фракций маннопротеинов и способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкана. Способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкана, заключающийся в том, что биомассу дрожжей предварительно подвергают механической активации в активаторах или мельницах, к полученному механокомпозиту добавляют раствор ферментного комплекса, проявляющий способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюканазную или протеазную активность, проводят гидролиз, полученный гидролизат разделяют на маннопротеиновую и способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкановую фракции, которые подвергают последующей очистке, при определенных условиях. Вышеописанный способ позволяет повысить эффективность гидролиза и увеличить выход конечного продукта. 1 з.п. ф-лы, 4 ил., 10 пр.

Изобретение позволяет получать из дрожжевой биомассы Saccharomyces cerevisiae препараты на основе водорастворимых маннопротеинов и способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкана, которые без дополнительной очистки могут быть использованы в косметике, пищевой промышленности, в животноводстве для профилактики инфекций, а также в иммунологии.

Клеточная стенка дрожжей S. cerevisiae является супрамолекулярным комплексом, состоящим преимущественно из способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкана и маннопротеинов. Маннопротеины, в свою очередь, состоят из белковой и маннанолигосахаридной части.

способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -Глюкан - полимер из последовательно соединенных способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -1,3-связью мономеров глюкозы (фиг.1). Полимерные цепочки способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -1,3-глюкана соединяются между собой посредством способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -1,6-связей в сложную сетчатую структуру. Во многом благодаря этой структуре способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -1,3-глюкан обеспечивает жесткость и прочность клеточной стенки, устойчивость ее к воздействиям окружающей среды. способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -1,3-Глюкан можно селективно гидролизовать ферментами, проявляющими 1,3-глюканазную активность.

Благодаря своим физико-химическим свойствам способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкан находит широкое применение в косметике и пищевой промышленности, например, в качестве компонентов кремов и диет, обогащенных слабоусваеваемыми пищевыми волокнами, а также как вещество, стимулирующее неспецифический иммунный ответ организма.

Маннопротеины (реже употребляемый термин - маннаны) различают по виду химической связи маннанолигосахаридной части с белковой частью. Наиболее распространены в клеточной стенке Saccharomyces cerevisiae два типа маннопротеинов: O-связанные, в которых присоединение маннанолигосахаридной части к белку происходит посредством O-гликозидной связи между остатком маннанолигосахарида и гидроксильной группой серина или треонина (фиг.2), и N-связанные Маннопротеины с N-гликозидной связью между остатком N-ацетилглюкозамина и способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -амидным азотом аспарагина (фиг.3).

Из литературы известно, что O-гликозидная связь маннопротеинов легко разрушается при действии разбавленных растворов щелочей (способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -элиминирование) фиг.4). Достаточно обработки 0,1-0,5 М гидроксидом натрия в течение 12 часов, чтобы отщепить олигосахаридный компонент от белка. N-связанный маннанолигосарид, напротив, может быть отщеплен от белковой молекулы только под действием специфических ферментов - EndoH-EndoF-гликозидаз. Однако под действием растворов щелочей N-маннанолигосахариды экстрагируются из клеточной стенки вместе с белковым компонентом. Необходимым условием для экстракции является разупорядочение клеточной стенки дрожжей, вызванное механической обработкой в энергонапряженных активаторах или гидролизом структурообразующего способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкана.

Известно, что маннопротеины посредством маннанолигосахаридных фрагментов взаимодействуют со специфическими белками (пектинами) на поверхности болезнетворных бактерий и препятствуют их закреплению на слизистых оболочках организма, например в пищеварительном тракте или ротовой полости. Неприкрепленные бактерии не способны вызвать заболевания, не размножаются и быстро выводятся из организма или гибнут.

Супрамолекулярная структура клеточной стенки дрожжей S. cerevisiae построена таким образом, что маннопротеины в значительной степени интегрированы в способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкановый слой и для переведения их в биологически доступную водорастворимую форму необходимо разрушить связь маннопротеинов с способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюканом. Для этого используют различные методы, например индуцированный автолиз, ферментативный или кислотный гидролиз.

Известно изобретение RU 2406516 C1 от 20.12.2010 в котором из дрожжевой биомассы получают антибактериальный препарат, содержащий маннанопротеины, интегрированные в клеточную стенку. Для этого проводится механическая активация дрожжевой биомассы совместно с ферментным комплексом, обладающим деполимеразной активностью к способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкану и последующий твердофазный ферментативный гидролиз.

В результате механической активации получается механокомпозит, представляющий собой дрожжевые клетки с равномерно распределенным среди них ферментным комплексом. В ходе последующего ферментативного гидролиза клектчные стенки лишь частично гидролизуются, переводя маннанопротеины, интегрированные в стенки, в биодоступное, но не в водорастворимое состояние.

Недостатком данного технического решения является нерациональное использование механической активации. Из-за необходимости проводить обработку в низкоэнергетичных условиях, чтобы не денатурировали ферменты, разупорядочения структуры клеточных стенок практически не происходит и последующий ферментативный гидролиз не облегчается. Также, гидролиз стенок проходит не полностью, что сказывается на биологической активности маннанов.

Наиболее близким техническим решением,, выбранным за прототип, является способ получения способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюканов и маннанов описанный в Pat. USA № 7.048.937 В2 (от 23.05.2006). Способ по прототипу включает 3 стадии:

1. Подготовка биомассы к ферментативному гидролизу: автолиз микробной (в т.ч. дрожжевой) биомассы при 35-55°C для разрушения клеток и получения клеточных стенок. Проводится в течение 24-36 часов при pH от 4 до 8. Полученные клеточные стенки отделяются центрифугированием и подвергаются ферментативному гидролизу.

2. Ферментативный гидролиз: проводится добавленными к реакционной смеси, содержащей подготовленные клеточные стенки, ферментами (щелочными протеазами, глюкоамилазой, амилазой, амилоглюкозидазой, липазой). В процессе гидролиза часть белков и способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкана клеточных стенок гидролизуется и становится доступной для разделения на две фракции. Гидролизат центрифугируют, при этом способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкан выпадает в осадок и сушится распылительной сушкой, а маннопротеины остаются в надосадочной жидкости, которую используют для ультрафильтрации и выделения маннопротеинов.

3. Разделение на фракции: ультрафильтрация экстракта на молекулярных ситах позволяет выделить маннопротеины с молекулярной массой выше 10 кDа. Полученные маннопротеины сушат распылительной сушкой.

Таким образом получают препарат маннанов, который содержит не менее 85 мас.% маннопротеинов с молекулярной массой выше 10 кDа и препарат способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкана, который содержит около 65 мас.% способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкана.

Способ получения маннопротеинов и способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкана по прототипу имеет существенные недостатки. Для подготовки биомассы методом автолиза в жидкой фазе и получения полупродукта разрушенных клеточных стенок необходимо большое количество воды. Проведение процесса автолиза в жидкой фазе экономически не эффективно, так как необходимо длительное время (более суток) поддерживать высокую температуру (около 50°C) реакционной смеси, затем отделять осадок клеточных стенок от жидкой фазы. Также известно, что для увеличения скорости автолиза к реакционной смеси добавляют пожароопасные и токсичные органические растворители.

Использование щелочных протеаз на стадии ферментативного гидролиза клеточных стенок обуславливает необходимость в щелочном (от 9 до 10) pH реакционной среды. В этих условиях низкомолекулярные 0-маннанолигосахариды отщепляются от белковых молекул и переходят в раствор. При ультрафильтрации на молекулярных ситах этот тип маннанолигосахаридов не извлекается и отбрасывается вместе с балластными веществами. Таким образом, в состав препарата маннопротеинов, полученного по прототипу, входят лишь высокомолекулярные N-маннанолигосахариды, что снижает биологическую активность полученного препарата. Кроме того, полученные препараты содержат 85 и 65% маннопротеинов и способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкана соответственно, что обуславливает необходимость их дальнейшей очистки с целью получения очищенных препаратов для применения в косметике и иммунологии.

Задача, решаемая заявляемым техническим решением, заключается в разработке экологически чистого, простого способа получения очищенных препаратов на основе водорастворимых маннопротеинов и способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкана.

Способ получения должен позволять использовать доступное сырье, такое как биомасса кормовых дрожжей, отработанная дрожжевая биомасса, послеспиртовая барда и т.д. Для улучшения способа получения препаратов по прототипу необходимо, чтобы подготовка дрожжевой биомассы, а именно разрушение клеточных стенок дрожжей проводилось без проведения автолиза в жидкой фазе, а на стадии ферментативного гидролиза использовались ферменты, проявляющие наибольшую активность при значениях pH<7. Для использования в косметике и иммунологии маннопротеины и способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкан должны быть дополнительно очищены от примесей балластных веществ, потенциально способных вызывать аллергические реакции.

Поставленная задача решается благодаря заявляемому способу, включающему подготовку биомассы дрожжей к ферментативному гидролизу, ферментативный гидролиз, разделение на фракции, очистку, отличающийся тем, что, биомассу дрожжей предварительно подвергают механической активации в активаторах или мельницах, обеспечивающих ускорение мелющих тел 60-600 м/с2 при времени пребывания в зоне обработки 0,5-15 мин., к полученному механокомпозиту добавляют раствор ферментного комплекса, проявляющий способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюканазную или протеазную активность, ферментативный гидролиз проводят при pH 4-7, концентрации ферментного комплекса 0,5-10 мас.%, концентрации полученного механокомпозита 5-20 мас.%, при температуре 50-65°C в течение 10-30 часов, полученный гидролизат разделяют на маннопротеиновую и способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкановую фракции, которые подвергают последующей очистке.

Предпочтительно, механическую активацию биомассы проводят в активаторах планетарного, центробежного или виброцентробежного типов, или в роликовых мельницах.

При механической активации дрожжевой биомассы в указанных высокоэнергетичных условиях происходит механическое разрушение клеток и значительное разупорядочение надмолекулярной структуры клеточных стенок, повышение их реакционной способности по отношению к ферментативному гидролизу. Также, в полученном механокомпозите - продукте механической активации - реализуются уменьшенные диффузионные пути, структурные слои клеточной стенки носят диффузный характер.

Подбор оборудования для механической активации не случаен и направлен на достижение заданной структуры механокомпозита. Условия механической активации и состав оборудования не очевиден и не может быть подобран простым перебором режимов без проведения всестороннего изучения структуры и разупорядочения стенок дрожжевой биомассы.

Механический способ подготовки дрожжевой биомассы к ферментативному гидролизу, а именно получение разрушенных клеточных стенок более экономически эффективен, чем автолиз в жидкой фазе так как не требует больших количеств воды, длительного поддержания повышенной температуры, а также стадии выделения клеточных стенок из автолизата. Полупродукт разрушенных клеточных стенок получаемый после механической активации представляет собой воздушно сухой порошок от бежевого до светло-коричневого цвета, который может непосредственно использоваться для дальнейшего ферментативного гидролиза.

Ферментативный гидролиз полупродукта, полученного в результате механической активации, при помощи препаратов, проявляющих способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюканазную и протеазную активность позволяет разрушать химические связи между маннопротеиновой частью и структурообразующей способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкановой частью. Следствием разрушения химических связей между перечисленными компонентами является возможность их разделения на две фракции. Кроме того, проведение гидролиза ферментными препаратами, проявляющими активность в диапазоне pH 4-7 позволяет сохранить низкомолекулярные O-маннанолигосахариды в составе маннопротеиновой фракции, что, безусловно, повышает биологическую активность полученных веществ по сравнению с препаратами по прототипу.

Проведение очистки водорастворимых маннопротеинов и способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкана в описанных режимах позволяет получать препараты с более высоким, нежели в прототипе, содержанием маннопротеинов и способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкана. Более концентрированные и очищенные препараты обладают большей биологической активностью и содержат меньше балластных веществ, которые потенциально могут вызывать аллергические реакции. Так, очищенный маннопротеиновый препарат имеет следующий состав: водорастворимые маннопротеины - 85-90 масс.%, способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкан - 2-4 масс.%, зола - 3-6 масс.%, вода - остальное. Очищенный способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкановый препарат имеет следующий состав: способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкан - 75-80, белки - 10-13, зола - 5-7 масс.%, вода - остальное.

Совокупность существенных признаков заявляемого способа среди известных прототипов не выявлена, что позволяет сделать вывод о соответствии заявляемого способа критерию «изобретательский уровень» и «новизна».

Достигаемый технический результат заключается в получении биологически активных препаратов на основе водорастворимых маннопротеинов и способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкана, обладающих повышенной чистотой, с помощью заявляемого экологически чистого и простого способа.

Изобретение поясняется следующими примерами.

Пример 1.

Высушенные до влажности 10 мас.% прессованные хлебопекарные дрожжи ГОСТ 171-81 механически активируют в проточном активаторе центробежного типа ЦЭМ, или виброцентробежного типа ВЦМ, или роликовой мельнице обеспечивающих ускорение мелющих тел 60 м/с 2 и время пребывания в зоне обработки 0,5 минут. Полученный полупродукт смешивают с ферментативным комплексом «ЦеллоЛюкс-А» (производство ПО «СИББИОФАРМ» г.Бердск), обладающим способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюканазной активностью, в соотношении 99,5/0,5. К смеси добавляют буферный раствор с pH 4-6 до концентрации твердой фазы 5 мас.% и проводят ферментативный гидролиз в течение 10 часов при температуре 50°C.

При ускорении мелющих тел менее 60 м/с2 не обеспечивается достаточная разупорядоченность супрамолекулярной структуры клеточных стенок дрожжевой биомассы, что снижает эффективность последующего ферментативного гидролиза.

Применение обработки менее 0,5 минут не обеспечивает необходимой степени разрушения дрожжевых клеток, накопления механической энергии и практически не приводит к образованию механокомпозита. Понижение температуры ферментативного гидролиза ниже 50°C отрицательно сказывается на скорости протекания гидролиза, а проведение прогрева менее, чем за 10 часов, не обеспечивает оптимальной степени превращения. Понижение концентрации твердой фазы менее 5 мас.% не целесообразно из экономических соображений, так как связано с дальнейшей необходимостью удаление лишнего объема воды.

Пример 2.

Высушенные до влажности 10 мас.% прессованные хлебопекарные дрожжи ГОСТ 171-81 механически активируют в проточном активаторе центробежного типа ЦЭМ, или виброцентробежного типа ВЦМ, или роликовой мельнице обеспечивающих ускорение мелющих тел 600 м/с2 и время пребывания в зоне обработки 15 минут. Полученный полупродукт смешивают с ферментативным комплексом «ЦеллоЛюкс-А» (производство ПО «СИББИОФАРМ» г.Бердск), обладающим способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюканазной активностью, в соотношении 9/1. К смеси добавляют буферный раствор с pH 4-6 до концентрации твердой фазы 20 мас.% и проводят ферментативный гидролиз в течение 20 часов при температуре 65°C.

При ускорении более 600 м/с2 происходит разогрев обрабатываемой биомассы, что может привести к разрушению биологически активных маннопротеинов. Применение обработки свыше 15 минут также может приводить к механодеструкции целевых компонентов. Повышение температуры ферментативного гидролиза выше 65°C приводит к денатурации ферментативного комплекса. Увеличение времени прогрева свыше 20 часов несущественно сказывается на степень превращения ввиду постепенного уменьшения скорости реакции от времени. Повышение концентрации твердой фазы более 20 мас.% не целесообразно ввиду высокой вязкости реакционной смеси.

Пример 3.

Осуществляется в условиях примера 2. В качестве ферментативного комплекса используется смесь ферментативного комплекса «ЦеллоЛюкс А», обладающего способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюканазной активностью, и ферментативного комплекса «Протосубтилин г3х» (производство ПО «СИББИОФАРМ» г.Бердск), обладающего протеазной активностью по отношению к белкам клеточной стенки. Оптимальная температура проведения ферментативного гидролиза для данного ферментативного комплекса 60°C, оптимальный pH 6-7. Продолжительность реакции 15 часов.

Использование смеси ферментативных комплексов, обладающих способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюканазной и протеазной активностью, позволяет увеличить скорость ферментативной реакции гидролиза клеточной стенки за счет комплексного воздействия на все ее структурные компоненты.

Пример 4.

Осуществляется в условиях примера 1-2. В качестве механического активатора используют активатор планетарного типа АГО-2, позволяющий получать в лабораторных условиях небольшие партии продукта для научных исследований и отработки технологических стадий.

Пример 5.

Осуществляется в условиях примера 2. В качестве сырья используется дрожжевая биомасса послеспиртовой барды высушенная до влажности 10 мас.%. Ввиду наличия в дрожжевой биомассе послеспиртовой барды соединений, способных инактивировать ферментативный комплекс, затрудняя протекание ферментативного гидролиза, целесообразно использовать дрожжевую биомассу и ферментативный комплекс, обладающий способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюканазной активностью, в соотношении 90/10. Продолжительность реакции составляет в данном случае 30 часов. Вовлечение в производство дешевого и некондиционного сырья позволяет рационально утилизировать перечисленные отходы, а также сократить расходы на получение препарата.

Пример 6.

Осуществляется в условиях примера 2-3. В качестве сырья используется биомасса кормовых дрожжей, высушенная до влажности 10 мас.%. Ввиду наличия у кормовых дрожжей упрочненной клеточной стенки, целесообразно использовать интенсивные режимы механической активации и смесь ферментативных комплексов, обладающих способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюканазной и протеазной активностью. Соотношение интенсивно активированной биомассы кормовых дрожжей и смеси ферментативных комплексов составляет 98/2. Продолжительность реакции составляет 20 часов. Вовлечение в производство дешевого кормового сырья позволяет сократить расходы на получение препарата.

Пример 7

Осуществляется в условиях примера 1-3. Продукт, полученный в результате ферментативного гидролиза центрифугируют в течение 10 минут при 5000 об./мин. Осадок, содержащий способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкан, промывают раствором 0,005-0,01 М гидроксида натрия с постепенным понижением концентрации, а затем дистиллированной водой. Очищенный препарат способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкана сушат распылительной сушкой или в вакуумных сушильных шкафах при температуре не выше 50°C.

Полученный продукт содержит, мас.%:

способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкан - 80%,

белки - 10%,

зола - 5%,

вода - остальное.

Пример 8.

Осуществляется в условиях примеров 1-3. Продукт, полученный в результате ферментативного гидролиза центрифугируют в течение 10 минут при 5000 об./мин. Надосадочную жидкость, содержащую маннопротеины, фильтруют на молекулярных ситах, удерживающих молекулы с молекулярной массой более 10 kDa и многократно промывают раствором «25 мас.% дистиллированной воды / 75 мас.% этилового спирта» до достижения прозрачных промывных вод. Очищенный препарат, содержащий маннопротеины, сушат распылительной сушкой или в вакуумных сушильных шкафах при температуре не выше 50°C.

Полученный продукт содержит, мас.%:

водорастворимые маннопротеины - 90%,

способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкан - 2%,

зола - 3%,

вода - остальное.

Пример 9.

Осуществляется в условиях примера 5-6. Продукт, полученный в результате ферментативного гидролиза, центрифугируют в течение 10 минут при 5000 об./мин. Осадок, содержащий способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкан, промывают раствором 0,005-0,01 М гидроксида натрия с постепенным понижением концентрации, а затем дистиллированной водой. Очищенный препарат способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкана сушат распылительной сушкой или в вакуумных сушильных шкафах при температуре не выше 50°C.

Полученный продукт содержит, мас.%:

способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкан - 75%,

белки - 13%,

зола - 7%,

вода - остальное.

Пример 10.

Осуществляется в условиях примера 5-6. Продукт, полученный в результате ферментативного гидролиза, центрифугируют в течение 10 минут при 5000 об./мин. Надосадочную жидкость, содержащую маннопротеины, фильтруют на молекулярных ситах, удерживающих молекулы с молекулярной массой более 10 kDa и многократно промывают раствором «25 мас.% дистиллированной воды / 75 мас.% этилового спирта» до достижения прозрачных промывных вод. Очищенный препарат, содержащий маннопротеины, сушат распылительной сушкой или в вакуумных сушильных шкафах при температуре не выше 50°C.

Полученный продукт содержит, мас.%:

водорастворимые маннопротеины - 85%,

способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкан - 4%,

зола - 6%,

вода - остальное.

Источники информации

1. Biorndal H., Lindberg В. The Structure of a способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -(1-6)-D-glucan from yeast cell walls // Biochem. J. - 1973. - № .135. - P.31-36.

2. Manners D.J., Masson A.J., Patterson J.C. The structure of a способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -(1-3)-D-glucan from yeast cell walls // Biochem. J. - 1973. - № 135. - С.19-30.

3. Бирюзова В.И. Ультраструктурная организация дрожжевой клетки / М.: Наука, 1993. - 224 с.

4. Калебина Т.С., Кулаев И.С. Роль белков в формировании молекулярной структуры клеточной стенки дрожжей // Успехи биологической химии. - 2001. - № .41. - С.105-130.

5. Kitamura К., Matsuki S., Tanabe K. Physiologically active polysaccharides, production ad use thereof// Pat. USA. - № 4.313.934.-2.02.1982.

6. Nakakuki Т. Present status and future prospects of functional oligosaccharide development in Japan // J. Appl. Glycosci. - 2005. - № 52. - P.267-271.

7. Warrand J. Healthy polysaccharides. The next chapter in food products // Food technol. Biotechnol. - 2006. - № 44. - P.355-370.

8. Гликопротеины, под ред. А. Готтшалка, Т1./М.: Мир, 1969. - 304 с.

9. Fairchild A.S., Grimes J.L., Jones F.T., Winel M.J., Edens F.W., Sefton A.E. Effects of hen age, Bio-Mos, and Flavomycin on poult susceptibility to oral Escherichia coli challenge // J. Poultry Sci. - 2001. - № 80. - P.562-571.

10. Firon N., Oftek I., Sharon N. Carbohydrate specificity of the surface lectins of Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, and Salmonella typhimurium II Carbohydrate research - 1983. - № 120. - P.235-249.

11. Smith S., Elbein A.D., Pan Y.T. Inhibition of bacterial binding by high-mannose oligosaccharides // Pat. USA. - № 5.939.279. - 17.08.1999.

12. Tzipori S. The relative importance of enteric pathogen affecting neonates of domestic animals // Adv. in vet. sc. compare, med. - 1985. - № 29. - P.103-206.

13. Dawson K.A., Sefton A.E. Methods and composition for control of coccidiosis // Pat. USA. - № 7.048.937.B2. - 23.05.2006.

14. Sedmak J.J. Production of beta-glucans and mannans // Pat. USA. - № 2006/0263415.A1. - 23.11.2006.

15. Белоусова Н.И., Гордиенко С. В., Ерошин В.К., Ильченко В.Я. Получение смесей аминокислот на основе автолизатов дрожжей Saccharomyces, выращенных на этаноле или сахарах // Биотехнология. - 1990. - № 3. - С.6-9.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкана, включающий подготовку биомассы дрожжей к ферментативному гидролизу, ферментативный гидролиз, разделение на фракции, очистку, отличающийся тем, что биомассу дрожжей предварительно подвергают механической активации в активаторах или мельницах, обеспечивающих ускорение мелющих тел 60-600 м/с2 при времени пребывания в зоне обработки 0,5-15 мин, к полученному механокомпозиту добавляют раствор ферментного комплекса, проявляющий способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюканазную или протеазную активность, до концентрации комплекса 0,5-10 мас.%, и буферный раствор с pH 4-7, до концентрации твердой фазы 5-20 мас.%, гидролиз проводят при температуре 50-65°C в течение 10-30 ч, полученный гидролизат разделяют на маннопротеиновую и способ получения водорастворимых фракций маннопротеинов и <img src= -глюкана, патент № 2504384" SRC="/images/patents/502/2504354/946.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -глюкановую фракции, которые подвергают последующей очистке.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что механическую активацию биомассы дрожжей проводят в активаторах планетарного, центробежного или виброцентробежного типов или в роликовых мельницах.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2504384

patent-2504384.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс A61K31/715  полисахариды, те имеющие больше, чем пять сахаридных радикалов, соединенных друг с другом гликозидными связями; их производные, например простые эфиры, сложные эфиры

Патенты РФ в классе A61K31/715:
использование альгинатных олигомеров в борьбе с биопленками -  патент 2527894 (10.09.2014)
композиции для лечения гастроэзофагеальной рефлюксной болезни (гэрб) -  патент 2524639 (27.07.2014)
полисахарид из штамма bifidobacterium infantis и его применение для лечения или предупреждения воспалительных расстройств. -  патент 2511044 (10.04.2014)
фармацевтическая композиция для лечения гастроэзофагеальной рефлюксной болезни -  патент 2501549 (20.12.2013)
глазные композиции, содержащие мукоадгезивные полисахариды, способные стимулировать восстановление эпителия роговицы -  патент 2493854 (27.09.2013)
композиционный энтеросорбент -  патент 2491941 (10.09.2013)
способ лечения шокового состояния у новорожденных с хирургической патологией -  патент 2491088 (27.08.2013)
способ лечения воспалительных заболеваний парадонта -  патент 2489137 (10.08.2013)
способ прогнозирования массивной интраоперационной кровопотери при операциях по поводу неорганных забрюшинных опухолей -  патент 2489087 (10.08.2013)
применение олигосахаридов, содержащих n-ацетиллактозамин, для развития иммунных ответов у новорожденных -  патент 2486904 (10.07.2013)

Класс A61K31/716 глюканы

Патенты РФ в классе A61K31/716:
терапевтическое восстановление и усиление увлажнения поверхности глаза -  патент 2510274 (27.03.2014)
средства, повышающие выживаемость при травматическом шоке -  патент 2471489 (10.01.2013)
средства, обладающие эритропротекторным действием при отравлении фенилгидразином -  патент 2471488 (10.01.2013)
применение дрожжевых клеточных стенок для лечения и/или предупреждения гиперинсулинемии -  патент 2463065 (10.10.2012)
препарат для заживления ран и предотвращения адгезии повязки к ране, содержащий хитозан-глюкановый комплекс -  патент 2455995 (20.07.2012)
фармацевтическая композиция для лечения атопического дерматита -  патент 2453303 (20.06.2012)
способ лечения генерализованных васкулитов при нейроинфекциях у детей -  патент 2444353 (10.03.2012)
способ пролонгированного воздействия на рефлексотерапевтические точки (филлеропунктура) -  патент 2406478 (20.12.2010)
мукоадгезивные ксилоглюкансодержащие препараты, полезные в медицинских устройствах и в фармацевтических препаратах -  патент 2403012 (10.11.2010)
способ профилактики тяжелых осложнений беременности у пациенток с тромбофилией -  патент 2367446 (20.09.2009)

Класс A61K36/06 грибы, например дрожжи



Наверх