ПАТЕНТНЫЙ ПОИСК В РФ
НОВЫЕ ПАТЕНТЫ, ЗАЯВКИ НА ПАТЕНТ
БИБЛИОТЕКА ПАТЕНТОВ НА ИЗОБРЕТЕНИЯ

лечебное средство с противоопухолевой активностью на основе акадезина

Классы МПК:A61K31/7056  содержащие пятичленные кольца с азотом в качестве гетероатома
A61K31/192  имеющие ароматические группы, например сулиндак, 2-арилпропионовые кислоты, этакриновая кислота
A61K31/405  индолалканкарбоновые кислоты; их производные, например триптофан, индометацин
A61K31/616  карбоновыми кислотами, например ацетилсалициловая кислота
A61P35/00 Противоопухолевые средства
Автор(ы):, , , , , , , , , , , , , , , ,
Патентообладатель(и):Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2012-10-31
публикация патента:

Предложено лечебное средство с повышенной противоопухолевой активностью на основе акадезина, включающее дополнительно к акадезину нестероидный противовоспалительный препарат: ибупрофен, или индометацин, или аспирин. Показано синергетическое противоопухолевое действие заявленного средства на модели В-клеточного лейкоза. 3 табл., 3 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности онкологии и гематологии, а именно к лечебному средству для лечения В-клеточного лейкоза на основе 5-аминоимидазол-4-карбоксамид-1-рибофуранозида (АИКАР, акадезина) в комбинации с одним из нестероидных противовоспалительных препаратов (НСПВП).

Среди распространенных видов злокачественных опухолей - гемобластозы (опухоли кроветворной системы), в частности малигнизация В-лимфоцитов (В-клеточный лейкоз). В настоящее время практически единственным средством сохранения жизни и поддержания ее относительно высокого качества у больных В-клеточным лейкозом служит базисная полихимиотерапия (антрациклиновые антибиотики, алкилирующие агенты, антимитотические препараты и др.). При рецидивах заболевания используют препараты нового поколения - ингибиторы протеинкиназ дасатиниб и понатиниб. Указанные режимы лечения проводятся как многомесячные и многолетние курсы и, следовательно, дорогостоящи [Тrаре АР, Gonzalez-Angulo AM. Breast cancer and metastasis: on the way toward individualized therapy. Cancer Genomics Proteomics. 2012 9(5):297-310; Rodrigues G, Sanatani M. Age and comorbidity considerations related to radiotherapy and chemotherapy administration. Semin Radiat Oncol. 2012, 22(4):277-283)].

Особенность опухолевых клеток - приобретение устойчивости к практически любым препаратам. Это обусловлено нарушением механизмов гибели в опухолевых клетках и выживанию вариантов с нефункционирующими сигнальными путями программированной гибели (апоптоза). Эта важнейшая трудность противоопухолевой терапии делает необходимым поиск веществ, способных вызывать неапоптотические виды гибели опухолевых клеток. К таким веществам относят акадезин [Van Den Neste Е, Van den Berghe G, Bontemps F. AICA-riboside (acadesine), an activator of AMP-activated protein kinase with potential for application in hematologic malignancies. Expert Opin. Investig. Drugs. 2010, 19(4):571-578; Drew BG, Kingwell BA. Acadesine, an adenosine-regulating agent with the potential for widespread indications. Expert Opin. Pharmacother. 2008, 9(12):2137-2144].

Акадезин важен для противоопухолевой терапии благодаря уникальному механизму противоопухолевого действия: это соединение вызывает сложную гибель с участием механизма некроза [Глазунова и соавт., АИКАР - противоопухолевый препарат широкого спектра действия. Онкологический журнал общественного объединения "Белорусское онкологическое общество", 2012, том 6, стр.16]. Практическое применение акадезина сдерживается крайне высокой стоимостью субстанции, получаемой путем органического синтеза. Недавно разработан эффективный метод получения акадезина с помощью микробиологического синтеза с использованием рекомбинантного продуцента (RU 2405833). Цитотоксичность природной субстанции для культуры клеток В-лейкоза не отличается от активности синтетического акадезина [Глазунова и соавт., АИКАР - противоопухолевый препарат широкого спектра действия. Онкологический журнал общественного объединения "Белорусское онкологическое общество", 2012, том 6, стр.16].

Молекулярные механизмы противоопухолевого эффекта акадезина далеко не ясны, однако в настоящее время его рассматривают как перспективный противолейкозный препарат [Leukemia PLoS ONE, 2009,4(11), е2889, р.1-11; Expert Opin.Invest. Drugs. 2010,19(4),p.571-578; Blood. 2010., 116(16)3023-3032; Oncotarget. 2011, 2(12), p.1322-1328; Mol.Cancer Ther. 2011, 10(3), p.437-447].

Ближайшим аналогом заявляемого изобретения является акадезин - лечебное средство с противоопухолевой активностью, характеризующейся избирательным подавлением В-лимфоцитов, но не Т-лимфоцитов [WO 203/080076, Blood. 2003, 101, р.3674-3680; Leukemia. 2005, 19, р.292-294]. Недостатком акадезина как противоопухолевого средства является его быстрое превращение в пуриновые нуклеотиды, что снижает его внутриклеточное содержание. Вместе с тем известно, что некоторые НСПВП (ибупрофен, индометацин, аспирин) подавляют in vitro активность фермента трансформилазы-циклогидролазы, ответственного за превращение акадезина в пуриновые нуклеотиды [Baggott JE, Morgan SL, На Т, Vaughn WH, Hine RJ. Inhibition of folate-dependent enzymes by non-steroidal anti-inflammatory drugs. Biochem J. 1992, 15;282 (Pt l):197-202].

Задача настоящего изобретения - разработать лечебное средство на основе акадезина с более выраженной противоопухолевой активностью.

Задача решена путем разработки лечебного средства на основе акадезина, включающего дополнительно НСПВП: ибупрофен, или индометацин, или аспирин.

Изобретение подтверждено следующими примерами.

Пример 1. Цитотоксичность акадезина и его комбинаций с НСПВП для клеток В-лимфоцитарного лейкоза мыши (линия Р388).

Клетки линии В-клеточного лейкоза (линия Р388) культивировали в питательной среде Игла, модифицированной Дульбекко (среда DMEM) с добавлением 2 мМ L-глутамина, 100 ЕД/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина (культуральная среда) при 37°C, 5% CO2 в увлажненной атмосфере. В день эксперимента клетки подсчитывали в камере Горяева и суспендировали в культуральной среде до концентрации 50000 клеток/мл. В лунки 96-луночного планшета (Nunc, Дания) вносили 190 мкл клеточной взвеси (-10 тыс. клеток) в культуральной среде и инкубировали 16 ч при 37°C, 5% CO2. Приготавливали серийные разведения акадезина, ибупрофена, индометацина, аспирина и пироксикама из стоковых растворов (10 мМ в диметилсульфоксиде для каждого исследуемого соединения, кроме аспирина; 100 мг/мл для аспирина). Из каждого разведения получали требуемую конечную концентрацию препарата в лунке в объеме 5-10 мкл. В контрольные лунки вносили раствор диметилсульфоксида до конечной концентрации 0,5%. Клетки инкубировали с каждым соединением в отдельности или с комбинациями акадезина с остальными соединениями в течение 72 ч. Каждую концентрацию исследовали в трех повторностях. После окончания инкубации в лунки вносили 20 мкл водного раствора (5 мг/мл) бромида 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия. Клетки инкубировали 2 ч до развития темно-фиолетовой окраски клеток (формазан), удаляли культуральную среду. К клеткам добавляли 100 мкл диметилсульфоксида и суспендировали. Оптическую плотность измеряли на спектрофотометре при длине волны 570 нм, вычитая оптическую плотность при 690 нм. Процент выживших клеток рассчитывали как отношение оптической плотности (OD570 нм-OD 690 нм) контрольных (без препаратов) лунок к соответствующему показателю в лунках с той или иной концентрацией исследуемого соединения или комбинации исследуемых соединений.

Таблица 1
Цитотоксичность акадезина и НСПВП для клеток линии Р388.
Соединение Концентрация
Акадезин лечебное средство с противоопухолевой активностью на основе акадезина, патент № 2494744 0 1.53 715 30 мкМ
Ибупрофен 0 мМ100*100 10094 6229
лечебное средство с противоопухолевой активностью на основе акадезина, патент № 2494744 0,2 мМ100 10098 653212
лечебное средство с противоопухолевой активностью на основе акадезина, патент № 2494744 0,4 мМ100 6039 1885
Индометацин0 мМ 100100 1009462 29
лечебное средство с противоопухолевой активностью на основе акадезина, патент № 2494744 0,1 мМ96 1512 54 3
Аспирин 0 мМ100100 10094 6229
лечебное средство с противоопухолевой активностью на основе акадезина, патент № 2494744 0,5 мг/мл 986451 3221 15
лечебное средство с противоопухолевой активностью на основе акадезина, патент № 2494744 1 мг/мл 954632 20168

Примечания: *% выживших клеток (среднее 3-х независимых измерений). Подчеркнуты наиболее выраженные результаты синергизма акадезина с другими соединениями.

Из приведенных данных следует, что воздействие только акадезина на клетки В-лейкоза оказалось токсичным в диапазоне концентраций 15-30 мкМ. Соединения, с которыми исследованы комбинации акадезина, использованы в нетоксических или слаботоксических концентрациях. Эффект синергизма наблюдали для ибупрофена, или индометацина, или аспирина. Так, акадезин (3 мкМ) и ибупрофен (0.4 мМ) по отдельности не вызывали выраженной гибели клеток, а при комбинации двух соединений в тех концентрациях выживало только 39% клеток. Выраженный синергизм виден при совместном действии 1,5-3 мкМ акадезина и 0,1 мМ индометацина.

Таким образом, нестероидные противовоспалительные агенты: ибупрофен, или индометацин, или аспирин, усиливают цитотоксичность акадезина для культувируемых клеток В-лимфоцитарного лейкоза.

Пример 2. Противоопухолевая активность акадезина в комбинации с ибупрофеном на модели В-клеточного лейкоза Р388 у лабораторных мышей.

Клетки лимфоцитарного лейкоза Р388, индуцированного у мышей линии DBA/2 путем смазывания кожи метилхолантреном, перевивали мышам-гибридам первого поколения BDF1 (C57Bl/6j×DBA/2) подкожно в правую подмышечную область. Клетки получали из асцитной жидкости мышей-опухоленосителей. Количество клеток для прививки - 10 6 клеток в питательной среде 199. Лечение начинали через 24 часа после перевивки опухолевых клеток.

Группы животных формировали для получения статистически достоверных результатов: контрольная группа состояла из 12 мышей, опытные - из 8 животных.

Критерием оценки противоопухолевого эффекта служило торможение роста опухоли (ТРО, %). Для вычисления ТРО проводили измерение трех максимальных взаимно перпендикулярных размеров опухоли (длина, ширина, высота) у каждого животного и вычисляли ее объем, а затем средний объем опухоли в группе. Измерение объема опухоли проводили каждые 3 дня, начиная с 7-го дня опыта, когда опухоли у нелеченных животных становятся измеримыми.

Торможение роста опухоли вычисляется по формуле:

ТРО (%)=(Vk-Vo)/Vk×100, где

Vk - средний объем опухолей в контрольной группе (мм3 );

Vo - средний объем опухолей в опытной группе (мм3).

Акадезин вводили внутрибрюшинно в терапевтической дозе 80 мг/кг, а также в неэффективной дозе 50 мг/кг внутрибрюшинно в течение 10 дней. Ибупрофен вводили перорально в дозе 100 мг/кг в течение 10 дней.

При сочетанном применении акадезина в двух дозах и ибупрофена наблюдался синергический противоопухолевый эффект при взаимодействии двух препаратов. Сочетанное применение акадезина в дозе 80 мг/кг и неэффективной дозе ибупрофена 100 мг/кг противоопухолевый эффект выше: ТРО=87%-84%-68%, чем при использовании акадезина в неэффективной дозе 50 мг/кг и той же дозе ибупрофена: ТРО=64%-77%-58%. Эта разница в противоопухолевом действии двух групп статистически недостоверна (р>0,05). Однако при сочетанном применении акадезина (80 мг/кг) и ибупрофена (100 м/кг) наблюдалась гибель 3 мышей из 8, получавших такую комбинацию (37,5% случаев).

Таблица 2
Противоопухолевое действие акадезина в сочетании с ибупрофеном на В-клеточный лейкоз Р388.
ГруппаДоза, мг/кг Дни введенияПуть введения ТРО, % (дни от начала опыта) Гибель от токсичности***
810 13
Акадезин 801-10в/бр 55*46 370/8
-лечебное средство с противоопухолевой активностью на основе акадезина, патент № 2494744 -501-10 -лечебное средство с противоопухолевой активностью на основе акадезина, патент № 2494744 -1749 380/8
Ибупрофен100 1-10per os35 204 0/8
Акадезин+ 801-10 в/бр per os87** 84**68** 3/8
Ибупрофен 100
Акадезин+ 501-10 в/бр per os54** 77**58** 0/8
Ибупрофен 100

Примечания: *р<0,05 по отношению к контролю; **р>0,05 между группой сочетанного введения акадезина в дозе 80 мг/кг с ибупрофеном в дозе 100 мг/кг и группой сочетанного применения акадезина в дозе 50 мг/кг с ибупрофеном в дозе 100 мг/кг; ***в числителе: число мышей, погибших от токсичности в первые 3 дня после окончания лечения, в знаменателе: общее число животных в группе.

Таким образом, акадезин в сочетании с НСПВП ибупрофен проявляет синергическое противоопухолевое действие на В-клеточный лейкоз Р388.

Пример 3. Противоопухолевая активность акадезина в комбинации с аспирином на модели В-клеточного лейкоза Р388 у лабораторных мышей.

Противоопухолевую активность акадезина в комбинации с аспирином определяли по схеме, приведенной в примере 2, но акадезин вводили внутрибрюшинно в терапевтической дозе 60 мг/кг, а аспирин в дозе 200 мг/кг перорально в течение 10 дней.

Таблица 3
Противоопухолевое действие акадезина в сочетании с аспирином на В-клеточный лейкоз Р388.
Группа Доза,Дни ПутьТРО, % (дни от начала Гибель от
лечебное средство с противоопухолевой активностью на основе акадезина, патент № 2494744 мг/кгвведе- введе- опыта)токсич-
лечебное средство с противоопухолевой активностью на основе акадезина, патент № 2494744 лечебное средство с противоопухолевой активностью на основе акадезина, патент № 2494744 нияния 810 13ности***
Акадезин601-10 в/бр58* 62*37**0/8
Аспирин200 1-10per os 431944 0/8
Акадезин+ 601-10в/бр 58*63* 73*,**1/8
Аспирин200лечебное средство с противоопухолевой активностью на основе акадезина, патент № 2494744 per osлечебное средство с противоопухолевой активностью на основе акадезина, патент № 2494744 лечебное средство с противоопухолевой активностью на основе акадезина, патент № 2494744 лечебное средство с противоопухолевой активностью на основе акадезина, патент № 2494744 лечебное средство с противоопухолевой активностью на основе акадезина, патент № 2494744

Примечания: *р<0,05 по отношению к контролю; **р<0,05 между группой сочетанного введения акадезина в дозе 60 мг/кг с аспирином в дозе 200 мг/кг и группой применения акадезина в дозе 50 мг/кг в монотерапии; ***в числителе: число мышей, погибших от токсичности в первые 3 дня после окончания лечения, в знаменателе: общее число животных в группе.

Из данных, приведенных в таблице 3, следует, что акадезин в режиме монотерапии вызывал торможение роста опухоли (ТРО) через 8-10 дней после начала введения (58% и 62%). Величина ТРО не отличалась от таковой при комбинации акадезина и аспирина в указанные сроки (58% и 63%). Однако в последующем терапевтическое действие акадезина ослабевало: к 13-м суткам после начала монотерапии акадезином ТРО составил лишь 37%), тогда как при сочетанном воздействии акадезина и аспирина достигнут выраженный эффект: %ТРО=73 (таблица 3). Следовательно, комбинация акадезина с аспирином приводит к стойкому и выраженному противоопухолевому эффекту, тогда как эффективность только акадезина кратковременна. Аспирин в режиме монотерапии также проявлял противоопухолевое действие, и его эффект в комбинации с акадезином к 13-м суткам лечения следует считать аддитивным (ТРО 37% акадезин, 44% аспирин, 73% комбинация акадезина и аспирина).

Таким образом, из результатов, представленных в таблицах 2 и 3, следует, что заявляемое лечебное средство в соответствующих дозах проявляет более выраженную противоопухолевую активность, чем акадезин.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Лечебное средство с противоопухолевой активностью на основе акадезина, отличающееся тем, что дополнительно включает нестероидный противовоспалительный препарат: ибупрофен, или индометацин, или аспирин.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2494744

patent-2494744.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс A61K31/7056  содержащие пятичленные кольца с азотом в качестве гетероатома

Патенты РФ в классе A61K31/7056:
новые 5-модифицированные пиримидиновые нуклеозиды - ингибиторы роста mycobacterium tuberculosis -  патент 2517173 (27.05.2014)
наружное средство для лечения при ранах, загрязненных микрофлорой -  патент 2512824 (10.04.2014)
фармацевтический состав для лечения инфекционных воспалительных заболеваний в гинекологии и способ его получения -  патент 2498806 (20.11.2013)
состав для топического применения, содержащий микросферы адапалена и клиндамицин -  патент 2497515 (10.11.2013)
органические соединения -  патент 2489439 (10.08.2013)
моносебацинат производного пиразола -  патент 2482122 (20.05.2013)
стабилизированная композиция местного применения, обладающая противоугревым и антибиотическим действием -  патент 2481845 (20.05.2013)
фармацевтическая композиция для лечения инфекционных воспалительных заболеваний в гинекологии и способ ее получения -  патент 2479305 (20.04.2013)
способ лечения хронического вирусного гепатита с препаратами в липосомальной форме -  патент 2475263 (20.02.2013)
комбинация и фармацевтический препарат для лечения воспалительных заболеваний -  патент 2465915 (10.11.2012)

Класс A61K31/192  имеющие ароматические группы, например сулиндак, 2-арилпропионовые кислоты, этакриновая кислота

Патенты РФ в классе A61K31/192:
соединение сальвианоловой кислоты л, способ его приготовления и применения -  патент 2529491 (27.09.2014)
четырехзамещенные бензолы -  патент 2527177 (27.08.2014)
композиции, включающие по меньшей мере одно производное нафтойной кислоты, бензоилпероксид и по меньшей мере один пленкообразующий компонент, способы их получения и их применения -  патент 2526905 (27.08.2014)
применение бензофенонового производного или его соли и ингибитора tnf- в комбинации, и фармацевтическая композиция, содержащая данное производное или его соль и ингибитор -  патент 2522272 (10.07.2014)
сокристаллическая форма фенбуфена -  патент 2521572 (27.06.2014)
соединение для лечения метаболических расстройств -  патент 2521284 (27.06.2014)
средство, обладающее анксиолитической активностью -  патент 2519191 (10.06.2014)
средство для профилактики и снижения деструкции белков скелетных мышц при их атрофии, вызванной гипокинезией и/или гравитационной разгрузкой -  патент 2517576 (27.05.2014)
способ профилактики и снижения деструкции белков скелетных мышц при их атрофии, вызванной гипокинезией и/или гравитационной разгрузкой -  патент 2517259 (27.05.2014)
содержащее конденсированную кольцевую структуру производное и его применение в медицине -  патент 2512547 (10.04.2014)

Класс A61K31/405  индолалканкарбоновые кислоты; их производные, например триптофан, индометацин

Патенты РФ в классе A61K31/405:
замещенные циклогексилдиамины -  патент 2526251 (20.08.2014)
производное аминокислоты -  патент 2499790 (27.11.2013)
комплекс, образованный полисахаридом и нвр -  патент 2498820 (20.11.2013)
способы увеличения абсорбции пептидов, пептидомиметиков и других субстратов гастроинтестинального транспортного белка -  патент 2494737 (10.10.2013)
лечение агонистом мелатонина -  патент 2488392 (27.07.2013)
композиция для подавления аппетита, улучшения тонуса и настроения с природной антидепрессантной активностью и с антиастеническим действием -  патент 2484840 (20.06.2013)
капсула и лекарственное средство для профилактики сердечно-сосудистых заболеваний -  патент 2477123 (10.03.2013)
пероральная система доставки лекарственных веществ в область кишечника -  патент 2467766 (27.11.2012)
способ синтеза сульфонилгалогенидов и сульфонамидов из солей сульфоновых кислот -  патент 2466983 (20.11.2012)
соединения, обладающие антагонистической активностью по отношению к crth2 -  патент 2458918 (20.08.2012)

Класс A61K31/616  карбоновыми кислотами, например ацетилсалициловая кислота

Патенты РФ в классе A61K31/616:
способ коррекции тромбофилических нарушений гемостаза во время беременности -  патент 2524653 (27.07.2014)
применение соли ацетилсалициловой кислоты для лечения вирусных инфекций -  патент 2524304 (27.07.2014)
противотуберкулезное лекарственное средство -  патент 2498803 (20.11.2013)
новая композиция для лечения метаболического синдрома -  патент 2486902 (10.07.2013)
способ профилактики острого коронарного синдрома у мужчин, страдающих артериальной гипертонией, с умеренным риском развития острых сердечно-сосудистых осложнений -  патент 2483671 (10.06.2013)
способ получения лекарственных и биологически активных средств -  патент 2479318 (20.04.2013)
капсула и лекарственное средство для профилактики сердечно-сосудистых заболеваний -  патент 2477123 (10.03.2013)
способ ведения пациентов после протезирования трикуспидального клапана -  патент 2465894 (10.11.2012)
комбинация, обладающая антиагрегантной, липидрегулирующей и гастропротекторной активностями, фармацевтическая композиция -  патент 2453314 (20.06.2012)
комбинированное лекарственное средство кардифол, обладающее кардиопротекторным, антиагрегатным и антиишемическим действием на сердечно-сосудистую систему -  патент 2446806 (10.04.2012)

Класс A61P35/00 Противоопухолевые средства

Патенты РФ в классе A61P35/00:
способ лечения рака толстой кишки -  патент 2529831 (27.09.2014)
способ оценки эффекта электромагнитных волн миллиметрового диапазона (квч) в эксперименте -  патент 2529694 (27.09.2014)
новые (поли)аминоалкиламиноалкиламидные, алкил-мочевинные или алкил-сульфонамидные производные эпиподофиллотоксина, способ их получения и их применение в терапии в качестве противораковых средств -  патент 2529676 (27.09.2014)
производные 1, 2-дигидроциклобутендиона в качестве ингибиторов фосфорибозилтрансферазы никотинамида -  патент 2529468 (27.09.2014)
фармацевтическое средство, содержащее эпитопные пептиды hig2 и urlc10, для лечения рака, способы и средства для индукции антигенпрезентирующей клетки и цитотоксического т-лимфоцита (цтл), антигенпрезентирующая клетка и цтл, полученные таким способом, способ и средство индукции иммунного противоопухолевого ответа -  патент 2529373 (27.09.2014)
модульный молекулярный конъюгат для направленной доставки генетических конструкций и способ его получения -  патент 2529034 (27.09.2014)
модулирующие jak киназу хиназолиновые производные и способы их применения -  патент 2529019 (27.09.2014)
лечение опухолей с помощью антитела к vegf -  патент 2528884 (20.09.2014)
способ лечения местнораспространенного неоперабельного рака поджелудочной железы -  патент 2528881 (20.09.2014)
новые бензолсульфонамидные соединения, способ их получения и применение в терапии и косметике -  патент 2528826 (20.09.2014)


Наверх