способ прогнозирования гематогенного метастазирования при диффузном типе рака желудка

Формула изобретения

Способ прогнозирования гематогенного метастазирования при диффузном типе рака желудка путем иммуногистохимического исследования препаратов первичной опухоли, отличающийся тем, что для проведения исследования используют антитела Cyclophilin A Antibody (CypA) клон NBP 1-54388 при рабочем разведении 1:1200, и при наличии позитивной цитоплазматической экспрессии CypA в клетках первичной опухоли прогнозируют низкий риск развития гематогенных метастазов.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способов прогнозирования низкого риска гематогенного метастазирования при диффузном типе рака желудка.

В настоящее время одной из наиболее важных гистологических классификаций рака желудка является классификация, предложенная Lauren P. с разделением опухолей на кишечный и диффузный типы [1]. Несмотря на значительные достижения в области диагностики и прогнозирования течения заболевания при раке желудка до сих пор остаются высокими показатели заболеваемости и смертности от данной патологии [2].

Наиболее существенными прогностическими параметрами, предсказывающими гематогенную диссеминацию, являющуюся одной из наиболее частых причин смерти больных раком желудка, считают глубину прорастания стенки органа, интраваскулярную инвазию, выраженность ангиогенеза в опухолевом узле и лимфогенное метастазирование [3, 4, 5].

Наиболее близким к предлагаемому является способ определения показателей пятилетней выживаемости по выраженности экспрессии в первичной опухоли показателя апоптоза р53, предложенный IkeguchiM., Cai J., Yamane N. et al. (1999). При высоких показателях экспрессии пятилетняя выживаемость составляет 82%, при низких - 60%. Известный способ является недостаточно точным и информативным в плане прогнозирования гематогенного метастазирования при диффузном раке желудка Недостатком данного способа является то, что исследование проводится на общей группе больных раком желудка без уточнения гистотипа опухоли, не уточняется конкретная граница значений, относящихся к «высоким» и «низким показателям» [6]. Кроме того, пятилетняя выживаемость является широким понятием, включающим случаи наступления летальных исходов не только от отдаленного метастазирования.

Новая техническая задача - повышение точности и информативности способа.

Для решения поставленной задачи в способе прогнозирования гематогенного метастазирования при диффузном типе рака желудка, путем иммуногистохимического исследования препаратов первичной опухоли, для исследования используют антитела Cyclophilin A Antibody (CypA)клон NBP1-54388 при рабочем разведении 1:1200 и при наличии позитивной цитоплазматической экспрессии СурА в клетках первичной опухоли прогнозируют низкий риск возникновения гематогенных метастазов.

Способ осуществляют следующим образом. У пациентов с обнаруженным в операционном материале диффузным типом рака желудка проводят иммуногистохимическое исследование препаратов первичной опухоли. Для детекции экспрессии циклофиллина A используют антитела Cyclophilin A Antibody (CypA) клон NBP1-54388, рабочее разведение 1:1200, фирмы Novus, USA. Определяют наличие клеток с позитивной цитоплазматической экспрессией CypA в первичной опухоли при большом увеличении микроскопа (×400). В случаях с позитивной экспрессией CypA прогнозируют низкий риск развития гематогенных метастазов.

Сущность предлагаемого способа иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Больной С., 43 года, с диффузным типом рака желудка без предоперационной химиотерапии, стадии T2N3M0. Проведено исследование риска гематогенного метастазирования согласно предлагаемому способу. При иммуногистохимческом исследовании определялась позитивная экспрессия CypA в клетках первичной опухоли. В течение 60 месяцев наблюдения гематогенных метастазов не возникло.

Пример 2. Больной О., 31 год, с диффузным типом рака желудка без предоперационной химиотерапии, стадии T2N3M0. При иммуногистохимческом исследовании определялась негативная экспрессия CypA. Через 24 месяца после операции у пациента возникли гематогенные метастазы в печени.

Выбор маркера обусловлен изучением данных литературы, патентных источников и проанализированных клинических наблюдений. Циклофилин A (CypA) является белком, локализованным в цитозоле, одним из представителей семейства иммунофилинов, катализирующим реакцию цис-транс изомеризации X-Pro пептидной связи [3]. Показано, что данный белок участвует в регуляции процессов клеточного роста и дифференцировки [4]. Кроме цитозольной формы, существует секретируемая форма, которую синтезируют активированные макрофаги [5]. Внеклеточная форма CypA действует как агент хемотаксиса, регулирующий миграцию моноцитов, нейтрофилов, эозинофилов и T-клеток [5]. Этот белок обладает иммуномодулирующей активностью, стимулируя созревание и антигенпредставляющую функцию дендритных клеток [4]. В последние годы было проведено множество исследований, которые выявили гиперэкспрессию CypA в злокачественных опухолях различных локализаций [7, 8]. Однако, точная роль CypA в канцерогенезе остается до конца не ясной.

Критерии предлагаемого способа подобраны на основании анализа данных клинических исследований

В исследование вошло 29 пациентов с кишечным и 17 с диффузным типом рака желудка стадии T_1-3N_0-3M ₀, из них 48% мужчин и 52% женщин. Средний возраст больных 59,5±10,1 лет. Предоперационного лечения больным не проводилось. Операция выполнялась в объеме субтотальной дистальной резекции желудка, гастроэктомии, проксимальной резекции желудка, паллиативной субтотальной резекции желудка, операции Бильрот 2. Длительность наблюдения составила 5 лет.

Гистологический тип рака желудка устанавливался согласно классификации, предложенной Lauren P., 1965. Иммуногистохимичское исследование выполнялось по стандартной методике. Для детекции экспрессии циклофиллина A (CypA) использовались антитела Cyclophilin A Antibody (клон NBP 1-543 88) (рабочее разведение 1:1200) фирмы Novus, USA. Определялось наличие клеток с позитивной цитоплазматической экспрессией изучаемого маркера при большом увеличении микроскопа (х400). Статистическая обработка результатов выполнялась с помощью пакета программ Statistica 6,0 for Windows.

В группах больных с кишечным и диффузным типами рака желудка оценивалась экспрессия CypA (фиг.1, 2). Частота встречаемости случаев с позитивной экспрессией CypA не различалась у больных с кишечным и диффузным типами рака желудка (табл.1).

У больных с диффузным типом опухоли гематогенные метастазы выявлялись реже при позитивной экспрессии CypA, в то время как при кишечном типе рака желудка частота возникновения отдаленных метастазов не была связана с наличием экспрессии CypA (табл.2). Чувствительность метода составила 40%, специфичность, определяющая долю лиц с низким риском развития гематогенных метастазов - 100%.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет прогнозировать низкий риск гематогенного метастазирования и избегать избыточной агрессивной адъювантной терапии.

Источники информации, использованные при составлении описания:

1. Lauren P. The two histological main types of gastric carcinoma: diffuse and so-called intestinal-type carcinoma [Text] / P. Lauren // Acta. Pathol. Microbiol. Scand. - 1965. - № 64. - P.31-49.

2. Tenderenda M. Expression of CD34 in gastric cancer and its correlation with histology, stage, proliferation activity, p53 expression and apoptotic index / M. Tenderenda, P. Rutkowski, D. Jesionek-Kupnicka, R. Kubiak // Pathol Oncol Res. - 2001. - Vol.7(2). - P.129-34.

3. Fischer G. Determination of enzymatic catalysis for the cis-trans-isomerization of peptide binding in proline-containing peptides [Text] / G. Fischer, H. Bang, C. Mech // Biomed. Biochim. Acta. - 1984. - Vol 43. - P.1101-1111.

4. Bharadwaj U. Effects of cyclophilin A on myeloblastic cell line KG-1 derived dendritic like cells (DLC) through p38 MAP kinase activation [Text] / U. Bharadwaj, R. Zhang, H. Yang, M. Li, L.X. Doan, C. Chen, Q. Yao // J. Surg. Res. - 2005. - Vol.127. - P.29-38.

5. Sherry В. Identification of cyclophilin A as a proinflammatory secretory product of lipopolysaccharide-activated macrophages [Text] / B. Sherry, N. Yarlett, A. Strupp, A. Cerami // Proc. Natl. Acad. Sci. - 1992; - Vol.89. - P.3511-3515.

6. IkeguchiM., Cai J., Yamane N. et al. // Cancer (Philad.). - 1999. - V.85. - P.2329-2335.

7. Lee J. Role of Cyclophilin A during Oncogenesis / J. Lee // Arch Pharm Res. - 2010. - VoL 33. P.181-187.

8. Obchoei S. Cyclophilin A enhances cell proliferation and tumor growth of liver fluke-associated cholangiocarcinoma / S. Obchoei, S. M. Weakley, S. Wongkham, C. Wongkham, K. Sawanyawisuth, Q. Yao, C. Chen // Mol Cancer. - 2011. - Vol.10. - P.102.

Приложение

Фиг.1. Экспрессия CypA в криброзных структурах при кишечном типе рака желудка (ув. ×400).

Фиг.2. Экспрессия CypA в дискретных опухолевых клетках при диффузном типе рака желудка (ув. ×400).

Таблица 1. Частота встречаемости случаев с экспрессией CypA в опухолевых клетках при кишечном и диффузном типе рака желудка.

Таблица 2. Взаимосвязь экспрессии CypA в опухолевых клетках с наличием гематогенных метастазов при кишечном типе рака желудка.

Таблица 1
Тип рака желудка	Экспрессия CypA (количество больных, а.ч., %)
	негативная	позитивная
Кишечный	3/29 (10%)	26/29 (90%)
Диффузный	2/17 (12%)	15/17 (88%)
2=0,02; p=0,88

Таблица 2
Экспрессия циклофилина A	Гематогенные метастазы (количество больных, а.ч., %)
	нет (М0)	есть (М+ )	нет (М0)	есть (М+)
	кишечный тип		диффузный тип
негативная	3/3 (100%)	0/3 (0%)	0/2 (0%)	2/2 (100%)
позитивная	22/26 (85%)	4/26 (15%)	12/15 (80%)	3/15 (20%)
	2=0,53; p=0,46		2=5,4; p=0,01