n-оксикарбонилзамещенные 5'-деокси-5-фторцитидины и фармацевтический препарат

Формула изобретения

1. Соединение 5'-деокси-5-фтор-N⁴-пентилоксикарбонил)цитидин, обладающее противоопухолевой активностью.

2. Фармацевтический препарат, обладающий противоопухолевым действием, содержащий активный компонент и фармацевтически приемлемый носитель, отличающийся тем, что в качестве активного компонента он содержит соединение по п.1.

Описание изобретения к патенту

Настоящее изобретение относится к 5'-деокси-5-фтор-N ⁴-(пентилоксикарбонил)цитидину, которое является производным N⁴-(замещенный оксикарбонил)-5'-дезокси-5-фторцитидина общей формулы (I):

в которой R¹ представляет насыщенный или ненасыщенный, нормальный или разветвленный углеводородный радикал (в котором число атомов углерода в самой длинной нормальной цепи находится в интервале три-семь) или радикал формулы -(CH ₂)_n-Y (где n=0-4, если Y представляет циклогексил, или n=2-4, если Y представляет низшую алкоксигруппу с 1-4 атомами углерода или фенил) и R² представляет атом водорода или легко гидролизуемый в физиологических условиях радикал, а также гидратам или сольватам соединений общей формулы (I) и к содержащему их фармацевтическому препарату, характеризующемуся прекрасными фармакокинетическими свойствами при лечении опухолей с высоким уровнем безопасности.

Известно, что многие предшественники 5-фторурацила (5-ФУ) применимы в качестве противоопухолевых средств, но в целом эффективность их биоконверсии все еще остается недостаточной при лечении страдающих опухолями больных, и являются причиной желудочной токсичности и иммуносупрессорной токсичности, и такая токсичность в основном и ограничивает их дозировки.

В патенте США 4966891 раскрыты предшественники 5-ФУ, улучшенные с точки зрения вышеупомянутых эффективности биоконверсии и токсичности. Под действием ациламидаз эти предшественники превращаются в 5'-дезокси-5-фторцитидин (5'-ДФЦТ), а под действием цитидиндезаминазы - в 5'дезокси-5-фторуридин (5'-ДФУР) и затем под действием пиримидиннуклеотидной фосфорилазы - в 5-ФУ (in vivo), которая преимущественно локализуется в печени, тонкой кишке и тканях опухоли. В ходе интенсивных исследований фармакокинетических показателей предшественников 5-ФУ, в частности производных N ⁴-(замещенный оксикарбонил)-5'-дезокси-5-фторцитидина, создатели настоящего изобретения обнаружили, что определенные специфичные предшественники под действием изофермента ациламидазы, преимущественно обнаруживаемого в печени, но не в других органах человека, селективно превращаются в 5'-ДФЦТ и характеризуются лучшими фармакокинетическими показателями, чем другие испытанные соединения. Дальнейшие исследования, основанные на указанном открытии, позволили создателям настоящего изобретения выяснить, что особые производные N⁴-(замещенные оксикарбонил)-5'-дезокси-5-фторцитидина (далее N⁴-(замещенный оксикарбонил)-5'-ДФЦТ) вышеприведенной общей формулы (1) отличаются улучшенными фармакокинетическими показателями селективности на обезьянах, а именно в 4-7 раз более высокой максимальной концентрацией (C_макс) 5'-ДФУР и в 4 раза большей площадью под кривой (ППК) в крови по сравнению с другими соединениями и меньшей кишечной токсичностью, в результате чего и возникло настоящее изобретение.

5'-деокси-5-фтор-N ⁴-(пентилоксикарбонил)цитидин, относящийся к N⁴ -(замещенным оксикарбонил)-5'-ДФЦТ общей формулы (I) может быть получен реакцией соединения общей формулы (II):

в которой R⁴ представляет радикал для защиты гидроксигруппы, такой как: ацетил, бензоил, триметилсилил, трет-бутилдиметилсилил и т.п.,

с соединением общей формулы (III):

R¹OCOCl

в которой R¹ принимает вышеуказанные значения, с последующим, если необходимо, удалением защитного радикала.

Соединения вышеприведенной общей формулы (II) могут быть получены 2', 3'-ди-O-ацилированием или -силилированием 5'-дезокси-5-фторцитидина (J. Med. Chem, 22. 1330 (1979)) по методике, приведенной в патенте США 4966891, или прямым соединением 5-фторцитозина с 1,2,3-три-O-ацетил-5-дезоксифуранозой по методике, аналогичной методике, приведенной в литературе (Synthesis, 748 (1981)).

Реакция соединения вышеприведенной общей формулы (II) с соединением вышеприведенной общей формулы (III) может быть проведена в растворителе, таком как: пиридин, диоксан, тетрагидрофуран, ацетонитрил, хлороформ, дихлорметан и т.п., в присутствии акцептора кислоты, такого как: триэтиламин, пиридин, пиколин, 4-(N,N-диметиламино)пиридин, лутидин и т.п. Реакция может быть проведена в температурном интервале 0-30°С.

Защитный радикал может быть, если необходимо, удален по окончании реакции по известным специалисту методикам (Защитные группы в органическом синтезе, Джон Вили и сыновья, Нью-Йорк, Can. J. Chem., 49, 493 (1971) и патент США 4966891), например, щелочным или кислотным гидролизом.

Соединения вышеприведенной формулы (I) могут существовать как в несольватированном, так и в сольватированном виде, в том числе в гидратированной форме. Гидратация может быть осуществлена в ходе процесса приготовления или же может произойти постепенно вследствие гигроскопичных свойств первоначально безводного продукта. Сольваты с фармацевтически приемлемыми растворителями, такими как этанол, могут быть получены, например, в ходе кристаллизации.

Производные N ⁴-(замещенный оксикарбонил)-5'-ДФЦТ общей формулы (I), также как сольваты или гидраты соединений общей формулы (I), полученные способом изобретения, проявляют активность по отношению к ксенотрансплантантам рака ободочной кишки человека CXF280 и рака желудка GXF97, карциномы 26 ободочной кишки мышей, легочной карциномы Льюиса мышей и т.п. на мышах в очень широком интервале дозировок, как перорально, так и парентерально, вследствие чего применимы в качестве противоопухолевых средств. Под действием изофермента ациламидазы эти соединения успешно превращаются в 5'-ДФЦТ, под действием цитидиндезаминазы - в 5'-ДФУР и затем под действием пиридиннуклеозидной фосфорилазы превращаются в активный метаболит 5-ФУ.

Настоящее изобретение, кроме того, относится к фармацевтическим препаратам, в частности препаратам для лечения опухолей, содержащим соединения вышеприведенной общей формулы (I).

N⁴-(Замещенный оксикарбонил)-5'-ДФЦТ настоящего изобретения могут быть введены пероральным путем или непероральным путем человеку различными обычными методами введения. Кроме того, N⁴-(замещенный оксикарбонил)-5'-ДФЦТ настоящего изобретения используют в чистом виде или вводят в состав с совместимыми фармацевтическими носителями. Такой носитель может представлять собой органический или неорганический инертный материал, пригодный для энтерального, чрескожного или парентерального введения, такой как: вода, желатин, гумиарабик, лактоза, крахмал, стеарат магния, тальк, растительные масла, полиалкиленгликоли или петролатум. Фармацевтический препарат может быть приготовлен в твердом виде (например: в таблетках, драже, таблетках с желудочным покрытием, гранул, свеч, капсул или желудочных капсул), в полужидком виде (например, в виде мазей) или в жидкой форме (например, в виде растворов, суспензий или эмульсий). Фармацевтический препарат может быть стерилизован и/или может содержать дополнительные вспомогательные добавки, такие как: стабилизаторы, консерванты, осадители, эмульгаторы, улучшающие вкус добавки, соли для изменения осмотического давления или действующие в качестве буфера вещества. Фармацевтический препарат может быть получен обычным путем.

N⁴-(замещенный оксикарбонил)-5'-ДФЦТ настоящего изобретения могут быть использованы по отдельности или в виде смеси двух или более различных N⁴-(замещенный оксикарбонил)-5'-ДФЦТ, при этом количество N⁴-(замещенный оксикарбонил)-5'-ДФЦТ составляет 0,1-99,5%, предпочтительно 0,5-95% в пересчете на массу фармацевтического препарата.

Фармацевтический препарат настоящего изобретения может быть приготовлен в сочетании с другими обычными противоопухолевыми средствами.

Подверженность действию ациламидазы N⁴-(замещенный оксикарбонил)-5'-ДФЦТ настоящего изобретения и их фармакокинетические показатели приведены ниже.

1. Подверженность действию ациламидаз обезьяны и человека

N⁴-(замещенный оксикарбонил)-5'-ДФЦТ настоящего изобретения инкубируют 60 мин при 37°C с сырыми экстрактами печени обезьяны и человека в присутствии в качестве ингибитора цитидиндезаминазы тетрагидроуридина (0,4 Мм). Затем в качестве продукта с помощью ВЭЖХ выделяют 5'-ДФЦТ и подверженность к действию фермента подсчитывают по количеству продукта. Как видно из Таблицы 1, соединения настоящего изобретения в высшей степени подвержены действию ациламидазы печени человека, что предполагает их эффективное биопревращение в 5'-ДФЦТ в человеке (см. в конце описания).

2. Фармакокинетические показатели на обезьянах

Соединения настоящего изобретения вводят перорально группе из 2-5 циномолгичных обезьян (3-4 кг). Через различное время после введения отбирают плазму на определение в крови концентрации непревращенных молекул и их активного метаболита (5'-ДФУР).

С помощью ВЭЖХ из плазмы выделяют метаболиты и подсчитывают их концентрацию. Как видно из Таблицы 2, соединения настоящего изобретения характеризуются высоким уровнем C_макс и ППК активного метаболита 5'-ДФУР в плазме. Полученные результаты показывают, что соединения настоящего изобретения могут быть эффективно использованы для лечения различных опухолей человека (см. в конце описания).

Противоопухолевая активность соединений изобретения показана ниже.

3. Противоопухолевые испытания на ксенотрансплантанте CXF280 рака ободочной кишки человека

Опухоль CXF280 (размером 2×2 мм) имплантируют подкожно мышам линии BALB/c nu/nu (21-22 г) в день 0. Когда размер опухоли достигает 100 мм³ (примерно на 14-й день), мышам ежедневно в течение 3 недель перорально вводят соединения настоящего изобретения. В один из дней после последнего введения подсчитывают объем опухоли.

Приведенный в Таблице 3 (см. в конце описания) процент ингибирования роста опухоли подсчитывают по формуле:

% ингибирования = {1-(T-V₀)/(C-V₀)} 100, где V₀ - объем опухоли перед началом лечения, T - объем опухолей в подвергаемой лечению группе, C - объем опухоли из контрольной группы.

Как видно из Таблицы 3, соединения настоящего изобретения характеризуются безопасным введением, не вызывают при этом кишечной токсичности и гораздо более эффективны, чем 5-ФУ.

4. Противоопухолевая активность и активность против общего истощения по отношению к карциноме 26 ободочной кишки мышей

Противоопухолевую активность представительного соединения (пример 13) настоящего изобретения определяют следующим образом. Мышам (CDF₁ ) подкожно инокулируют карциному 26 ободочной кишки (10⁶ клеток) в день 0. Через 21 день, когда зверьки находятся в состоянии общего истощения, им ежедневно 7 раз дают испытуемое соединение. В день после последнего введения определяют прирост массы опухоли, прирост массы остова, массу жировой ткани, концентрацию глюкозы и острого фазового реагента ИКБ (иммуносупрессивного кислотного белка) в сыворотке. Как видно из Таблицы 4 (см. в конце описания), мыши, получавшие носитель, были ненормальны с точки зрения общего истощения, характеризующегося такими параметрами, как: масса жировой ткани, содержание в сыворотке глюкозы и ИКБ, в то время как лечение соединением примера 13 подавляет рост опухоли и ведет к улучшению параметров общего истощения.

Токсичность (ЛД₅₀) представительных соединений (примеры 13, 14 и 17) настоящего изобретения выявлялась при пероральном введении ежедневно в течение 21 дня на мышах. Характерные значения ЛД ₅₀, полученные в таких опытах, составляют более 500 мг/кг/день.

Суточная дозировка больному N⁴-(замещенный оксикарбонил)-5'-ДФЦТ настоящего изобретения может меняться в зависимости от массы и состояния больного, но, как правило, находится в интервале 0,5-500 мг на 1 кг массы, предпочтительно 2-200 мг. Следует отметить, что для соединений настоящего изобретения можно ожидать в 3-5 раз более высокой активности при лечении человека по сравнению с соединениями, раскрытыми в патенте США 4966891, если эту активность рассматривать с точки зрения С _макс и ППК для 5'-ДФУР после перорального введения соединений настоящего изобретения обезьяне. По той же причине можно ожидать, что соединения настоящего изобретения покажут достаточную активность при дозировках, в 3-5 раз более низких по сравнению с дозировками соединений указанного патента США. Настоящим изобретением может быть получен фармацевтический препарат с высоким уровнем безопасности.

Нижеследующие примеры предназначены для более подробной иллюстрации настоящего изобретения, но ни в коей мере для ограничения его объема.

Ссылочный пример. Получение исходных соединений

Получение 2',3'-ди-O-ацетил-5'-дезокси-5-фторцитидина

(a) Из 5'-дезокси-5-фторцитидина

В сухом пиридине (1,3 мл) растворяют 5'-дезокси-5-фторцитидин (50 мг). К раствору при перемешивании при 0°C добавляют уксусный ангидрид (39 мл). Реакционную смесь перемешивают 3 часа при 0°C. После удаления при пониженном давлении растворителя остаток распределяют между этилацетатом и охлажденной льдом водой. Этилацетатный слой сушат над сульфатом магния и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле с элюированием смесью дихлорметан-метанол (9:1) и после перекристаллизации из изопропанола получают 37 мг 2',3'-ди-O-ацетил-5'-дезокси-5-фторцитидина, т.пл. 191,5-193°C, ББА-МС m/z 330 (МН⁺).

(б) Из 5-фторцитозина и 1,2,3-три-O-ацетил-5-дезокси- -D-рибофуранозы

Раствор иодида натрия (3,6 г) и хлорметилсилана (794 мл) в сухом ацетонитриле (15 мл) перемешивают молекулярными ситами 4A (200 мг) при 0°C в течение 5 минут (при перемешивании осаждается бесцветный хлорид натрия). Добавляют 1,2,3-три-O-ацетил-5-дезокси- -D-рибофуранозу (2,0 г) и смесь перемешивают при 0°C в течение 30 минут. Затем добавляют при 0°C свежеприготовленный из 5-фторцитозина (1,12 г) раствор триметилсилилованного 5-фторцитозина в сухом ацетонитриле (5 мл) и продолжают перемешивание в течение 3 часов при комнатной температуре. Смесь фильтруют, фильтрат концентрируют в вакууме, и остаток распределяют между дихлорметаном и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Водный слой экстрагируют смесью CH₂Cl₂/MeOH (10:1). Объединенные органические слои сушат над безводным сульфатом натрия и испаряют при пониженном давлении. Остаток очищают хроматографией на силикагеле с применением в качестве элюента смеси CH₂ Cl₂/MeOH (10:1) с последующей рекристаллизацией из изопропанола с получением 1,24 г 2',3'-ди-O-ацетил-5'-дезокси-5-фторцитидина.

Пример 1

Получение 2',3'-ди-O-ацетил-5'-дезокси-5-фтор-N ⁴(пропоксикарбонил)-цитидина

К раствору 2',3'-ди-O-ацетил-5'-дезокси-5-фторцитидина (2 г) CH₂Cl₂ (15 мл) и сухом пиридине при перемешивании и охлаждении в бане со льдом по каплям добавляют n-пропилхлорформат (957 мл). После перемешивания в течение 30 минут при комнатной температуре смесь испаряют досуха при пониженном давлении. Остаток распределяют между эфиром и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Органический слой промывают рассолом, сушат над безводным сульфатом натрия и фильтруют.

Испарением фильтрата получают 2',3'-ди-O-ацетил-5'-дезокси-5-фтор-N ⁴-(пропоксикарбонил)цитидин (2,5 г)>E1-MC m/z 415 (М ⁺). ¹H ЯМР (ДМСО-d₆) : 0,92 (3Н, т, J=7,3 Гц), 1,37 (3Н, д, J=6,3 Гц), 1,63 (2Н, секс, J=7,3 Гц), 4,06-4,14 (3Н, м), 5,11 (1H, т, J=6,3 Гц), 5,47 (1Н, дв. д. J=4,6 и 6,3 Гц), 5,81 (1Н, д, J=4,6 Гц), 8,31 (1Н, ш.с), 10,63 (1Н, ш.с).

Нижеприведенные соединения (см. табл.5) получены по методике, аналогичной методике примера 1 (R¹ и R² принимают значения, указанные для общей формулы (I)). Соединение примера 9 получено из известного 2',3'-ди-O-бензоил-5'-дезокси-5-фторцитидина (патент США 4966891) по методике, аналогичной методике примера 1.

Пример 10

Получение 5'-дезокси-5-фтор-N ⁴-(пропоксикарбонил)цитидина

К раствору 2',3'-ди-O-ацетил-5'-дезокси-5-фтор-N⁴ -(пропоксикарбонил) цитидина (2,5 г) в CH₂Cl₂ (17 мл) при перемешивании и охлаждении в бане со льдом по каплям прибавляют 1 н. NaOH (17 мл). После перемешивания 1 ч при 0°C к смеси добавляют MeOH (0,9 мл). Добавлением концентрированной HCl в реакционной смеси устанавливают pH 6 и слои разделяют. Водный слой экстрагируют смесью растворителей CH₂Cl ₂-MeOH (95:5) (40 мл × 10). Соединенные органические слои сушат над безводным сульфатом натрия и фильтруют. Раствор испаряют и кристаллизацией из этилацетата получают 5'-дезокси-5-фтор-N ⁴-(пропоксикарбонил)цитидин (1,6 г, выход 79,8%), т.пл. 125-126,5°C. E1-MC m/z 331 (M⁺).

Нижеприведенные соединения (см. табл.6) получены по методике, аналогичной методике примера 10 (R¹ и R² принимают значения, указанные для общей формулы (I)).

Пример 19

Получение N⁴-(циклогексилоксикарбонил)-5'-дезокси-5-фторцитидина

В 20 мл сухого пиридина растворяют 5'-дезокси-5-фторцитидин (2,5 г), к раствору по каплям при 0°C добавляют триметилсилилхлорид (3,4 мл) и смесь перемешивают 30 мин при комнатной температуре. Одной порцией при 0°C к реакционной смеси добавляют циклогексилхлорформат. После перемешивания смеси 1 час при комнатной температуре пиридин испаряют при пониженном давлении. Остаток затем распределяют между насыщенным водным раствором NaHCO₃ и эфиром. Органический слой промывают рассолом, сушат над безводным MgSO ₄ и концентрируют при пониженном давлении. К остатку добавляют лимонную кислоту (2 г) и метанол (50 мл). Смесь перемешивают примерно сутки при комнатной температуре. После удаления растворителя при пониженном давлении остаток растворяют в смеси CH₂ Cl₂-MeOH (95:5) и нейтрализуют водным раствором NaOH. Органический слой сушат над безводным Na₂SO₄ и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают хроматографией на силикагеле с применением в качестве элюента смеси CH₂ Cl₂-MeOH (20:1) и после перекристаллизации из этилацетата получают N⁴-(циклогексилоксикарбонил)-5'-дезокси-5-фторцитидин (3,47 г, выход 92%), т.пл. 134-136°C. ББА-МС m/z 372 (MH ⁺).

Нижеприведенные соединения (см. табл.7) получены по методике, аналогичной методике примера 19 (R ¹ и R² принимают значения, указанные для общей формулы (I)).

Пример 28

Получение 5'-дезокси-5-фтор-N⁴-(неопентилоксикарбонил)-цитидина

В 15 мл сухого дихлорметана растворяют 5'-дезокси-2',3'-ди-O- ацетил-5-фторцитидин (1,5 г) и сухой пиридин (0,74 мл). К полученной смеси при 0°C по каплям прибавляют толуольный раствор неопентилхлорформата (3 экв.) и перемешивают 1 ч при комнатной температуре. После удаления растворителя при пониженном давлении остаток распределяют между эфиром и насыщенным водным раствором карбоната натрия. Органический слой последовательно промывают водой и рассолом, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрированием при пониженном давлении получают сырой 2',3'-ди-O-ацетил-5'-дезокси-5-фтор-N ⁴-(неопентилоксикарбонил) цитидин в виде бледно-желтого масла. Сырой продукт растворяют в этаноле (15 мл) и охлаждают в бане со льдом. При температуре ниже 15°C по каплям прибавляют 1 н. водный раствор гидроокиси натрия. По окончании прибавления реакционную смесь нейтрализуют при 0°C конц. соляной кислотой. Раствор концентрируют при пониженном давлении, и концентрат распределяют между водой и смесью растворителей CH₂>Cl₂ -MeOH (95:5). Водный слой вновь экстрагируют десять раз смесью CH₂Cl₂-MeOH (95:5) по 20 мл каждый раз. Все органические слои объединяют, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Очисткой остатка хроматографией на колонке с силикагелем с применением в качестве элюента смеси CH₂Cl₂-MeOH (20:1) в виде аморфного порошка 1,37 г (выход 84%) 5'-дезокси-5-фтор-N ⁴-(неопентилоксикарбонил)-цитидина. ББА-МС m/z 360 (MH ⁺). ¹H-ЯМР (ДМСО-d₆) : 0,93 (9Н, с), 1,31 (3Н, д, J=6,3 Гц), 3,68 (1Н, к, J=5,9 Гц), 3,81 (2Н, ш. с), 3,87-3,92 (1Н, м), 4,04-4,09 (1Н, м), 5,05 (1Н, д, J=5,9 Гц), 5,41 (1Н, ш. д, J=5,3 Гц), 5,67 (1Н, дв. д. J=1,3 и 3,6 Гц), 8,04 (1Н, ш. с), 10,53 (~1Н, ш. с).

Пример 29

5'-Дезокси-N⁴[(3,3-диметилбутоксикарбонил]-5-фторцитидин

Заглавное соединение получено по методике, аналогичной методике примера 28, за исключением того, что в качестве ацилирующего средства используют 3,3-диметилбутилхлорформат, аморфный порошок (выход 71%), ББА-МС m/z 374 (MH⁺). ¹H-ЯМР (ДМСО-d₆) : 0,93 (9Н, с), 1,31 (3Н, д, J=6,3 Гц), 1,55 (2Н, т, J=7,3 Гц), 3,68 (1Н, к, J=5,9 Гц), 3,84-3,93 (1Н, м), 4,03-4,09 (1Н, м), 4,15 (2Н, т, J=7,3 Гц), 5,05 (1Н, д, J=5,9 Гц), 5,4 (1Н, ш. д, J=5,3 Гц), 5.67 (1Н, дв. д, J=1,3 и 4 Гц), 8 (1Н, ш. с), 10,53 (~1Н, ш. с).

Нижеследующие примеры иллюстрируют фармацевтические препараты, содержащие соединение настоящего изобретения.

Пример A

Замкнутые желатиновые капсулы, каждая из которых содержит нижеперечисленные компоненты, получают известными методами

N ⁴-(Бутоксикарбонил)-5'-дезокси-5-фторцитидин -100 мг

Зерновой крахмал - 20 мг

Двуокись титана - 385 мг

Стеарат магния - 5 мг

Пленка - 20 мг

ПЭГ 6000 - 3 мг

Тальк - 10 мг - 543 мг

Пример B

Таблетки, каждая из которых содержит нижеперечисленные компоненты, получают известными методами.

N⁴-(Бутоксикарбонил)-5'-дезокси-5-фторцитидин - 100 мг

Лактоза - 25 мг

Зерновой крахмал - 20,2 мг

Гидроксипропилметилцеллюлоза - 4 мг

Стеарат магния - 0,8 мг

Пленка - 10 мг

ПЭГ 6000 - 1,5 мг

Тальк - 4,5 мг - 166 мг

Пример C

Сухие парентеральные дозировочные формы приготовляют известными методами.

(1) В общей сложности 5 г N⁴ -(Бутоксикарбонил)-5'-дезокси-5-фторцитидина растворяют в 75 мл дистиллированной воды, раствор подвергают бактериологическому фильтрованию и затем в асептических условиях разливают по сосудикам. Затем раствор сушат вымораживанием с получением в каждом сосудике по 500 мг стерильного сухого твердого вещества.

(2) Чистый N⁴-(бутоксикарбонил)-5'-дезокси-5-фторцитидин в количестве 500 мг на сосудик или ампулу герметизируют в сосуде и стерилизуют нагреванием.

Указанные сухие дозировочные формы перед употреблением восстанавливают добавлением приемлемого стерильного водного растворителя, такого как вода, для инъекций, или изотонического раствора хлорида натрия, или 5%-ной декстразы для парентерального введения.

Примеры D-I

Состав лекарственных форм
Примеры	D	E	F	G	H	I
Ингредиенты	мг/табл.	мг/табл.	мг/табл.	мг/табл.	мг/табл.	мг/табл.
5'-деокси-5-фтор-N4-(пентилоксикарбонил) цитидин	125.00	150.00	175.00	250.00	350.00	500.00
лактоза безводная	35.72	42.90	50.06	71.49	100.12	142.88
гипромеллоза	3.57	4.28	5.00	7.14	10.00	14.28
кросповидон	37.50	45.00	52.50	75.00	105.00	150.00
Pharmaburst C	89.30	107.16	125.00	178.60	250.00	357.20
маннит	23.21	27.85	32.50	46.43	65.00	92.84
микрокристаллическая целлюлоза	46.82	56.18	65.54	93.63	131.08	187.28
стеарат магния	8.22	9.86	11.50	16.43	23.00	32.88
аспартам	15.54	18.64	21.75	31.07	43.50	62.16
сахарин натрия	3.22	3.86	4.50	6.43	9.00	12.88
ванилин	7.86	9.43	11.00	15.71	22.00	31.44
смесь для маскировки горького вкуса	1.47	1.76	2.06	2.94	4.12	5.88
клубничный ароматизатор № 915.010	2.97	3.56	4.15	5.93	8.30	11.88
очищенная вода1	q.s.	q.s.	q.s.	q.s.	q.s.	q.s.
масса ядра	400.40 мг	480.48 мг	560.56 мг	800.80 мг	1121.12 мг	1601.60 мг
пленочное покрытие Opadry pink	8.00	9.61	11.00	16.00	22.00	32.03
очищенная вода1	44.53	53.44	62.34	89.05	124.67	178.10
суммарная масса таблетки	408.40 мг	490.09 мг	571.56 мг	816.80 мг	1143.12 мг	1633.63 мг
1 удаляют в процессе приготовления лекарственной формы

Процедура:

1. Смешивают 5'-деокси-5-фтор-N4-(пентилоксикарбонил)цитидин с безводной лактозой и частью кросповидона.

2. Растворяют гипромеллозу в очищенной воде.

3. Гранулируют смесь, полученную на стадии 1, с раствором для грануляции, полученным на стадии 2.

4. Подвергают мокрому размалыванию гранулированный продукт, полученный на стадии 3.

5. Сушат и размалывают гранулы, полученные на стадии 4.

6. Смешивают гранулы, полученные на стадии 5, с Pharmaburst С, оставшейся частью кросповидона, маннитом, микрокристаллической целлюлозой, аспартамом, сахарином натрия, ванилином, смесью для маскировки горького вкуса и клубничным ароматизатором.

7. Просеивают стеарат магния, добавляют его к смеси, полученной на стадии 6, и перемешивают.

8. Прессуют смесь для таблеток, полученную на стадии 7, с получением ядер.

9. Приготавливают суспензию пленочного покрытия путем диспергирования смеси для пленочного покрытия в очищенной воде.

10. Наносят пленочное покрытие на ядра, полученные на стадии 8 с использованием суспензии пленочного покрытия, полученной на стадии 9.

Примеры J-O

Ниже представлены составы (мг/таблетку) предпочтительных лекарственных форм, в которых лактоза заменена на маннит.

Состав лекарственных форм
Примеры	J	K	L	M	N	O
Ингредиенты	мг/табл.	мг/табл.	мг/табл.	мг/табл.	мг/табл.	мг/табл.
5'-деокси-5-фтор-N4-(пентилоксикарбонил) цитидин	125.00	150.00	175.00	250.00	350.00	500.00
маннит	58.93	70.75	82.56	117.92	165.12	235.72
гипромеллоза	3.57	4.28	5.00	7.14	10.00	14.28
кросповидон	37.50	45.00	52.50	75.00	105.00	150.00
Pharmaburst C	89.30	107.16	125.00	178.60	250.00	357.20
микрокристаллическая целлюлоза	46.82	56.18	65.54	93.63	131.08	187.28
стеарат магния	8.22	9.86	11.50	16.43	23.00	32.88
аспартам	15.54	18.64	21.75	31.07	43.50	62.16
сахарин натрия	3.22	3.86	4.50	6.43	9.00	12.88
ванилин	7.86	9.43	11.00	15.71	22.00	31.44
смесь для маскировки горького вкуса	1.47	1.76	2.06	2.94	4.12	5.88
клубничный	2.97	3.56	4.15	5.93	8.30	11.88
ароматизатор № 915.010
очищенная вода1	q.s.	q.s.	q.s.	q.s.	q.s.	q.s.
масса ядра	400.40 мг	480.48 мг	560.56 мг	800.80 мг	1121.12 мг	1601.60 мг
пленочное покрытие Opadry pink	8.00	9.61	11.00	16.00	22.00	32.03
очищенная вода1	44.53	53.44	62.34	89.05	124.67	178.10
суммарная масса таблетки	408.40 мг	490.09 мг	571.56 мг	816.80 мг	1143.12 мг	1633.63 мг
1 удаляют в процессе приготовления лекарственной формы

Процедура: аналогичная процедуре, описанной для примеров D-I, за исключением того, что на стадии 1 безводную лактозу заменяют на маннит.

Примеры P-U

Ниже представлены составы (мг/таблетку) предпочтительных лекарственных форм, в которых отсутствуют Pharmaburst C и лактоза.

Состав лекарственных форм
Примеры	P	Q	R	S	T	U
Ингредиенты	мг/табл.	мг/табл.	мг/табл.	мг/табл.	мг/табл.	мг/табл.
5'-деокси-5-фтор-N4-(пентилоксикарбонил)цитидин	125.00	150.00	175.00	250.00	350.00	500.00
маннит	58.93	70.75	82.50	117.86	165.00	235.72
гипромеллоза	3.57	4.28	5.00	7.14	10.00	14.28
кросповидон	62.50	75.01	87.50	125.00	175.00	250.00
микрокристаллическая целлюлоза	82.26	98.71	115.16	164.52	230.32	329.04
стеарат магния	7.41	8.90	10.37	14.82	20.74	29.64
аспартам	15.54	18.64	21.76	31.08	43.52	62.16
сахарин натрия	3.22	3.86	4.50	6.44	9.00	12.88
ванилин	7.86	9.43	11.00	15.72	22.00	31.44
смесь для маскировки горького вкуса	1.47	1.76	2.06	2.94	4.12	5.88
клубничный ароматизатор № 915.010	2.97	3.56	4.15	5.94	8.30	11.88
очищенная вода1	q.s.	q.s.	q.s.	q.s.	q.s.	q.s.
масса ядра	370.73 мг	444.90 мг	519.00 мг	741.46 мг	1038.00 мг	1482.92 мг
пленочное покрытие Opadry pink	7.41	8.90	10.38	14.83	20.76	29.66
очищенная вода1	41.99	50.43	58.82	84.04	117.64	168.07
суммарная масса таблетки	378.14 мг	453.80 мг	529.38 мг	756.29 мг	1058.76 мг	1512.58 мг
1 удаляют в процессе приготовления лекарственной формы

Процедура: аналогична процедуре, описанной для примеров D-I, за исключением того, что на стадии 1 безводную лактозу заменяют на маннит и на стадии 6 не применяют Pharmaburst С.

Таблица 1
Подверженность действию ациламидаэы в печени человека и обезьяны
Соединение (Пример № )	Активность ациламидазы (моль/мг белка/ч)
	Печень обезьяны	Печень человека
11	20	71
12	29	190
13	47	210
14	32	74
15	23	210
16	33	210
17	22	160
20	19	320
21	26	82
22	43	110
24	18	64
25	<13	160
26	20	560
27	59	110
28	25	52
29	22	50

Таблица 2
Фармакокинетические показатели на обезьянах
Соединение (Пример № )	5'-ДФУР в плазме
	Cмакс (Мкг/мл)	ППК (мкг.ч/мл)
10	1,44	2,03
11	1,57	2,06
12	2,10	2,90
13	1,50	1,96
14	1,80	2,40
15	2,60	2,89
16	1,40	2,52
17	1,65	2,66
28	1,00	1,40
29	2,00	2,09

Таблица 3
Противоопухолевое действие фторированных пиримидинов на мышей линии BA1 В/с nu/nu, несущих карциному СХГ280 ободочной кишки человека
Соединение (Пример № )	Доза х 21 (моль/кг/день)	Ингибирование роста, %	Характер фекалий*
Опыт 1
Носитель		-	Н
12	0,13	68
	0,3	69
	0,67	86
	1,0	86
	1,5	96	Н
13	0,13	59
	0,3	66
	0,67	79
	1,0	91
	1,5	94	Н
24	0,13	37
	0,3	64
	0,67	75
	1,0	83
	1,5	89	Н
Ссылочное соед.
5-ФУ	0,089	28	Н
	0,13	59	Н
	0,2	79	П
Опыт 2
Носитель
10	0,13	39
	0,3	56
	0,67	75
	1,5	86
	2,25	93	Н
11	0,13	46
	0,3	72
	0,67	84
	3,5	95
	2,25	100	Н
14	0,13	68
	0,3	68
	0,67	85
	1,5	94	Н
	2,25	100	Н
27	0,13	26
	0,3	72
	0,67	84
	1,5	94
	2,25	103	Н
Ссылочное соед.
5-ФУ	0,089	НЭ	Н
	0,13	20	Н
	0,2	58	П
НЭ - не эффективно
*Характер фекалий (Н - нормальные фекалии, П - понос)

Таблица 4
Улучшение вызванного опухолью общего истощения фторированными пиримидинами у мышей, несущих аденокарциному 26 ободочной кишки
Соед. (пр. № )	Доза х 7 (ммоль/кг) (мкг/мл)	Изменение массы опухоли (г)	Изменение массы опухоли (г)	Масса жировой ткани (мг)	Глюкоза сыворотки (мг/дл)	ИКБ сыворотки
Носитель		1,65	-1,5	11	91	1167
13	0,125	1,24	1,6*	22*	118*	1195
	0,25	0,91*	3,4	42*	120*	1020
	0,5	0,79 *	4,2	63*	147*	805*
	1	0,006	5,6*	85*	127*	795*
* R<0,05 относительно соответствующей величины для группы, получавшей носитель.

Таблица 5
Пример №	R1	R2	1H-ЯМP (в растворителе 1 или 2)	ББА-МС (m/z)
2	н-бутил	ацетил	(1): 0,87 (3Н, J = 7,3 Гц), 1,36 (5Н, м),	430 (MH+)
			1,59 (2Н, м), 2,05 (3H, с). 2,07 (3Н, с), 4,12
			(3Н, м), 5,11 (1Н, ш, т), 5,47 (1Н, ш, т), 5,81
			(1Н, д, J = 4,3 Гц). 8,34 (1Н, ш. с), 10,6 1Н, ш. с)
3.	н-пентил	ацетил	(1): 0,88 (3Н, т, J = 7,3 Гц), 1.31 (5Н, м).	444 (MH+)
			1,36 (3Н, д, J = 6,3 Гц), 1.61 (1Н, м). 2,06
			(3Н, с). 2,07 (3Н, с). 4.07-4.14 (3Н, м). 5.11
			(1Н. т. J = 6,3 Гц), 5.47 (1Н, дв. д. J = 6.3
			и 4,6 Гц), 5.8 (1Н, д. J = 4.6 ГЦ). 8,28 (1Н,
			ш. с), 10,63 (1Н, ш. с)
4	н-гексил	ацетил	(1): 0,87 (3Н, т. J = 6.9 Гц). 1,3 (6Н, м).	458 (MH+)
			1.36 (3H, д. J = 6,3 Гц), 1,59 (2H, м), 2.06
			(3Н, с). 2,07 (3Н. с). 4,07-4,14 (3H, м).
			5.11 (1Н. т. J = 6.3 Гц). 5,45 (1Н. дв. д,
			J = 6,3 и 4,6 Гц), 5,8 (1Н, д, J = 4.6 Гц),
			8.28 (1H, ш. с). 10.63 (1Н. ш. с)
ЯМР: растворитель 1 - ДМСО-d6, растворитель 2 - СDCl3
5	изопентил	ацетил	(1): 0.9 (6H, д, J =6.9 Гц), 1,36 (3Н. д, J =	444 (MH+)
			6.3 Гц). 1,51 (2Н, к. J = 6,9 Гц). 1,68 (1Н, м),
			2,06 (3Н, с). 2,07 (3Н, с), 4.09-4,2 (3Н, м). 5,11
			(1Н, т, J = 6,3 Гц), 5,46 (1Н. дв, J = 6.3 и
			4.3 Гц), 5,8 (1Н. д, J = 4.3 Гц), 8,28 (1H, ш. с),
			10.63 (1Н, ш.с)
6	2-этилбутил	ацетил	(1): 0,87 (6Н, т. J = 7.3 Гц), 1.23-1.45 (7Н,	456 (MH^)
			м), 1.51 (1Н, м), 2.06 (3H, с). 2.07 (3Н, с). 4.04
			(2Н, ш. д), 4,12 (1H, т. J = 6.3 Гц). 5.11 (1Н. т.
			J = 6.3 Гц), 5,46 (1Н. дв. д, J = 6.3 и 4 Гц).
			5.81 (д. J = 4,6 Гц). 8.32 (1Н, ш. с), 10,61 (1Н,
			ш. с)
7	циклогексил-	ацетил	(1); 1 (2Н. н), 1.11-1.29 (4Н, м). 1,36 (3Н.	470 (MH+)
	метил		д, J = 6,3 Гц), 1,57-1,77 (5Н, м), 2,06 (3Н, с).
			2,07 (3Н, с), 3,92 (2Н, ш. с), 4,12 (1Н, м),
			5,11 (1Н, т. J = 6,3 Гц), 5,46 (1Н, дв. д. J =
			6,3 и 4 Гц). 5,81 (1Н, д. J = 4 Гц). 8,33 (1Н, ш.
			с), 10,67 (1Н. ш. с)
ЯМР: растворитель 1 - ДМСЩ-d6, растворитель 2 - CDCl3
8	фенэтил	ацетил	(1): 1,36 (3H д. J = 6,3 Гц), 2,06 (3H, с).	478 (МН+)
			2,07 (3Н, с). 2,94 (2Н. т J = 6.8 Гц), 4,12 (1H
			м). 4,32 (2Н. ш. т), 5,11 (1Н. т. J = 6,3 Гц).
			5,46 (1Н, дв. д J = 6.3 и 4,3 Гц), 5,81 (1Н, д,
			J = 4,3 Гц), 7,16-7,37 (5Н, м), В, 32 (1Н, ш. с).
			10,67 (1Н. ш. с)
9	н-бутил	бензоил	(2): 0,96 (3Н. т, J = 7,3 Гц), 1.42 (2Н, м).	554 (MH+)
			1,58 (3Н, д, J = 6,3 Гц). 1,68 (2Н. м), 4.16 (2Н,
			ш. с), 4.52 (1H дв. к, J = 5,8 и 6,3 Гц), 5,4
			(1H, т, J = 5,8 Гц), 5,65 (1H. дв. д, J = 4.6 и
			5,8 Гц), 6.16 (1Н. д, J = 4.6 Га). 7,35-7,98 (11Н,
			м), 11,9 (1Н, ш. с)
ЯМР: растворитель 1 - ДМСО-d6, растворитель 2 - CDCl3

Таблица 6
Пр. №	R1	R2	Т.пл. °C	Р-ритель перекристал	ББА-МС m/2
11	н-бутил	Н	119-120	AcOEt	346 (MH+)
12	н-пентил	Н	110-121	AcOEt Et	359 (M+)
13	н-гексил	Н	114-116	AcOEt Et	373 (M+)
14	изопентил	Н	119-120	AcOEt	360(M+)
15	2-этилбутил	Н	аморфно*		374 (MH+)
16	циклогексил-	Н	126-127	AcOEt	386 (MH+)
	метил
17	фенэтил	Н	144-145	AcOEt-MeOH	394 (MH +)
18	аллил	Н	118,5-120	AcOEt	330 (MH+ )

Таблица 7
Пр. №	R1	R2	Т. пл. (°С)	Р-ритель, перекристал.	ББА-МС m/z
20	2-циклогексил-этил	Н	128-129,5	AcOEt	400 (MH+)
21	3-циклогексил-пропил	Н	аморфно*		414 (MH+)
22	3-фенилпропил	H	120-121	AcOEt	408 (MH+)
23	2-метоксиэткл	H	аморфно**		348 (MH+)
24	изобутил	Н	132-134	AcOEt	346 (MH+)
25	2-пропилэтил	Н	116-118	АсOEt	402 (MH+)
26	2-этигексил	Н	аморфно***		402(MH+)
22	н-гептил	H	115,5-117,5	AtOEt	388 (MH+)
* 1H-ЯМР (ДМСО-d6) для примера 21 : 0,78-0,93 (2H, м), 1,15-1,27 (6H, м), 1,31 (3H, д, J = 7 Гц), 1,59-1,75 (7H, м), 3,68 (1H, к, J = 6 Гц), 3,89 (1H, ш, т, J = 6 Гц), 4,01-4,14 (3H, м), 5,04 (1H, д, J = 6 Гц), 5,4 (1H, д, J = 6 Гц), 5,67 (1H, д, J = 2 Гц), 8 (1H, ш. с), 10,03 и 10,53 (всего 1H, ш, с каждый).
** 1H-ЯМР ДМСО-d6 для примера 23 : 1,31 (3H, д, J = 5,9 Гц), 3,28 (3H, c), 3,56 (2H, ш, т), 3,69 (1H, т, J = 6 Гц), 3,89 (1H, м), 4,06 (1H, м), 4,22 (2H, ш. т), 5,05 (1H, д, J = 6 Гц), 5,4 (1H, ш, с), 5,67 (1H, д, J = 3 Гц), 8,06 (1H, ш, с), 10,65 (1H, ш, с).
*** 1H-ЯMP (ДМСО-d 6) для примера 26 : 0,85-0,68 (6Н, м), 1,27-1,38 (6Н, м), 1,57 (1Н. ш. д, J = 6 Гц). 3.68 (1Н, к. J = 6 Гц), 3.89-4.02 (4Н, м). 5.05 (1Н. ш. с), 5.41 (1Н. ш. с). 5.67 (1Н. д. J = 3 Гц). 8.06 (1Н. ш. с)» 10.52 (1Н. ш. с).