соединения для лечения амилоидозов

Классы МПК:A61K38/08 пептиды, содержащие 5-11 аминокислот
A61K38/10 пептиды, содержащие 12-20 аминокислот
A61P25/28 для лечения нейродегенеративных заболеваний центральной нервной системы, например ноотропные агенты, агенты для усиления умственных способностей, для лечения болезни Альцгеймера или других форм слабоумия
A61P25/16 для лечения болезни Паркинсона
Автор(ы):, , ,
Патентообладатель(и):АФФИРИС АГ (AT)
Приоритеты:
подача заявки:
2009-06-12
публикация патента:

Группа изобретений относится к медицине и касается применения мимотопов для лечения соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 -амилоидозов, включая болезнь Альцгеймера, где вышеуказанные мимотопы являются полипептидами, содержащими от 4 до 20 аминокислотных остатков, и способны вызывать in vivo образование антител к неукороченному Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 1-40/42 и укороченным с N-конца формам Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 рЕ3-40/42, Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 3-40/42, Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 11-40/42, Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 pE11-40/42 и Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 14-40/42 без нарушения физиологических функций передачи сигнала БПА. Группа изобретений обеспечивает снижение риска аутоиммунных заболеваний при введении субъекту. 5 н. и 24 з.п. ф-лы, 3 пр., 4 табл., 7 ил.

Рисунки к патенту РФ 2491953

соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953

Настоящее изобретение относится к профилактике, лечению и диагностике заболеваний, обусловленных образованием и(или) агрегацией соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 -амилоида (соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 -амилоидозы). А именно, настоящее изобретение относится к новым мимотопам, вызывающим иммунный ответ на В-амилоид и укороченные с N-конца и(или) посттрансляционно модифицированные фрагменты соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 -амилоида, и новым антителам, распознающим вышеупомянутые мимотопы и пептиды АВ для применения в профилактике, лечении и диагностике заболеваний, обусловленных образованием и(или) агрегацией соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 -амилоида.

Различные дегенеративные заболевания характеризуются аномальными процессами полимеризации и накопления определенных белков, это так называемые протеинопатии. Настоящее изобретение относится к профилактике, лечению и диагностике протеинопатии, обусловленных белками соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 -амилоида и объединенных термином соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 -амилоидозы. Самая известная форма соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 -амилоидозов - болезнь Альцгеймера (БА). Другие примеры включают, но не ограничиваются перечисленным, деменцию с тельцами Леви и деменцию при синдроме Дауна.

БА - самая частая форма деменции у человека. На сегодняшний день эффективного лечения, способного остановить прогрессирование нейродегенерации и сопутствующего нарушения когнитивных функций, не существует. Для БА характерно аномальное накопление внеклеточных бляшек амилоида, тесно связанное с обширным астроцитозом и микроглиозом, а также дистрофией и гибелью нейронов. Эти амилоидные бляшки состоят в основном из белков амилоида соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 (Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 ), производных БПА (gi:112927) пептидов Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 40 и Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 42, образующихся из белка-предшественника амилоида (БПА), который экспрессируется на различных типах клеток нервной системы. Считается, что пептиды Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 принимают прямое участие в патогенезе и прогрессировании БА. Вследствие этого уменьшение объема Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 в головном мозге должно замедлять или останавливать прогрессирование заболевания, а также, возможно, останавливать ухудшение когнитивных функций у больных с БА.

В норме БПА подвергается превращениям за счет двух этапов расщепления с образованием известных на сегодняшний день форм Абета ×-40/42/43. Первое расщепление происходит под воздействием ферментов 1 и 2, расщепляющих БПА в бета-сайте (ВАСЕ1 и ВАСЕ); второй этап протеолиза осуществляет комплекс гамма-секретазы.

Ферменты ВАСЕ распознают два сайта на N-концевой части предполагаемого пептида Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 , и протеолитическая активность ВАСЕ ведет к образованию Abeta 1-Х и 11-Х соответственно. Таким образом, ВАСЕ, участвующие в превращениях БПА, создают ряд различных форм Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 , где главным компонентом является Abeta 1-40/42. Активность гамма-секретазы ведет к образованию 3 основных фрагментов: Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 1-40/42/43. После образования эти белки подвергаются дальнейшей обработке аминопептидазами с последующим поэтапным разрушением. Эти дальнейшие этапы ведут к образованию других форм, таких как, например, Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 3-40/42 соответственно.

Третье семейство протеолитических ферментов, участвующих в превращениях БПА, является так называемым семейством альфа-секретаз (семейство ADAM («дезинтегрин и металлопротеиназа»). Альфа-секретазы расщепляют белок - предшественник амилоида (БПА) в трансмембранном участке (между аа16 и аа17 в последовательности пептида Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 ) и препятствуют образованию пептидов Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 . Таким образом, расщепление альфа-секретазами является ключевым этапом в не-амилоидогенных превращениях БПА. А именно, расщепление альфа-секретазами приводит к высвобождению секретируемой формы, называемой sAPPalpha. Как полагают, sAPPalpha достаточно для осуществления большинства физиологических функций БПА, и она может служить сигнальной молекулой. Как свидетельствуют факты, отщепленный эктодомен играет роль в росте фибробластов в культуре. Обнаружено, что сБПА обладает нейропротективным действием на первичные нейроны в культуре, предупреждая повышение внутриклеточной концентрации Са2+, обусловленной истощением глюкозы и повышая токсическую возбуждающую пороговую концентрацию глутамата, а также участвуя в росте нейронов и дендритов.

У человека в среднем 60-85% материала бляшек амилоида образованы производными Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 40/42, укороченными с N-конца и часто модифицированными. Относительные количества укороченных с N-конца форм Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 различаются по уровням Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 , мутациям и активности ВАСЕ. Самые часто встречающиеся укороченные формы Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 - это Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 3-40/42 и Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 11-40/42, на которые предположительно приходится до 50% всех укороченных форм. Это означает, что на эти изоформы приходится 25-40% всех пептидов амилоида - в головном мозге при БА. Оба пептида содержат на N-конце остаток глутамина, который часто превращен ферментами в пироглутамат, с образованием Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 3(рЕ)-40/42 и Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 11(рЕ)-40/42 соответственно. Поскольку аминоконец белков Abeta 3(рЕ) и 11(рЕ) блокирован внутренним лактамом, он защищен от протеолитического действия аминопептидаз, отличающихся от специфичных к пироглутамату, и, таким образом, он может оставаться в тканях стабильным. У больных с БА можно обнаружить дополнительные укороченные с N-конца варианты, начиная с положения 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 бета-амилоида. Эти формы часто являются посттрансляционно модифицированными, например, путем метилирования.

Ранее показано, что укороченные и модифицированные пептиды более стабильны в тканях нервной системы, чем полноразмерный Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 . Кроме того, укороченные с N-конца формы Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 имеют более выраженные амилоидогенные свойства, чем неизмененные пептиды Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 , таким образом ускоряя образование бляшек, а также они проявляют нейротоксические свойства при воздействии на нейроны в культуре и экспериментах in vivo. Укороченные формы Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 можно выявить в диффузных скоплениях Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 уже на ранних стадиях БА, и они могут участвовать в раннем образовании бляшек, действуя как отдельные «затравки» in vivo. Вследствие этих эффектов предполагается, что пептиды Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 х-40/42 могут запускать и(или) ускорять образование бляшек, возможно, действуя как «затравочные центры», от которых впоследствии отсеиваются относительно менее амилоидогенные, но явно более обильные полноразмерные пептиды Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 . Кроме того, имеются убедительные доказательства, что присутствие форм Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 , укороченных с N-конца, коррелирует с нарастанием тяжести и ранним началом нейродегенерации в спорадических и семейных случаях болезни Альцгеймера, а также у больных с синдромом Дауна. Данные по таким больным предполагают связь между начальным образованием укороченных форм Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 и началом заболевания, а также его прогрессированием. В итоге, эти находки предполагают, что N-концевая гетерогенность пептидов АВ, которая выявлена in vitro и в головном мозге больных с БА, может ускорять отложение Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 в виде бляшек. Таким образом, протеолитические события, происходящие при расщеплении БПА в N-концевом домене Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 , могут играть значимую роль в патогенезе БА и схожих заболеваний.

В свете этих данных, видимо, важно уменьшить количество таких пептидных форм у больных с БА, чтобы замедлить прогрессирование заболевания, а также снизить токсичность и сопутствующее ухудшение когнитивных функций. Таким образом, оптимальная вакцина против БА должна вызывать иммунный ответ, направленный на большинство самых частых форм пептидов Ай, встречающихся в головном мозге больных БА - Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 1-40/42, Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 3-40/42, а также Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 3(р)Е-40/42, Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 11-40/42 и Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 11(р)Е-40/42, - не нарушая физиологические функции передачи сигнала БПА, а именно функций sAPPalpha.

Иммунотерапия, где использовалась активная и пассивная иммунизация против полноразмерных Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 , приводила к уменьшению бляшек Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 и оказывала благоприятное действие в отношении прогрессирования заболевания у экспериментальных животных с моделью БА. Во всех методиках активной вакцинации, изученной на моделях у мышей, использовали полноразмерный Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 40/42 или фрагменты, содержащие нативную последовательность Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 .

Однако первую На фазу клинического испытания у больных с БА с использованием полноразмерного Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 42 в качестве антигена пришлось прервать из-за тяжелых побочных эффектов, обусловленных воспалением тканей нервной системы, включая инфильтрацию головного мозга аутореактивными Т-лимфоцитами (Nicoll, J.A. et al. 2003 Nat Med 9: 448-452; Bayer, A.J., et al. 2005 Neurology 64: 94-101). Тем не менее, исследования, где изучали клинические эффекты у больных, леченых AN-1792, выявили, что у больных, у которых развился антительный ответ на Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 42, но не развился менингоэнцефалит, результаты тестов когнитивных функций были лучше, чем у больных, у которых иммунный ответ отсутствовал, что указывает на то, что иммунотерапия может оказаться полезным методом лечения БА.

Очень важно, что недавние результаты, полученные при аутопсии больных, подвергнутых вакцинации AN1792, продемонстрировали исчезновение полноразмерных форм АВ из головного мозга, но формы А6, укороченные с N-конца, сохранялись (Nicoll, J.A., et al. 2006 J Neuropathol Exp Neurol 65: 1040-1048). Этот факт подчеркивает необходимость в изобретении новых вакцин, которые направлены против полноразмерных Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 , а также форм, укороченных с N-конца, и модифицированных форм этой молекулы.

Индукция иммунного ответа на пептиды Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 40/42 у человека может влиять на снижение когнитивных функций у больных с БА, но безопасная вакцина против болезни Альцгеймера не должна вызывать образование аутореактивных Т-лимфоцитов. Вакцинация нативными пептидами Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 40/42 или их фрагментами несет риск аутоиммунного заболевания у больных, так как иммунный ответ не может быть направлен исключительно на Ар.

Цель настоящего изобретения - получение соединений и лекарственных средств, которые можно применять для лечения и(или) профилактики болезни Альцгеймера. Эти соединения не должны нести никакого риска или нести существенно сниженный риск аутоиммунных заболеваний при введении субъекту. Согласно другому аспекту настоящего изобретения, вышеуказанные соединения могут быть способны вызывать in vivo образование антител у субъекта к укороченным и(или) стабилизированным формам Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 , которые обычно являются главными компонентами отложений амилоида.

Таким образом, настоящее изобретение относится к применению по крайней мере одного соединения, содержащего аминокислотную последовательность

соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953

где:

X1 - серин (S), треонин (Т) или цистеин (С),

X 2 - глутамин (Q), треонин (Т) или метионин (М),

Х3 - лизин (К) или аргинин (R),

Х 4 - лейцин (L), метионин (М),

X5 - триптофан (W), тирозин (Y), фенилаланин (F) или изолейцин (I),

X6 - аспарагин (N), глутаминовая кислота (Е), аланин (А) или цистеин (С),

Х 7 - цистеин (С),

n и m - независимо друг от друга 0 или 1,

причем вышеуказанное соединение обладает связывающей способностью антитела, специфичного к эпитопу бета-пептида амилоида (Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 ), содержащему аминокислотную последовательность HQKLVF и(или) HQKLVFFAED.

для производства лекарственного средства для профилактики и(или) лечения болезни Альцгеймера.

Изобретение, описанное в данной заявке, относится к антигенам, которые не содержат последовательности нативного пептида Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 , но, однако, имитируют структуру неоэпитопов Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 , не выявляющихся мимотопами, такими как описанные в WO 2004/062556. Такие вакцины против БА, основанные на мимотопах, будут, следовательно, индуцировать антительные ответы, направленные исключительно против аномальных молекул Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 , упомянутых в данном документе, но не против родительских структур. Важно, чтобы иммунный ответ, индуцируемый этими мимотопами, не влиял на полноразмерный БПА и секретируемый БПАальфа (sAPPalpha), и вследствие этого вакцинация не должна нарушать нормальные физиологические функции обеих молекул. Кроме того, мимотопы не содержат потенциальные эпитопы Т-лимфоцитов и не вызывают образование вредных аутореактивных Т-лимфоцитов.

Удивительно, но оказалось, что соединение, содержащее аминокислотную последовательность формулы I, способно вызывать образование in vivo антител к укороченной форме Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 - Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 1-40/42, укороченных с N-конца форм, таких как Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 3-40/42, Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 (рЕ)3-40/42, неизмененного Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 11-40/42, модифицированных Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 p(E)11-40/42 и Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 14-40/42 соответственно, а также к укороченным с Nсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 -конца и посттрансляционного модифицированных вариантов амилоида, начиная с положения 2, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 в Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 . Важно, что эти мимотопы не вызывают перекрестную реактивность с неоэпитопами, присутствующими на sAPP альфа после отщепления от БПА и, таким образом, не нарушали нормальную передачу сигнала sAPP альфа.

Антитела, образующиеся после вакцинации молекулами (мимотопами) настоящего изобретения, способны связывать вышеперечисленные фрагменты Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 с последующим разрушением бляшек Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 .

Формула I и II и все другие пептидные молекулы, описанные в данной заявке, имитируют естественные пептиды Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 и варианты Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 1-40/42, Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 рЕ3-40/42, Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 3-40/42, Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 11-40/42, Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 pE11-40/42 и Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 14-40/42 так, что соединения, содержащие аминокислотные последовательности, описанные в данном документе, способны индуцировать образование соответствующих антител. С помощью таких антител также можно выявлять дополнительные укороченные с N-конца и посттрансляционно модифицированные варианты амилоида, начиная с положения 2, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 в Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 .

«соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 -амилоидозы», согласно употреблению в данном документе, означают различные нейродегенеративные заболевания, которые характеризуются аберрантной полимеризацией и накоплением специфических белков, - так называемые протеинопатии. Настоящее изобретение относится к профилактике, лечению и диагностике протеинопатий, обусловленных белками соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 -амилоида и объединенных термином соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 -амилоидозы. Самая известная форма соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 -амилоидозов болезнь Альцгеймера (БА). Другие примеры включают, но не ограничиваются перечисленным, деменцию с тельцами Леви и деменцию при синдроме Дауна. Другие примеры - деменция с тельцами Леви, миозит, спорадический миозит с тельцами включения, наследственное кровоизлияние в мозг с амилоидозом (голландского типа), церебральная амилоидная ангиопатия, Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 -ассоциированный ангиит.

Введение соединения, содержащего аминокислотную последовательность формулы II, вызывает иммунный ответ на те же самые не укороченные и укороченные и посттрансляционно модифицированные формы Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 , как и соединения, содержащего аминокислотную последовательность формулы I.

Согласно конкретному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения, соединение является пептидом, содержащим аминокислотную последовательность, которую выбирают из группы, включающей SHTRLYF(C), HMRLFFN(C), SHQRLWF(C), HQKMIFA(C), HMRMYFE(C), THQRLWF(C) и HQKMIF(C), предпочтительно из группы, включающей SHTRLYF(C), HMRLFFN(C), HQKMIFA(C), HMRMYFE(C), THQRLWF(C) (все из которых способны вызывать in vivo образование антител к пептидам Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 ).

Согласно дополнительному предпочтительному варианту настоящего изобретения, по крайней мере одно соединение является пептидом, содержащим аминокислотную последовательность SHTRLYF(C), SGEYVFH(C), SGQLKFP(C), SGQIWFR(C), SGEIHFN(C), HMRLFFN(C), GELWFP(C), HQKMIFA(C), GEIWFEG(C), GEIYFER(C), THQRLWF(C), GEIRFGS(C), GEIKFDH(C) или GEIQFGA(C), в частности HQKMIFA(C).

Другой аспект настоящего изобретения относится к применению по крайней мере одного соединения, содержащего аминокислотную последовательность

соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 ,

где:

X1 - серии (S), аланин (А) или цистеин (С),

X 2 - серин (S), треонин (Т), глутаминовая кислота (Е), аспарагиновая кислота (D), глутамин (Q) или метионин (М),

Х 3 - изолейцин (I), тирозин (Y), метионин (М) или лейцин (L),

Х4 - лейцин (L), аргинин (R), глутамин (Q), триптофан (W), валин (V), гистидин (Н), тирозин (Y), изолейцин (I), лизин (K), метионин (М) или фенилаланин (F),

Х5 - аналанин (А), фенилаланин (F), гистидин (Н), аспарагин (N), аргинин (R), глутаминовая кислота (Е), изолейцин (I), глутамин (Q), аспарагиновая кислота (D), пролин (Р) или триптофан (W), глицин (G),

Х6 - любой аминокислотный остаток,

X7 - цистеин (С),

m и n - независимо друг от друга 0 или 1,

причем вышеуказанное соединение обладает связывающей способностью антитела, специфичного к эпитопу бета-пептида амилоида (Ар), содержащему аминокислотную последовательность HQKLVF и(или) HQKLVFFAED.

для производства лекарственного средства для профилактики и(или) лечения болезни Альцгеймера.

Согласно предпочтительному варианту настоящего изобретения, соединение содержит пептид, имеющий аминокислотную последовательность, которую выбирают из группы, включающей SGEYVFH(C), SGQLKFP(C), SGQIWFR(C), SGEIHFN(С), GQIWFIS(С), GQIIFQS(C), GQIRFDH(C), GEMWFAL(C), GELQFPP(C), GELWFP(C), GEMQFFI(C), GELYFRA(C), GEIRFAL(C), GMIVFPH(C), GEIWFEG(C), GDLKFPL(C), GQILFPV(C), GELFFPK(C), GQIMFPR(C), GSLFFWP(C), GEILFGM(C), GQLKFPF(C), GTIFFRD(C), GQIKFAQ(C), GTLIFHH(C), GEIRFGS(C), GQIQFPL(C), GEIKFDH(C), GEIQFGA(C), GELFFEK(C), GEIRFEL(C), GEIYFER(C), SGEIYFER(C), AGEIYFER(C) и (C)GEIYFER.

Конкретные предпочтительные соединения настоящего изобретения включают или состоят из вышеуказанных аминокислотных последовательностей, где С-конец вышеуказанного пептида может содержать или не содержать остаток цистеина (указанный скобками) так, что получающееся соединение может быть связано, например, с молекулой-носителем. Однако разумеется, также возможно связать цистеиновый остаток с N-концом вышеуказанного пептида.

Согласно особенно предпочтительному варианту настоящего изобретения, аминокислотную последовательность выбирают из группы, включающей GELWFP(C), GEIWFEG(C), GEIYFER(C), GEILFGM(C), GEIKFDH(C), GEIQFGA(C) (все из которых являются пептидами-конкурентами) и GEIKFDH(C), GEIRFGS(С), SGQLKFP(C), SGQIWFR(C), SGEIHFN(C), GELWFP(C), GEIWFEG(C), GEIYFER(C), GEIQFGA(C), SGEYVFH(C) (все из которых способны вызывать in vivo образование антител к вышеперечисленным пептидам Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 ).

Другой аспект настоящего изобретения относится к применению по крайней мере одного соединения, содержащего аминокислотную последовательность, которую выбирают из группы, включающей AIPLFVM(C), KLPLFVM(C), QLPLFVL(C) и NDAKIVF(C), для производства лекарственного средства для профилактики и(или) лечения болезни Альцгеймера.

Каждое из соединений настоящего изобретения способно вызывать in vivo образование антител к пептидам - производным Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 40/42, включая Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 1-40/42 и укороченные с N-конца формы, такие как Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 3-40/42, Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 (рЕ)3-40/42, неизмененный Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 11-40/42, модифицированные Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 p(E)11-40/42 и Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 14-40/42 соответственно. Поскольку соединения настоящего изобретения выделяют с помощью антитела к аминокислотным остаткам Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 от 14 до 19, соединения настоящего изобретения способны вызывать образование антител, которые связываются с укороченными формами пептида Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 , начиная с аминокислот в положении 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 пептидов Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 . Таким образом, эти соединения особенно хорошо подходят для лечения и(или) профилактики БА, поскольку введение по крайней мере одного из вышеуказанных соединений ведет к образованию антител, способных распознавать основные формы Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 , например, Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 1-40/42, Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 рЕ3-40/42 и Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 3-40/42. Кроме того, эти мимотопы не вызывают перекрестную реактивность с ноэпитопами, присутствующими на sAPP альфа после отщепления от БПА, и вследствие этого не нарушают нормальную передачу сигнала sAPP альфа.

Соединения настоящего изобретения, в частности пептиды настоящего изобретения, могут быть дополнительно модифицированы на N-конце с помощью реакции ацилирования и(или) ацетилирования. Например, особенно предпочтительное соединение содержит аминокислотную последовательность AC-GEIYFER(С).

Согласно настоящему изобретению, термин «мимотоп» означает молекулу, которая имеет конформацию, являющуюся топологическим эквивалентом эпитопа, который она имитирует. Мимотоп связывается с тем же самым антигенсвязывающим участком антитела, с которым специфически связывается нужный антиген. Мимотоп будет вызывать иммунный ответ у хозяина, проявляющийся в реакции на антиген, который он имитирует. Также мимотоп может действовать как конкурент за связывание эпитопа, который он имитирует в анализах торможения in vitro (например, в твердофазном иммуноферментном анализе), где участвуют эпитоп и антитело, связывающее вышеуказанный эпитоп. Однако мимотоп настоящего изобретения необязательно может предотвращать связывание эпитопа или конкурировать за связывание эпитопа, который он имитирует в анализах торможения in vitro, хотя он способен вызывать иммунный ответ при введении млекопитающему.

Согласно использованию в данном документе, термин «эпитоп» означает иммуногенный участок антигена, который распознается молекулой определенного антитела. Как правило, антиген имеет один или несколько эпитопов, каждый из которых способен связывать антитело, способное распознавать определенный эпитоп.

Мимотопы настоящего изобретения можно получать синтетическим путем с помощью методик химического синтеза, известных в данной области техники, либо в виде отдельного пептида, либо как часть другого пептида или полипептида. Или пептидный мимотоп можно получать в микроорганизме, вырабатывающем этот пептидный мимотоп, который затем выделяют и, при необходимости, подвергают дополнительной очистке. Пептидный мимотоп можно получать в таких микроорганизмах, как бактерии, дрожжи или грибы, в клетках эукариотов, таких как клетки млекопитающих или насекомых, или с помощью рекомбинантного вирусного вектора, такого как аденовирус, поксивирус, вирус герпеса, вирус леса Семлики, бакуловирус, бактериофаг, вирус синдбис или вирус сендаи. Пригодные для получения пептидного мимотопа бактерии включают Е. coli, В. subtilis или любые другие бактерии, которые способны вырабатывать пептиды, такие как пептидный мимотоп. Пригодные для получения пептидного мимотопа типы дрожжей включают Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces pombe, Candida spp., Pichia pastoris или любые другие дрожжи, способные вырабатывать пептиды. Соответствующие методики известны в данной области техники. Также методики выделения и очистки пептидов, получающихся рекомбинантным путем, хорошо известны в данной области техники и включают, например, гель-фильтрацию, аффинную хроматографию, ионообменную хроматографию и т.д.

Для облегчения выделения пептидного мимотопа может быть изготовлен гибридный полипептид, где пептидный мимотоп трансляционно слит (ковалентно связан) с гетерологичным полипептидом, который обеспечивает выделение с помощью аффинной хроматографии. Типичные гетерологичные полипептиды - His-Tag (например, His6 : 6 остатков гистидина), GST-Tag (глутатион-S-трансфераза) и т.д. Гибридный полипептид не только облегчает очистку мимотопов, но и предупреждает разрушение полипептида мимотопа в процессе очистки. Если требуется удалить гетерологичный полипептид после очистки, гибридный полипептид может содержат сайт расщепления в месте соединения между пептидным мимотопом и гетерологичным полипептидом. Участок расщепления состоит из аминокислотной последовательности, которая расщепляется ферментом, специфичным для этой аминокислотной последовательности в данном сайте (например, протеазами).

Мимотопы настоящего изобретения также могут быть модифицированы в или вблизи их N- и(или) С-конца так, чтобы с ними в вышеуказанным положениях был связан остаток цистеина. В предпочтительном варианте концевые остатки цистеина (расположенные на N- и С-концах пептида) используются для циклизации пептидов за счет дисульфидной связи.

Мимотопы настоящего изобретения также могут быть использованы в различных анализах и наборах, в частности, в иммунологических анализах и наборах. Таким образом, особенно предпочтительно, чтобы мимотоп мог быть частью другого пептида или полипептида, в частности, фермента, который используется как репортер в иммунологических анализах. Такие ферменты-репортеры включают, например, щелочную фосфатазу или пероксидазу хрена обыкновенного.

Мимотопы, согласно настоящему изобретению, предпочтительно представляют собой антигенные полипептиды, которые в своей аминокислотной последовательности отличаются от аминокислотной последовательности Ар или от фрагментов Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 . В этом отношении мимотопы настоящего изобретения могут включать не только аминокислотные замены одного или нескольких естественных остатков аминокислот, но также одну или несколько аминокислот, не встречающихся в естественных условиях (например, не относящихся к 20 «классическим» аминокислотам), или они могут быть полностью собраны из аминокислот, не встречающихся в естественных условиях. Кроме того, антигены настоящего изобретения, которые вызывают образование антител к и связывающих Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 1-40/42, Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 pE3-40/42, Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 3-40/42, Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 11-40/42, Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 pE11-40/42 и Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 14-40/42 (и другие укороченные с N-конца формы Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 , начиная с положений аминокислотных остатков 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 и 13), могут быть собраны из D- или L-аминокислот или комбинаций DL-аминокислот и, на выбор, их можно подвергнуть дальнейшим модификациями, замыканию в кольцо или получению производных. Подходящие антигены, индуцирующие образование антител, можно получить из пептидных библиотек, имеющихся в продаже. Предпочтительно эти пептиды должны состоять по крайней мере из 7 аминокислот, и предпочтительно их длина должна составлять до 16 аминокислот, предпочтительно до 14 или 20 аминокислот (например, от 5 до 16 аминокислотных остатков). Однако согласно настоящему изобретению более длинные пептиды тоже могут быть успешно использованы в качестве антигенов, индуцирующих образование антител. Кроме того, мимотопы настоящего изобретения также могут быть частью какого-либо полипептида и, следовательно, содержать на N- или С-конце по крайней мере один дополнительный аминокислотный остаток.

Для получения мимотопов настоящего изобретения (например, антигенов, индуцирующих образование антител, описанных в данном документе), конечно же, также пригодны библиотеки фагов и библиотеки пептидов, например, полученных с помощью методик комбинаторной химии или полученных путем высокопроизводительных методик скрининга наиболее меняющихся структур (Display: A Laboratory Manual by Carlos F.Barbas (Editor), et al.; Willats WG Phage display: practicalities and prospects. Plant Mol. Biol. 2002 Dec.; 50(6):837-54).

Кроме того, согласно настоящему изобретению также могут быть использованы антигены, индуцирующие образование антител к Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 1-40/42, Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 рЕ3-40/42, Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 3-40/42 и Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 11-40/42 и основанные на нуклеиновых кислотах («аптамеры»), и их тоже можно найти с помощью большинства различных библиотек (олигонуклеотидов) (например, из 2-180 остатков нуклеиновых кислот) (например, Burgstaller et al., Curr. Opin. Drug Discov. Dev. 5(5) (2002), 690-700; Famulok et al., Ace. Chem. Res. 33 (2000), 591-599; Mayer et al., PNAS 98 (2001), 4961-4965, и т.д.). В антигенах на основе нуклеиновых кислот, индуцирующих образование антител, цепь нуклеиновой кислоты может быть получена, например, из естественных фосфорнодиэфирных соединений, или также из фосфотиоатов или комбинаций или химических вариантов (например, таких как пептид-нуклеиновая кислота), где в качестве нуклеотидов, согласно настоящему изобретению, могут использованы в основном U, Т, А, С, G, Н и mC. 2'-Остатки нуклеотидов, которые могут быть использованы согласно настоящему изобретению, предпочтительно представляют собой Н, ОН, F, Cl, NH2, O-метил, O-этил, O-пропил или O-бутил, где нуклеиновые кислоты также могут быть модифицированы различным образом, например, с использованием защитных групп, как они традиционно используются в синтезе олигонуклеотидов. Таким образом, антигены на основе аптамеров, индуцирующие образование антител, также являются предпочтительными антигенами, индуцирующими образование антител в объеме настоящего изобретения.

Согласно предпочтительному варианту настоящего изобретения соединение связывают с фармацевтически приемлемым носителем, предпочтительно KLH (гемоцианином фиссуреллы), столбнячным токсином, альбуминсвязывающим белком, бычьим сывороточным альбумином, дендримером (MAP; Biol. Chem. 358: 581), пептидными линкерами (или фланкирующими участками regions), а также веществами-адъювантами, описанными в Singh et al., Nat. Biotech. 17 (1999), 1075-1081 (в частности, в таблице 1 этого документа) и O'Hagan et al., Nature Reviews, Drug Discovery 2 (9) (2003), 727-735 (в частности, эндогенные иммуномодулирующие соединения и системы доставки, описанные там), или их смесями. Конъюгированные химические соединения (например, с участием гетерофункциональных соединений, таких как GMBS и, конечно, других, таких как описаны в «Bioconjugate Techniques», Greg T.Hermanson) в данном контексте могут быть выбраны из реакций, известных специалисту в данной области техники. Кроме того, состав вакцин может быть дополнен адъювантом, предпочтительно малорастворимым алюминийсодержащим веществом, в частности, гидроксидом алюминия. Конечно, также могут быть использованы такие адъюванты, как гидрофосфат алюминия MF59, фосфат кальция, цитокины (например, ИЛ-2, ИЛ-12, ГМ-КСФ), сапонины (например, QS21), производные мурамил-1-аланил-d-изоглутамина, олиго-CpG, ЛПС, МПС, полифосфазены, эмульсии (например, эмульсия Фройнда, SAF), липосомы, виросомы, искомы, кохлеаты, полилактид-когликолидные микрочастицы, полоксамерные частицы, вирусоподобные частицы, термолабильный энтеротоксин (ЛТ), холерный токсин (XT), мутантные токсины (например, ., LTK63 и LTR72), микрочастицы и(или) полимеризованные липосомы.

Соединение настоящего изобретения предпочтительно связано с носителем или адъювантом через линкер, который выбирают из группы, состоящей из NHS-поли(этиленоксида) (РЭО) (например, NHS-PEO4-малеимид).

Вакцину, которая содержит настоящее соединение (мимотоп) и фармацевтически приемлемый носитель, можно вводить любым подходящим путем, например, внутрикожно, внутривенно, интраперитонеально, внутримышечно, интраназально, внутрь, подкожно и т.д., и в любом подходящем инжекторном устройстве (Oсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 Hagan et al., Nature Reviews, Drug Discovery 2 (9), (2003), 727-735). Соединение настоящего изобретения предпочтительно выпускать в фармацевтической форме для внутривенного, подкожного, внутрикожного или внутримышечного введения (см., например, «Handbook of Pharmaceutical Manufacturing Formulations», Sarfaraz Niazi, CRC Press Inc. 2004).

Лекарственное средство (вакцина) согласно настоящему изобретению содержит соединение настоящего изобретения в количестве от 0,1 нг до 10 мг, предпочтительно от 10 нг до 1 мг, в частности, от 100 нг до 100 мкг, или же, например, от 100 фмоль до 10 мкмоль, предпочтительно до 10 пмоль до 1 мкмоль, в частности, от 100 пмоль до 100 нмоль. Типично вакцина может также содержать вспомогательные вещества, например, буферные растворы, стабилизаторы и т.д.

Другой аспект настоящего изобретения относится к применению соединения согласно определению выше для лечения и(или) уменьшения симптомов синуклеопатии.

Удивительно, но оказалось, что соединения настоящего изобретения также можно использовать для лечения или уменьшения симптомов, обусловленных синуклеопатиями.

Амилоидозы и синуклеопатии обусловлены накоплением в головном мозге соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 -амилоида и соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 -синуклеина соответственно. У некоторых больных имеются клинические и морфологические проявления обоих заболеваний, что предполагает перекрывание механизмов патогенеза. Этих больных относят к страдающим вновь открытым синдромом, называемым деменцией с тельцами Леви или болезнью Паркинсона с деменцией (ДТЛ/БПД). Недавно на модели ДТЛ/БПД у трансгенных животных установлено, что суперэкспрессия и синуклеина, и белка-предшественника амилоида (hAPP) у мышей ведет к развитию когнитивных и двигательных нарушений, сопровождающихся утратой холинергических нейронов и уменьшением количества синаптических пузырьков, образованием обширных амилоидных бляшек и фибриллярных включений в нейронах, вступающих в иммунологическую реакцию с haSYN. Все эти признаки также обнаруживают при синдроме ДТЛ/БПД. Недавно описано, что обе молекулы способны взаимодействовать и образовывать гибридные олигомеры in vitro. Также обнаружено, что суперэкспрессия БПА может усугублять некоторые морфологические эффекты суперэкспрессии соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 -синуклеина. И наоборот, соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 -синуклеин способен усиливать секрецию и токсичность бета-пептидов амилоида и, возможно, также усиливать эффекты соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 -амилоида, что свидетельствует в поддержку перекрывания механизмов патогенеза при нейродегенеративном процессе.

Установлено, что при обеих протеинопатиях прогрессирующее накопление пептидных олигомеров является одним из главных проявлений токсичности, ведущим к различным изменениям, которые типичны либо для синуклеопатии, либо для амилоидозов. Несмотря на механическое сходство, предполагается, что соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 -синуклеин и Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 вызывают разные, а также сходящиеся, патологические эффекты в отношении структурной целостности и функции головного мозга. Считается, что синуклеины влияют на моторную функцию гораздо сильнее, чем на когнитивную, в то время как пептиды соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 -амилоиды вызывают противоположные эффекты. Причина такого расхождения на сегодняшний день не установлена, но оно мешает точному выяснению взаимозависимости и эффектов обеих молекул.

Методика лечения, представленная в настоящем изобретении, описана как иммунотерапия, направленная на Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 , что приведет к удалению главного внеклеточного амилоида. Такое лечение должно уменьшить изменения, вызванные амилоидом - от образования бляшек до гибели нейронов, - а также нарушения памяти и снижение когнитивных функций. Однако субклеточная локализация синуклеинов указывает, что эти внутриклеточные белки в основном активны на уровне синапсов, в частности, в синаптических пузырьках. Любопытно также, что скопления синуклеина, которые являются типичным морфологическим признаком синуклеопатий, в основном обнаруживаются внутри клеток. Кроме того, полагают, что механизм патогенеза синуклеопатий включает изменения внутри нейронов, начиная с нарушения функции митохондрий, накопления неправильно свернутых убиквитинированных или фосфорилированных белков, а также накопления альфа-синуклеина. Такие изменения в итоге приводят к изменениям функции синапсов, нарушению синаптической передачи и гибели дофаминергических нейронов с классическими проявлениями синуклеопатий. Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 , наоборот, обнаруживается в основном во внеклеточном пространстве, и бляшки амилоида, а также волокна, протофибриллы и олигомеры бета-амилоида могут оказывать нейротоксическое воздействие при внесении во внеклеточное пространство или в ткань головного мозга. Таким образом, для опытного специалиста будет удивительным, что методика, направленная в основном на внеклеточный амилоид, будет уменьшать симптомы синуклеопатий, таких как болезнь Паркинсона, которые влияют главным образом на внутриклеточные процессы, ведущие к развитию типичных симптомов, описанным ниже. Еще удивительнее, что, как считается в настоящее время, перекрывающиеся эффекты обеих молекул обусловлены прямым взаимодействием двух белков, что должно происходить преимущественно внутри клеток.

Согласно настоящему изобретению, термин «синуклеопатия» включает все нейродегенеративные заболевания, характеризующиеся аномальными скоплениями синуклеина. Несколько нейродегенеративных заболеваний, включая болезнь Паркинсона (БП), болезнь телец Леви (БТЛ), диффузную болезнь телец Леви (ДБТЛ), деменцию с тельцами Леви (ДТЛ), паркинсонизм с деменцией (ПД), множественную системную атрофию (МСА) и нейродегенерацию с отложением железа в головном мозге I типа (НОЖГМ I типа) объединены под названием синуклеопатии.

«Симптомы синуклеопатии» согласно употреблению в данном документе означают те симптомы синуклеопатии, в частности болезни Паркинсона, которые касаются двигательных и «немоторных» функций у больного, страдающего вышеуказанным заболеванием. «Двигательные симптомы» включают тремор в покое, брадикинезию, ригидность, нарушения равновесия, сгорбленную позу, дистонию, повышенную утомляемость, нарушения мелких движений и их координации, грубые нарушения координации, скудость движений (уменьшенный размах рук), акатизию, расстройства речи, такие как тихий голос или неразборчивая речь, вызванная отсутствием мышечного контроля, утрату выражения лица, или «лицо-маска», микрографию, трудности при глотании, нарушения половой функции, слюнотечение и т.д. «Немоторные» симптомы включают боль, деменцию или спутанность сознания, нарушения сна, запоры, кожные болезни, депрессию, страх или тревожность, нарушения памяти или заторможенность мышления, нарушения мочеиспускания, повышенную утомляемость и ноющие боли, потерю энергии, навязчивое поведение, судороги и т.д.

Согласно предпочтительному варианту настоящего изобретения, синуклеопатию выбирают из группы, включающей болезнь Паркинсона, деменцию с тельцами Леви, множественную системную атрофию и нейродегенерацию с накоплением железа в головном мозге. Особенно предпочтительна болезнь Паркинсона.

Другой аспект настоящего изобретения относится к пептиду, имеющего или состоящего из аминокислотной последовательности, которую выбирают из группы, включающей SHTRLYF(C), SGEYVFH(C), SGQLKFP(C), SGQIWFR(C), SGEIHFN(C), GQIWFIS(С), NDAKIVF(C), GQIIFQS(C), GQIRFDH(C), HMRLFFN(C), GEMWFAL(C), GELQFPP(C), GELWFP(C), SHQRLWF(C), HQKMIFA(C), GEMQFFI(C), GELYFRA(C), GEIRFAL(C), GMIVFPH(C), GEIWFEG(C), GEIYFER(C), AIPLFVM(C), GDLKFPL(C), GQILFPV(C), GELFFPK(C), GQIMFPR(C), HMRMYFE(C), GSLFFWP(C), GEILFGM(C), GQLKFPF(C), KLPLFVM(C), GTIFFRD(C), THQRLWF(C), GQIKFAQ(C), GTLIFHH(C), GEIRFGS(C), GQIQFPL(C), GEIKFDH(C), GEIQFGA(C), QLPLFVL(C), HQKMIF(C), GELFFEK(C), GEIRFEL(C), AcGEIYFER(C), SGEIYFER(C), AGEIYFER(C) and (C)GEIYFER. Как указано путем использования скобок, пептиды настоящего изобретения могут содержать или не содержать остаток цистеина на С- или N-конце. Вследствие этого в объем настоящего изобретения также входят следующие аминокислотные последовательности: SHTRLYF, SGEYVFH, SGQLKFP, SGQIWFR, SGEIHFN, GQIWFIS, NDAKIVF, GQIIFQS, GQIRFDH, HMRLFFN, GEMWFAL, GELQFPP, GELWFP, SHQRLWF, HQKMIFA, GEMQFFI, GELYFRA, GEIRFAL,- GMIVFPH, GEIWFEG, GEIYFER, AIPLFVM, GDLKFPL, GQILFPV, GELFFPK, GQIMFPR, HMRMYFE, GSLFFWP, GEILFGM, GQLKFPF, KLPLFVM, GTIFFRD, THQRLWF, GQIKFAQ, GTLIFHH, GEIRFGS, GQIQFPL, GEIKFDH, GEIQFGA, QLPLFVL, HQKMIF, GELFFEK, GEIRFEL, SGEIYFER и AGEIYFER.

Согласно предпочтительному варианту пептид связан с фармацевтически приемлемым носителем, предпочтительно гемоцианином фиссуреллы.

Другой аспект настоящего изобретения относится к фармацевтической форме, предпочтительно вакцине, содержащей по крайней мере один пептид согласно настоящему изобретению. Вышеуказанная дозированная фармацевтическая форма может использоваться для лечения субъектов, страдающих болезнью Альцгеймера, или профилактики образования бляшек АВ у субъекта для замедления развития болезни Альцгеймера.

Настоящее изобретение дополнительно проиллюстрировано следующими рисунками и примерами, однако не налагающих каких-либо ограничений.

Фиг.1 отображает связывание моноклонального антитела MV-002 со специфическими пептидами и рекомбинантными белками.

Фиг.2 отображает типичные анализы связывания с мимотопами В-амилоида и укороченных с N-конца и(или) посттрансляционно модифицированных фрагментов В-амилоида.

Фиг.3 отображает типичные анализы торможения с мимотопами В-амилоида и укороченных с N-конца и(или) посттрансляционно модифицированных фрагментов В-амилоида.

Фиг.4 отображает примеры характеристик иммунного ответа in vivo, вызванного вакцинацией мимотопами (введенный пептид/посторонний пептид).

Фиг.5 отображает примеры характеристик иммунного ответа in vivo, вызванного вакцинацией мимотопами против фрагментов бета-амилоида и sAPP альфа.

Фиг.6 отображает примеры характеристик иммунного ответа in vivo, вызванного вакцинацией мимотопами против полноразмерного АВ40/42.

Фиг.7 отображает области, покрытые бляшками амилоида. Тд2576 вводили 6-кратно с вакцинами из мимотопов, где в качестве адъюванта использован гидроксид алюминия, путем подкожного введения с месячными интервалами. Контрольные мыши получали только фосфатно-солевой буфер с гидроксидом алюминия. Области, покрытые бляшками амилоида, представлены в виде процента от контрольной группы. Gr1соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 контрольная группа; Gr2соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 получавшие р4675.

ПРИМЕРЫ:

Методики

Антитела, использованные для идентификации мимотопов согласно настоящему изобретению, выявляют аминокислотные последовательности - производные человеческого Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 , но не связываются с полноразмерным человеческим БПА. Выявляющиеся последовательности включают EVHHQKLVFFAED (=оригинальный эпитоп aa11-24 Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 ) и p(E)VHHQKLVF (p4374 = оригинальный эпитоп aa11-19 Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 с пироглутаматной модификацией на N-конце). Антитело может быть моноклональным или поликлональным антителом или какой-либо частью антитела или его производным; единственное условие - эта молекула антитела должна специфически распознавать по крайней мере один из вышеупомянутых эпитопов (производных человеческого Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 ), но не связываться с полноразмерным человеческим БПА.

Мимотопы идентифицированы и дополнительно исследованы с помощью таких моноклональных антител и библиотек пептидов.

Пример 1: Получение моноклональных антител для специфического распознавания соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 -амилоида и укороченных с N-конца и(или) посттрансляционно модифицированных фрагментов соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 -амилоида.

Создано моноклональное антитело, полученное в эксперименте Alz-9 с гибридизацией: Мышей С57/В16 многократно иммунизировали оригинальным эпитопом Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 HQKLVFC, связанным с гемоцианином фиссуреллы и гидроксидом алюминия в качестве адъюванта. Специфичную для пептида р4377 антителопродуцирующую гибридому выявляли с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (плашки для твердофазного иммуноферментного анализа, покрытые пептидом р4377). Человеческий Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 40/42 (рекомбинантный белок) использовали в качестве положительного контроля: включали гибридомы, распознающие рекомбинантный белок, иммобилизованный на плашках для твердофазного иммуноферментного анализа, так как они специфически связывали и пептид, и полноразмерный Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 . р1454 (человеческий А6 33-40) использовали в качестве отрицательного контроля. Кроме того, гибридомы исследовали на активность против p4374, р1323 и sAPP-альфа. Только гибридомы, значимо связывающие p4374 и р1323 и не связывающие sAPP-альфа, использовали для дальнейшего получения антител.

Клон гибридомы (MV-002 (внутреннее наименование А115; IgG2b) очищали и анализировали на специфическое выявление р1323, р4374, р4377, р1454, Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 и sAPP-альфа соответственно. MV-002 распознавало эпитопы р1323 и р4377 и полноразмерный белок Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 (рекомбинантный белок; получен от Bachem AG, Бубендорф, Швейцария) в твердофазном иммуноферментном анализе. Однако оно не выявляло р1454 в твердофазном иммуноферментном анализе. Кроме того, антитела MV-002 не выявляли sAPP-альфа, но специфически связывались с пептидом р4374, кодируемым пируглутаматным вариантом Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 11-19.

Пример 2: Фаговое отображение твердофазный иммуноферментный анализ связывания и торможения in vitro

Библиотеки фагового отображения, использованные в примере, включают: Ph.D. 7: New England BioLabs E8102L (библиотека 7-мерных линейных). Фаговое отображение выполнено согласно инструкции производителя (http://www.neb.com/).

После 2 или 3 последовательных циклов пэннинга собирали клоны отдельных фагов и проводили твердофазный иммуноферментный анализ с надосадочной жидкостью фагов на плашках, покрытых антителом, которое использовалось для процедуры пэннинга. Клоны фагов, которые давали положительный результат в этом твердофазном иммуноферментном анализе (сильный сигнал мишени, но отсутствие сигнала неспецифического контроля), подвергали секвенированию. По последовательностям ДНК определяли последовательности пептидов. Эти пептиды синтезировали и исследовали с помощью твердофазного иммуноферментного анализа связывания и торможения. Кроме того, создавали некоторые новые мимотопы путем комбинирования данных о последовательностях мимотопов, обнаруженных при скрининге, для идентификации консенсусной последовательности для вакцинации мимотопами.

1. Анализ связывания in vitro (твердофазный иммуноферментный анализ)

Пептиды, полученные с помощью фагового отображения, а также их варианты связывали с бычьим сывороточным альбумином и фиксировали на плашках для твердофазного иммуноферментного анализа (1 мкмоль; как указано соответствующими значениями), а затем инкубировали с моноклональным антителом, которое использовали для процедуры скрининга для анализа связывающей способности идентифицированных пептидов.

2. Анализ торможения in vitro (твердофазный иммуноферментный анализ)

Различные количества пептидов (концентрации в пределах от 5 мкг до 0,03 мкг; серийные разведения), полученные с помощью фагового отображения, инкубировали с моноклональным антителом, которое использовали в процедуре скрининга. Пептиды, уменьшающие последующее связывание антитела с оригинальным эпитопом, нанесенным на плашки для твердофазного иммуноферментного анализа, считали в этом анализе ингибирующими.

Пример 3: Исследование мимотолов in vivo: анализ игшуногенности и перекрестной реактивности

1. Исследование мимотопов In vivo

Ингибирующие, а также неингибирующие пептиды связывали с гемоцианином фиссуреллы и вводили мышам (мыши дикого типа С57/В16; подкожное введение в бедро) вместе с соответствующим адъювантом (гидроксид алюминия). Животных вакцинировали 3-6 раз с двухнедельными интервалами и сыворотку брали также каждые 2 недели. В каждой пробе сыворотки определяли титры антител к введенным пептидам, а также титры антител к посторонним пептидам. Кроме того, определяли титры антител к рекомбинантному человеческому белку Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 и к оригинальным пептидам соответственно. Как правило, сыворотки анализировали с использованием реакции с пептидами, связанными с бычьим сывороточным альбумином, и рекомбинантными полноразмерными белками, иммобилизованными на плашках для твердофазного иммуноферментного анализа. Титры определяли, используя специфические антитела к мышиному IgG. Подробные результаты приведены на рисунках 4, 5 и 6 соответственно.

2. Результаты

2.1. Идентификация специфических моноклональных антител (мАТ), направленных против укороченных с N-конца и модифицированных форм Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 :

На рисунке 1 отображены характеристики моноклонального антитела MV-002 (внутреннее наименование А115; IgG2b), полученного в эксперименте Alz-9, демонстрирующие специфичность к полноразмерному Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 и фрагментам Ай, укороченного в положениях E11 и Н14 и модифицированного в положениях от Е11 до pE11.

2.2. Скрининг специфическими мАТ, направленными против укороченных с N-конца и модифицированных форм Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 :

2.2.2. Библиотека фагового отображения Ph.D. 7

2.2.1.1. Скрининг моноклональным антителом к р1323

Сорок семь последовательностей идентифицированы путем скрининга библиотек фагового отображения PhD 7 в этом скрининге:

В таблице 1 суммированы идентифицированные пептиды и их связывающая способность в сравнении с оригинальным эпитопом.

Таблица 1.
Связывание мимотопов с родительским антителом MV-002
Внутренний номер пептида Идентификационный номер последовательности: ПоследовательностьСвязывающая способность
р44031 SHTKLYFC1
р44042 SGEYVFHC1
р44133SGQLKFPC 1
р4414 4SGQIWFRC 1
р4415 5SGEIHFNC1
р46666 GQIWFISC1
р46677 NDAKIVFC3
р46688GQIIFQSC 2
р4669 9GQIRFDHC 3
р4670 10HMKLFFNC3
р467111 GEMWFALC3
р467212 GELQFPPC3

Внутренний номер пептида Идентификационный номер последовательности: ПоследовательностьСвязывающая способность
р467313 GELWFPC3
р467414 SHQKLWFC3
р467515HQKMIFAC 3
р4676 16GEMQFFIC 3
р4677 17GELYFRAC3
р467818 GEIRFALC3
р467919 GMIVFPHC3
р468020GEIWFEGC 3
р4681 21GEIYFERC 3
р4682 22AIPLFVMC1
р468323 GDLKFPLC3
р468424 GQILFPVC3
р468525GELFFPKC 3
р4686 26GQIMFPRC 3
р4687 27HMRMYFEC3
р468828 GSLFFWPC2
р468929 GEILFGMC3
р469030GQLKFPFC 3
р4691 31KLPLFVMC 1
р4692 32GTIFFRDC1
р469333 THQRLWFC3
р469434 GQIKFAQC3
р469535GTLIFHHC 2
р4696 36GEIRFGSC 3
р4697 37GQIQFPLC3
р469838 GEIKFDHC3
р469939 GEIQFGAC3
р470040QLPLFVLC 1
р4794 41HQKMIFC 2
р4795 42GELFFEKC2
р479643 GEIRFELC2

Внутренний номер пептида Идентификационный номер последовательности: ПоследовательностьСвязывающая способность
р480444 Ас-GEIYFERC2
р480545 SGEIYFERC1
р480646AGEIYFERC 1
р4807 47CGEIYFER 1

Условные обозначения в таблице 1: связывающая способность обозначена одним из следующих шифров: 1:Х означает коэффициент разведения родительского AT. Ac - указывает ацетилированный АА.

шифр связываниясоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 ОД ½ макс. 1:Х
0связывание отсутствует :0
1 слабое связывание:<40000
2среднее связывание :40000-320000
3сильное связывание :>320000

2.3. Исследование in vitro характеристик мимотопов, идентифицированных при скрининге библиотек фагового отображения с помощью моноклональных антител к укороченным с N-конца и модифицированным формам Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 :

На рисунках 2 и 3 представлены репрезентативные примеры анализов связывания и торможения, использованных для исследования характеристик мимотопов in vitro. Полученные данные суммированы в таблицах 1 и 2 соответственно.

Мимотопы MV-002: Из 47 последовательностей представлены 11 последовательностей, тормозящих связывание моноклонального антитела MV-002 в экспериментах с конкурированием in vitro. Идентифицированы еще 36 последовательности, которые не тормозили связывание моноклонального антитела в экспериментах с конкурированием связыванием in vitro, но сохраняли связывающую способность родительского антитела (таблица С). Важно, как отображено на фиг.4-6, что способность конкурировать с оригинальным эпитопом за связывание с родительским антителом in vitro не являлась обязательным условием индукции специфического иммунного ответа с перекрестной реактивностью со специфическими пептидами in vivo. Таким образом, ингибирующие и неингибирующие пептиды можно использовать для индукции иммунных ответов, выявляющих пептиды in vivo (подробнее см.: фиг.4-6), что может приводить к выведению пептидов амилоида из головного мозга.

Таблица 2.
Мимотопы, описанные в настоящем изобретении, давшие положительные результаты в анализах торможения; мимотопы MV-002
Внутренний номер пептида Идентификационный номер последовательности: ПоследовательностьИнгибирующая способность
р46677 NDAKIVFC1
р467010 HMRLFFNC1
р467313GELWFPC 1
р4674 14SHQRLWFC 1
р4675 15HQKMIFAC2
р468020 GEIWFEGC2
р468121 GEIYFERC2
р468929GEILFGMC 1
р4698 38GEIKFDHC 2
р4699 39GEIQFGAC1
р479441 HQKMIFC1

Условные обозначения в таблице 2: ингибирующая способность обозначена одним из следующих шифров:

Слабое торможение означает, что для уменьшения связывания AT требуется больше пептида, чем оригинального эпитопа; сильное торможение означает, что для уменьшения связывания AT требуются одинаковые количества пептидов - мимотопа и оригинального пептида. Мимотопы сравнивают с оригинальным пептидом в качестве стандарта. Для расчета конкурентной способности в сравнении с оригинальным пептидом использовано ОД при 5 мкг пептида, использованного в данном анализе.

шифр конкурентной способности соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953
0 отсутствие торможения (ОД пептида больше чем в 4,6 раз, чем у оригинального пептида)
1 Слабее, чем у оригинального пептида (ОД пептида в 4,6 раз меньше, чем у оригинального пептида)
2Сильное торможение (как у оригинального пептида; ОД пептида в 2,3 раза меньше, чем у оригинального пептида)

2.4. Исследование in vivo характеристик мимотопов, идентифицированных при скрининге библиотек фагового отображения с использованием моноклонального антитела к амилоиду-бета:

Самок мышей С57/bl6, 5-6 на группу, подкожно иммунизировали 30 мкг пептида, связанного с гемоцианином фиссуреллы. В контрольных группах соответственно вводили оригинальный эпитоп, связанный с гемоцианином фиссуреллы. В качестве адъюванта применяли гидроксид алюминия (всегда 1 мг на одну мышь). Все введенные пептиды проявили способность специфично связываться с моноклональными антителами, хотя некоторые пептиды не тормозили связывание оригинального эпитопа с родительским антителом in vitro (в анализах торможения in vitro). Для измерения титра антител проводили твердофазный иммуноферментный анализ с сыворотками мышей после каждой вакцинации с двухнедельными интервалами (см. Фиг.6 и 7 соответственно). На всех рисунках титры рассчитывали как ОД макс/2. Лунки на плашке для твердофазного иммуноферментного анализа покрывали мимотопом, связанным с бычьим сывороточным альбумином, и посторонним пептидом, связанным с бычьим сывороточным альбумином (отрицательный контроль). Положительный контроль проводили с помощью реакции родительского антитела с соответствующим конъюгатом мимотопа с бычьим сывороточным альбумином. Детекцию выполняли с использованием IgG к мышиным антителам. Кроме того, рекомбинантные белки иммобилизовывали на плашках для твердофазного иммуноферментного анализа и проводили соответствующие реакции с сыворотками. На Фиг.4, 5 и 6 отображены репрезентативные примеры анализов, использованных для исследования характеристик мимотопов in vivo. Представленные результаты получены в отношении пептидов, активных в анализах торможения in vitro, таких как р4670, р4675, р4680 и р4681, и пептида р4403, не обладающего ингибирующей активностью.

На рисунке 4 приведены примеры исследования характеристик иммунного ответа in vivo, вызванного вакцинацией мимотопами, путем анализа иммунного ответа против введенного пептида и постороннего пептида, содержащего отличающуюся последовательность. В представленных примерах эпитоп р4377 и мимотопы р4670, р4675, р4680, р4681 и р4403 вызывают иммунный ответ против введенных пептидов, но не вызывают соответствующий иммунный ответ против отличающейся последовательности (р1454).

На рисунке 5 приведены примеры исследования характеристик иммунного ответа in vivo, вызванного вакцинацией мимотопами, направленного на соответствующий оригинальный эпитоп родительского антитела (р4377), а также пептидов - производных других форм укороченных форм Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 (р1323 и р4374) и против sAPP альфа.

р4377 и мимотопы р4670, р4675, р4680, р4681 и р4403 вызывали выявляющиеся иммунные ответы на оригинальный эпитоп р4377. Схожее явление можно было выявить, анализируя перекрестную реактивность с модифицированной формой, такой как представленный р4374. Любопытно, что оригинальный эпитоп и вакцины с мимотопами вызывали значимые титры антител к модифицированной форме р4374 оригинального эпитопа. Удивительно, что мимотопы оказались способны вызывать, но необязательно вызывали более эффективный иммунной ответ против р1323, что указывало на возможность вызывать более широкую иммунную реактивность в сравнении с оригинальным фрагментом Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 . Кроме того, не выявлялась активность против sAPP альфа.

Рисунок 6 отображает примеры исследования характеристик иммунного ответа на полноразмерный Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 in vivo, вызванного вакцинацией мимотопами. Удивительно, но мимотопы, отобранные с использованием MV-002, вызывали перекрестную реактивность не только с укороченными или модифицированными короткими эпитопами, использованными для получения антител, но также и с полноразмерными, немодифицированными формами Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 с той же эффективностью, что и оригинальная последовательность, и даже эффективнее, чем р4377.

Интересно, что конкурирующие и неконкурирующие пептиды оказались способны вызывать схожие иммунные ответы, проявляющиеся в специфическом взаимодействии с пептидами, содержащими оригинальные последовательности Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 . Таким образом, мимотопы настоящего изобретения представляют собой оптимизированные новые кандидаты для применения в вакцинах против более широкого спектра естественных форм пептидов Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 , таких как обнаруживают в головном мозге больных с БА. Эти формы включают, но не ограничиваются перечисленным, Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 1-40/42 и укороченные с N-конца формы, такие как Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 3-40/42 и Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 (рЕ) 3-40/42, а также немодифицированный Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 11-40/42, модифицированный Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 p(E)11-40/42 и Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 14-40/42 соответственно. Важно, что представленные мимотопы также не вызывали перекрестную реактивность к неоэпитопами, присутствующими на sAPP альфа после отщепления от БПА, и вследствие этого не нарушают нормальную передачу сигнала sAPP альфа (подробнее см. рисунок 5).

Таблица 3.
Пептиды - не мимотопы
Внутренний номер пептида:Идентификационный номер последовательности:Последовательность
р125348 DAEFRHDSGYC

Внутренний номер пептида: Идентификационный номер последовательности: Последовательность
р1323 49CHQKLVFFAED
р437450 p(E)VHHQKLVFC
р437751EVHHQKLVFC
р145452 CGLMVGGVV
Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 1-4053 DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGA IIGLMVGGVV; производное человеческого БПА (gi:112927)
Aсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 1-4254 DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGA IIGLMVGGVVIA; производное человеческого БПА (gi:112927)
sAPP альфа 55Альфа-секретаза давала продукт расщепления - производное человеческого БПА (gi:112927)

В таблице 4 приведены дополнительные примеры иммунного ответа на полноразмерный Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 , вызванного вакцинацией мимотопами, с использованием мимотопов - производных MV-002. Все пептиды, перечисленные в таблице 4, вызывают специфические иммунологические реакции с полноразмерными и(или) укороченными и модифицированными формами АВ или их фрагментами.

Таблица 4.
Исследование характеристик мимотопов in vivo: MV-002
Внутренний номер пептида Идентификационный номер последовательности: Выявление АВ/укороченных/модифицированных форм
р44031+
р44042 +
р4413 3+

р44144 +
р4415 5+
р4670 10+
р467313+
р467515 +
р4680 20+
р468121+
р469333 +
р4696 36+
р469838+
р469939 +

2.5: Исследование характеристик мимотопов in vivo в отношении эффективности, проявляющейся уменьшением признаков модели болезни Альцгеймера, у трансгенных животных

Для изучения доклинической эффективности вакцин с мимотопами использовали модель БА у мышей Tg2576. У этой линии трансгенных мышей экспрессируется человеческий БПА, несущий двойную шведскую мутацию 670/671 в положении аа под контролем промотора белка приона хомячка (БПр), что ведет к суперэкспрессии этого белка. В настоящее время это самые широко применяющиеся модели БА в научных исследованиях. В модели Tg2576 воспроизводятся различные основные морфологические признаки БА, включая характерное отложение бляшек амилоида и астроцитоз. Как и все другие модельные системы БА, существующие на сегодняшний день, эта модель не отражает все кардинальные нейропатологические признаки БА.

Чтобы оценить, может ли лечение мимотопами предупреждать накопление Ай в головном мозге, мышам Tg2576 вводили подкожно 6 раз с месячными интервалами конъюгаты пептид-гемоцианин фиссуреллы, адсорбированный на гидроксиде алюминия (адъювант) или фосфатно-солевой буфер, адсорбированный на гидроксиде алюминия (обозначенный как ФСБ или контроль). В срок до 8 недель после последней иммунизации животных забивали, извлекали головной мозг и анализировали массу АВ (патологические изменения, схожие с БА). Мышей забивали под глубокой анестезией. Затем извлекали головной мозг, фиксировали в 4% параформальдегиде и обезвоживали пошагово в серии растворов этилового спирта, а затем инкубировали в ксилене и заливали парафином. Головной мозг, залитый парафином, разрезали на срезы толщиной 7 мкм с помощью микротома, и срезы помещали на предметные стекла.

В качестве методики оценки патологии, схожей с БА, у животных Tg2576 мы анализировали относительную площадь, занятую отложениями амилоида в головном мозге леченых животных. Этот анализ проводили с помощью программы автоматического распознавания областей. Для идентификации бляшек срезы окрашивали моноклональным антителом (мАТ) ЗА5 (специфичным к Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 40/42). Животных, леченых мимотопами, сравнивали с контрольными животными. Всех животных забивали в возрасте 13,5-14 месяцев. Для анализа выбирали 3 стекла на одно животное с препаратами коры головного мозга гиппокампа, окрашенными мАТ 3А5, а затем документировали с использованием системы Mirax (Zeiss). Для расчета площади, занятой бляшками амилоида, мы анализировали до четырех отдельных срезов на один препарат, и срезы, имеющие в тканях артефакты и аномальную интенсивность окрашивания, исключали после просмотра полученных изображений.

В отношении мимотопов MV002 мы проводили анализ площади, используя один типичный кандидат: Анализ выполняли после многократной вакцинации вакцинами с конъюгатом пептид-гемоцианин фиссуреллы. В контрольной группе выявлена средняя занятая относительная площадь 0,35%, а у животных, леченых мимотопами, 0,24%. Это соответствует уменьшению на 31% во 2-й группе, леченой мимотопами.

Таким образом, эти данные четко указывают на благоприятный эффект вакцинации вакцинами с мимотопами при лечении модели БА у трансгенных животных.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Применение по меньшей мере одного соединения, содержащего аминокислотную последовательность

соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953

где X1 - серин (S), треонин (Т) или цистеин (С),

Х2 - глутамин (Q), треонин (Т) или метионин (М),

Х3 - лизин (К) или аргинин (R),

Х4 - лейцин (L), метионин (М),

Х5 - триптофан (W), тирозин (Y), фенилаланин (F) или изолейцин (I),

Х6 - аспарагин (N), глутаминовая кислота (Е), аланин (А) или цистеин (С),

Х7 - цистеин (С),

n и m - независимо друг от друга 0 или 1,

причем соединение обладает связывающей способностью антитела, специфичного к эпитопу бета-пептида амилоида (Асоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 ), содержащему аминокислотную последовательность HQKLVF и(или) HQKLVFFAED,

для производства лекарственного средства для профилактики и/или лечения соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 -амилоидозов, включая болезнь Альцгеймера.

2. Применение по п.1, при котором соединение содержит пептид, имеющий аминокислотную последовательность, которую выбирают из группы, включающей SHTRLYF(C), HMRLFFN(C), SHQRLWF(C), HQKMIFA(C), HMRMYFE(C), THQRLWF(C) и HQKMIF(C).

3. Применение по п.1, при котором соединение является полипептидом, содержащим от 4 до 20 аминокислотных остатков.

4. Применение по п.1, при котором соединение связано с фармацевтически приемлемым носителем, предпочтительно гемоцианином фиссуреллы.

5. Применение по п.1, при котором соединение выпускают в фармацевтической форме для внутривенного, подкожного, внутрикожного или внутримышечного введения.

6. Применение по п.1, при котором соединение выпускают в фармацевтической форме вместе с адъювантом, предпочтительно гидроксидом алюминия.

7. Применение по п.1, при котором соединение содержится в лекарственном средстве в количестве от 0,1 нг до 10 мг, предпочтительно от 10 нг до 1 мг, в частности от 100 нг до 10 мкг.

8. Применение по п.1, при котором соединение применяют для лечения и/или уменьшения симптомов синуклеопатии.

9. Применение по п.8, при котором синуклеопатию выбирают из группы, включающей болезнь Паркинсона, деменцию с тельцами Леви, множественную системную атрофию и нейродегенерацию с накоплением железа в головном мозге.

10. Применение по меньшей мере одного соединения, содержащего аминокислотную последовательность

соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953

где X1 - серин (S), аланин (А) или цистеин (С),

Х2 - серин (S), треонин (Т), глутаминовая кислота (Е), аспарагиновая кислота (D), глутамин (Q) или метионин (М),

Х3 - изолейцин (I), тирозин (У), метионин (М) или лейцин (L),

Х4 - лейцин (L), аргинин (R), глутамин (Q), триптофан (W), валин (V), гистидин (Н), тирозин (Y), изолейцин (I), лизин (K), метионин (М) или фенилаланин (F),

Х5 - аналанин (А), фенилаланин (F), гистидин (Н), аспарагин (N), аргинин (R), глутаминовая кислота (Е), изолейцин (I), глутамин (Q), аспарагиновая кислота (D), пролин (Р) или триптофан (W), глицин (G),

Х 6 - любой аминокислотный остаток,

Х7 - цистеин (С),

m и n - независимо друг от друга 0 или 1,

причем соединение обладает связывающей способностью антитела, специфичного к эпитопу бета-пептида амилоида (Ар), содержащему аминокислотную последовательность HQKLVF и (или) HQKLVFFAED,

для производства лекарственного средства для профилактики и/или лечения соединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 -амилоидозов, включая болезнь Альцгеймера.

11. Применение по п.10, при котором соединение содержит пептид, имеющий аминокислотную последовательность, которую выбирают из группы, включающей SGEYVFH(C), SGQLKFP(C), SGQIWFR(C), SGEIHFN(C), GQIWFIS(C), GQIIFQS(C), GQIRFDH(C), GEMWFAL(C), GELQFPP(C), GELWFP(C), GEMQFFI(C), GELYFRA(C), GEIRFAL(C), GMIVFPH(C), GEIWFEG(C), GQILFPV(C), GELFFPK(C), GQIMFPR(C), GSLFFWP(C), GEILFGM(Cсоединения для лечения амилоидозов, патент № 2491953 ), GQLKFPF(C), GTIFFRD(C), GQIKFAQ(C), GTLIFHH(C), GEIRFGS(C), GQIQFPL(C), GEIKFDH(C), GEIQFGA(C), GELFFEK(C), GEIRFEL(C), GEIYFER(C), SGEIYFER(C), AGEIYFER(C) и (C)GEIYFER.

12. Применение по п.10, при котором соединение является полипептидом, содержащим от 4 до 20 аминокислотных остатков.

13. Применение по п.10, при котором соединение связано с фармацевтически приемлемым носителем, предпочтительно гемоцианином фиссуреллы.

14. Применение по п.10, при котором соединение выпускают в фармацевтической форме для внутривенного, подкожного, внутрикожного или внутримышечного введения.

15. Применение по п.10, при котором соединение выпускают в фармацевтической форме вместе с адъювантом, предпочтительно гидроксидом алюминия.

16. Применение по п.10, при котором соединение содержится в лекарственном средстве в количестве от 0,1 нг до 10 мг, предпочтительно от 10 нг до 1 мг, в частности от 100 нг до 10 мкг.

17. Применение по п.10, при котором соединение применяют для лечения и/или уменьшения симптомов синуклеопатии.

18. Применение по п.17, при котором синуклеопатию выбирают из группы, включающей болезнь Паркинсона, деменцию с тельцами Леви, множественную системную атрофию и нейродегенерацию с накоплением железа в головном мозге.

19. Применение по меньшей мере одного соединения, содержащего аминокислотную последовательность, которую выбирают из группы, включающей AIPLFVM(C), KLPLFVM(C), QLPLFVL(C) и NDAKIVF(C), для производства лекарственного средства для профилактики и/или лечения fi-амилоидозов, включая болезнь Альцгеймера.

20. Применение по п.19, при котором соединение является полипептидом, содержащим от 4 до 20 аминокислотных остатков.

21. Применение по п.19, при котором соединение связано с фармацевтически приемлемым носителем, предпочтительно гемоцианином фиссуреллы.

22. Применение по п.19, при котором соединение выпускают в фармацевтической форме для внутривенного, подкожного, внутрикожного или внутримышечного введения.

23. Применение по п.19, при котором соединение выпускают в фармацевтической форме вместе с адъювантом, предпочтительно гидроксидом алюминия.

24. Применение по п.19, при котором соединение содержится в лекарственном средстве в количестве от 0,1 нг до 10 мг, предпочтительно от 10 нг до 1 мг, в частности от 100 нг до 10 мкг.

25. Применение по п.19, при котором соединение применяют для лечения и/или уменьшения симптомов синуклеопатии.

26. Применение по п.25, при котором синуклеопатию выбирают из группы, включающей болезнь Паркинсона, деменцию с тельцами Леви, множественную системную атрофию и нейродегенерацию с накоплением железа в головном мозге.

27. Пептид, содержащий аминокислотную последовательность, которую выбирают из группы, включающей SHTRLYF(C), SGEYVFH(C), SGQLKFP(C), SGQIWFR(C), SGEIHFN(C), GQIWFIS(C), NDAKIVF(C), GQIIFQS(C), GQIRFDH(C), HMRLFFN(C), GEMWFAL(C), GELQFPP(C), GELWFP(C), SHQRLWF(C), HQKMIFA(C), GEMQFFI(C), GELYFRA(C), GEIRFAL(C), GMIVFPH(C), GEIWFEG(C), GEIYFER(C), AIPLFVM(C), GDLKFPL(C), GQILFPV(C), GELFFPK(C), GQIMFPR(C), HMRMYFE(C), GSLFFWP(C), GEILFGM(C), GQLKFPF(C), KLPLFVM(C), GTIFFRD(C), THQRLWF(C), GQIKFAQ(C), GTLIFHH(C), GEIRFGS(C), GQIQFPL(C), GEIKFDH(C), GEIQFGA(C), QLPLFVL(C), HQKMIF(C), GELFFEK(C), GEIRFEL(C), AcGEIYFER(C), SGEIYFER(C), AGEIYFER(C) и (C)GEIYFER.

28. Пептид по п.27, связанный с фармацевтически приемлемым носителем, предпочтительно гемоцианином фиссуреллы.

29. Фармацевтическая форма, предпочтительно вакцина, содержащая по меньшей мере один пептид по п.27 или 28.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2491953

patent-2491953.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс A61K38/08 пептиды, содержащие 5-11 аминокислот

Патенты РФ в классе A61K38/08:
применение пептида актг (4-7)-пгп гепатопротекторного воздействия -  патент 2528741 (20.09.2014)
циклический октапептид, радиофармацевтическое средство на его основе и способ применения радиофармацевтического средства для получения лекарственных (фармацевтических) средств для лечения новообразований, экспрессирующих соматостатиновые рецепторы -  патент 2528414 (20.09.2014)
содежащий октреотид состав с замедленным высвобождением со стабильно высоким уровнем воздействия -  патент 2526822 (27.08.2014)
применение опиорфина в качестве психостимулирующего агента -  патент 2526819 (27.08.2014)
способ хирургического лечения острого панкреатита с ранним энтеральным интраоперационным питанием пациента -  патент 2526247 (20.08.2014)
способ лечения болезни альцгеймера -  патент 2526155 (20.08.2014)
новый пептид и его применение -  патент 2525913 (20.08.2014)
пептиды и их производные, взаимодействующие с никотиновым ацетилхолиновым рецептором и пригодные для использования в косметологии против мимических и возрастных морщин -  патент 2524428 (27.07.2014)
ингибиторы протеазы вируса гепатита с и их применение -  патент 2523790 (27.07.2014)
применение аналогов соматостатина при менингиоме -  патент 2523416 (20.07.2014)

Класс A61K38/10 пептиды, содержащие 12-20 аминокислот

Патенты РФ в классе A61K38/10:
способ профилактики и лечения бронхиальной астмы, осложняющих ее респираторных вирусных инфекций и других воспалительных заболеваний дыхательных путей -  патент 2526146 (20.08.2014)
пептидные лиганды соматостатиновых рецепторов -  патент 2525468 (20.08.2014)
композиции и способы для улучшенной иммуногенности соматостатина в лечении дефицита гормона роста и инсулиноподобного фактора роста -  патент 2519051 (10.06.2014)
композиция, на основе гидрофобных агентов и способ ее получения(варианты) -  патент 2518240 (10.06.2014)
композиции для лечения боли и/или воспаления -  патент 2515054 (10.05.2014)
пролонгированная доставка аналогов компстатина из гелей -  патент 2505311 (27.01.2014)
конъюгаты для лечения мезотелиомы -  патент 2502518 (27.12.2013)
пептиды с большим числом мостиковых связей, выделяемые из actinomadura namibiensis -  патент 2498995 (20.11.2013)
способ лечения красного плоского лишая слизистой оболочки полости рта -  патент 2491954 (10.09.2013)
полипептиды, конкурентно ингибирующие gq- белок, способы их получения и применение -  патент 2487135 (10.07.2013)

Класс A61P25/28 для лечения нейродегенеративных заболеваний центральной нервной системы, например ноотропные агенты, агенты для усиления умственных способностей, для лечения болезни Альцгеймера или других форм слабоумия

Патенты РФ в классе A61P25/28:
внутрижелудочковая доставка ферментов при лизосомных болезнях накопления -  патент 2529830 (27.09.2014)
улучшение памяти у пациентов с оценкой 24-26 баллов по краткой шкале оценки психического статуса -  патент 2529815 (27.09.2014)
новое производное пиразол-3-карбоксамида, обладающее антагонистической активностью в отношении рецептора 5-нт2в -  патент 2528406 (20.09.2014)
6-замещенные изохинолины и изохинолиноны полезные в качестве ингибиторов rho-киназы -  патент 2528229 (10.09.2014)
применение программы противоположной дифференцировки клеток (ппдк) для лечения дегенерировавших органов в патологическом состоянии -  патент 2528084 (10.09.2014)
сублингвальная форма 6-метил-2-этил-3-гидроксипиридина и ее применение в качестве средства, обладающего стимулирующей, анорексигенной, антидепрессивной, анксиолитической, противогипоксической, антиамнестической (ноотропной) и антиалкогольной активностью -  патент 2527342 (27.08.2014)
четырехзамещенные бензолы -  патент 2527177 (27.08.2014)
способ лечения болезни альцгеймера -  патент 2526155 (20.08.2014)
способ повышения фармакологической активности действующего вещества лекарственного средства и фармацевтическая композиция -  патент 2526153 (20.08.2014)
терапевтические агенты 713 -  патент 2526055 (20.08.2014)

Класс A61P25/16 для лечения болезни Паркинсона

Патенты РФ в классе A61P25/16:
инъекционная лекарственная форма для лечения болезни паркинсона, способ ее приготовления и применение -  патент 2520758 (27.06.2014)
фармацевтическая композиция в виде разовой пероральной дозы, содержащая леводопу, карбидопу и энтакапон, или их соли -  патент 2519159 (10.06.2014)
режим дозирования ингибиторов комт -  патент 2518483 (10.06.2014)
модуляторы метаботропного глутаматного рецептора для лечения болезни паркинсона -  патент 2508107 (27.02.2014)
производные имидазопиридина или имидазопиримидина в качестве ингибиторов фосфодиэстеразы 10а -  патент 2502737 (27.12.2013)
соединения, композиции и способы, предназначенные для лечения бета-амилоидных заболеваний и синуклеинопатий -  патент 2501792 (20.12.2013)
способы лечения нарушений с применением селективного антагониста nr2b-подтипа nmda рецепторов -  патент 2499598 (27.11.2013)
карбоксил- или гидроксилзамещенные производные бензимидазола -  патент 2493153 (20.09.2013)
композиции для лечения болезни паркинсона -  патент 2484823 (20.06.2013)
продолжительное 24-часовое введение в кишечник леводопа/карбидопа -  патент 2484815 (20.06.2013)


Наверх