Поиск патентов
ПАТЕНТНЫЙ ПОИСК В РФ

способ получения наноразмерного амфотерицина в

Классы МПК:C07H17/04 гетероциклические радикалы, содержащие только кислород в качестве гетероатомов
C07H17/08 гетероциклические кольца из восьми или более атомов, например эритромицины
A61K47/48 неактивный ингредиент, химически связанный с активным ингредиентом, например полимер, связанный с лекарственным средством
B82B3/00 Изготовление или обработка наноструктур
Автор(ы):, , , ,
Патентообладатель(и):Закрытое акционерное общество "Нанотехнологии и инновации" (ЗАО "НТиИ") (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2012-05-17
публикация патента:

Настоящее изобретение относится к области медицины, фармацевтике и нанотехнологиям и, конкретно, к способу получения наноразмерного, нанесенного на алюмосиликатные нанотрубки, амфотерицина В - малорастворимого полиенового макроциклического антибиотика, который широко используется для лечения грибковых заболеваний. Предложен способ получения наноразмерного амфотерицина В путем смешения раствора амфотерицина В в диметилсульфоксиде при комнатной температуре с алюмосиликатными нанотрубками с последующим осаждением 1-20 мас.% амфотерицина В на алюмосиликатные нанотрубки путем обработки полученной смеси водой при интенсивном перемешивании и скорости подачи воды 10 мл/мин. Технический результат - предлагаемый способ прост и удобен в технологическом исполнении и позволяет получать принципиально новую лекарственную форму амфотерицина В, представляющую собой амфотерицин В, нанесенный на твердые неорганические структуры - алюмосиликатные нанотрубки, что позволит в дальнейшем разрабатывать новые мази, гели и болтанки для лечения грибковых заболеваний. Применение наноразмерного носителя способствует равномерному распределению амфотерицина В, а алюмосиликатный тип носителя - хороший сорбент - обеспечивает пролонгированное действие амфотерицина В, при этом носитель (наноразмерные трубки) не разрушается, а также позволяет достичь более высокой биодоступности нерастворимого амфотерицина В, в сравнении с микроразмерными формами его использования. 4 пр., 2 ил.

Рисунки к патенту РФ 2491288

способ получения наноразмерного амфотерицина в, патент № 2491288 способ получения наноразмерного амфотерицина в, патент № 2491288

Настоящее изобретение относится к области медицины, фармацевтике и нанотехнологиям и, конкретно, к способу получения наноразмерного, нанесенного на алюмосиликатные нанотрубки, амфотерицина В - малорастворимого полиенового макроциклического антибиотика формулы

способ получения наноразмерного амфотерицина в, патент № 2491288 ,

продуцируемого Streptomyces nodosus, который оказывает фунгицидное или фунгистатическое действие в отношении Candida spp., Cryptococcus neoformans, Aspergillus spp. и других грибов. Способ может найти применение в производстве лекарственных средств, фармацевтике и медицине.

Открытый более полувека назад амфотерицин В до последнего времени остается способ получения наноразмерного амфотерицина в, патент № 2491288 золотым стандартомспособ получения наноразмерного амфотерицина в, патент № 2491288 эмпирической антимикотической терапии, несмотря на тяжелые побочные эффекты. Амфотерицин В представляет собой полиеновый макроциклический антибиотик, продуцируемый грибами Streptomyces nodosus, выделенными впервые из образца почвы на реке Ориноко (Orinoco) в Венесуэле в 1955 году. Действие препарата основано в значительной степени на связывании с эргостеролом мембраны грибов и нарушением ее целостности.

Амфотерицин В - препарат широкого спектра действия, активен в отношении большинства видов Candida (исключая С.lusitaniae), а также Blastomyces dermatitidis, Coccidioides immitis, Cryptococcus neoformans, Fusarium spp., Histoplasma capsulatum, Paracoccidioides brasiliensis, Rhodotorula spp., Sporotrix spp. Амфотерицин В также эффективен против возбудителей висцерального и американского кожного лейшманиоза. Кроме того, амфотерицин В в некоторых случаях активен в отношении Aspergillus spp.Trichosporon spp. и Pseudoallescheria boydii резистентны к АмВ [(а) Митрофанов В.С. Системные антифунгальные препараты. Пробл. мед. микол. 2001; 3(2): 6-14; (b) A. Lemke, A.F. Kiderlen, O. Kayser. Amphotericin B. Appl. Microbiol. Biotechnol. (2005) 68: 151-162; (с) V. Idemyor. Emerging opportunistic fungal infections: where are we heading? J. Natl. Med. Assoc. (2003) 95:1211-1215].

Амфотерицин В используют тремя способами: внутривенно, ингаляционно, перорально и местно (в виде мази). Основная проблема сильно ограничивающая применение этого вещества заключается в его низкой растворимости в большинстве органических растворителей и воде. Частично проблема низкой растворимости амфотерицина В решена за счет применения дорогостоящих лекарственных форм в которых он находится в виде липидных комплексов, липосом и коллоидных дисперсий [(a) Walsh, Thomas J.; Finberg, Robert W.; Arndt, Carola; Hiemenz, John; Schwartz, Cindy; Bodensteiner, David; Pappas, Peter; Seibel, Nita; Greenberg, Richard N.; Dummer, Stephen; Schuster, Mindy; Dismukes, William E.; Holcenberg, John S.; Liposomal Amphotericin B for Empirical Therapy in Patients with Persistent Fever and Neutropenia. New England Journal of Medicine, 1999; 340:764-771; (b) Janknegt, R.; de Marie, S.; Bakker-Woudenberg, I. A.; Crommelin, D. J. Liposomal and lipid formulations of amphotericin B. Clinical pharmacokinetics, 1992, 23(4):279-291; (c) Patricia K. Sharkey, John R. Graybill, Edward S. Johnson, Stephen G. Hausrath, Richard B. Pollard, Antonia Kolokathis, Donna Mildvan, Patty Fan-Havard, Robert H.K. Eng, Thomas F. Patterson, John C. Pottage, Jr., Michael S. Simberkoff, Judith Wolf, Richard D. Meyer, Renu Gupta, Lily W. Lee, and David S. Gordon. Amphotericin В Lipid Complex Compared with Amphotericin В in the Treatment of Cryptococcal Meningitis in Patients with AIDS. din Infect Dis. 1996, 22: 308-314; (d) John W. Hiemenz and Thomas J. Walsh. Lipid Formulations of Amphotericin B: Recent Progress and Future Directions. Clin Infect Dis. 1996, 22 (Supplement 2): S133-S144.]; важно отметить, что все перечисленные лекарственные формы не являются истинными растворами амфотерицина В.

Известен способ получения наноразмерных суспензий Амфотерицина В для лечения амебных заболеваний мозга [Andreas Lemke, Albrecht F. Kiderlen, Boris Petri, Oliver Kayser. Delivery of amphotericin B nanosuspensions to the brain and determination of activity against Balamuthia mandrillaris amebas Nanomedicine: Nanotechnology, Biology, and Medicine, 6: 597-603 (2010).]. По этому способу суспензия наноразмерных частиц Амфотерицина В была получена гомогенизацией под высоким давлением, с использованием пистолетного гомогенизатора. Амфотерицин В смешивали с различными по структуре поверхностно активными веществами в воде, количество амфотерицина В составляло 2%, а поверхностно активного вещества 1%. Полученную массу многократно - в течение 20 циклов гомогенизировали при давлении 1500 бар (приблизительно 1500 атмосфер) до получения наноразмерной суспензии. В целом метод очень дорогостоящий и малотехнологичный.

Известен и принят нами за прототип способ получения наноразмерного амфотерицина В на носителе - желатине [Manoj Nahar, Dinesh Mishra, Vaibhav Dubey, Narendra Kumar Jain. Development, characterization, and toxicity evaluation of amphotericin B-loaded gelatin nanoparticles. Nanomedicine: Nanotechnology, Biology, and Medicine 4: 252-261 (2008)]. Наноразмерную смесь желатина и амфотерицина В получали следующим образом: 200 мг желатина растворяли в 10 мл дистиллированной воды при 40 градусах по Цельсию, затем добавляли 10 мл ацетона для осаждения высокомолекулярного желатина. Надосадочную жидкость удаляли, а оставшийся высокомолекулярный желатин повторно растворяли добавлением 10 мл дистиллированной воды при перемешивании со скоростью 600 оборотов в минуту при постоянном нагревании. При этом рН желатинового раствора регулировали в промежутке от 2 до 12. Растворенный в 500 мкл диметилсульфоксида амфотерицин В добавляли в водно-полимерную фазу, затем прибавляли 30 мл ацетона, далее прикалывали 25% водный раствор глутарового альдегида, действующий как сшивающий реагент.Раствор перемешивали 12 часов со скоростью 600 оборотов в минуту. Не связавшийся с желатином амфотерицин В удаляли, абсорбируя 10 мл амберлита XAD 16, с последующей фильтрацией (фильтр с размером пор 1-микрон; Whatman Japan KK, Tokyo, Japan). Диметилсульфоксид удаляли многократным промыванием дистиллированной водой. Полученный наноразмерный желатиново-амфотерициновый комплекс подвергали лиофилизации дисахаридом трегалозой (trehalose) с целью получения смеси, содержащей наноразмерные частицы для последующих исследований.

Способ достаточно трудоемкий и предусматривает получение наноразмерного амфотерицина В исключительно для инъекций, так как выделяют его в лиофилизованном виде.

Полученный по этому способу желатиново-амфотерициновый комплекс не может быть использован для нанесения на алюмосиликатные нанотрубки, поскольку значительное количество желатина будет сорбировано нанотрубками и комплекс распадется. Нанотрубки могут агрегировать в значительно более крупные образования при использовании желатина. Кроме того, нерастворимые алюмосиликатные нанотрубки (неорганические по своей природе) не могут быть подвергнуты лиофилизации трегалозой. Также, в случае очистки адсорбцией с участием амберлита значительная часть нанотрубок будет сорбирована.

Задачей настоящего изобретения является разработка удобного и простого в технологическом исполнении способа получения наноразмерного амфотерицина В нанесенного на твердый наноразмерный неактивный носитель с целью использования его в виде другой лекарственной формы, например, для приема внутрь в виде таблеток или для наружного применения и тем самым достичь более высокой биодоступности нерастворимого амфотерицина В, в сравнении с микроразмерными формами его использования.

Поставленная задача достигается предлагаемым способом получения наноразмерного амфотерицина В с использованием раствора амфотерицина В в диметилсульфоксиде и неактивного носителя, отличительной особенностью которого является то, что в качестве неактивного носителя используют алюмосиликатные нанотрубки и процесс ведут путем смешения раствора амфотерицина В в диметилсульфоксиде при комнатной температуре с алюмосиликатными нанотрубками с последующим осаждением 1-20 мас.% амфотерицина В на алюмосиликатные нанотрубки путем обработки полученной смеси водой при интенсивном перемешивании и скорости подачи воды 10-20 мл/мин.

Алюмосиликатные нанотрубки представляют собой неорганический материал соответствующий по своему составу минералу каолинит Al2O3 ·2SiO2·2H2O. Внешний диаметр трубок 90-140 нм, внутренний диаметр 10-60 нм, длина 300-2000 нм; основной состав - оксид кремния (43,13%) и оксид алюминия (34,37%). Предлагаемый способ основан на приготовлении истинного раствора амфотерицина В в присутствии нанотрубок, к которому, затем с равномерной скоростью при интенсивном перемешивании добавляют воду. В ходе прибавления воды образуется система растворителей, в которой амфотерицин В не растворим и осаждается на поверхность алюмосиликатных нанотрубок; после осаждения раствор центрифугируют, смесь воды с диметилсульфоксилом декантируют. Для удаления остатков диметилсульфоксида, полученный порошок смешивают с водой и центрифугируют, процедуру повторяют еще два раза. После чего, порошок нанотрубок с нанесенным амфотерицином В сушат в вакуумированном эксикаторе для удаления остатков воды.

На Фиг.1. показаны исходные алюмосиликатные нанотрубки.

На Фиг.2. показаны алюмосиликатные нанотрубки с нанесенным 10% массовым количеством амфотерицина В.

Технический результат - предлагаемый способ прост и удобен в технологическом исполнении и позволяет получать принципиально новую лекарственную форму амфотерицина В, представляющую собой амфотерицин В, нанесенный на твердые неорганические структуры -алюмосиликатные нанотрубки, что позволит в дальнейшем разрабатывать новые мази, гели и болтанки для лечения грибковых заболеваний. Применение наноразмерного носителя способствует равномерному распределению амфотерицина В, а алюмосиликатный тип носителя - хороший сорбент - обеспечивает пролонгированное действие амфотерицина В, при этом носитель (наноразмерные трубки) не разрушается, а также позволяет достичь более высокой биодоступности нерастворимого амфотерицина В, в сравнении с микроразмерными формами его использования.

Изобретение соответствует критерию «новизна», так как в известной научно-технической и патентной литературе отсутствует полная совокупность признаков, характеризующих предлагаемое изобретение.

Из литературы известно, что алюмосиликатные нанотрубки могут являться носителем для органических веществ, в том числе и биологически активных [D. Shchukin, R. Price, G. Sukhorukov, Y. Lvov, Halloysite Nanotubes as Biomimetic Nanoreactors. Small, 1, 510-513 (2005); M. Zhi, W. Jinye, G. Xiang, D. Tong, Q. Yongning. Application of Halloysite Nanotubes Progress in Chemistry, 24: 275-283 (2012)]. Предлагаемое изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень», так как до настоящего времени амфотерицин В не наносили на алюмосиликатные нанотрубки и не использовали сорастворитель для осаждения амфотерицина В на неорганический носитель и, главное, было неочевидно, что амфотерицин В осядет именно на нанотрубки, а не на стенки реакционного сосуда или выпадет в осадок в не связанном с нанотрубками виде.

Изобретение соответствует условию «промышленная применимость», поскольку амфотерицин В широко используется для лечения грибковых заболеваний. Создание носителей и лекарственных форм с его использованием является решением ключевой проблемы применения этого труднорастворимого лекарственного вещества. Применение амфотерицина В нанесенного на нанотрубки, полученного по предлагаемому способу, позволит разрабатывать новые таблетки, мази, гели и болтанки для лечения грибковых заболеваний.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами, не ограничивающими его объем.

Пример 1.

К раствору амфотерицина В (0,6 г) в диметилсульфоксиде (50 мл) при перемешивании и температуре 18-20°С прибавляли алюмосиликатные нанотрубки (5 г), перемешивали в течение 15 минут. К полученной смеси добавляли с равномерной скоростью при интенсивном перемешивании 100 мл дистиллированной воды в течение 10 минут.Перемешивание останавливали, с осадка декантировали 120 мл жидкости, добавляли 100 мл воды, взбалтывали, центрифугировали, декантировали 100 мл жидкости. Процедуру повторяли еще два раза. Смесь центрифугировали, декантировали всю жидкую фазу. Осадок сушили в вакуумированном (5-10 мм рт.ст.) эксикаторе при комнатной температуре в течение двух суток. Получали 5,2 г порошка, который анализировали с использованием элементного анализа, содержание углерода соответствовало десятипроцентному массовому количеству амфотерицина В в смеси. Сравнение фотографий, сделанных на электронном микроскопе, для исходных алюмосиликатных нанотрубок (фиг.1) и для конечной смеси (фиг.2), показало, что амфотерицин В сорбирован нанотрубками.

Пример 2.

К раствору амфотерицина В (1,2 г) в диметилсульфоксиде (100 мл) при перемешивании и температуре 25°С прибавляли алюмосиликатные нанотрубки (10 г), перемешивали в течение 15 минут. К полученной смеси добавляли с равномерной скоростью при интенсивном перемешивании 200 мл дистиллированной воды в течение 10 минут. Перемешивание останавливали, с осадка декантировали 240 мл жидкости, добавляли 200 мл воды, взбалтывали, центрифугировали, декантировали 200 мл жидкости. Процедуру повторяли еще два раза. Смесь центрифугировали, декантировали всю жидкую фазу. Осадок сушили в вакуумированном (5-10 мм рт.ст.) эксикаторе при комнатной температуре в течение двух суток. Получали 10,4 г порошка, который анализировали с использованием элементного анализа, содержание углерода соответствовало десяти процентному массовому количеству амфотерицина В в смеси.

Пример 3.

К раствору амфотерицина В (2,5 г) в диметилсульфоксиде (100 мл) при перемешивании и температуре 25°С прибавляли алюмосиликатные нанотрубки (10 г), перемешивали в течение 15 минут. К полученной смеси добавляли с равномерной скоростью при интенсивном перемешивании 200 мл дистиллированной воды в течение 10 минут. Перемешивание останавливали, с осадка декантировали 240 мл жидкости, добавляли 200 мл воды, взбалтывали, центрифугировали, декантировали 200 мл жидкости. Процедуру повторяли еще два раза. Смесь центрифугировали, декантировали всю жидкую фазу. Осадок сушили в вакуумированном (5-10 мм рт.ст.) эксикаторе при комнатной температуре в течение двух суток. Получали 12 г порошка, который анализировали с использованием элементного анализа, содержание углерода соответствовало двадцати процентному массовому количеству амфотерицина В в смеси.

Пример 4.

К раствору амфотерицина В (0,2 г) в диметилсульфоксиде (100 мл) при перемешивании и температуре 25°С прибавляли алюмосиликатные нанотрубки (10 г), перемешивали в течение 15 минут. К полученной смеси добавляли с равномерной скоростью при интенсивном перемешивании 200 мл дистиллированной воды в течение 10 минут. Перемешивание останавливали, с осадка декантировали 240 мл жидкости, добавляли 200 мл воды, взбалтывали, центрифугировали, декантировали 200 мл жидкости. Процедуру повторяли еще два раза. Смесь центрифугировали, декантировали всю жидкую фазу. Осадок сушили в вакуумированном (5-10 мм рт.ст.) эксикаторе при комнатной температуре в течение двух суток. Получали 9,6 г порошка, который анализировали с использованием элементного анализа, содержание углерода соответствовало одно процентному массовому количеству амфотерицина В в смеси.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ получения наноразмерного амфотерицина В с использованием раствора амфотерицина В в диметилсульфоксиде и неактивного носителя, отличающаяся тем, что в качестве неактивного носителя используют алюмосиликатные нанотрубки и процесс ведут путем смешения раствора амфотерицина В в диметилсульфоксиде при комнатной температуре с алюмосиликатными нанотрубками с последующим осаждением 1-20 мас.% амфотерицина В на алюмосиликатные нанотрубки путем обработки полученной смеси водой при интенсивном перемешивании и скорости подачи воды 10 мл/мин.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2491288

patent-2491288.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс C07H17/04 гетероциклические радикалы, содержащие только кислород в качестве гетероатомов

Патенты РФ в классе C07H17/04:
способы получения кристаллических форм a, c и d фумарата производного эритромицина, сами формы и способы получения промежуточных соединений -  патент 2266295 (20.12.2005)
растворимые в воде фосфонооксиметиловые эфиры затрудненных спиртов или фенолов, фармацевтические композиции на их основе, способ анестезии и способ лечения опухолевых заболеваний -  патент 2235727 (10.09.2004)
производные класса олеандомицина и способ их получения -  патент 2234510 (20.08.2004)
способ получения азитромицина и способы получения промежуточных соединений -  патент 2144924 (27.01.2000)
кристаллический полугидрат типа b соли бензойной кислоты 4'-деокси-4'-эпи- метиламиноавермектина bia/bib, способ ее получения, инсектицидная композиция и способ борьбы с сельскохозяйственными насекомыми-вредителями -  патент 2133753 (27.07.1999)
кристаллический этопозид 4`-фосфат диэтанолсольват и способ его получения -  патент 2042686 (27.08.1995)
кристаллическая 2-о- -d-глюкопиранозил-l-аскорбиновая кислота и способ ее получения -  патент 2041234 (09.08.1995)
d-1-фенил-2-метиламинопропанола-1,5,6,7-триоксифлавон-7-0- -d-глюкуронидат, обладающий антиокислительной и сосудорасширяющей активностью -  патент 2027722 (27.01.1995)

Класс C07H17/08 гетероциклические кольца из восьми или более атомов, например эритромицины

Патенты РФ в классе C07H17/08:
высокочистый пентамицин -  патент 2515936 (20.05.2014)
гидраты солей эритромицина, их получение и применение -  патент 2510659 (10.04.2014)
производные нистатина и их применение в качестве противогрибковых агентов -  патент 2488590 (27.07.2013)
макроциклические полиморфы, композиции, содержащие такие полиморфы, и способы их применения и получения -  патент 2478643 (10.04.2013)
способ получения сетчатого полимерного сорбента для селективного выделения антибиотика эритромицина -  патент 2478103 (27.03.2013)
твердые формы макролидов -  патент 2476438 (27.02.2013)
5-о-производные авермектина, способ их получения и антипаразитарные средства на их основе -  патент 2472801 (20.01.2013)
способ получения аморфной формы рокситромицина -  патент 2455309 (10.07.2012)
макролидные производные -  патент 2455308 (10.07.2012)
5-о-сукциноилавермектин, способ его получения и антипаразитарное средство на его основе -  патент 2453553 (20.06.2012)

Класс A61K47/48 неактивный ингредиент, химически связанный с активным ингредиентом, например полимер, связанный с лекарственным средством

Патенты РФ в классе A61K47/48:
новый вариант эксендина и его конъюгат -  патент 2528734 (20.09.2014)
синтетический иммуноген для защиты от токсического действия наркотических и психоактивных веществ -  патент 2526807 (27.08.2014)
конъюгированные белки с пролонгированным действием in vivo -  патент 2526804 (27.08.2014)
производные fgf21 со связующим альбумина а-в-с-d-e- и их применение -  патент 2525393 (10.08.2014)
оксинтомодулин человека, его применение, лекарственный препарат на его основе и способ применения препарата для лечения и профилактики гипергликемии -  патент 2524204 (27.07.2014)
конъюгаты, содержащие гидрофильные спейсеры линкеров -  патент 2523909 (27.07.2014)
конъюгаты производного антрациклина, способы их получения и их применение в качестве противоопухолевых соединений -  патент 2523419 (20.07.2014)
композиции и способы доставки фармакологических агентов -  патент 2522977 (20.07.2014)
лекарственный препарат и способ улучшения реологических свойств мокроты и ингаляционное применение такого препарата -  патент 2522846 (20.07.2014)
хелатные амфифильные полимеры -  патент 2519713 (20.06.2014)

Класс B82B3/00 Изготовление или обработка наноструктур

Патенты РФ в классе B82B3/00:
способ комбинированной интенсивной пластической деформации заготовок -  патент 2529604 (27.09.2014)
многослойный композиционный материал для защиты от электромагнитного излучения -  патент 2529494 (27.09.2014)
способ функционализации углеродных наноматериалов -  патент 2529217 (27.09.2014)
нанокомпонентная энергетическая добавка и жидкое углеводородное топливо -  патент 2529035 (27.09.2014)
способ получения насыщенных карбоновых кислот -  патент 2529026 (27.09.2014)
способ получения катализатора для процесса метанирования -  патент 2528988 (20.09.2014)
способ модифицирования углеродных нанотрубок -  патент 2528985 (20.09.2014)
полимерный медьсодержащий композит и способ его получения -  патент 2528981 (20.09.2014)
композиции матриксных носителей, способы и применения -  патент 2528895 (20.09.2014)
полимерное электрохромное устройство -  патент 2528841 (20.09.2014)

Наверх