полифункциональное комбинированное лекарственное средство для коррекции иммунодефицитных состояний и лечения тяжелых инфекционно-воспалительных заболеваний

Формула изобретения

Полифункциональное комбинированное лекарственное средство для коррекции иммунодефицитных состояний и лечения тяжелых инфекционно-воспалительных заболеваний на основе интерферона альфа-2b, отличающееся тем, что оно выполнено в виде суппозиториев, включающих интерферон человеческий рекомбинантный альфа-2b, алоэ экстракт сухой, буферный раствор, витамин Е, глицин, лецитин, тизоль и твердый жир при следующих соотношениях компонентов для получения суппозитория массой 1,45 г (г):

Интерферон человеческий рекомбинантный
альфа-2b	400000 МЕ-675000 ME
Алоэ экстракт сухой	0,05-0,07
Витамин Е	0,04-0,06
Глицин	0,014-0,016
Буферный раствор	0,100-0,104
Лецитин	0,012-0,016
Тизоль	0,04-0,06
Твердый жир	остальное

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине и к фармацевтической промышленности и касается нового полифункционального комбинированного лекарственного средства широкого спектра действия на основе интерферона, а именно суппозитория ректального для коррекции иммунодефицитных состояний и лечения инфекционных вирусных заболеваний. Лекарственное средство содержит синергидную комбинацию иммуномодулятора интерферона альфа-2b с натуральным биостимулятором алоэ экстрактом. В состав данного средства также входят глицин, тизоль, лецитин, витамин Е, буферный раствор и твердый жир в качестве суппозиторной основы.

Иммунная система - одна из важнейших систем нашего организма. Ее роль сложно переоценить, ведь именно иммунная система защищает наш организм от вредных факторов как внешней, так и внутренней среды, помогает нам справиться с множеством заболеваний.

Современный ритм жизни, состояние экологии и ряд других факторов отрицательно сказываются на иммунитете. Известно, что снижение иммунитета приводит к возникновению инфекционных заболеваний, трудно поддающихся лечению и зачастую усугубленных развитием осложнений или формированием жизнеугрожающих состояний.

В терапии различных инфекционных заболеваний используется достаточно широкий ассортимент лекарственных средств, воздействующих на иммунную систему, среди наиболее перспективных - препараты интерферона. Интерфероны широко применяются для коррекции и лечения хронических вирусных заболеваний печени и являются единственными противовирусными препаратами, которые снижают риск формирования цирроза печени и трансформацию его в гепатоцеллюлярную карциному [Блохина Н.П. Новые стратегии интерферонотерапии больных хроническим гепатитом С // Вирусные гепатиты. 1999. Т.2. № 6. С.11-18; Ариненко Р.Ю., Аникин В.Б., Головкин В.И. Система интерферона: первая линия защиты организма // Terra Medica. 1997. № 4. С.11-14].

Значительные успехи для лечения иммунодефицитных состояний, усугубленных различными клиническими патологиями, достигнуты в области разработки лекарственных средств на основе человеческого интерферона альфа-2b, при производстве которого используют технологии рекомбинантной ДНК, что значительно удешевляет производство, а также сводит к нулю вероятность передачи какой-либо инфекции от донора.

Признано, что количество побочных эффектов снижается при ректальном использовании лекарственных средств. В частности, при таком способе введения не происходит выработки антител к интерферону, значительно снижающих эффективность терапии.

Известно лекарственное средство Кипферон на основе интерферона человеческого рекомбинантного альфа-типа с комплексным иммуноглобулиновым препаратом, содержащим иммуноглобулины классов А, М, G, и обладающее противовирусной и иммуномодулирующей активностью, которые могут быть использованы при лечении широкого спектра вирусных заболеваний [Патент № 2073522 RU, МПК А61К 9/02. Лекарственный препарат противовирусного действия].

Препарат содержит антитела, получаемые из крови человека, что может привести к потенциальной контаминации его человеческими вирусами или другими агентами донора.

Известно лекарственное средство Генферон, содержащее природный интерферон или рекомбинантный интерферон альфа-, или бета-, и/или гамма-типов и таурин (тауфон), а также вспомогательные вещества в определенном соотношении [Патент № 2201212 RU, МПК А61К 9/00. Суппозитории, обладающие иммуномодулирующим, противовирусным, противобактериальным, регенерирующим, репаративным, мембрано- и гепатопротекторным действием].

В состав Генферона входит анестезин, который может вызывать аллергические реакции и стойкое снижение чувствительности в месте применения.

Известно лекарственное средство для лечения тяжелых форм инфекционных заболеваний и смешанных инфекций. Оно содержит интерферон человеческий рекомбинантный альфа-, и/или бета-, и/или гамма-типов, антиоксидантный комплекс, витаминный комплекс, а также оротовую кислоту и/или орнитин или его производное - цитрулина малат, или глутоксим, антибактериальные, антимикотические вещества [Патент № 2366450 RU, МПК А61К 38/21, А61К 31/195, А61К 31/355, А61К 31/375, А61К 31/525, А61Р 31/00, А61Р 37/04. Средство для лечения тяжелых инфекционно-воспалительных заболеваний и смешанных инфекций].

Состав сложен, что увеличивает степень риска индивидуальной непереносимости препарата. Его действие обусловлено биологически активными компонентами, повышающими активность и обеспечивающими синергидное действие лекарственного средства, включает антибиотики и другие синтетические биологически активные вещества, обладающие рядом побочных эффектов. Суппозиторная форма хотя и приводит к уменьшению побочных действий, но не исключает формирования устойчивых к антибиотикам штаммов микрофлоры.

Следует, однако, отметить преимущества комбинированной лекарственной формы, которые, в свою очередь, можно разделить на субъективные и объективные.

К «субъективным» преимуществам относятся:

- удобство применения для пациента (избавляет его память и внимание от необходимости составлять сложные комбинации из различных лекарственных форм и принимать их «горстями» и т.д.);

- психологический и социальный комфорт (существенно проще применять одну единицу лекарственной формы, чем несколько, во время работы, в общественном месте и др.);

- экономический фактор - в большинстве случаев цена комбинированных препаратов ниже суммарной цены монопрепаратов.

«Объективные» достоинства комбинированных препаратов - потенцирование действия за счет:

- однонаправленного эффекта ингредиентов;

- уменьшения инактивации лекарственного вещества в организме (подавление биотрансформации);

- создание одним ингредиентом условий для проявления эффекта другого;

- снижение риска побочных эффектов;

- моделирование естественных процессов в организме.

Проблемы лечения инфекционно-воспалительных заболеваний, связанные со снижением иммунитета и развитием осложнений, обусловливают целесообразность разработки новых комплексных препаратов синергидного действия.

Известно лекарственное средство Виферон, содержащее генно-инженерный интерферон альфа-2, антиоксиданты - аскорбиновую кислоту и альфа-токоферол [Патент № 2024253 RU, МПК А61К 9/02. Ректальные свечи и устройство для введения ректальных свечей в полость организма]. Средство может быть использовано для лечения различных заболеваний, при которых эффективны препараты интерферона, в том числе вирусного гепатита, ОРВИ, ревматоидного артрита, менингитов. Показано, что специфическая активность интерферона существенно возрастает в присутствии антиоксидантов. Данное лекарственное средство принято как ближайший аналог (прототип).

Второй заявленный в патенте объект - устройство обеспечивает сразу три функции: оно является формой для разливки свечей, их хранения и введения больному.

К недостаткам группы решений можно отнести: усложнение препаративной формы лекарственного средства для целей изготовления и удорожание лекарства за счет применения для его введения одноразового специального устройства, что хотя и препятствует попаданию средства на кожу и способствует снижению микробной контаминации организма больного в процессе введения препарата, однако не решает проблемы неизбежного снижения устойчивости слизистых оболочек к действию повреждающих агентов (чаще всего синтетического происхождения) и не обладает собственным ресурсом противомикробного действия. В то же время не указаны сроки хранения заявленного состава (т.е. соответствие требованиям фармакопеи) вне использования заявленного устройства.

В настоящее время все больший интерес клиническая медицина проявляет к лекарственным средствам растительного происхождения, обладающим достаточной эффективностью и минимально проявляющим токсические свойства. Находят широкое применение в комплексной терапии многих заболеваний биогенные стимуляторы, способные при введении в организм оказывать стимулирующее влияние и ускорять процессы регенерации и в то же время являющиеся малотоксичными.

Исходя из изложенного очевидна целесообразность разработки суппозиторных форм с улучшенной специфической активностью иммуномодуляторов совместно с натуральными биостимуляторами растительной природы для лечения тяжелых инфекционных заболеваний.

Задачей настоящего изобретения является разработка полифункционального комбинированного лекарственного средства для коррекции иммунодефицитных состояний и лечения тяжелых инфекционно-воспалительных заболеваний на основе комбинации интерферона альфа-2b с биостимулятором растительного происхождения, обладающего заданными и соответствующими требованиям фармакопеи физико-химическими, структурно-механическими и биологическими свойствами, с улучшенной специфической активностью и эффективностью препарата, с повышенной биодоступностью.

Сущность изобретения состоит в экспериментально обоснованном подборе компонентов и их концентраций, обладающих необходимыми свойствами для обеспечения препарата заданными характеристиками, подтверждении технологических возможностей реального осуществления найденного решения.

Техническим результатом является получение комбинированного лекарственного средства в виде стабильного в процессе длительного хранения суппозитория, обладающего стандартными физико-химическими, структурно-механическими, полифункциональными биологическими свойствами, повышенной биодоступностью и синергидной терапевтической эффективностью интерферона альфа-2b с биостимулятором растительного происхождения алоэ экстрактом.

Технический результат достигается тем, что суппозиторная масса также содержит эффективные количества природного антиоксиданта и эмульгатора и вспомогательных веществ, обладающих определенной терапевтической активностью и способностью улучшать технологические характеристики действующих субстанций. В качестве вспомогательных веществ в состав заявляемого средства входят промотор всасывания действующих веществ, стабилизатор активности интерферона, природный эмульгатор и буферный раствор солей. Полученное лекарственное средство характеризуется стабильностью физико-химических и биологических свойств, их полифункциональностью, улучшением переносимости, снижением токсичности, увеличением биодоступности, эффективности, увеличением срока хранения.

Полифункциональный препарат на основе синергидной комбинации иммуномодулятора интерферона альфа-2b и биостимулятора алоэ экстракта, а также витамина Е содержит вспомогательные вещества, стабилизирующие интерферон, такие как глицин и буферные растворы солей, тизоль и эмульгатор лецитин, увеличивающие биодоступность средства, и твердый жир в качестве суппозиторной основы при следующих соотношениях компонентов для получения суппозитория массой 1,45 г (г):

Интерферон человеческий рекомбинантный
альфа-2b	400000 МЕ-675000 ME
Алоэ экстракт сухой	0,05-0,07
Витамин Е	0,04-0,06
Глицин	0,014-0,016
Буферный раствор	0,100-0,104
Лецитин	0,012-0,016
Тизоль	0,04-0,06
Твердый жир	остальное

Описание изобретения иллюстрировано таблицами 1-5 и фиг.1-3.

Фиг.1 - спектр ЯМР ¹Н твердого жира (произв. Loders Croklaan, Голландия).

Фиг.2 - спектр ЯМР ¹Н суппозиториев комбинированного состава.

Фиг.3 - кривые «доза - ответ» дифференциальные (а) и интегральные (б); слева - фармакологический ответ; справа - токсический ответ.

В таблице № 1 представлены составы модельных смесей заявляемого средства.

Рекомбинантный человеческий интерферон альфа-2b представляет собой водорастворимый белок с молекулярной массой около 19300 Да. Его получают из клона Escherichia coli, содержащего плазмидный гибрид, полученный методом генной инженерии, включающий в себя ген интерферона альфа-2b из лейкоцитов человека. Интерферон действует в нескольких направлениях. Во-первых, он оказывает влияние на клетки, соседние с инфицированной, запуская в них цепь событий, приводящих к подавлению синтеза вирусных белков. Вторым направлением действия интерферонов является стимуляция иммунной системы для борьбы с вирусами. Интерферон вызывает и целый ряд других биологических эффектов, в том числе подавляет размножение клеток. Недавние исследования показали, что в определенных условиях он может препятствовать развитию злокачественных новообразований.

Высокий профилактический и лечебный эффект в отношении многих вирусных и бактериальных инфекций показали препараты с основным действующим веществом - интерферон альфа. Выяснилось, что интерферон альфа обладает уникальной способностью почти мгновенно запускать механизмы уничтожения вирусов, патогенных бактерий и грибов, аллергенов и других антигенов. Благодаря альфа-интерферону обеспечивается координация действий различных клеток иммунной системы, останавливающих рост и размножение инфекционных агентов. Интерферон альфа предотвращает и замедляет действие T-супрессоров, подавляющих иммунный ответ В-лимфоцитов и других Т-лимфоцитов на антигены. Интерферон альфа за счет увеличения количества рецепторов на мембране иммунных клеток усиливает процесс захвата и поглощения ими чужеродных агентов, активирует выработку специфических антител, разрушающих антигены. Интерферон альфа участвует в формировании механизма защиты против внутриклеточных возбудителей. Под его воздействием усиливается образование белков на клеточной мембране, тем самым улучшается процесс распознавания и уничтожения антигенов Т-клетками. Альфа интерферон активирует факторы, повышающие вероятность того, что чужеродные агенты будут распознаны иммунными клетками, а также способствуют быстрому выведению антигенов из организма. В результате укрепляется иммунитет и возрастает устойчивость организма к инфекции, происходит замедление или остановка развития онкологического процесса.

На сегодняшний день общепризнано, что альфа-интерфероны наиболее эффективны при лечении хронических вирусных заболеваний, они являются единственными противовирусными препаратами, которые снижают риск формирования цирроза печени и трансформацию его в гепатоцеллюлярную карциному. Препараты рекомбинантного альфа-2b интерферона востребованы при лечении больных гриппом и другими острыми респираторными заболеваниями [Интерфероновый статус, препараты интерферона в лечении и профилактике инфекционных заболеваний и реабилитации больных / Под ред. С.С.Афанасьева [и др.]. М., 2005].

Наиболее часто употребляемым биогенным стимулятором является экстракт алоэ. Он оказывает адаптогенное, общетонизирующее, слабительное, антисептическое и желчегонное действие. Улучшает клеточный метаболизм, трофику и регенерацию тканей, повышает общую неспецифическую резистентность организма и устойчивость слизистых оболочек к действию повреждающих агентов, ускоряет процессы регенерации. Алоэ воздействует на систему иммунитета, активируя макрофаги, вызывает высвобождение интерферонов и интерлейкинов. Обладает некоторой противомикробной активностью в отношении стрептококков, стафилококков, брюшнотифозной и дизентерийной палочек, протея. Стимулирует защитные функции гранулоцитов, возбуждает аппетит. Повышает энергетические запасы в сперматозоидах и усиливает их подвижность. Алоэсодержащие препараты широко применяются во многих областях медицины (гинекология, стоматология, дерматология, хирургия, терапия, иммунология) [Олейников Д.Н., Зилфикаров И.Н., Ибрагимов Т.А. Исследование химического состава алое древовидного (AloeArborescensMill.), 2010. № 3. С.77-82].

В состав заявленного средства алоэ экстракт введен как вещество, повышающее специфическую активность интерферона. Было проведено изучение специфической активности в зависимости от состава комбинированных суппозиториев в сравнении с суппозиториями, содержащими в качестве активной субстанции только интерферон альфа-2b. В эксперименте было установлено, что противовирусная активность образца заявляемого средства почти на 40% превышает противовирусную активность образца № 1, содержащего только интерферон альфа-2b (См. таблицу 2).

Определение специфической противовирусной активности

Стандартный образец:

- международный стандарт Interferon alpha 2b, (Human r DNA derived), NIBSC Code: 95/566, или стандартный образец предприятия (СОП), противовирусная активность которого установлена относительно Международного стандарта Interferon alpha 2b, (Human r DNA derived), NIBSC Code: 95/566 при доверительной вероятности 0,95.

Индикаторный вирус:

- вирус везикулярного стоматита, штамм Индиана, депонированный в Институте вирусологии им. Д.И.Ивановского (номер в коллекции ГКВ-29).

Противовирусную активность препарата определяют в сравнении со стандартным образцом. Разведение Международного стандарта Interferon alpha 2b проводят в соответствии с инструкцией.

Для определения специфической активности препарата подготавливают 96-луночные планшеты культуральные с культурой клеток для титрования.

За титр интерферона принимают величину, обратную разведению препарата, в котором клеточная культура в 50% лунок оказалась полностью защищенной от цитопатического действия вируса.

Витамин Е включает группу соединений (токоферолы и токотриенолы), обладающих активностью -токоферола [Блажеевич Н.В., 1984].

Жирорастворимый витамин, функция которого до конца остается невыясненной. Как антиоксидант тормозит развитие свободнорадикальных реакций, предупреждает образование перекисей, повреждающих клеточные и субклеточные мембраны, что имеет важное значение для развития организма, нормальной функции нервной и мышечной систем, предупреждает гемолиз эритроцитов, тормозит окисление ненасыщенных жирных кислот. Нехватка витамина Е может служить одной из причин вялости и малокровия.

В состав заявленного лекарственного средства витамин Е введен как вещество, предотвращающее отрицательное действие свободных радикалов в организме и возникновение процессов окисления твердого жира при хранении суппозиториев. Изучалась стабильность физико-химических показателей суппозиториев в зависимости от концентрации витамина Е. Результаты опытов представлены в таблице № 3.

Данные таблицы 3 свидетельствуют о влиянии глицина и витамина Е на стабильность действующих веществ в суппозиториях. Как видно из данных таблицы интерферон альфа-2b имеет тенденцию к снижению активности в процессе хранения. Уже через полгода хранения его активность падает на 10% в составе № 1, где содержатся минимальные количества глицина и витамина Е. Наилучшую сохранность интерферона альфа-2b и гликозидов антраценпроизводных алоэ-экстракта в пересчете на алоэ-эмодин обеспечивает комбинация глицина и витамина Е в сочетании 0,015 г и 0,05 г, соответственно. Так через 15 месяцев хранения в составах № 3 и № 10 содержание интерферона альфа-2b по сравнению с исходным уменьшилось незначительно. Аналогичная зависимость выявлена и для алоэ-эмодина.

Глицин - простейшая алифатическая аминокислота, является регулятором обмена веществ, нормализует и активирует процессы защитного торможения в центральной нервной системе, уменьшает психоэмоциональное напряжение, повышает умственную работоспособность. В состав заявляемого лекарственного средства, помимо терапевтических свойств, глицин введен в качестве стабилизатора активности интерферона (см. таблицу 1).

Лецитин - это натуральный эмульгатор, позволяет получать устойчивые эмульсии в системах масло-вода. Состоит из сложных эфиров аминоспирта холина и диглицеридфосфорных кислот; является важнейшим представителем фосфолипидов. Лецитин обладает мощным антиоксидантным действием, предупреждает образование высокотоксичных свободных радикалов в организме. При дефиците лецитина снижается эффективность воздействия лекарственных препаратов. В состав заявляемого лекарственного средства лецитин введен как эмульгатор. В опытах in vitro изучалось влияние лецитина на скорость высвобождения действующих веществ из суппозиториев. Следует отметить, что при разработке состава и технологии получения комбинированных суппозиториев заданная концентрация интерферона альфа-2b в готовом продукте очень мала (500000 МЕ/суппозиторий, что соответствует 0,001182 г). Определение концентрации интерферона альфа-2b в диализате затруднительно, так как количественное определение по специфической активности является затратным и трудоемким, и недостаточна чувствительность методики ЯМР-спектроскопии. Поэтому при выборе концентрации лецитина в суппозиториях оценивали степень высвобождения действующих веществ (алоэ-эмодин) алоэ экстракта в диализат, при этом отбор проб проводили через 60 минут после начала диализа. Это связано также с низким содержанием алоэ экстракта в суппозиториях и с чувствительностью метода количественного определения. Кроме того оценивались также физико-химические показатели качества суппозиториев в зависимости от вида применяемых эмульгаторов. Результаты исследования представлены в таблице 4.

Тизоль^® - оригинальный отечественный препарат, не имеющий аналогов. Является проводником лекарственных средств, обеспечивает проводимость через кожу, слизистые и другие биологические ткани на глубину до 8 см. Служит основой для приготовления мягких лекарственных форм, хорошо сочетается с лекарственными веществами, доставляет в патологический очаг внесенное в него лекарственное вещество, не разрушая его, а полностью высвобождая в неизменном виде. Тизоль^® обладает противовоспалительным, дегидратирующим, протекторным, противоотечным, местным анальгезирующим, увлажняющим, противозудным действием, ускоряет репаративные процессы. Важной технологической особенностью тизоля является обеспечение микробиологической чистоты и стерильности лекарственных композиций, что исключает необходимость введения антимикробных консервантов, которые могут вызывать нежелательные побочные эффекты. Кроме того, тизоль значительно увеличивает сроки хранения лекарственных композиций и сокращает сроки лечения по сравнению с традиционными методами лечения (см. таблицы № 3 и № 5).

Учитывая физико-химические и терапевтические свойства используемых компонентов и благодаря экспериментально найденному оригинальному их сочетанию и соотношению при разработке заявляемого средства в виде суппозиториев, становится возможным достичь высокой эффективности и стабильности заявленного лекарственного средства.

Таким образом, отличительной особенностью предлагаемого лекарственного средства в виде суппозиториев является именно сочетание иммуномодулятора интерферона альфа-2b и натурального биостимулятора растительного происхождения алоэ экстракта, а также комплекса веществ с определенными свойствами, повышающими специфическую активность, терапевтическую эффективность и стабильность лекарственной формы в процессе хранения, и которое ранее не использовалось в медицинской практике.

Такое сочетание позволило получить стабильное полифункциональное средство для коррекции иммунодефицитных состояний и для лечения целого ряда тяжелых инфекционных заболеваний с осложнениями различной тяжести, включая онкологические.

Препарат изготавливают в форме суппозиториев традиционным методом в соответствии с «Фармацевтической технологией: Технология лекарственных форм», 2-е изд., Москва: Издательский центр «Академия», 2006.

Технология производства суппозиториев сводится к последовательному добавлению активных компонентов в основу, что значительно упрощает процесс производства и обеспечивает качество получаемого продукта ввиду снижения количества критических параметров процесса.

Для обеспечения стабильности интерферона альфа-2b человеческого рекомбинантного необходимо использование буферного раствора, содержащего натрия гидрофосфат додекагидрат (ГОСТ 4172-76) и натрия дигидрофосфат дигидрат (ГОСТ 245-76).

Учитывая результаты исследований при выборе состава, технология производства разрабатываемых суппозиториев основывалась на методе выливания. Способ выливания в настоящее время в России используется чаще других ввиду несложного технологического оснащения.

Вспомогательные стадии, касающиеся подготовки воды очищенной и подготовки производства, осуществляются в соответствии с правилами GMP.

Использовали стерильные компоненты суппозитория: основу стерилизовали автоклавированием, водные растворы действующих веществ и буферный раствор стерилизовали путем стерилизующей фильтрации.

Заявленное средство было изучено методом спектроскопии ЯМР Н твердого тела (Фиг.1, Фиг.2). Изучалась возможность взаимодействия активных компонентов с указанной основой и друг с другом. Наблюдаемое отсутствие смещений сигналов протонов компонентов в спектрах суппозиториев можно считать доказательством отсутствия взаимодействия между всеми активными и вспомогательными компонентами готовой лекарственной формы, что в свою очередь свидетельствует о стабильности заявленного средства в процессе длительного хранения.

Было проведено доклиническое изучение заявленного средства. В системе доклинического исследования лекарственных препаратов первым этапом является оценка токсичности соединения для культуры клеток и лабораторных животных [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. 2-е изд., перераб. и доп. М.: Медицина, 2005].

Оценка токсичности заявленного средства проводилась на лабораторных животных: мышах массой от 19 г до 21 г и крысах. Общая продолжительность наблюдения за животными составляла 2 недели, причем в первые сутки после введения животные находились под непрерывным наблюдением. Регулярно фиксировали общее состояние животных, особенности их поведения, интенсивность и характер двигательной активности, наличие и характер судорог, координацию движений, частоту и глубину дыхательных движений, состояние волосяного и кожного покрова, положение хвоста, потребление корма и воды, изменение массы тела. Регистрировали сроки развития интоксикации и гибели животных.

Исследование заявленного средства на токсичность проводили в центре диагностических исследований ЦКП (НОЦ) РУДН при финансовой поддержке Министерства образования и науки.

В лабораторных условиях устанавливали острую и хроническую токсичность заявляемого средства. Исследования строго регламентировались соответствующими нормативными документами, в которых определяется схема и порядок проведения опытов, условия содержания и рацион кормления животных, их число, способы введения препаратов, время, объем вводимого препарата, продолжительность наблюдения, описание состояния животных и т.д.

При изучении острой токсичности устанавливали зависимость доли погибших мышей, % от дозы испытываемого средства (Фиг.3). По экспериментальной кривой «доза - ответ» определяли показатели: ЛД10 (доза, при которой гибнет 10% подопытных мышей) и ЛД50 (доза, при которой гибнет 50% подопытных мышей). В наших исследованиях для заявляемого средства ЛД50 определить для этих животных не представлялось возможным. Так мы вводили мышам внутривенно водную вытяжку из суппозитория. Вытяжку готовили следующим образом: один суппозиторий растворяли в 1 мл воды для инъекций при температуре 37°С в течение 15 минут. Затем фильтровали полученную смесь через бумажный фильтр и вводили мышам внутривенно и внутрибрюшинно при дозе интерферона более 10000000 ME на мышь. Мыши при этом остаются живы более 5 суток. (Тест-доза при контроле интерферона на токсичность составляет 1000000 ME / 0,5 мл физиологического раствора на мышь).

Определение хронической токсичности заявляемого средства проводили на 56 крысах мужского пола и 56 крысах женского пола при его ежедневном введении в течение 14 дней в большой дозе (4 суппозитория) и в малой дозе (1 суппозиторий). Животные были поделены на 8 групп. В таблице 3 представлена схема изучения хронической токсичности заявляемого средства. В течение эксперимента снимали следующие показатели: объем потребления животными корма и воды; динамику изменения массы тела, изменение общего состояния и поведения; гематологические и биохимические показатели и др.

Из результатов проведенного эксперимента следует, что заявляемое средство является не токсичным лекарственным средством, хорошо переносится лабораторными животными, так как при его введении не наблюдалось видимых отклонений в поведении животного и его физиологического состояния.

Таким образом, отличительной особенностью предлагаемого лекарственного средства в виде суппозиториев является именно сочетание и количественное соотношение иммуномодулятора интерферона альфа-2b и натурального биостимулятора растительного происхождения алоэ экстракта, а также комплекса веществ с определенными свойствами, повышающими специфическую активность, терапевтическую эффективность и стабильность лекарственной формы в процессе хранения, обеспечивающими низкую токсичность препарата. Лекарственное средство не включает антимикробных консервантов, содержит натуральные антиоксидант витамин Е и эмульгатор лецитин. Оригинальный отечественный препарат тизоль повышает биодоступность и стабильность суппозиториев в процессе хранения.

Лекарственное средство реализуемо в экспериментально подобранном соотношении компонентов, соответствует требованиям фармакопеи и ранее не использовалось в медицинской практике.

Таблица 1
Составы композиций при выборе рецептуры заявляемого средства
Наименование сырья	№ состава
	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
ИФН альфа-2b человеческий рекомбинантный, тыс. ME	500	500	500	500	500	500	500	500	500	500
Алоэ экстракт сухой, г	0,015	0,015	0,015	0,015	0,015	0,015	0,015	0,250	0,06	0,06
Глицин, г	0,005	0,01	0,015	0,005	0,005	0,01	0,015	0,015	0,015	0,015
Витамин Е, г	0,005	0,01	0,05	0,05	0,01	0,005	0,005	0,01	0,01	0,05
Тизоль, г	0	0,05	0,05	0,05	0,05	0,05	0,05	0,05	0,05	0,05
Раствор буферный*, г	0,012	0,012	0,012	0,012	0,012	0,012	0,012	0,012	0,012	0,012
Лецитин, г	0,014	0,014	0,014	0,014	0,014	0,014	0,014	0,014	0,014	0,014
Твердый жир, г	1,399	1,384	1,294	1,304	1,344	1,339	1,334	1,104	1,289	1,249
Примечание: * Раствор буферный натрия гидрофосфат додекагидрат и натрия дигидрофосфат дигидрат

Таблица 2
Противовирусная активность препаратов в одном суппозитории
№ образца	Наименование ингредиентов	Активность, ME*
1	Интерферон альфа-2b (буферный раствор), лецитин, твердый жир	606000
2 (Заявля- емое средство)	Интерферон альфа-2b, (буферный раствор), алоэ экстракт сухой, тизоль, глицин, витамин Е, лецитин, твердый жир	849333

Таблица 3
Зависимость стабильности от состава композиции (от концентрации стабилизатора, антиоксиданта и промоутера всасывания)
Срок наблюде- ния	Определяемое количество интерферона альфа-2b в одном суппозитории должно быть 500 (от 400 до 675) тыс. ME (Определение противовирусной активности на культуре клеток)										Определяемое количество алоэ-эмодина (ВЭЖХ)*, мг/суппозиторий
	№ состава										№ состава
	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	8	9	10
Свежеприг.	435	465	510	490	450	450	460	450	450	500	250	63,0	65,0
6 месяцев	400	438	500	485	420	410	425	430	420	500	210	62,0	62,4
12 месяцев	370	395	500	480	390	380	387	400	400	500	210	61,7	62,3
15 месяцев	350	385	500	475	380	345	342	400	388	495	200	61,5	62,3
* не указаны пределы количественного содержания алоэ-эмодина в суппозитории, так как оно разное в зависимости от состава композиции

Таблица 4
Выбор поверхностно-активных веществ
Наименование ПАВ	Показатели качества
	Температура плавления, °С	Время полной деформации, мин	Твердость, кг/суппозит.	% Высвобождения действующих веществ (алоэ-эмодина) из суппозиториев через 2 часа после начала диализа через полупроницаемую мембрану в опытах (in vitro) (метод ВЭЖХ)
Эмульгатор № 1	37,2±0,1	12,4±0,15	4,2±0,2	51,3±1,3
Эмульгатор № 2	37,1±0,3	13,23±0,17	4,2±0,4	54,6±1,8
Твин-80	36,2±0,2	4,15±0,26	3,2±0,1	65,0±1,2
Цетеарет-25	36,6±0,5	6,46±0,14	4,0±0,5	63,9±0,9
Gelucire 44/14	36,7±0,2	5,10±0,54	3,5±0,2	62,2±1,1
Lanette SX	36,8±0,5	4,26±0,31	3,7±0,1	68,2±0,8
Лецитин	36,2±0,1	3,17±0,22	2,9±0,1	75,2±0,5
Без эмульгатора	36,9±0,3	9,35±0,47	3,9±0,8	49,2±1,6