способ лечения экспериментального сапа

Классы МПК:A61K31/43  соединения,содержащие 4-тио-1-азабицикло[320] гептановые циклические системы, тесоединения, содержащие циклическую систему формулы , например пенициллины, пенемы
A61P31/04 антибактериальные средства
Автор(ы):, , , , , , ,
Патентообладатель(и):Федеральное казенное учреждение эдравоохранения Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2012-07-06
публикация патента:

Изобретение относится к области микробиологии и ветеринарии и предназначено для лечения экспериментального сапа. Золотистых хомячков, животных высокочувствительных к сапу, инфицируют B.mallei ц 5 в дозе 104 микробных клеток, что соответствует 103 Dlm. Лечение начинают через 4 ч - экстренная профилактика, или через 24 ч и 48 ч после инфицирования. В качестве антибактериального средства применяют меропенем в липосомальной форме -15 мг в 0,5 мл, в дозе 50 мг/кг/сут, препарат вводят в внутрибрюшинно, пятикратно с интервалом в 72 ч. Использование способа увеличивает выживаемость животных с острой формой сапа. 1 з.п. ф-лы, 2 пр., 2 табл.

Изобретение относится к микробиологии, в частности к способам экстренной профилактики и лечению сапа.

Сап является опасным инфекционным заболеванием человека и животных. При формировании острых форм заболевания (пневмония, септицемия) без антибиотикотерапии прогноз неблагоприятный, а при использовании химиопрепаратов лечение необходимо проводить длительное время, используя комбинации активных антибиотиков. Возбудитель сапа (Burkholderia mallei) обладает высокой устойчивостью к большинству известных антибиотиков (пенициллины, аминогликозиды, гликопептиды и др.), в опытах in vivo он чувствителен к некоторым тетрациклинам, хинолонам, карбапенемам, комбинированным сульфаниламидам. Меропенем относится к наиболее активным препаратам (МПК для большинства штаммов В.mallei составляет 0,5-1,0 мкг/мл). При этом максимально достижимая концентрация препарата в плазме крови составляет 50-100 мкг/мл. Одним из достоинств меропенема является его длительный постантибиотический эффект, в определенной мере компенсирующий короткий период полувыведения (1,5 ч) из организма с мочой. Меропенем достаточно эффективен при лечении инфекций, вызываемых другими видами буркхольдерий (В.pseudomallei и В.cepacia) (Cheng А.С., Currie B.J. Melioidosis: epidemiology, pathophysiology and management. Clin. Microbiol. Rev. - 2005. - Vol 18. - P.383-416; Conway S.P., Brownlee K.G., Denton M., Pecham D.G. Antibiotic treatment of multidrug-resistant organisms in cystic fibrosis. - Am. J. Respir. Med. - 2003. - Vol.2. - P.321-332). Однако в литературе отсутствуют сведения о терапевтическом эффекте меропенема при естественных и экспериментальных заболеваниях сапом. Наиболее близким аналогом в настоящее время является способ лечения острых форм сапа, включающий 2-х недельное внутривенное введение доксициклина, цефтазидима, котримоксазола и последующее проведение курса поддерживающей терапии с использованием доксициклина и азитромицина в течение 4-6 месяцев. (Estes D.M., Dow S.M., Schweizer H.P., Torres A.G. Present and future therapeutic strategies for melioidosis and glanders, - Expert. Rev. Anti. Infect. Ther. - 2010, - Vol.8. - P.325-338). В опубликованной работе по лечению сапа эффективность химиотерапии достигает 40-60%.

Целью изобретения является разработка способа применения химиотерапевтического средства (меропенема) для лечения острой формы сапа, смоделированной на золотистых хомячках. У золотистых хомячков при парентеральном введении В.mallei ц 5 в дозе 103 Dlm наблюдалась 100% летальность в течение первых 4 дней после заражения. Проблема подбора и оценки эффективности химиопрепаратов в опытах на животных в данном случае осложняется естественными трудностями многократного внутривенного введения антибиотика. В то же время известно, что заключение химиопрепарата в липосомальную форму обеспечивает равномерное, длительное (в пределах 3-х сут) поступление активного начала в лимфоток с последующим выходом в венозную систему при внутрибрюшинном введении, в определенной мере копируя длительную многократную капельную инфузию.

Для достижения поставленной цели использовали липосомальные препараты меропенема (Астра Зенека). Липосомальный препарат готовили по методу Szoka F., Papahandjopoulos D. Procedure for preparation of liposomes with large internal space and high capture by reverse-phase evaporation (Proc. Nat. Sci. USA. - 1978. - Vol.75, № 9. - P.4194-4198.). Для этого из расчета на 5 мл липосом 56,7 мг смеси липидов (фосфатидилхолин, холестерин в соотношении 7:3) растворяли в 3,8 мл хлороформа, затем 150 мг меропенема, растворенного в дистиллированной воде в объеме 1,5 мл, добавляли к раствору липидов в органической фазе и обрабатывали на роторном миксере мощностью 500 вт при 15000 об/мин в течение 1 мин до достижения образования эмульсии, после чего при пониженном давлении в роторном испарителе полностью удаляли органический растворитель. К образовавшемуся гелю добавляли до 5 мл дистиллированную воду и тщательно перемешивали, удаление невключившегося материала осуществляли диализом. В конечном варианте включаемый материал (меропенем) находится в водной фазе геля в результате формирования липидно-хлороформной эмульсии типа «вода в масле». Полученные нами липосомы имели размеры 1,0-1,2 мкм и содержали в 1,0 мл 30 мг меропенема.

Опыты поставлены на золотистых хомячках весом 90-110 г, животных, высокочувствительных к сапу, у которых заболевание протекает всегда в острой форме и заканчивается летально в течение 3-7 сут в зависимости от дозы заражения, если не проводится лечение. Заражение проведено подкожно в область правой паховой складки культурой В.mallei ц 5 в дозе 104 м.к., что соответствует 10 Dlm. Лечение начинали через 4 (экстренная профилактика), 24 ч и 48 ч липосомальными формами меропенема внутрибрюшинно 3-х и 5-кратно с интервалом в 72 ч, обычный раствор меропенема, растворенный в 0,9% NaCl, вводился ежедневно подкожно и внутрибрюшинно. Во всех сериях ежедневная доза составляла 50 мг/кг веса животного. Показано, что меропенем, растворенный в 0,9% NaCl, при парентеральном ежедневном введении не обладает защитным эффектом, но несколько удлиняет продолжительность жизни павших животных по сравнению с контролем заражения. В то же время липосомальная форма меропенема обеспечивает защиту 60-100% животных (р<0,01). Тем самым установлено, что липосомальная форма меропенема обеспечивает эффективную защиту животных от острых форм сапа, вызванных инфицированием золотистых хомячков В.mallei ц 5 в дозе 10 Dlm. Способ защиты базируется на биологическом явлении перманентного выхода из липосом эффективного антибиотика (меропенема) с последующим попаданием его через внутрибрюшинный лимфоток в кровеносную систему.

Таким образом предлагаемый способ состоит из предварительного получения инкапсулированного меропенема и моделирования острой формы сапа у чувствительных к этой инфекции лабораторных животных - для этого формируют 3 группы животных: одной проводится лечение инкапсулированным меропенемом, второй группе - меропенемом в обычном растворе для инъекций и третья группа - контрольная, которой лечение не проводится. Для получения эффективных концентраций инкапсулированного меропенема были подобраны оптимальные соотношения ингредиентов по вышеуказанному составу.

Примеры конкретного выполнения:

Пример 1. В опыт взяты 4 группы золотистых хомячков по 10 животных в каждой, заражение проведено подкожно в паховую область правой задней конечности штаммом В.mallei ц 5, взвесь бактерий вводили в дозе 10 м.к. (103 Dlm) в объеме 0,5 мл. Лечение меропенемом начиналось через 24 ч после инфицирования; липосомальный препарат (15 мг в 0,5 мл) вводился трехкратно, внутрибрюшинно с интервалом в 72 ч, последняя инъекция (3-я) сделана на 7-й день после заражения. Меропенем, растворенный в 0,9% NaCl, вводили ежедневно (15 мг в 0,5 мл) подкожно в контралатеральную заднюю конечность или внутрибрюшинно в той же дозе. Срок наблюдения за животными - 14 дней после заключительной инъекции антибиотика. Показано, что меропенем в растворе 0,9% NaCl защитным эффектом не обладает при обоих способах введения, в то же время препарат в той же суммарной дозе, введенной в липосомальной форме, защищал 60% зараженных животных при значительном увеличении сроков средней продолжительности жизни павших животных (табл.1).

Пример 2. Для выяснения значения роли начала лечения и кратности введения препарата золотистым хомячкам, зараженным 104 м.к. (103 Dlm), вводили липосомальную форму меропенема через 4 ч (экстренная профилактика), 24 ч и 48 ч после инфицирования, а затем в той же дозе (15 мг/0,5 мл) препарат вводили через каждые 72 ч 5-кратно (табл.2). Учет результатов опыта проводили через 10 сут после заключительной инъекции антибиотика, т.е. через 21 сут после исходного заражения. Обращает на себя внимание факт, что во всех контролях ни одно животное не прожило более 6 дней после подкожной инъекции взвеси В.mallei ц 5 в любой дозе от 101 до 104 м.к. В то же время все животные, леченные липосомальной формой меропенема, выжили и были забиты хлороформом на 26-й день после заражения. На вскрытии специфические для сапа поражения лимфоузлов и паренхиматозных органов не обнаружены.

Таким образом, применение предлагаемого способа значительно увеличило выживаемость лабораторных животных в острой форме сапа при введении инкапсулированного меропенема.

Таблица 1
Эффективность лечения экспериментального сапа золотистых хомячков меропенемом в различных формах введения
Препарат меропенема, дозаСпособ введения меропенема, кратностьСпособ заражения В.mallei ц 5, дозаЛ Т (сут)% защиты
в липосомах 15 мг/72 чв/брюшинно, 3 п/кожно 104 м.к. 4/1017,560
в растворе 0,9% NaCl 5 мг/24 ч в/брюшинно, 10п/кожно 104 м.к.10/10 7,00
в растворе 0,9% NaCl 5 мг/24 чп/кожно, 10п/кожно 104 м.к. 10/105,70
Контроль заражения - 1 -п/кожно 104 м.к. 10/104,00
Контроль заражения - 2 -п/кожно 101 м.к. 10/104,50
Примечания для таблиц 1 и 2:
Л - летальность, в числителе число погибших животных, в знаменателе число зараженных животных,
Т - средняя продолжительность жизни павших животных.

Таблица 2
Эффективность лечения экспериментального сапа липосомальной формой меропенема (15 мг/72 ч) в разные сроки от момента инфицирования, доза заражения 103 Dlm В.mallei ц 5
Время введения препаратаКратность введения ЛТ % защиты
Через 4 ч 34/1018 60%
Через 4 ч 50/10- 100%
Через 24 ч 34/1017,4 60%
Через 24 ч50/10 -100%
Через 48 ч39/10 17,210%
Через 48 ч5 0/9-100%
Контроль заражения -10/104,1 -

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Способ лечения экспериментального сапа, включающий введение антибактериальных средств инфицированным лабораторным животным, отличающийся тем, что золотистых хомячков, животных, высокочувствительных к сапу, инфицируют В.mallei ц 5 в дозе 104 микробных клеток, что соответствует 103 Dlm, лечение начинают через 4 ч - экстренная профилактика, или через 24 и 48 ч после инфицирования, в качестве антибактериального средства применяют меропенем в липосомальной форме -15 мг в 0,5 мл, в дозе 50 мг/кг/сут, препарат вводят в внутрибрюшинно, пятикратно с интервалом в 72 ч.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что для получения нетоксичной и эффективной формы меропенема готовят смесь липидов, которые растворяют в хлороформе, к этой композиции добавляют водный раствор меропенема и для достижения эмульсии обрабатывают на роторном миксере, и после удаления диализом невключившегося материала получают липосомы размером 1,0-1,2 мкм, содержащие 30 мг/мл меропенема, которые используют для химиотерапии.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2490013

patent-2490013.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс A61K31/43  соединения,содержащие 4-тио-1-азабицикло[320] гептановые циклические системы, тесоединения, содержащие циклическую систему формулы , например пенициллины, пенемы

Патенты РФ в классе A61K31/43:
способ лечения хронического эндометрита -  патент 2522382 (10.07.2014)
новые однократные единичные составы карбапенема и аминогликозида -  патент 2521391 (27.06.2014)
способ лечения клапанного аппарата сердца -  патент 2491932 (10.09.2013)
препарат для лечения мастита у коров в лактационный период -  патент 2491069 (27.08.2013)
способ получения бета-лактамных антибиотиков в виде геля полимерного комплекса с ионами серебра -  патент 2484810 (20.06.2013)
ранозаживляющее средство для местного применения -  патент 2481835 (20.05.2013)
способ комплексного лечения неспецифических воспалительных заболеваний женской половой сферы -  патент 2481102 (10.05.2013)
состав антибиотиков, содержащий бета-лактамы и буферные компоненты -  патент 2459625 (27.08.2012)
фармацевтическая композиция для лечения инфекционных болезней, вызванных множественно-устойчивыми бактериями -  патент 2455989 (20.07.2012)
способ профилактики мастита у коров -  патент 2448705 (27.04.2012)

Класс A61P31/04 антибактериальные средства

Патенты РФ в классе A61P31/04:
способ получения алкилбензилдиметиламмонийфторидов, обладающих противовирусным и антибактериальным действием -  патент 2529790 (27.09.2014)
вакцины на основе солюбилизированных и комбинированных капсулярных полисахаридов -  патент 2528066 (10.09.2014)
производные 5-гидроксиметилоксазолидин-2-она для лечения бактериальных кишечных заболеваний -  патент 2527769 (10.09.2014)
способ комплексного лечения некротического энтероколита у новорожденных и детей младшего грудного возраста -  патент 2527348 (27.08.2014)
композиции карбонатных соединений, препятствующих образованию биопленки, для использования при уходе за полостью рта -  патент 2526912 (27.08.2014)
способ получения комплексного антибактериального иммуномодулирующего препарата -  патент 2526184 (20.08.2014)
антибактериальные соединения -  патент 2525915 (20.08.2014)
производные 5-амино-2-(1-гидроксиэтил)тетрагидропирана -  патент 2525541 (20.08.2014)
композиции и способы лечения, включающие цефтаролин -  патент 2524665 (27.07.2014)
антимикробные/антибактериальные медицинские устройства, покрытые традиционными средствами китайской медицины -  патент 2524635 (27.07.2014)


Наверх