питательная среда для культивирования fusicoccum amygdali del. - продуцента фузикокцинов

Формула изобретения

Питательная среда для культивирования Fusicoccum amygdali Del. - продуцента фузикокцинов, включающая углеводы, фосфат калия, сульфат магния и воду, отличающаяся тем, что среда дополнительно содержит азотнокислый калий и в качестве углеводов - сахар-сырец и мелассу при следующем соотношении компонентов, мас.%:

меласса	1,0-2,0
сахар-сырец	0,8-1,5
KNO3	0,02-0,03
KH2PO4	0,1-0,3
MgSO 4·7H2O	0,02-0,03
вода водопроводная	до 100

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к получению биологически активных веществ, и может быть использовано при получении фузикокцинов различного назначения как для сельскохозяйственного производства, так и для медицинских целей.

В настоящее время активно изучаются свойства и биологическая активность фузикокцинов в медицине. 1. Sassa Т. et al. Fusicoccins P and Q, and 3-epifusicoccins H and Q, new polar fusicoccins from isolate Niigata 2-A of a peach Fusicoccum canker fungus. Biosci. Biotechnol Biochem. 2002, Nov; 66(11), 2356-61. 2. Ingrid J. de Vries - van Leeuwen et al. Fusicoccin A - selectively induces apoptosis in tumor cells after interferon-alpha priming. Cancer Lett. 2010, 293(2), 198-206.

Известна питательная среда для культивирования продуцента фузикокцина (авторское свидетельство № 1172515, кл. A01N 63/00, 07.07.1980), включающая глюкозу, соевую муку, двузамещенный фосфорнокислый калий, сернокислый калий и сернокислый магний и воду. Недостаток питательной среды - получение в основном фузикокцина А.

Известна также питательная среда для культивирования продуцента фузикокцина (авторское свидетельство № 1378364, кл. C12N 1/14, A01N 63/00, 04.12.1984), включающая мелассу, глюкозу, калий азотнокислый однозамещенный, фосфорнокислый магний, сернокислый магний и воду. Недостаток этой питательной среды - значительное преобладание в спектре фузикокцинов фузикокцина А.

Задача предлагаемого изобретения - получить наибольший спектр фузикокцинов с целью использования их в медицинских целях.

Технический результат - получить кроме фузикокцина А фузикокцины C, D, H, J.

Поставленная задача достигается за счет того, что питательная среда для культивирования Fusicoccum amygdali Del. - продуцента фузикокцинов, включающая, мас.%: мелассу 1.0-2.0; KNO₃ 0.02-0.03; KH₂PO₄ 0.1-0.3; воду - до 100, дополнительно содержит сахар-сырец 0.8-1.5; MgSO₄×7H₂O 0.02-0.03.

Указанный интервал содержания компонентов среды достаточен для достижения поставленной задачи. Увеличение интервала ведет к необоснованному расходу сырья. Уменьшение количественного значения компонентов не позволяет достичь поставленной задачи ввиду того, что не обеспечивает требуемый уровень биосинтеза фузикокцинов.

Примеры конкретного выполнения.

Пример 1. Готовят среду состава, мас.%: меласса 2.0; сахар-сырец 1.5; KNO₃ 0.03; KH₂PO₄ 0.3; MgSO ₄×7H₂O 0.03; вода водопроводная до 100; рН 6.0-6.5. Биосинтез проводят по двухфазной системе. Указанную среду засевают грибом Fusicoccum amygdali Del. и выращивают посевной мицелий в течение 48 часов. Затем берут 10-15 мл посевного мицелия и засевают в колбы со 150 мл питательной среды того же состава и культивируют при температуре 25-26°C в течение 72 часов. Получают культуральную жидкость с концентрацией фузикокцинов 500 мг/л. Использование комбинированного метода газовой хроматографии - масс-спектрометрии (ГХ-МС) позволило установить, что в культуральной жидкости содержание фузикокцинов меняется в следующих пределах: фузикокцина C 28-21%, D 2,5-1,5%, H 8,0-6,0%, J 20-15%, A 40-49%, а также 16-O-диметилфузикокцина J, дитретпентенилфузикокцина и отдельных неиндефицированных фузикокциновых метаболитов.

Пример 2. Готовят среду состава, мас.%: меласса 1.0; сахар-сырец 0.8; KNO₃ 0.02; KH₂PO₄ 0.1; MgSO₄×7H₂O 0.02; вода водопроводная до 100; рН 6.0-6.5. Среду засевают культурой гриба, как описано в примере 1, культивируют при тех же условиях. Концентрация фузикокцина в культуральной среде 500 мг/л. В культуральной жидкости содержание фузикокцинов меняется в следующих пределах: фузикокцина C 28-21%, D 2.5-1.5%, H 8.0-6.0%, J 20-15%, A 40-49%, a также 16-O-диметилфузикокцина J, дитретпентенилфузикокцина и отдельных неиндефицированных фузикокциновых метаболитов.

Пример 3. Готовят среду, включающую, мас.%: меласса 1.5; сахар-сырец 1.2; KNO₃ 0.025; KH ₂PO₄ 0.2; MgSO₄×7H₂ O 0.025; вода водопроводная до 100; рH 6.0-6.5. Среду засевают культурой гриба, как описано в примере 1, культивируют при тех же условиях. Концентрация фузикокцина в культуральной среде 500 мг/л. В культуральной жидкости содержание фузикокцинов меняется в следующих пределах: фузикокцина C 28-21%, D 2.5-1.5%, H 8.0-6.0%, J 20-15%, A 40-49%, a также 16-O-диметилфузикокцина J, дитретпентенилфузикокцина и отдельных неиндефицированных фузикокциновых метаболитов.

Пример 4. Готовят среду, включающую, мас.%: меласса 0.5; сахар-сырец 0.4; KNO₃ 0.01; KH₂PO ₄ 0.05; MgSO₄×7H₂O 0,01; вода водопроводная до 100; рH 6.0-6.5. Среду засевают культурой гриба, как описано в примере 1, культивируют при тех же условиях. Концентрация фузикокцинов в культуральной жидкости снижается до 280 мг/л. В культуральной жидкости увеличивается содержание фузикокцина А, но содержание других фузикокцинов уменьшается - C 11%, D 1%, H 2%, J 6%, A 68%, а также 16-O-диметилфузикокцина J, дитретпентенилфузикокцина и отдельных неиндефицированных фузикокциновых метаболитов.

Вывод. Предполагаемое изобретение позволяет увеличить в достаточной степени спектр фузикокцинов для медицинских целей.