микробиологический способ получения 21-ацетоксипрегна-1,4,9( 11 ),16-тетраен-3,20-диона из 21-ацетоксипрегна-4,9( 11 ),16-триен-3,20-диона
Классы МПК: | C07J5/00 Нормальные стероиды, содержащие атомы углерода, водорода, галогена или кислорода, замещенные в положении 17 бета цепью из двух атомов углерода, например прегнан, и замещенные в положении 21 только одним атомом кислорода, связанным простой связью C12P33/02 дегидрогенизация; дегидроксилирование |
Автор(ы): | Фокина Виктория Валерьевна (RU), Суходольская Галина Викторовна (RU), Шутов Андрей Анатольевич (RU), Николаева Вера Максимовна (RU), Донова Марина Викторовна (RU), Савинова Татьяна Степановна (RU), Лукашёв Николай Вадимович (RU), Суровцев Виктор Васильевич (RU) |
Патентообладатель(и): | Российская Федерация, от имени которой выступает Министерство промышленности и торговли Российской Федерации (RU) |
Приоритеты: |
подача заявки:
2011-11-16 публикация патента:
27.04.2013 |
Изобретение относится к высокоэффективному микробиологическому способу получения 21-ацетоксипрегна-1,4,9(11),16-тетраен-3,20-диона из 21-ацетоксипрегна-4,9(11),16-триен-3,20-диона. Реакция 1,2-дегидрирования 21-ацетоксипрегна-4,9(11),16-триен-3,20-диона осуществляется с помощью клеток Nocardioides simplex BKM Ac-2033Д при температуре 25°C в среде буферного раствора с pH 5,0-5,5, содержащей метил- -циклодекстрин, полярный растворитель, смешивающийся с водой, и экзогенный акцептор электронов. Использование растущей культуры или осажденных клеток позволяет осуществлять трансформацию при высокой нагрузке субстрата (10-20 г/л) при полном селективном превращении субстрата в 1,2-дегидрированный продукт и высоких скоростях процесса. 6 з.п. ф-лы, 7 прим., 2 табл.
Формула изобретения
1. Микробиологический способ получения 21-ацетоксипрегна-1,4,9(11),16-тетраен-3,20-диона формулы (I)
из 21-ацетоксипрегна-4,9(11),16-триен-3,20-диона формулы (II)
в водной среде, содержащей экзогенный акцептор электронов менадион в эффективном количестве и метил- -циклодекстрин в количестве не более 2 молей на 1 моль исходного субстрата, с применением клеток микроорганизма Nocardioides simplex BKM Ас-2033Д, обладающих 3-кетостероид-1-дегидрогеназной активностью, с использованием полярного растворителя, смешивающегося с водой, при концентрации указанного растворителя в водной среде от 4 до 8 об.%, в среде буферного раствора с pH от 5,0 до 5,5, преимущественно 5,1+0,1 при температуре 25°C в течение от 6 до 14 ч, при этом менадион вносят в среду для трансформации одновременно со стероидным субстратом в виде раствора в полярном растворителе с последующим выделением целевого продукта из культуральной жидкости.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что процесс продолжительностью от 6 до 14 ч проводят с концентрацией исходного субстрата от 10 до 20 г/л соответственно.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве полярного растворителя, смешивающегося с водой, используют апротонные растворители (предпочтительно диметилсульфоксид), или протонные растворители, например алифатические спирты (предпочтительно этанол), при этом концентрация растворителя в водной среде составляет от 4 до 8 об.%.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве буферного раствора с диапазоном значений pH от 5,0 до 5,5 используют Na-ацетатный буфер, или Na-цитратный буфер, или раствор NaH2PO4 , подкисленный до pH 5,0 (предпочтительно Na-ацетатный буфер).
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что трансформацию проводят в водной среде, содержащей метил- -циклодекстрин, взятый в количестве от 1,5 до 2 молей на 1 моль загруженного субстрата.
6. Способ по п.1, отличающийся тем, что в трансформации используют растущую культуру бактерий Nocardioides simplex BKM Ас-2033Д, взятую в эффективном количестве, предпочтительно от 0,1 до 0,17 г на 1 г загруженного субстрата в пересчете на сухой вес.
7. Способ по п.1, отличающийся тем, что в трансформации используют осажденные клетки Nocardioides simplex BKM Ас-2033Д, взятые в эффективном количестве, предпочтительно от 0,1 до 0,17 г на 1 г загруженного субстрата в пересчете на сухой вес.
Описание изобретения к патенту
Класс C07J5/00 Нормальные стероиды, содержащие атомы углерода, водорода, галогена или кислорода, замещенные в положении 17 бета цепью из двух атомов углерода, например прегнан, и замещенные в положении 21 только одним атомом кислорода, связанным простой связью
Класс C12P33/02 дегидрогенизация; дегидроксилирование