6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической активностью по отношению к опухолевым клеткам человека

Классы МПК:C07D307/40 радикалы, замещенные атомами кислорода
A61K31/341  не конденсированные с другим кольцом, например ранитидин, фуросемид, буфетолол, мускарин
A61P35/00 Противоопухолевые средства
Автор(ы):, , , , ,
Патентообладатель(и):Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Новосибирский институт органической химии им. Н.Н. Ворожцова Сибирского отделения Российской академии наук (НИОХ СО РАН) (RU),
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Новосибирский национальный исследовательский государственный университет" (НГУ) (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2012-04-19
публикация патента:

Изобретение относится к органической химии, конкретно к новым 6-гидроксинафтохинонам лабданового типа формулы (Ia-в):

6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ,

где R1=R2=H(Ia); R1=Me, R2=H(1б); R1=H, R 2=CO2Et (Iв), обладающим способностью подавлять рост опухолевых клеток человека. Наиболее активное вещество - (1S,4aS,8aR)-Метил 5-{2-[2-(6-гидрокси-1,4-диоксо-1,4-дигидронафталин-8-ил)-фуран-3-ил]этил}-1,4а,6-триметил-1,2,3,4,4а,7,8,8а-октагидронафталин-1-карбоксилат (Ia) подавляет рост опухолевых клеток СЕМ-13, U-937 и МТ-4 в концентрациях 3.4, 5.8 и 4.3 мкМ соответственно. Соединения получают из ламбертиановой кислоты, содержащейся в живице и хвое кедра сибирского. 4 пр., 1 табл.

Изобретение относится к органической химии, конкретно - к новым оптически активным нафтохинонам, содержащим фрагмент лабданового дитерпеноида, формулы (Iа-в):

6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582

где R1=R2=Н(Ia); R1=Me, R2=H(Iб); R1=H, R 2=CO2Et (Iв),

обладающим значительной цитотоксичностью по отношению к опухолевым клеткам человека.

Указанные свойства позволяют предполагать возможность использования соединений в медицине в качестве фармацевтического препарата.

В последние годы при создании противоопухолевых агентов внимание уделяется поиску ингибиторов тканевой инвазии опухолевых клеток и индукторам апоптоза опухолевых клеток [Fenteany, G.; Zhu, S. Cur. Top. Med. Chem. 2003, v.3 (4), p.593-616]. Соединения обоих типов найдены в ряду сестертерпеноидов и лабдановых дитерпеноидов. В качестве перспективных ингибиторов инвазии опухолевых клеток рассматриваются хинон- и гидрохинонсодержащие ди- и сестертерпеноиды морских губок - стронгулофорин-26 (II) [Warabi K., Patrik B.O., Austin P., Roskelley C.D., Roberge M., Andersen R.J., J. Nat. Prod. 2007, v.70 (5), p.736-740], авинозол (III) [Diaz-Marrero A.R., Austin P., Van Soest R., Matainaho T., Roskelley C.D., Roberge M., Andersen R.J., Org. Lett. 2006, v.8 (17), p.3749-3752]. Соединения проявляют значительную цитотоксичность по отношению к опухолевым клеткам, а также обладают антиинвазивной активностью в тестах связывания: IC50 (доза, ингибирующая инвазию опухолевых клеток на 50%) соединений (II, III) составляет 1-50 мкг/мл (клетки рака груди MDA-MB-231) и 20-50 мкг/мл (клетки карциномы LS 174Т) [Diaz-Marrero A.R., Austin P., Van Soest R., Matainaho Т., Roskelley C.D., Roberge M., Andersen R.J., Org. Lett. 2006, v.8 (17), p.3749-3752]. Соединения (II, III) являются малодоступными метаболитами.

6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582

Активным противоопухолевым агентом является природный лабданоид пинусолид (IV). Это соединение является аналогом по свойствам заявляемых соединений. Пинусолид (IV) содержится в нейтральной части живицы кедра сибирского Pinus sibirica R.Mayr.

Антилейкемический и хемопривентивный потенциал пинусолида был изучен in vitro на клеточной линии лимфомы Беркитта BJAB. Было показано, что пинусолид не только снижает пролиферативную активность опухолевых клеток в относительно низких концентрациях, но и специфично индуцирует апоптоз у 70% клеток в концентрации 100 мкМ. Апоптоз клеток BJAB опосредован потерей потенциала митохондриальной мембраны. В сущности, пинусолид в концентрации 100 мкМ приводит к потере потенциала митохондриальной мембраны, указывая на то, что это соединение использует механизм митохондриального апоптоза в соответствующем сигнальном пути гибели клетки. Значительная индукция апоптоза пинусолидом (100 мкМ) наблюдалась также в эксперименте ex vivo. Фрагментация ДНК происходила как в первичных лимфобластных клетках, так и в лейкемических. Пинусолид ex vivo преодолевает антрациклиновую устойчивость первичных лимфобластов, полученных от пациентов с высоким риском ОЛЛ (острая лимфобластная лейкемия) и слабым ответом на химиотерапию [Е.Е.Shults, J.Velder, H.-G.Schmalz, S.V.Chernov, T.V.Rubalova, Y.V.Gatilov, G.Henze, G.A.Tolstikov, A.Prokop. // Bioorg. Med. Chem. Lett., 2006, v.16 (16), p.4228-4232; Koo K.A., Lee M.K., Kim S.H., Jeong E.J., Kim S.Y., Oh Т.Н., Kim Y.C. Pinusolide and 15-methoxypinusolidic acid attenuate the neurotoxic effect of staurosporine in primary cultures of rat cortical cells. // Br. J. Pharmacol., 2007, v.150 (1), p.65-71].

Авторы работы [Han B.H., Yang H.O., Kang Y.-H., Suh D.-Y., Go H.J., Song W.-J., Kim Y.Ch., Park M.K. In Vitro Platelet-Activating Factor Receptor Binding Inhibitory Activity of Pinusolide Derivatives: A Structure-Activity Study. // J. Med. Chem. 1998, v.41 (14), p.2626-2630] охарактеризовали пинусолид (IV) в качестве нового антагониста фактора агрегации тромбоцитов. В опытах с использованием тромбоцитов кролика было получено значение IC50 для агрегации тромбоцитов, вызванной ФАТ (фактор агрегации тромбоцитов) от 19 до 5 мкМ при снижении концентрации ФАТ от 500 до 5 нМ. ЕД50 in vivo составило 1.1 мг/кг для внутривенного введения и 69.0 мг/кг per os.

Пинусолид (2 мг/кг) также проявляет местное противовоспалительное действие в эксперименте на ухе мыши; активность соединения сравнима с гидрокортизоном [Koo K.A., Sung S.H., Kim Y.C. A New Neuroprotective Pinusolide Derivative from the Leaves of Biota orientalis II Chem. Pharm. Bull, 2002, v.50(6), p.834-836].

Основным недостаткам фармакологического действия пинусолида (IV) является его использование в значительных дозах (IC50 100 мкМ), однако в связи с селективностью фармакологического (антипролиферативного и апоптозиндуцирующего) эффекта, связанного с активацией каспазы-3 указанного эпоксилабданоида, получение его структурных аналогов представляет значительный интерес для создания противоопухолевых агентов с направленным действием на цикл деления клетки.

Аналогом по строению заявляемых соединений является азлактон 16-формилметилламбертианата (V), обладающий антиоксидантной, гепатопротекторной и гемостимулирующей активностью [Патент RU 2353620. Харитонов Ю.В., Шульц Э.Э., Сорокина И.В., Толстикова Т.Г., Баев Д.С., Жукова Н.А., Толстиков Г.А. (Z)-метил-16-(5-оксо-2-фенилоксазол-4-илиденметил)-15,16-эпокси-8(17),13(16),14-лабдатриен-18-оат, обладающий антиоксидантной, гепатопротекторной и гемостимулирующей активностью. Опубл. 27.04.2009, бюл. № 12; С.А. 2009, 150, P495008k].

6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582

Аналогом по свойствам заявляемых соединений [помимо природных меротерпеноидов (II, III) и лабданового дитерпеноида (IV)] является растительный тритерпеноид бетулиновая кислота (VI).

6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582

Описаны некоторые биологические эффекты агента (VI), включающие антивирусную, антипаразитарную, антибактериальную активности и в частности задержку роста опухолевых клеток [Eiznhamer D.A, Xu Z.Q. Betulinic acid: a promising anticancer candidate // I. Drugs, 2004, v.7 (4), p.359-373]. Противоопухолевая активность была показана на клеточной линии меланомы [Liu W.K., Но J.С., Cheung F.W., Liu В.P., Ye W.С, Che С.N. Apoptotic activity of betulinic acid derivatives on murine melanoma B16 cell line // Eur. J. Pharmacol. 2004, v.498(1-3), p.71-78], при головной и шейной плоскоклеточной карциномы [Eder-Czembirek С, Czembirek С, Erovic ВМ et al. Combination of betulinic acid with cisplatin-different cytotoxic effects in two head and neck cancer cell lines. // Oncol. Rep. 2005, v.14 (5), p.667-671], лейкемии [Ehrhardt H., Fulda S., Fuhrer M., Debatin K.M., Jeremias I. Betulinic acid-induced apoptosis in leukemia cells // Leukemia. 2004, v.18(8), p.1406-1412] и других опухолевых клеточных линий [Yun Y., Han S., Park E., Yim D., Lee C.K. Immunomodulatory activity of betulinic acid by producing proinflammatory cytokines and activation of macrophages // Arch. Pharm. Res. 2003, v.26(12), p.1087-1095].

В 2000 году бетулиновая кислота (VI) была включена в программу RAID (Rapid Access to Intervention Development) Национального института рака, как потенциальный противоопухолевый агент (http://dtp.nci.nih.gov/docs/small_mol/status_small_mol.html). В настоящее время препарат на основе бетулиновой кислоты проходит клинические исследования в США в качестве средства для лечения злокачественной меланомы (http://clinicaltrials.gov/show/NCT00346502).

Задачей изобретения, является создание новых средств, обладающих способностью подавлять рост опухолевых клеток человека, на основе доступного растительного метаболита ламбертиановой кислоты (VII).

Поставленная задача решается новыми химическими соединениями - 6-гидроксинафтохинонами лабданового типа, формулы (Ia-в), обладающими способностью к подавлению роста опухолевых клеток человека СЕМ-13, МТ-4 и U-937.

6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582

где R1=R2=Н(Ia); R1=Me, R2=H(Iб); R1=H, R 2=CO2Et (Iв).

Способ получения соединений (Ia-в) реализуется по показанной на схеме 1 последовательности превращений ламбертиановой кислоты (VII). Метилирование ламбертиановой кислоты (VII) дает метиловый эфир (VIIa), обработка которого p-толуолсульфокислотой в бензоле гладко приводит к 8(9),13(16),14-лабдатриену (VIII) (выход 89%) [Ю.В.Харитонов, Э.Э.Шульц, М.М.Шакиров, Г.А.Толстиков. Синтетические трансформации высших терпеноидов. XVII. Внутримолекулярная циклизация фурфуриламидов лабданового типа. Журнал органической химии. 2008, т.44 (4), с.521-528]. Формилирование соединения (VIII) в условиях реакции Вильсмайера-Хаака приводит к метиловому эфиру 16-формилфломизоиковой кислоты (IX) (выход 78%) [Миронов М.Е., Харитонов Ю.В., Шульц Э.Э., Шакиров М.М., Гатилов Ю.В., Толстиков Г.А. Синтетические трансформации высших терпеноидов. XXIII. Синтез изоиндолинонов на основе дитерпеноидов. Журнал органической химии. 2010, т.46 (12), с.1855-1867]. Альдольно-кротоновая конденсация терпеноидного альдегида (IX) с ацетоном протекает с образованием кетона (X) (выход 94%). Реакция кетона (X) с избытком триметилхлорсилана в ацетонитриле в присутствии безводных хлорида цинка и триэтиламина приводит к образованию (1-терпенил)-3-триметилсилоксибутадиена (XI) (выход 92%). При кипячении диена (XI) с бензохиноном (XIIa) бензоле присутствии L-пролина и хроматографировании продуктов реакции на силикагеле выделяют 8-замещенный 6-гидрокси-1,4-нафтохинон (Ia) (выход 70%).

Взаимодействие диена (XI) с 2-бром-6-метилбензохиноном (XIIб) при нагревании в бензоле в присутствии L-пролина протекает как последовательное циклоприсоединение и дегидробромирование и приводит к образованию 8-замещенного 6-гидрокси-2-метил-1,4-нафтохинона (I6) (выход 68%).

Соединение (Iв) синтезировали в три стадии из альдегида (IX). При конденсации терпенового альдегида (IX) с ацетоуксусным эфиром получают 4-терпенил-3-этоксикарбонил-3-бутен-2-оны в виде смеси (Z)- и (E)-изомеров (ХIIIа, ХIIIб) (выход 89%, соотношение ~1:1, по данным ЯМР спектра), которые легко разделяют колоночной хроматографией на силикагеле. Взаимодействие смеси изомерных кетонов (XIIIa, б) с триметилхлорсиланом в ацетонитриле в присутствии хлорида цинка и триэтиламина приводит к 2-этоксикарбонил-3-триметилсилоксибутадиен терпенового типа (XIV) (выход 96%). При взаимодейстии 2-этоксикарбонилзамещенного силоксидиена (XIV) с бензохиноном (XIIa) получают терпеноидный 6-гидрокси-7-этоксикарбонилнафтохинон (Iв) (35%).

Техническим результатом изобретения является создание новых производных лабданоидов (Ia-в), обладающих способностью к подавлению роста опухолевых клеток человека. Новые соединения получают путем химической модификации доступного растительного метаболита Pinus sibirica R.Mayr. - ламбертиановой кислоты (VII), которая легко выделяется из лесопромышленного продукта - кедровой живицы или из хвои кедра, являющейся многотоннажным отходом лесосеки [Т.Г.Толстикова, И.В.Сорокина, М.П.Долгих., Ю.В.Харитонов, С.В.Чернов, Э.Э.Шульц, Г.А.Толстиков. Нейротропная активность аддуктов ламбертиановой кислоты с N-замещенными малеинимидами. Химико-фармацевтический журнал. 2004, т.38 (10), с.13-15]. Физико-химические константы новых, впервые полученных соединений, приведены в примерах 1-3.

Биологическая активность соединений (Ia-в) изучалась путем определения способности к подавлению роста опухолевых клеток СЕМ-13, МТ-4 и U-937. Цитотоксическую активность устанавливали путем определения CCID50 - доза, ингибирующая жизнеспособность опухолевых клеток на 50%. Для определения CCID50 использовали стандартный МТТ тест, как описано в рекомендациях [Mosmann Т. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. // J Immunol Methods, 1983, v.16 (1), p.55-63; Wilson J.K., Sargent J.M., Elgie A.W., Hill J.G., Taylor C.G. A feasibility study of the MTT assay for chemosensitivity testing in ovarian malignancy // Br. J. Cancer, 1990, v.62 (2), p.189-194]. Результаты изучения цитотоксической активности приведены в табл.1.

Таблица 1
Цитотоксичность соединений (Ia-в)
СоединениеОпухолевые клетки СЕМ-13, CCID50, (мкМ) Опухолевые клетки U-937, CCID50, (мкМ) Опухолевые клетки МТ-4, CCID50, (мкМ)
(Ia) 3.4±1.15.8±0.8 4.3±1.4
(Iб) 12.2±1.64.4±1.9 6.6±2.5
(Iв) 7.5±0.99.2±0.8 15.1±1.3
Пинусолид (II) 9.2±0.02 34.1±0.849.1±0.8
Бетулиновая кислота (VI)4.3±0.8 6.1±1.4 11.6±2.2
Ламбертиановая кислота (VII) 69.143.2 92.1

Из данных таблицы 1 видно, что заявляемые соединения (Ia-в) обладают способностью подавлять рост опухолевых клеток человека. Наибольшей цитотоксической активностью обладает соединение (Ia). Цитотоксическая доза соединения (Ia) составляет 3.4 мкМ для клеток T-клеточных лейкозов СЕМ-13, 5.8 мкМ - для клеток моноцитов человека U-937 и 4.3 мкМ - для клеток Т-клеточной лейкемии МТ-4. Это соединение оказалось в 20 раз более активным ингибитором жизнеспособности опухолевых клеток СЕМ-13 и МТ-4, и в 8 раз более активным ингибитором жизнеспособности опухолевых клеток U-937, чем исходное ламбертиановая кислота (VII). Соединения (Ia-в) более активно, чем пинусолид, подавляют рост опухолевых клеток моноцитов человека U-937 (CCID50 =4.4-9.2 мкМ) и T-клеточной лейкемии (CCID50=4.3-15.1 мкМ). Соединения (Ia, б) в более низкой концентрации подавляют рост клеток лейкемии МТ-4, чем бетулоновая кислота (VI).

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Получение (1S,4aS,8aR)-Метил 5-{2-[2-(6-гидрокси-1,4-диоксо-1,4-дигидронафталин-8-ил)-фуран-3-ил]этил}-1,4а,6-триметил-1,2,3,4,4а,7,8,8а-октагидронафталин-1-карбоксилата (Ia).

1. (1S,4aR,5S,8aR)-Метил 5-[2-(фуран-3-ил)этил]-1,4а-диметил-6-метилендекагидро-нафталин-1-карбоксилат (метилламбертианат) (VIIa).

К раствору 2.5 г ламбертиановой кислоты (IV) в 50 мл этанола добавляют 1.99 г диметилсульфата и при перемешивании в течение 15 мин прикапывают раствор 2.2 г гидроокиси калия в 22 мл воды. Температура не должна превышать 40°C. Реакционную массу перемешивают 2 ч при комнатной температуре, затем добавляют 100 мл воды, продукт экстрагирируют хлористым метиленом (4×50 мл). Объединенный экстракт промывают 1%-ным водн. раствором NaOH (2×25 мл), водой (3×25 мл) и сушат сульфатом магния. Растворитель упаривают, в остатке получают 2.38 г (91%) метилового эфира ламбертиановой кислоты (VIIa) в виде масла. 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 (c 1.3, в хлороформе). Данные спектров ЯМР 1 H и 13C соответствуют приведенным в работе [Dauben W.G., German V.F. The structure of lambertianic acid. A new diterpenic acid. // Tetrahedron. 1966, v.22 (2), p.679-683].

2. (1S,10S)-Метил-5-[2-(фуран-3-ил)этил]-1,6,10-триметил-1,2,3,4,5,6,9,10-окта гидронафталин-1-карбоксилат (метил-15,16-эпокси-8(9),13(16),14-лабдатриен-18-оат) (VIII).

К раствору 1.00 г (3.02 ммоль) метилового эфира ламбертиановой кислоты (VIIa) в 10 мл бензола добавляют 0.01 г (0.06 ммоль) безв. p-толуолсульфокислоты. Реакционную смесь кипятят 2 ч, растворитель выпаривают в вакууме, остаток хроматографируют на колонке с силикагелем (элюент - петролейный эфир). Получают 0.89 г (89%) соединения (VIII) в виде масла. [6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ]580+23.4 (c 3.1, EtOH). Данные спектров ЯМР 1H и 13C соответствуют приведенным в работе [Ю.В.Харитонов, Э.Э.Шульц, М.М.Шакиров, Г.А.Толстиков. Синтетические трансформации высших терпеноидов. XVII. Внутримолекулярная циклизация фурфуриламидов лабданового типа. Журнал органической химии. 2008, т.44 (4), с.521-528].

3. (1S,4aS,8aR)-Метил 5-[2-(2-формилфуран-3-ил)этил]-1,4а,6-триметил-1,2,3,4,4а,7,8,8а-октагидронафталин-1-карбоксилат (Метил 16-формил-8(9),13(16),14-лабдатриеноат) (IX).

К перемешиваемому раствору 8.80 г (26.7 ммоль) дитерпеноида (VIII) в 40 мл ДМФА добавляют по каплям 4.80 мл (52.5 ммоль) POCl 3 (температура 20°C). Реакционную массу выдерживают при периодическом перемешивании 48 ч, затем выливают на 70 мл ледяной воды. К полученной смеси добавляют 20 мл насыщенного водного раствора NaOAc, образовавшийся органический слой отделяют, водный слой экстрагируют эфиром. Объединенные экстракты промывают 5%-ным водным раствором соды и высушивают над MgSO4 . Растворитель упаривают в вакууме, остаток хроматографируют на Al2O3 (20:1, петролейный эфир-эфир, 4:1). Фракции, содержащие продукт, кристаллизуют из гексана, получают 7.48 г (78%) метил 16-формил-8(9),13(16),14-лабдатриеноата (IX). Т.пл. 55-58°C. 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 (с 0.55, CHCl3). Данные спектров ЯМР 1 H и 13C соответствуют приведенным в работе [Миронов М.Е., Харитонов Ю.В., Шульц Э.Э., Шакиров М.М., Гатилов Ю.В., Толстиков Г.А. Синтетические трансформации высших терпеноидов. XXIII. Синтез изоиндолинонов на основе дитерпеноидов. Журнал органической химии. 2010, т.46 (12), с.1855-1867].

4. (1S,4aS,8aR,E)-Метил 1,4а,6-триметил-5-{2-[2-(3-оксобут-1-енил)фуран-3-ил]этил}-1,2,3,4,4а,7,8,8а-октагидронафталин-1-карбоксилат (X).

К раствору 5.0 г (14 ммоль) терпенового альдегида (IX) в 25 мл ацетона при интенсивном перемешивании прибавляют 0.28 г NaOH (7 ммоль) в 8.0 мл H2O. Реакционную смесь перемешивают 5 ч при комнатной температуре, затем упаривают. К остатку добавляют 50 мл хлористого метилена и 5 мл 10%-ного водного раствора HCl. Слои разделяют, органический слой промывают дистиллированной водой до pH 7, сушат над MgSO4, упаривают в вакууме, остаток хроматографируют на силикагеле (элюент-петролейный эфир-диэтиловый эфир, 4:1). Выделяют 5.25 г (94%) соединения (X) в виде масла, 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 (c 0.34, CHCl3). ИК спектр, 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 , см-1: 3141, 3112, 2952, 1722, 1680, 1664, 1612, 1564, 1464, 1439, 1376, 1361, 1235, 1191, 1162, 1142, 1097, 1039, 970, 893, 825, 794, 756. УФ спектр (EtOH), 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 макс, нм (lg6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ): 202 (4.08), 330 (3.86). Спектр ЯМР 1H, 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 , м.д. (J, Гц): 0.75 с (3H, C20H3 ) 1.00 т.д (1H, Н3, J 13.5, 4.5), 1.19 с (3H, С 19Н3), 1.22 м (1H, Hl), 1.30 д.д (1H, Н5, J 12.5, 1.8), 1.51 м (1Н, Н2), 1.62 с (3H, С17Н3), 1.72 м (1H, H6 ), 1.81-1.92 м (3H, H1,2,6), 1.96 м (2Н, Н7 ), 2.08 м (2Н, H11), 2.18 д.м (1H, Н3, Jгем 13.5), 2.28 с (3H, С4'H3 ), 2.53 м (2Н, H12), 3.60 с (3H, OCH3), 6.38 д (1H, H14, J 1.5), 6.55 д (1H, Н1' , J 15.8), 7.30 д (1H, Н2', J 15.8), 7.39 д (1H, Н15, J 1.5). Спектр ЯМР 13С, 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 , м.д.: 17.33 к (С20), 19.13 т (C2 ), 19.43 к (С17), 20.33 т (С6), 25.32 т (С12), 27.63 к (С4'), 27.97 к (С 19), 28.62 т (C11), 36.84 т (С7), 36.88 т (С1), 37.21 т (С3), 39.14 с (С 10), 43.43 с (С4), 50.64 к (OCH3), 53.00 д (С5), 112.95 д (С14), 122.09 д (С2'), 126.71 д (С1'), 127.53 с (С8), 131.79 с (С13), 137.77 с (С9 ), 144.06 д (С15), 145.98 с (С16), 177.53 с (C18), 197.21 с (С3'). Масс-спектр, m/z (Iотн., %): 398 (0.6), 358 (0.3), 339 (0.9), 283 (0.6), 265 (0.8), 249 (7), 189 (26), 150 (100), 133 (13), 108 (30), 83 (24), 59 (24). Найдено: m/z 398.2444 [М]+ . С25Н35О4. Вычислено: M 398.2452.

5. (1S,4aR,8aR,E)-Метил 1,4а,6,8а-триметил-5-(2-{2-[3-(триметилсилокси)бута-1,3-диенил]фуран-3-ил}этил)-1,2,3,4,4а,7,8,8а-октагидронафталин-1-карбоксилат (XI).

К перемешиваемой суспензии 0.27 г (2 ммоль) безводного хлористого цинка и 5 мл (36 ммоль) триэтиламина при нагревании до 60°C в токе аргона последовательно прибавляют раствор 3.98 г (10 ммоль) кетона (X) в 40 мл ацетонитрила и 3.8 мл (30 ммоль) триметилхлорсилана. Реакционную массу перемешивают 2 ч (температура масляной бани 90-100°C), затем добавляют 2 мл триэтиламина и 1 мл триметилхлорсилана и продолжают нагревание еще 3 ч. После охлаждения добавляют 50 мл безводного диэтилового эфира, в токе аргона отфильтровывают образовавшийся осадок. Маточный раствор упаривают в вакууме водоструйного насоса, остаток аналогично обрабатывают 50 мл безводного диэтилового эфира. Маслообразное соединение подвергают очистке путем перколирования через слой дезактивированного силикагеля (масса силикагеля 6 г, диаметр колонки 3 см, элюент - безводный диэтиловый эфир). После упаривания получают соединение (XI) (выход 92%), в виде светло-коричневого маслообразного вещества, устойчивого в атмосфере аргона. Спектр ЯМР 1H, 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 , м.д. (J, Гц): 0.23 с (9Н, OSi(CH3)3 ), 0.75 с (3H, C20H3), 1.01 т.д (1Н, Н 3, J 13.4, 4.0), 1.19 с (3H, С19Н3 ), 1.23 м (1Н, Н1), 1.33 м (1H, Н5), 1.53 м (1H, Н2, Jгем 13.6), 1.66 с (3H, С 17Н3), 1.70-2.12 м (7Н, H1,2,3,6,6,7,7 ), 2.20 м (2H, H11), 2.45 м (2H, H12), 3.61 с (3H, OCH3); 4.36 c, 4.41 с (2H, H4' ), 6.28 д (1H, H14, J 1.5), 6.45 д, 6.60 д (2Н, Н 1',2', J 15.8), 7.27 д (1H, H15, J 1.5). Спектр ЯМР 13С, 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 , м.д.: 0.15 к ((CH3)3OSi), 17.69 к (С20), 19.60 т (С2), 19.89 к (С 17), 20.81 т (С6), 25.68 т (С12), 28.42 к (С19), 29.61 т (С11), 34.29 т (С 7), 37.18 т (С1), 37.70 т (С3), 39.59 с (С10), 43.87 с (С4), 51.09 к (ОСН 3), 53.49 д (С5), 96.48 т (С4' ), 112.66, (С14), 115.02 д (С1'), 123.37 д (С2'), 124.65 с (C13), 127.49 с (С 8), 138.65 с (С9), 141.73 д (С15), 147.95 с (С16), 154.91 с (С3'), 178.06 с (С18).

6. (1S,4aS,8aR)-Метил 5-{2-[2-(6-гидрокси-1,4-диоксо-1,4-дигидронафталин-8-ил)-фуран-3-ил]этил}-1,4а,6-триметил-1,2,3,4,4а,7,8,8а-октагидронафталин-1-карбоксилат (Iа).

К раствору 1.9 г (4 ммоль) диена (XI) в 20 мл бензола в токе аргона добавляют 0.39 г (3.6 ммоля) бензохинона (XIIa) (предварительно возгоняют) и 0.041 г (0.36 ммоль) L-пролина. Реакционную смесь кипятят 12 ч, растворитель удаляют в вакууме, остаток растворяют в 50 мл хлористого метилена, раствор промывают дистиллированной водой (3×20 мл), сушат MgSO4 , затем упаривают. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем, последовательно выделяют кетон (X) (элюент-петролейный эфир-диэтиловый эфир 4:1) и соединение (Ia) (элюент-хлороформ-метанол 100:1), которое очищают кристаллизацией из эфира. Выход 1.42 г (70%). Т.пл. 125-127°C. 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 (с 0.02, CHCl3). ИК-спектр, см-1 : 3430, 2952, 1724, 1697, 1668, 1595, 1576, 1500, 1455, 1419, 1332, 1279, 1230, 1208, 1194, 1162, 1141, 1086, 1060, 1045, 981, 892, 848, 810, 756. УФ спектр (EtOH), 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 макс, нм (lg6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ): 201 (4.55), 244 (4.07), 366 (3.46). Спектр ЯМР 1H, 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 , м.д. (J, Гц): 0.69 с (3H, С20Н3 ), 0.94 т.д (1H, Н3, J 13.4, 4.3), 1.05 т.д (1Н, Н 1, J 12.9, 4.0), 1.17 с (3H, С19Н3 ), 1.22-1.27 м (1H, Н5), 1.41 д (1Н, H2 , J 13.7), 1.48 с (3H, С17Н3), 1.63-1.75 м (3H, Н1,2,6), 1.79-2.02 м (3H, Н6,7,7 ), 2.11-2.22 м (3H, Н3,11,11), 2.30-2.36 м (2Н, H 12), 3.62 с (3H, ОСН3), 6.46 д (1H, H14 , J 1.6), 6.80 д (1H, H2', J 10.0), 6.87 д (1H, Н36-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 , J 10.0), 7.14 д (1H, Н76-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 , J 2.5), 7.43 д (1Н, H15, J 1.6), 7.62 д (1Н, H56-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 , J 2.5), 8.01 уш.с (1H, OH). Спектр ЯМР 13 C, 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 , м.д.: 17.56 к (С20), 19.38 т (С2 ), 19.49 к (С17), 20.66 т (C6), 25.73 т (C12), 28.26 к (C19), 29.09 т (C11 ), 34.11 т (С7), 37.00 т (С1), 37.51 т (С3), 39.38 с (С10), 43.80 с (C4 ), 51.15 к (OCH3), 53.32 д (С5), 111.89 д (С14), 113.54 д (С56-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 122.15 с (С13), 123.62 с (С86-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 a), 124.39 д (С76-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 127.48 с (С8), 133.90 с (С86-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 135.45 с (С46-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 a), 136.25 д (С36-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 138.44 с (С9), 140.44 д (С26-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 141.52 д (C15), 147.04 с (С16 ), 160.22 с (С66-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 178.52 с (С18), 183.22 с (С16-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 185.16 с (С46-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ). Масс-спектр, m/z (Iотн., %): 499.3 (6.02), 91.1 (100), 249.1 (72.78), 250.2 (23.16), 43.0 (20.98). Найдено: m/z 502.2344 [M]+. C31H34 O6. Вычислено: M 502.2350.

Пример 2. Получение (1S,4aS,8aR)-Метил 5-{2-[2-(6-гидрокси-2-метил-1,4-диоксо-1,4-дигидронафталин-8-ил)фуран-3-ил]этил}-1,4а,6-триметил-1,2,3,4,4а,7,8,8а-октагидронафталин-1-карбоксилата (Iб).

Стадии 1-5 выполняются по методикам, приведенным в описании примера 1.

6. 1S,4aS,8aR)-Метил 5-{2-[2-(6-гидрокси-2-метил-1,4-диоксо-1,4-дигидронафталин-8-ил)фуран-3-ил]этил}-1,4а,6-триметил-1,2,3,4,4а,7,8,8а-октагидронафталин-1-карбоксилат (I6).

К раствору 1.9 г (4 ммоль) диена (XI) в 20 мл бензола в токе аргона добавляют 0.72 г (3.6 ммоля) 2-бром-6-метилбензохинона (ХIIб) (предварительно возгоняют) и 0.041 г (0.36 ммоль) L-пролина. Реакционную смесь кипятят 12 ч, растворитель удаляют в вакууме, остаток растворяют в 50 мл хлористого метилена, раствор промывают дистиллированной водой (3×20 мл), сушат MgSO4 , затем упаривают. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем, последовательно выделяют кетон (X) (элюент-петролейный эфир-диэтиловый эфир 4:1) и соединение (I6) (элюент-хлороформ-метанол 100:1), которое очищают дополнительной перекристаллизацией из эфира. Получают 1.26 г (68%) соединения (I6). Т.пл. 162-164°C. 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 (c 0.27, CHCl3). ИК спектр, см-1 : 3424, 2957, 2928, 2874,1725,1680, 1665, 1597, 1570, 1500, 1480, 1376, 1331, 1254, 1238, 1208, 1172, 1154, 1139, 1091, 956, 943, 890, 874, 744, 604. УФ спектр (EtOH), 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 макс., нм (lg6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ): 201 (4.31), 267 (3.97), 361 (2.80), 372 (2.77). Спектр ЯМР 1H, 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 , м.д. (J, Гц): 0.66 с (3H, C20H3 ), 0.91 т.д (1H, H3, J 13.6, 4.7), 1.00 т.д (1Н, Н 1, J 14.3, 5.4), 1.14 c (3H, С19Н3 ), 1.23 м (1H, H5), 1.38 м (1H, Н2), 1.44 с (3H, С17Н3), 1.56-1.74 м (4Н, H1,2,6,6 ), 1.83-2.01 м (3H, H7,7,11), 2.07 с (CH3 ) 2.11-2.19 м (2Н, H3,11), 2.32 м (2Н, H12 ), 3.59 с (3H, ОСН3), 6.44 д (1H, H14, J 1.7), 6.73 д (1Н, Н26-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 , J 1.6), 7.08 д (1H, Н76-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 , J 2.6), 7.43 д (1Н, Н15, J 1.7), 7.59 д (1H, Н56-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 , J 2.6), 8.01 уш.с (1Н, OH). Спектр ЯМР 13 С, 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 , м.д.: 16.79 к (СН3), 17.51 к (С20 ), 19.34 т (С2), 19.45 к (С17), 20.64 т (С6), 25.68 т (С12), 28.24 к (С19 ), 29.10 т (С11), 34.10 т (С7), 36.96 т (С1), 37.50 т (С3), 39.36 с (С10 ), 43.77 с (С4), 51.11 к (ОСН3), 53.30 д (С5), 111.80 д (C14), 113.30 д (С 56-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 121.68 с (С13), 123.92 с (С86-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 а), 124.33 д (С76-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 127.19 с (С8), 133.53 д (С36-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 133.89 с (С86-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 135.76 с (С4'а), 138.46 с (С 9), 141.34 д (С15), 147.46 с (С16 ), 150.08 с (С26-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 160.15 с (С66-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 178.44 с (С18), 183.55 с (С16-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 185.18 с (C46-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ). Масс-спектр, m/z (Iотн., %): 516.3 (14.58), 57.0 (100), 42.9 (80.84), 55.0 (70.68), 71.0 (66.62). Найдено: m/z 516.2505 [M]+. C32H36 O6. Вычислено: М 516.2506.

Пример 3. Получение (1S,4aR,5S,8aR)-Метил-5-(2-{2-[5-(хлорметил)-1,2,4-оксадиазол-3-ил]-фуран-3-ил}этил)-1,4а-диметил-6-метилендекагидронафталин-1-карбоксилата (Iв).

Стадии 1-3 выполняются по методикам, приведенным в описании примера 1.

4. (1S,4aS,8aR,Z)- и (1S,4aS,8aR,E)-Метил 5-{2-[2-(2-этоксикарбонил-3-оксобут-1-енил)фуран-3-ил]этил}-1,4а,6-триметил-1,2,3,4,4а,7,8,8а-октагидронафталин-1-карбоксилаты (XIIIa, б).

а. К раствору 4.0 г (11.2 ммоль) альдегида (IX) в 40 мл бензола добавляли 2.13 мл ацетоуксусного эфира (16.7 ммоль), 0.22 мл пиперидина (2.2 ммоль), 0.50 мл уксусной кислоты (8.8 ммоль), 0.015 г молекулярных сит 3Å и 0.13 г (1.10 ммоль) L-пролина. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником 8 ч (контроль ТСХ), упаривают досуха, остаток растворяют в 50 мл хлористого метилена, промывают водой (3×10 мл), органический слой сушат MgSO4. Остаток после упаривания хроматографируют на силикагеле (элюент петролейный эфир-диэтиловый эфир, 4:1). Получают 4.77 г (90%) смеси соединений (XIIa, б).

Соединения (XIIIa, б) разделяют колоночной хроматографией на силикагеле (элюенты-гексан для (Z)- и гексан-этиэтиловый эфир, 5:1 - для (E)-изомера).

(Z)-изомер (XIIIa): 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 (с 0.55, CHCl3). ИК-спектр, см-1 : 557, 669, 694, 758, 799, 870, 897, 920, 984, 1038, 1090, 1165, 1202, 1231, 1340, 1375, 1431, 1466,1555, 1620, 1661, 1724, 2883, 2953, 3142, 3431. Спектр ЯМР 1Н, 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 , м.д. (J, Гц): 0.74 с (3H, С20Н3 ), 1.01 т.д (1Н, Н3, J 13.3, 4.4), 1.19 с (3H, С 19Н3), 1.22 т.д (1H, Н1, J 13.9, 3.4), 1.31 м (1H, H5), 1.35 т (3H, CO2CH 2CH3, J 7.2), 1.54 м (1Н, Н2 ), 1.62 с (3Н, С17Н3), 1.70 к.д (1Н, H 6, J 12.7, 5.8), 1.81 д.т (1H, Н1, J 13.5, 3.5), 1.85 м (1Н, Н2), 1.93 м (2Н, Н6,7), 2.00-2.08 м (2Н, Н7,11), 2.21 м (2Н, Н3,11), 2.32 с (3H, С46-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 Н3), 2.55 м (2Н, Н12,12), 3.61 с (3H, OCH3), 4.38 к (2Н, CO2CH 2CH3, J 7.2), 6.41 д (1Н, H14, J 1.9), 7.29 с (1H, Н16-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 7.42 д (1H, Н15, J 1.7). Спектр ЯМР 13C, 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 , м.д.: 14.04 к (CO2CH2CH 3), 17.65 к (С20), 19.45 т (С2), 19.77 к (C17), 20.64 т (С6), 25.87 т (С 12), 26.32 к (С46-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 28.30 к (С19), 29.06 т (С11 ), 34.14 т (С7), 37.21 т (C1), 37.51 т (С3), 39.47 с (С10), 43.75 с (С4 ), 51.01 к (OCH3), 53.29 д (С5), 61.42 т (CO2CH2CH3), 113.47 д (C14), 123.47 д (С16-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 128.09 с (С8), 128.13 с (С36-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 135.68 с (С13), 137.85 с (С9 ), 144.61 с (С16), 145.87 д (С15), 168.02 с (CO2CH2CH3), 177.86 с (С18), 193.48 с (С26-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ). Масс-спектр, m/z (Iотн., %): 470.3 (1.03), 176.1 (100.00), 221.1 (84.69), 201.7 (72.95), 189.2 (34.48), 161.0 (28.95). Найдено: m/z 470.2655 [M]+. C28 H38O6. Вычислено: M 470.2663.

(E)-изомер (XIIIб): 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 (с 0.55, CHCl3). ИК-спектр, см-1 : 598, 669, 696, 756, 872, 986, 1036, 1094, 1186, 1232, 1331, 1371, 1447, 1462, 1562, 1622, 1720, 2883, 2953, 3144, 3429. Спектр ЯМР 1H, 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 , м.д. (J, Гц): 0.74 с (3H, С20Н3 ), 1.01 т.д (1H, Н3, J 13.3, 4.3), 1.18 с (3H, С 19Н3), 1.21 м (1H, Н1), 1.28 т (3H, CO2CH2CH3, J 7.0), 1.32 м (1H, Н5), 1.54 м (1H, Н2), 1.62 с (3H, С17Н3), 1.70 к.д (1H, H6, J 12.5, 5.7), 1.80 т.д (1H, Н1, J 13.6, 3.5), 1.85 м (1H, Н2), 1.94 м (2Н, Н6,7), 1.99-2.08 м (2Н, Н7,11), 2.18 м (2Н, Н3,11), 2.45 с (3H, С46-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 Н3), 2.54 м (2Н, Н12,12), 3.60 с (3H, OCH3), 4.23 к (2Н, CO2CH 2CH3, J 7.2), 6.37 д (1H, H14, J 1.8), 7.32 с (1H, Н16-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 7.39 д (1H, Н15, J 1.6). Спектр ЯМР 13С, 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 , м.д.: 14.05 к (CO2CH2CH 3), 17.62 к (С20), 19.44 т (С2), 19.78 к (С17), 20.64 т (С6), 25.73 т (С 12), 28.28 к (С19), 29.04 т (С11), 31.13 к (С46-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 34.16 т (С7), 37.16 т (С1 ), 37.52 т (С3), 39.45 с (С10), 43.74 с (C4), 50.08 к (OCH3), 53.28 д (С5 ), 61.13 т (CO2CH2CH3 ), 113.18 д (С14), 123.12 д (С16-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 127.99 с (C8), 127.81 с (С36-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 133.87 с (С13), 137.94 с (С9 ), 144.80 с (С16), 145.51 д (С15), 164.60 с (CO2CH2CH3), 177.88 с (С18), 202.60 с (С26-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ). Масс-спектр, m/z (Iотн., %): 470.3 (1.93), 176.1 (100), 222.1 (66.77), 207.1 (60.49), 264 (48.11), 189.2 (48.11). Найдено: m/z 470.2636 [M]+. C28 H38O6. Вычислено: M 470.2663.

5. (1S,4aS,8aR)-Метил 5-(2-{2-[2-(этоксикарбонил)-3-(триметилсилокси)бута-1,3-диенил]фуран-3-ил}этил)-1,4а,6-триметил-1,2,3,4,4а,7,8,8а-октагидронафталин-1-карбоксилат (XIV).

К перемешиваемой суспензии 0.27 г (2 ммоль) безводного хлористого цинка и 5 мл (36 ммоль) триэтиламина при нагревании до 60°C в токе аргона последовательно прибавляют раствор 4.7 г (10 ммоль) смеси кетонов (XIIIa, б) в 60 мл ацетонитрила и 3.8 мл (30 ммоль) триметилхлорсилана. Реакционную массу перемешивают 2 ч (температура масляной бани 80-90°C), затем добавляют 2 мл триэтиламина и 1 мл триметилхлорсилана и продолжают нагревание еще 3 ч. После охлаждения добавляют 50 мл безводного диэтилового эфира, в токе аргона отфильтровывают образовавшийся осадок. Маточный раствор упаривают в вакууме водоструйного насоса, остаток аналогично обрабатывают 50 мл безводного диэтилового эфира. Маслообразное соединение подвергают очистке путем перколирования через слой дезактивированного силикагеля (масса силикагеля 6 г, диаметр колонки 3 см, элюент - безводный диэтиловый эфир). После упаривания получают 4.66 г (86%) диена (XIV) в виде светло-коричневого масла. Спектр ЯМР 1H, 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 , м.д. (J, Гц): 0.25 с [9Н, OSi(CH3)3 ], 0.74 с (3H, С20Н3), 1.01 м (1H, Н 3), 1.19 с (3H, С19Н3), 1.26 м (2Н, Н1,5), 1.33 т (3H, CO2CH2C H3, J 7.1), 1.57 м (1H, Н2), 1.64 с (3H, С17Н3), 1.67-2.07 м (7Н, Н1,2,3,6,6,7,7 ), 2.20 м (2Н, Н11), 2.46 м (2Н, Н12), 3.61 с (3Н, OCH3), 4.35 к (2Н, CO2CH 2CH3, J 7.1), 4.41 с (2Н, H46-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 6.30 д (1H, Н14, J 1.8), 6.71 с (1H, Н16-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 7,28 д (1H, Н15, J 1.8). Спектр ЯМР 13C, 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 , м.д.: 0.18 к (OSi(CH3)3), 14.15, 14.39 к (CO2CH2CH3 ), 17.72 к (С20), 19.58 т (С2), 20.68 к (С17), 20.79 т (С6), 25.84, 25.98 т (С 12), 28.41 к (С19), 29.17, 29.44 т (С11 ), 34.28 т (С7), 37.20 т (С1), 37.66 т (С3), 39.59 с (С10), 43.74 с (С4 ), 51.09 к (OCH3), 53.48 д (С5), 59.28, 61.26 т (CO2CH2CH3), 94.34 т (C46-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 112.59 д (С14), 113.58 д (С16-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 127.65, 127.90 с (С13), 128.20, 128.41 с (С8), 135.78 с (С26-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 137.97, 138.49 с (С9), 143.22 д (С 15), 145.86 с (С16), 152.24 с (С36-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 167.98, 169.61 с (CO2CH 2CH3), 178.02 с (С18).

6. (1S,4aS,8aR)-Метил 5-{2-[2-(6-гидрокси-7-этоксикарбонил-1,4-диоксо-1,4-дигидронафталин-8-ил)фуран-3-ил]этил}-1,4а,6-триметил-1,2,3,4,4а,7,8,8а-октагидронафталин-1-карбоксилат (Iв).

К раствору 2.17 г (4 ммоль) диена (XIV) в 20 мл бензола в токе аргона добавляют 0.38 г (3.3 ммоль) бензохинона (XIIa) (предварительно возгоняют) и 0.04 г (0.36 ммоль) L-пролина. Реакционную смесь нагревают до кипения и выдерживают 12 ч, затем растворитель удаляют в вакууме, остаток растворяют в 50 мл хлористого метилена, промывают дистиллированной водой (3×20 мл), сушат MgSO4, затем упаривают. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелем, последовательно выделяют 0.33 г (15%) непрореагировавшего диена (XIV), 0.52 г смеси кетонов (XIIIa, б) (элюент-петролейный эфир-диэтиловый эфир 4:1) и 1.2 г фракций, содержащих продукт реакции (элюенты-хлороформ, хлороформ-метанол 100:1). Последующей хроматографией фракций, содержащих продукт, и перекристаллизацией из эфира получают 0.82 г (35%) терпеноидного 6-гидрокси-7-этоксикарбонилнафтохинона (Iв). Т.пл. 51-54°C. 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 (с 0.45, CHCl3). ИК спектр, 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 , см-1: 3334, 2956, 2925, 2854, 1724, 1671, 1615, 1573, 1508, 1462, 1440, 1375, 1342, 1271, 1236, 1190, 1155, 1139, 1106, 1090,1041, 1015, 984, 900, 850, 810, 756. УФ спектр (EtOH), 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 макс., нм (lg6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ): 203 (4.41), 256 (4.06), 307 (3.53), 503 (2.49). Спектр ЯМР 1H, 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 , м.д. (J, Гц): 0.59, 0.61 с (3H, С20Н3 ), 0.85 т (3H, CO2CH2CH3 , J 7.1), 0.81 м (1H, Н3), 0.93 м (1Н, Н1 ), 1.05 т (3H, CO2CH2CH3 , J 7.1), 1.11, 1.12 с (3H, С19Н3), 1.16 м (1Н, Н5), 1.36, 1.42 с (3H, С17Н 3), 1.53 д.м (1H, Н2, Jгем 12.6), 1.61 м (1Н, H6), 1.65-1.86 м (3H, Н2,6,11 ), 1.89-1.93 м (3H, Н7,11), 1.98-2.08 м (H, Н 3,7,12) 2.12 д.д (1H, Н12, J 13.6, 2.8), 3.57 с (3H, OCH3), 4.12 к (2Н, CO2CH 2CH3, J 7.1), 6.41 д (1H, H14, J 1.6), 6.79 д (1Н, Н26-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 , J 9.2), 6.89 д (1Н, Н36-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 , J 9.2), 7.48 д (1H, Н15, J 1.6), 7.78 с (1H, H56-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 11.27 с, 11.29 с (1H, OH). Спектр ЯМР 13 С, 6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 , м.д.: 13.48, 13.95 к (CO2CH2 CH3), 17.45, 17.46 к (С20), 19.11, 19.22 к (С17), 19.36 т (С2), 20.57 т (С 6), 25.39, 25.46 т (С12), 28.22, 28.24 к (С 19), 28.53, 28.66 т (С11), 34.01 т (С7 ), 36.78 т, 36.89 т (С1), 37.43 т (С3), 39.30 с (C10), 43.66 с (С4), 50.93 к (OCH 3), 53.21 д, 53.25 д (С5), 62.46 т (С Н2), 111.69, 111.75 д (С14), 117.25 д (C 56-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 121.16 с (С13), 124.02 с (С76-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 127.11 с (C8), 134.31 с (С86-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 136.33 д (С36-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 136.84 с (С46-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 а), 138.28 с (C9), 140.81, 140.82 д (С 15), 141.21 д (С26-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 144.20 с (С16), 164.13 с (С66-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 169.55 с (CO2CH2CH 3), 177.82 с (C18), 182.43 с (С16-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ), 183.79 с (С46-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582 ). Масс-спектр. Найдено: m/z 574.2563 [M]+ . C34H38O8. Вычислено: M 574.2561.

Пример 4. Исследование активности соединений формулы (Ia-в)

В работе использовали линии опухолевых клеток человека МТ-4, СЕМ-13 (клетки T-клеточных лейкозов человека) и U-937 (клетки моноцитов человека). Клетки культивировали в среде RPMI-1640, содержащей 10% сыворотки крови эмбрионов крупного рогатого скота, 2 ммоль/л L-глутамина, 80 мкг/мл гентамицина и 30 мг/мл линкомицина, при температуре 37°C в CO2 инкубаторе. Исследуемые вещества, растворяли в ДМСО и добавляли к клеточной культуре в необходимых концентрациях. Использовали по 3 лунки на каждую концентрацию. Для эксперимента использовали клетки на 3 сутки культивирования после оценки морфологии, подсчета концентрации и жизнеспособности клеток. Клетки СЕМ-13, U-937 или МТ-4 помещали в лунки 96-луночного планшета («Cel-Cult», Англия) по 100 мкл в лунку, в посевной концентрации 0.5×10 6 клеток в мл. Исследуемые вещества добавляли к клеткам, получая конечные концентрации 0.01-1000 мкМ, используя по 3 лунки на каждую концентрацию. Клетки, инкубируемые в тех же условиях без добавления препаратов, являлись контрольными. Клетки культивировали 72 часа. Водный раствор МТТ (5 мг/мл) профильтровывали через 0.22 мкм фильтр («Flow laboratories», Англия), добавляли в каждую исследуемую культуру в соотношении 1:10 к ее объему, смесь инкубировали 3-4 часа при температуре 37°C в CO 2 инкубаторе. По окончании инкубации супернатант осторожно удаляли, затем в каждую анализируемую лунку добавляли по 100 мкл ДМСО. Осадок ресуспендировали и 30 мин инкубировали в темноте при комнатной температуре до полного растворения кристаллов формазана.

Оптическую плотность (OD) образцов измеряли на мультилуночном спектрофотометре BioRad 680 (США) при длине волны, равной 490 нм. Процент ингибирования роста клеток определяли по формуле 100 - (среднее значение OD в опыте/среднее значение OD в контроле)×100. Полученное значение для контрольного триплета (первые три лунки без добавления соединений, параллельных для каждого исследуемого экспериментального агента) принималось за 100%. Рассчитывали среднее значение и ошибку среднего для каждой концентрации анализируемого соединения. По результатам строили диаграмму зависимости жизнеспособности клеток (%) от концентрации исследуемого цитотоксического вещества, определяли дозу, на 50% ингибирующую жизнеспособность клеток (CCID50), а также стандартную ошибку (SE) показателя ЦД50.

Соединение (Ia) ингибирует рост опухолевых клеток человека СЕМ-13, U-937 и МТ-4 в концентрациях 3.4, 5.8 и 4.3 мкМ соответственно. Цитотоксическая активность этого соединения проявляется в более низких дозах по сравнению с цитотоксичностью аналога по свойствам пинусолида (IV). Дозы, ингибирующие жизнеспособность опухолевых клеток на 50%, для соединения (IV) в этих же условиях составляют 9.2, 34.1 и 49.1 мкМ.

Соединение (Iб) проявляет свой цитотоксический эффект в концентрациях 12.2, 4.4 и 6.6 мкМ соответственно, эффективные дозы этого соединения для клеток СЕМ-13 и МТ-4 практически одинаковы с эффективными концентрациями пинусолида (II). При этом соединение (16) ингибирует рост клеток моноцитов человека U-937 в 2.3 раза меньшей дозе, чем пинусолид (II).

Соединение (Iв) подавляет рост опухолевых клеток человека СЕМ-13, U-937 и МТ-4 в концентрациях 7.5, 9.2 и 15.1 мкМ соответственно.

Соединение (Ia) является наиболее активным цитотоксическим агентом.

Таким образом, заявляемое изобретение обладает следующими преимуществами, а именно:

- новые соединения формулы (Ia-в) обладают способностью ингибировать рост опухолевых клеток человека в микромолярных концентрациях;

- заявляемые соединения (Ia-в) синтезируются из доступного растительного сырья - хвои или живицы кедра сибирского.

6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

6-Гидроксинафтохиноны лабданового типа формулы (Ia-в)

6-гидроксинафтохиноны лабданового типа, обладающие цитотоксической   активностью по отношению к опухолевым клеткам человека, патент № 2479582

где R1=R2=H(Ia); R 1=Me, R2=H (Iб); R1=H, R2 =CO2Et (Iв),

обладающие цитотоксической активностью по отношению к опухолевым клеткам человека.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2479582

patent-2479582.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс C07D307/40 радикалы, замещенные атомами кислорода

Класс A61K31/341  не конденсированные с другим кольцом, например ранитидин, фуросемид, буфетолол, мускарин

Патенты РФ в классе A61K31/341:
композиции для лечения гастроэзофагеальной рефлюксной болезни (гэрб) -  патент 2524639 (27.07.2014)
халконы в качестве усилителей антимикробных средств -  патент 2521252 (27.06.2014)
способ терапии при маститах у собак -  патент 2513998 (27.04.2014)
соединения для применения в визуализации, диагностике и/или лечении заболеваний центральной нервной системы или опухолей -  патент 2505528 (27.01.2014)
антагонисты рецептора сфингозин-1-фосфата (s1p) и способы их применения -  патент 2505527 (27.01.2014)
новые лиганды сигма ( )-рецепторов с антиапоптотическими и/или проапоптотическими свойствами в отношении биохимических механизмов клетки, обладающие нейропротекторным, противораковым, антиметастатическим и противовоспалительным действием при хроническом воспалительном процессе -  патент 2497511 (10.11.2013)
фармацевтическая композиция для профилактики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний -  патент 2491070 (27.08.2013)
хиральные диацилгидразиновые лиганды для модуляции экспрессии экзогенных генов с помощью экдизон-рецепторного комплекса -  патент 2490253 (20.08.2013)
новые 4-(гетероциклоалкил)бензол-1,3-диольные соединения в качестве ингибиторов тирозиназ, способ их получения и их применение в лечении человека, а также в косметических средствах -  патент 2482116 (20.05.2013)
сульфонамидные соединения или их соли -  патент 2481329 (10.05.2013)

Класс A61P35/00 Противоопухолевые средства

Патенты РФ в классе A61P35/00:
способ лечения рака толстой кишки -  патент 2529831 (27.09.2014)
способ оценки эффекта электромагнитных волн миллиметрового диапазона (квч) в эксперименте -  патент 2529694 (27.09.2014)
новые (поли)аминоалкиламиноалкиламидные, алкил-мочевинные или алкил-сульфонамидные производные эпиподофиллотоксина, способ их получения и их применение в терапии в качестве противораковых средств -  патент 2529676 (27.09.2014)
производные 1, 2-дигидроциклобутендиона в качестве ингибиторов фосфорибозилтрансферазы никотинамида -  патент 2529468 (27.09.2014)
фармацевтическое средство, содержащее эпитопные пептиды hig2 и urlc10, для лечения рака, способы и средства для индукции антигенпрезентирующей клетки и цитотоксического т-лимфоцита (цтл), антигенпрезентирующая клетка и цтл, полученные таким способом, способ и средство индукции иммунного противоопухолевого ответа -  патент 2529373 (27.09.2014)
модульный молекулярный конъюгат для направленной доставки генетических конструкций и способ его получения -  патент 2529034 (27.09.2014)
модулирующие jak киназу хиназолиновые производные и способы их применения -  патент 2529019 (27.09.2014)
лечение опухолей с помощью антитела к vegf -  патент 2528884 (20.09.2014)
способ лечения местнораспространенного неоперабельного рака поджелудочной железы -  патент 2528881 (20.09.2014)
новые бензолсульфонамидные соединения, способ их получения и применение в терапии и косметике -  патент 2528826 (20.09.2014)


Наверх