генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты

Классы МПК:C12N15/54 трансферазы (2)
C12N9/10 трансферазы (2)
C12N15/74 векторы или экспрессионные системы, специально предусмотренные для прокариотических хозяев, кроме Ecoli, например Lactobacillus, Micromonospora
C12P21/00 Получение пептидов или протеинов
Автор(ы):, ,
Патентообладатель(и):ЗЕ СКРИПС РЕСЕЧ ИНСТИТЬЮТ (US)
Приоритеты:
подача заявки:
2007-05-21
публикация патента:

Настоящее изобретение относится к области биохимии, в частности к способам трансляции белка, и может быть использовано в различных тест-системах, предназначенных для детектирования соединений полипептидной природы. Предложена ортогональная пара, включающая тРНК (О-тРНК) и аминоацил-тРНК синтетазу (О-РС), в которой О-тРНК является супрессорной тРНК, распознающей амбер-кодон, а О-РС представляет собой мутантную форму тирозил-тРНК синтетазы Methanococcus janaschii, предпочтительно аминоацилирующую указанную тРНК неприродной аминокислотой L-(7-гидроксикумарин-4-ил)-этилглицином. Описана система трансляции, обеспечивающая введение в любое выбранное положение интересующего белка, синтезируемого в этой системе, неприродной аминокислоты L-(7-гидроксикумарин-4-ил)-этилглицина, которая включает ортогональную пару по изобретению, названную неприродную аминокислоту и нуклеиновую кислоту, которая кодирует представляющий интерес белок и содержит в выбранном положении селекторный кодон, распознаваемый О-тРНК. 6 н. и 14 з.п. ф-лы, 9 ил., 5 пр.

Рисунки к патенту РФ 2473690

генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690

Текст описания приведен в факсимильном виде. генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690 генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты, патент № 2473690

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Система трансляции, включающая

(a) первую неприродную аминокислоту, которая представляет собой неприродную аминокислоту L-(7-гидроксикумарин-4-ил)-этилглицин;

(b) первую ортогональную аминоацил-тРНК синтетазу (О-РС), содержащую последовательность аминокислот, указанную в SEQ ID NO:2, или консервативный вариант указанной последовательности, при этом SEQ ID NO:2 или консервативный вариант указанной последовательности дополнительно содержит Glu в положении, соответствующем Tyr32; His в положении, соответствующем Leu65; Gly в положении, соответствующем His70; Tyr положении, соответствующем Phe108; His в положении, соответствующем Gln109; Gly в положении, соответствующем Asp158; и Gly положении, соответствующем Leu162; и

(c) первую ортогональную тРНК (О-тРНК), кодируемую последовательностью SEQ ID NO:1,

причем указанная первая О-РС предпочтительно аминоацилирует указанную первую О-тРНК указанной первой неприродной аминокислотой.

2. Система трансляции по п.1, отличающаяся тем, что указанная первая О-РС получена из аминоацил-тРНК-синтетазы Methanococcus jannaschii.

3. Система трансляции по п.1, отличающаяся тем, что указанная первая О-тРНК представляет собой супрессорную тРНК, распознающую амбер-кодон.

4. Система трансляции по п.1, которая дополнительно включает нуклеиновую кислоту, кодирующую представляющий интерес белок, причем указанная нуклеиновая кислота содержит, по меньшей мере, один селекторный кодон, который распознает указанная первая О-тРНК.

5. Система трансляции по п.4, дополнительно содержащая вторую О-РС и вторую О-тРНК, причем указанная вторая О-РС предпочтительно аминоацилирует вторую указанную О-тРНК второй неприродной аминокислотой, которая отлична от указанной первой неприродной аминокислоты, и указанная вторая О-тРНК распознает селекторный кодон, отличный от селекторного кодона, распознаваемого указанной первой О-тРНК.

6. Система трансляции по п.1, отличающаяся тем, что указанная первая О-РС и указанная первая О-тРНК указанной системы экспрессируются в клетке-хозяине, при этом указанная клетка-хозяин представляет собой клетку эубактерии.

7. Система трансляции по п.6, отличающаяся тем, что указанная клетка-хозяин представляет собой клетку E.coli.

8. Система трансляции по п.6, отличающаяся тем, что указанная клетка-хозяин содержит полинуклеотид, кодирующий указанную первую О-РС, и полинуклеотид, кодирующий указанную первую О-тРНК.

9. Способ получения в системе трансляции белка, содержащего неприродную аминокислоту в выбранном положении, который включает:

(а) обеспечение системы трансляции, содержащей

(i) первую неприродную аминокислоту, которая представляет собой неприродную аминокислоту L-(7-гидроксикумарин-4-ил)-этилглицин,

(ii) первую ортогональную аминоацил-тРНК синтетазу (О-РС), содержащую последовательность аминокислот, соответствующую SEQ ID NO:2, или консервативный вариант указанной последовательности, при этом SEQ ID NO:2 или консервативный вариант указанной последовательности дополнительно содержит Glu в положении, соответствующем Tyr32; His в положении, соответствующем Leu65; Gly в положении, соответствующем His70; Tyr положении, соответствующем Phe108; His в положении, соответствующем Gln109; Gly в положении, соответствующем Asp158; и Gly положении, соответствующем Leu162;

(iii) первую ортогональную тРНК (О-тРНК), кодируемую последовательностью SEQ ID NO:1, и

(b) обеспечение нуклеиновой кислоты, кодирующей указанный белок, причем указанная нуклеиновая кислота содержит, по меньшей мере, один селекторный кодон, распознаваемый указанной первой О-тРНК;

(c) обеспечение трансляции указанного белка;

(d) выделение указанного белка.

10. Способ по п.9, отличающийся тем, что указанная О-РС получена из аминоацил-тРНК синтетазы Methanococcus jannaschii, или тирозил-тРНК синтетазы Methanococcus jannaschii дикого типа.

11. Способ по п.9, отличающийся тем, что указанное обеспечение системы трансляции включает обеспечение полинуклеотида, кодирующего указанную О-тРНК.

12. Способ по п.9, в котором указанный белок дополнительно содержит вторую неприродную аминокислоту, которая отлична от указанной первой неприродной аминокислоты, и указанная система трансляции дополнительно содержит вторую О-РС и вторую О-тРНК, причем указанная вторая О-РС предпочтительно аминоацилирует указанную вторую О-тРНК второй неприродной аминокислотой, которая отлична от указанной первой неприродной аминокислоты, и указанная вторая О-тРНК распознает селекторный кодон в нуклеиновой кислоте, который отличен от селекторного кодона, распознаваемого первой О-тРНК.

13. Способ по п.9, отличающийся тем, что указанная первая О-РС и указанная первая О-тРНК указанной системы трансляции экспрессируются в клетке-хозяине, содержащей указанную нуклеиновую кислоту, кодирующую указанный белок, и при этом указанная клетка-хозяин представляет собой клетку эубактерии.

14. Способ по п.13, отличающийся тем, что указанная клетка-хозяин представляет собой клетку Е.coli.

15. Способ по п.13, отличающийся тем, что указанная клетка-хозяин содержит полинуклеотид, кодирующий указанную первую О-РС, и полинуклеотид, кодирующий указанную первую О-тРНК.

16. Аминоацил-тРНК синтетаза, содержащая последовательность аминокислот, соответствующую SEQ ID NO:4, или консервативный вариант указанной последовательности.

17. Полинуклеотид, кодирующий ортогональную аминоацил-тРНК синтетазу (О-РС) по п.16.

18. Полинуклеотид по п.17, отличающийся тем, что указанный полинуклеотид содержит последовательность нуклеотидов, соответствующую SEQ ID NO:5.

19. Экспрессионный вектор, содержащий полинуклеотид по п.17.

20. Клетка-хозяин для получения белка, содержащего неприродную аминокислоту, содержащая вектор по п.19.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2473690

patent-2473690.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс C12N15/54 трансферазы (2)

Патенты РФ в классе C12N15/54:
гены диацилглицерол-ацилтрансферазы и их использование -  патент 2514655 (27.04.2014)
новые гены ацилтрансферазы лизофосфатидной кислоты -  патент 2507263 (20.02.2014)
способ синтеза белка с модифицированным профилем n-гликозилирования в растениях -  патент 2499053 (20.11.2013)
гомологи глицерин-3-фосфатацилтрансферазы (гфат) и их использование -  патент 2485179 (20.06.2013)
эпигенетический регуляторный комплекс для контроля экспрессии генов -  патент 2462512 (27.09.2012)
способ получения полиненасыщенных жирных кислот в трансгенных растениях -  патент 2449007 (27.04.2012)
способы получения симвастатина -  патент 2447152 (10.04.2012)
синтетаза жирных кислот, кодирующий ее полинуклеотид и их применение -  патент 2444572 (10.03.2012)
применение и получение стабильной при хранении нейтральной металлопротеиназы -  патент 2433182 (10.11.2011)
генетически модифицированный микроорганизм и способ получения макролидного соединения с гидроксильной группой в 16-положении с использованием таких микроорганизмов -  патент 2394906 (20.07.2010)

Класс C12N9/10 трансферазы (2)

Класс C12N15/74 векторы или экспрессионные системы, специально предусмотренные для прокариотических хозяев, кроме Ecoli, например Lactobacillus, Micromonospora

Патенты РФ в классе C12N15/74:
конструкции и способы для продуцирования и секреции ферментов, расщепляющих клеточную стенку -  патент 2525194 (10.08.2014)
усовершенствованные векторы экспрессии млекопитающих и их применение -  патент 2502800 (27.12.2013)
промоторы lactococcus и их применение: -  патент 2495129 (10.10.2013)
мультивалентная вакцина из нативных везикул наружной мембраны менингококков, способы ее получения и применения -  патент 2477145 (10.03.2013)
клостридиальный токсин netb -  патент 2474587 (10.02.2013)
рекомбинантный гибридный полипептид, способный ингибировать пролиферацию эндотелиальных клеток человека in vitro, и способ его получения -  патент 2465283 (27.10.2012)
способ хромосомной интеграции и замены последовательности днк в clostridia -  патент 2464317 (20.10.2012)
состав полиэпитопного белка для индукции иммунного ответа против вируса ящура -  патент 2453557 (20.06.2012)
микроорганизм-носитель нуклеотидных последовательностей, кодирующих антигены и белковые токсины -  патент 2447145 (10.04.2012)
рекомбинантная плазмидная днк, содержащая гены синтеза бутанола из clostridium acetobutylicum (варианты), рекомбинантный штамм lactobacillus brevis - продуцент н-бутанола (варианты) и способ микробиологического синтеза н-бутанола -  патент 2375451 (10.12.2009)

Класс C12P21/00 Получение пептидов или протеинов

Патенты РФ в классе C12P21/00:
рекомбинантная плазмидная днк ppa-oprf-eta, кодирующая синтез рекомбинантного белка oprf-eta pseudomonas aeruginosa, штамм escherichia coli pa-oprf-eta - продуцент рекомбинантного белка oprf-eta pseudomonas aeruginosa и способ получения рекомбинантного белка oprf-eta pseudomonas aeruginosa -  патент 2529359 (27.09.2014)
модифицированная дрожжевая двугибридная система для эффективного исследования взаимодействия между белками и их доменами. -  патент 2529356 (27.09.2014)
лейколектины и их применение -  патент 2528860 (20.09.2014)
модифицированный фактор виллебранда с удлиненным полупериодом существования in vivo, его применения и способы получения -  патент 2528855 (20.09.2014)
способ получения пептидов, специфично распознающих определенные типы клеток и предназначенных для терапевтических целей -  патент 2528739 (20.09.2014)
слитый белок тиоредоксина и домена 4 инфестина, способ его получения, экспрессионная плазмидная днк, кодирующая слитый белок, и бактерия рода escherichia coli, трансформированная такой плазмидной днк -  патент 2528251 (10.09.2014)
способ получения цитохрома с -  патент 2528061 (10.09.2014)
рсв-специфичные связывающие молекулы и средства для их получения -  патент 2527067 (27.08.2014)
способы, относящиеся к модифицированным гликанам -  патент 2526250 (20.08.2014)
l-фукоза 1 6 специфичный лектин -  патент 2524425 (27.07.2014)


Наверх