консорциум штаммов, используемый для получения бифидосодержащей продукции

Классы МПК:C12N1/20 бактерии; питательные среды для них
A23C9/12 сброженные молочные продукты; обработка с использованием микроорганизмов и(или) ферментов
A23L1/29 изменение питательных свойств пищевых продуктов; диетические продукты
A61K8/99 из микроорганизмов
Автор(ы):, ,
Патентообладатель(и):Общество с ограниченной ответственностью "Бифилюкс" (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2011-04-21
публикация патента:

Консорциум штаммов Bifidobacterium bifidum ВКПМ Ac-1875 и Bifidobacterium longum ВКПМ Ac-1876 активно размножается в питательных средах разного состава с накоплением производственной биомассы в короткие сроки культивировании, сквашивает молоко с образованием сгустка с хорошими вкусовыми и органолептическими свойствами, обладает кислотообразующей активностью, антагонистической активностью в отношении к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам. Это позволяет использовать консорциум штаммов при приготовлении бактерийных препаратов, биологически активных добавок к пище, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, гигиенических и косметических средств, обеспечивающих нормализацию микробиоценозов организма человека, в т.ч. желудочно-кишечного и урогенитального трактов, кожных и слизистых покровов, и расширит арсенал средств коррекции микрофлоры человеческого организма. 2 табл., 6 пр.

Изобретение относится к пищевой, биотехнологической и медицинской, косметической промышленности, в частности используется для приготовления кисломолочных, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, заквасок, гигиенических и косметических средств, биологически активных добавок и бактерийных препаратов.

В связи с неблагоприятными экологическими условиями, стрессами, длительной антибактериальной, лучевой и химиотерапией, дисбиозами, возникающими вследствие перенесенных заболеваний, увеличивается количество людей страдающих нарушениями нормальной микрофлоры организма. Для лечения и профилактики этих нарушений все большее внимание уделяется как препаратам, обладающим пробиотическим действием, так и пищевым продуктам, содержащим представителей нормальной микрофлоры кишечника - бифидобактерии.

Наиболее типичными для организма человека являются пять видов бифидобактерии - B.bifidum, B.longum, B.adolescentis, B.breve, B.infantis. С наибольшей частотой в биоценозе обнаруживаются виды B.bifidum и B.longum (до 75%). Вид B.adolescentis встречается в основном у взрослых людей, виды B.breve и B.infantis - преимущественно у детей грудного возраста.

Известны зарубежные моно- и комплексные препараты-эубиотики и кисломолочные продукты, включающие в свой состав бифидобактерии видов B.bifidum, B.lonqum, B.adolescentis, B.breve (патент № 2336886, патент № 2411008, Франция; патент № 637297, Швейцария; патент № 2134179, патент № 2421066 ФРГ; патент № 05227946, патент № 0430642, Япония; патент № 4645667, США).

У нас в стране для приготовления бактерийных препаратов и продуктов лечебно-диетического питания применяют отечественные штаммы бифидобактерий видов B.bifidum № 1,791,792, ВКПМ S-1257, Ac-1578; B.lonqum B379M, B.adolescentis MC-42, В.breve 79-119, В.infantis 79-43 (авторское свидетельство № 343588, патент РФ № 2215028, патент РФ № 1347221, патент РФ № 849779, патент РФ № 2108383, патент РФ № 2152993, патент РФ № 2216589, патент РФ № 863639, патент РФ № 2078814, патент РФ № 2111248).

Качество лечебных продуктов и препаратов во многом обусловлено свойствами штамма-продуцента, его специфической активностью и технологичностью. Использование многоштаммовых композиций позволит суммировать полезные свойства, присущие отдельным штаммам, заселять организм человека теми из них, которые наиболее физиологичны для каждого индивидуума. Это делает возможным разработку комплексных продуктов лечебного питания и бактерийных препаратов, способных обеспечить высокую колонизационную резистентность организма человека, восстанавливать его нарушенную микрофлору и способствовать снижению заболеваемости.

Задачей настоящего изобретения являлось получение консорциума штаммов Bifidobacterium bifidum B-UH, Bifidobacterium longum B-NH, имеющего высокую биологическую активность, стабильное кислотообразование, способного хорошо расти при культивировании в искусственных питательных средах и молоке, устойчивого к условиям внешней среды и обладающего антагонистической активностью по отношению к условно-патогенной и патогенной микрофлоре.

Консорциум получен путем сочетания двух штаммов, относящихся к видам бифидобактерий, наиболее часто встречающимся в организме человека, Bifidobacterium bifidum и Bifidobacterium longum.

Штамм Bifidobacterium bifidum B-UH выделен от здорового ребенка грудного возраста, депонирован в ВКПМ, ФГУП ГосНИИгенетика, коллекционный номер Ас-1875.

Штамм Bifidobacterium longum B-NH выделен от здорового ребенка грудного возраста, депонирован в ВКПМ, ФГУП ГосНИИгенетика, коллекционный номер Ас-1876.

Заявляемый консорциум штаммов Bifidobacterium bifidum и Bifidobacterium longum может быть использован при производстве кисломолочной продукции, заквасок, ферментированных пищевых продуктов, например: квас, пиво и т.п., неферментированных пищевых продуктов, например: соки, напитки и т.п. Так же консорциум штаммов бифидобактерий может широко использоваться для производства гигиенических и косметических средств, например: кремов, лосьонов, салфеток, мыла, присыпок, тампонов, питательных масок, гелей, женских прокладок, косметического молочка, различных пудр и т.д. Кроме того, консорциум штаммов бифидобактерий может быть применен в производстве бактериальных препаратов, в виде свечей, пероральных и других средств.

Техническим результатом заявленного изобретения является консорциум штаммов Bifidobacterium bifidum B-UH, Bifidobacterium longum B-NH, используемый в качестве биологически активного вещества для получения кисломолочных, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, заквасок, гигиенических и косметических средств, биологически активных добавок и бактерийных препаратов. Консорциум штаммов обладает биологически и технологически значимыми свойствами, такими как кислотообразующая активность, способность наращивать микробную биомассу в различных питательных средах. Консорциум антагонистически активен по отношению к патогенным и условно-патогенной микроорганизмам.

Культурально-морфологические признаки консорциума.

Клетки штаммов консорциума бифидобактерий представляют собой грам+ полиморфные палочки с бифуркацией или утолщением на 1-2-х концах, склонные к образованию скоплений. В полужидких питательных средах растут по всей высоте объема, кроме зоны аэробиоза. Отдельно выросшие колонии в Бифидум-среде имеют удлиненную и шарообразную форму. Логарифмическая фаза роста заканчивается к 12-16 часам культивирования.

Физиолого-биохимические признаки консорциума.

Неподвижные, бесспоровые анаэробы. Оптимальная температура выращивания - (38±1)°C, pH питательных сред - 7.2-7,4. Каталазу не образуют, желатину не разжижают. Сбраживают глюкозу с образованием уксусной и L+ молочной кислоты без образования газа, закисляя среду выращивания до pH 4,2-3,4. Консорциум штаммов активно размножается на средах разного состава, а так же в молоке, сквашивая его к 12-18 часам культивирования. Это позволит широко использовать консорциум штаммов бифидобактерий в различных технологических процессах (Таблица 1).

Таблица 1.
Накопление микробной массы (КОЕ/мл lg 10) и активность кислотообразования (в градусах Тернера) консорциума штаммов бифидобактерий в динамике развития при культивировании в гидролизатно-молочной питательной среде (ГМ), Бифидум-среде (БФ) и молоке (М).
ПИТАТЕЛЬНАЯ ВРЕМЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ
СРЕДА 12 ч 24 ч 48 ч
консорциум штаммов, используемый для получения бифидосодержащей   продукции, патент № 2467065 КОЕ °TКОЕ °T КОЕ°T
консорциум штаммов, используемый для получения бифидосодержащей   продукции, патент № 2467065 ГМ 8,698 9,8146 7,2194
консорциум штаммов, используемый для получения бифидосодержащей   продукции, патент № 2467065 БФ 8,088 8,8118 7,0162
консорциум штаммов, используемый для получения бифидосодержащей   продукции, патент № 2467065 М 8,482 9,2110 7,6156

Таблица 2.
Антагонистическая активность штаммов Bifidobacterium bifidum B-UH, Bifidobacterium longum B-NH по отдельности и в составе консорциума
Штамм Зона задержки роста тест-культур мм/M±m
Sh.sonneiSh.flexneri E.coli S.aureusPr.vulgaris
В.bifidum B-UH 22±2,0 25±1,818±1,6 20±1,2 25±1,4
В.longum B-NH28±1,6 22±1,4 20±2,216±1,8 26±1,2
Консорциум 34±0,828±2,2 32±1,8 32±1,436±1,6

Консорциум штаммов бифидобактерий способен наращивать микробную массу в питательных средах, сквашивать молоко в короткие сроки культивирования, проявлять специфическую активность. Это делает возможным его использование в приготовлении кисломолочных, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, заквасок, гигиенических и косметических средств, биологически активных добавок и бактерийных препаратов.

Пример № 1. Получение и использование консорциума для приготовления кисломолочного продукта

1-ый пассаж Лиофилизированные штаммы Bifidobacterium bifidum B-UH, Bifidobacterium longum B-NH в количестве 0,1 г сухой биомассы (1 доза) вносят по отдельности в среду выращивания и титруют методом десятикратных разведении до 10-7-9 . Выращивают при температуре (38±1)°C до появления отдельных колоний в последнем разведении. Или 1 дозу сухой биомассы каждого штамма вносят в 20-30 мл питательной среды. Культивируют до получения биомассы с содержанием клеток микроорганизмов не менее 108/мл.
2-ой пассажВыращенную культуру каждого из штаммов объемом не более 10% вносят в среду накопления и культивируют при температуре (38±1)°C до получения биомассы с содержанием микробных тел не менее 10 8/мл.
3-ий пассаж (продукт) Полученную биомассу каждого из штаммов смешивают, получая консорциум, и в объеме не более 5% вносят в стерильное молоко и культивируют до образования сгустка. Получают готовый кисломолочный продукт с нежным вкусом густой однородной консистенции с
консорциум штаммов, используемый для получения бифидосодержащей   продукции, патент № 2467065 содержанием не менее в 1 мл 10 живых бифидобактерий.

Пример № 2. Получение и использование консорциума для приготовления ферментированных и неферментированного пищевых продуктов

1-ый пассаж Лиофилизированные штаммы Bifidobacterium bifidum B-UH, Bifidobacterium longum B-NH в количестве 0,1 г сухой биомассы (1 доза) вносят по отдельности в среду выращивания и титруют методом десятикратных разведении до 10-7-9 . Выращивают при температуре (38±1)°C до появления отдельных колоний в последнем разведении. Или 1 дозу сухой биомассы каждого штамма вносят в 20-30 мл питательной среды. Культивируют до получения биомассы с содержанием клеток микроорганизмов не менее 107/мл.
2-ой пассажВыросшую культуру каждого из штаммов объемом не более 10% вносят в среду накопления и культивируют при температуре (38±1)°C до получения биомассы с содержание микробных тел не менее 10 7/мл.
Получение ферментированного или неферментированного пищевого продуктаПолученную биомассу смешивают, получая консорциум, вносят в пищевое сырье (молоко, соки, пиво, квас и пр.), перемешивают и разливают в емкости. В результате получают продукт с титром клеток микроорганизмов не менее 106 в 1 мл.

Пример № 3. Получение и использование консорциума штаммов бифидобактерий для приготовления биологически активной добавки

Получение жидкой биологически активной добавки (БАД) Штаммы микроорганизмов Bifidobacterium bifidum B-UH, Bifidobacterium longum B-NH 1-2- их пассажей (пример 1) смешивают, получая консорциум, вносят в питательную среду объемом не более 5%, выращивают до получения биомассы с содержанием микробных тел в 1 мл не менее 108 и разливают в емкости. В результате получают биологически активную добавку, которая представляет собой жидкий концентрат с высоким, не менее 108/мл содержанием штаммов микроорганизмов.
Получение сухой биологически активной добавки (БАД) В жидкую биологически активную добавку вносят защитные среды высушивания (сахароза 80% и желатина 8% в объеме 10-12%, обезжиренное молоко до 20%). Полученную суспензию разливают по 1-5 мл (1-5 доз) в ампулы или пенициллиновые флаконы, замораживают при t (40-45)°C и лиофилизируют из замороженного состояния в вакуум-сушильных аппаратах. Полученная сухая биологически активная добавка в 1 дозе содержит не менее 107 живых клеток микроорганизмов.

Пример № 4. Получение и использование консорциума штаммов бифидобактерий для приготовления бактерийного препарата

Штаммы Bifidobacterium bifidum B-UH, Bifidobacterium longum B-NH 1-2-их пассажей (пример 1) вносят по отдельности в питательную среду объемом не более 5%, выращивают при температуре (38±1)°C до получения микробной массы с содержанием микроорганизмов не менее 108/мл. Выращенную биомассу смешивают, получая консорциум штаммов, добавляют защитные среды высушивания (сахароза 80% и желатина 8% в объеме 10-12%, обезжиренное молоко до 20%). Полученную суспензию разливают по 1-5 мл (1-5 доз) в ампулы или пенициллиновые флаконы, замораживают при t (40-45)°C и лиофилизируют из замороженного состояния в вакуум-сушильных аппаратах. Полученный препарат (консорциум) в 1 дозе содержит 107 живых клеток микроорганизмов. Согласно НТД на препараты нормальной микрофлоры человека допускается содержание в 1 дозе не менее 10 живых клеток микробных тел.

Пример № 5. Получение и использование консорциума штаммов для приготовления гигиенических и косметических средств.

Штаммы Bifidobacterium bifidum B-UH, Bifidobacterium longum B-NH 1-2-их пассажей (пример 1) вносят по отдельности в питательную среду объемом не более 5%, выращивают при температуре (38±1)°C до получения микробной массы с содержанием живых клеток не менее 108/мл.

Получение продукта: выросшую биомассу смешивают, получая консорциум, и вводят в состав крема или мыла в количестве не более 1%.

Пример № 6. Получение и использование консорциума штаммов бифидобактерий для приготовления закваски

Лиофилизированные штаммы Bifidobacterium bifidum B-UH, Bifidobacterium longum B-NH в количестве 0,1 г (1 доза) сухой биомассы вносят по отдельности в 20-30 мл питательной среды. Выращивают до получения биомассы с содержанием микроорганизмов не менее 107/мл.

Получение закваски. Выросшую культуру штаммов микроорганизмов смешивают, получая консорциум, и объемом не более 10% вносят в среду накопления. Культивируют при температуре (38±1)°C до получения биомассы (закваски) с содержанием микробных тел не менее 10 8/мл.

Таким образом, предлагаемый консорциум активно размножается в питательных средах с накоплением производственной биомассы в короткие сроки культивирования, сквашивает молоко с образованием сгустка, обладает специфической активностью.

Полученный консорциум можно рекомендовать для приготовления кисломолочных, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, заквасок, биологически активных добавок, бактерийных препаратов, гигиенических и косметических средств.

Клиническая эффективность консорциума проводилась в составе жидкой биологически активной добавки - «Нормофлорин Д» на базе Московской медицинской Академии имени И.М.Сеченова. Под наблюдением находились 40 взрослых людей с воспалительными заболеваниями кишечника (ВЗК) - язвенный колит, Болезнь крона, хронический колит. Больные, наряду с базисной терапией, получали «Нормофлорин Д» по 1 столовой ложке перед едой в течение 30 дней. Контрольная группа людей не принимали «Нормофлорин Д». В результате у больных на фоне получения биодобавки «Нормофлорин Д» отмечено значительное снижение отрицательных проявлений диспепсического синдрома (тошнота, отрыжка, снижение аппетита), абдоминального синдрома (вздутие живота, метеоризм, частота и характер стула). Нежелательные явления при приеме «Нормофлорин Д» не наблюдались.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Консорциум штаммов Bifidobacterium bifidum ВКПМ Ac-1875 и Bifidobacterium longum ВКПМ Ac-1876, используемый для получения бифидосодержащей продукции.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2467065

patent-2467065.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс C12N1/20 бактерии; питательные среды для них

Патенты РФ в классе C12N1/20:
способ определения чувствительности патогенных бактерий к комплексным антибактериальным препаратам -  патент 2529711 (27.09.2014)
бифазная транспортная питательная среда для выделения и выращивания бруцеллезного микроба -  патент 2529364 (27.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528874 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528873 (20.09.2014)
штамм lactobacillus fermentum, обладающий широким спектром антагонистической активности и пробиотический консорциум лактобактерий для изготовления бактериальных препаратов -  патент 2528862 (20.09.2014)
изолированный штамм (варианты), обеспечивающий улучшение состояния здоровья жвачных животных, способ его получения, и способ его введения жвачным животным -  патент 2528859 (20.09.2014)
способ получения миллерита с использованием сульфатредуцирующих бактерий -  патент 2528777 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528744 (20.09.2014)
питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов -  патент 2528740 (20.09.2014)
питательная среда для культивирования легионелл -  патент 2528101 (10.09.2014)

Класс A23C9/12 сброженные молочные продукты; обработка с использованием микроорганизмов и(или) ферментов

Патенты РФ в классе A23C9/12:
способ получения бактериального концентрата и применение его в качестве биологически активной добавки к пище или закваски прямого внесения для курунги -  патент 2524435 (27.07.2014)
способ получения замороженного бактериального концентрата на основе симбиоза пробиотических бактерий -  патент 2524432 (27.07.2014)
антирефлюксное детское питание -  патент 2524201 (27.07.2014)
штамм бактерий lactobacillus acidophilus используемый для приготовления кисломолочного продукта -  патент 2524117 (27.07.2014)
способ культивирования бифидобактерий в молоке -  патент 2515048 (10.05.2014)
способ производства белкового кисломолочного продукта -  патент 2514671 (27.04.2014)
способ производства сухого сметанного продукта -  патент 2511028 (10.04.2014)
консорциум бифидобактерий и лактобацилл, используемый для приготовления бактерийных препаратов и биологически активных добавок, предназначенных для коррекции микрофлоры людей старше 14 лет, способ его получения, биологически активная добавка к пище для коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта людей старше 14 лет и бактериальный препарат для лечения дисбиотических состояний желудочно-кишечного тракта людей старше 14 лет -  патент 2491336 (27.08.2013)
консорциум бифидобактерий и лактобацилл, используемый для приготовления бактерийных препаратов и биологически активных добавок, предназначенных для коррекции микрофлоры детей в возрасте от 3-х до 14 лет, способ его получения, биологически активная добавка к пище и бактериальный препарат для лечения дисбиотических состояний желудочно-кишечного тракта в возрасте от 3-х до 14 лет -  патент 2491335 (27.08.2013)
консорциум бифидобактерий для приготовления бактерийных препаратов и биологически активных добавок к пище, предназначенных для коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта детей в возрасте от 3-х до 14 лет, и способ его получения, биологически активная добавка к пище для коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта детей от 3-х до 14 лет и бактериальный препарат для лечения дисбиотических состояний желудочно-кишечного тракта детей в возрасте от 3-х до 14 лет -  патент 2491334 (27.08.2013)

Класс A23L1/29 изменение питательных свойств пищевых продуктов; диетические продукты

Патенты РФ в классе A23L1/29:
улучшение памяти у пациентов с оценкой 24-26 баллов по краткой шкале оценки психического статуса -  патент 2529815 (27.09.2014)
синергетическая смесь бета-галактоолигосахаридов с бета-1,3 и бета-1,4/1,6 связями -  патент 2529160 (27.09.2014)
жидкая энтеральная пищевая композиция с низким содержанием одновалентных ионов металлов -  патент 2529158 (27.09.2014)
способ производства быстрозамороженного пюреобразного диетического продукта -  патент 2528719 (20.09.2014)
способ снижения веса, комплексный состав продуктов для снижения веса, комплект для упаковки, хранения, транспортировки продуктов для снижения веса -  патент 2528480 (20.09.2014)
способ комплексного лечения артериальной гипертонии при метаболических нарушениях -  патент 2525593 (20.08.2014)
инстантный функциональный пищевой продукт -  патент 2525338 (10.08.2014)
способ коррекции ожирения абдоминального типа -  патент 2525007 (10.08.2014)
способ создания продукта спортивного питания -  патент 2524550 (27.07.2014)
функциональный пищевой ингредиент с заданным липидным профилем -  патент 2524358 (27.07.2014)

Класс A61K8/99 из микроорганизмов

Патенты РФ в классе A61K8/99:
средство (варианты), композиция (варианты) и применение средства (варианты) для снижения неприятного запаха изо рта -  патент 2515113 (10.05.2014)
зубная паста, содержащая лиофилизированную массу живых бифидобактерий -  патент 2494724 (10.10.2013)
средство для роста фибробластов -  патент 2492850 (20.09.2013)
применение натуральных активных веществ в косметических или терапевтических композициях -  патент 2491910 (10.09.2013)
микроорганизмы, ингибирующие образование неприятного подмышечного запаха -  патент 2459864 (27.08.2012)
косметическое средство для сухой и очень сухой кожи -  патент 2456977 (27.07.2012)
штамм lactobacillus paracasei, используемый для получения продукции, содержащей лактобактерии -  патент 2453594 (20.06.2012)
штамм lactobacillus helveticus, используемый для получения продукции, содержащей лактобактерии -  патент 2453593 (20.06.2012)
штамм bifidobacterium bifidum, используемый для получения бифидосодержащей продукции -  патент 2453592 (20.06.2012)
штамм lactobacillus rhamnosus, используемый для получения продукции, содержащей лактобактерии -  патент 2453591 (20.06.2012)


Наверх