препарат для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров

Формула изобретения

Препарат для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров, включающий диоксидин, норфлоксацин и воду для инъекций, отличающийся тем, что он дополнительно содержит глицерин, 1,2 пропиленгликоль, масло подсолнечное рафинированное, воск эмульсионный и кислоту стеариновую при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Норфлоксацина гидрохлорид	1,0-3,5
Диоксидин	1,0-3,5
Диметилсульфоксид	10,0
Глицерин	10,0
1,2 пропиленгликоль	10,0
Масло подсолнечное рафинированное	12,5
Воск эмульсионный	1,0
Кислота стеариновая	1,0
Вода для инъекций	до 100%

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к препаратам для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров.

Существенным препятствием для развития животноводства и повышения продуктивности животных являются заболевания органов воспроизводства, среди которых значительное место занимают эндометриты, в крупных хозяйствах заболевает до 90% отелившихся коров [Турченко А.Н. Разработка и усовершенствование лечебно-профилактических мероприятий при остром послеродовом эндометрите у коров: Дис .докт.вет.наук. - Краснодар, 1999. - 385 с.]. Воспалительные процессы в гениталиях самок возникают в результате действия специфической и неспецифической микрофлоры. В основном они обусловлены условно-патогенной микрофлорой, способной при снижении резистентности организма животных провоцировать субинволюцию матки, задержание последа, эндометриты и т.п., что неблагоприятно влияет на последующую воспроизводительную функцию животных [Распутина О.В. Разработка и применение лекарственных средств на основе ароксиалканкарбоновой кислоты при болезнях животных, вызываемых условно патогенной микрофлорой: автореф. дис д-ра вет. наук. - Новосибирск, 2007, - 40 с.].

Острый послеродовой эндометрит - воспаление преимущественно слизистой оболочки матки. В зависимости от характера воспаления послеродовой эндометрит подразделяется на катаральный, гнойно-катаральный и фибринозный. Считается, что основной формой проявления послеродового эндометрита у коров является гнойно-катаральный эндометрит. Клинические признаки заболевания проявляются на 6-7 или 8-10 дни после родов. В первом случае эндометрит развивается, как правило, на фоне задержания последа или острой субинволюции матки. Из половых органов животного при его лежании, натуживании или массаже через прямую кишку выделяется в большом количестве гнойно-слизистый, гнойный или серозно-гнойный с отложением фибрина экссудат жидкой консистенции, серо-бурого или желто-бурого цвета.

Существует большое количество препаратов, предлагаемых для лечения акушерско-гинекологических болезней животных. Однако многие из них не устраивают ветеринарную практику, особенно при эндометритах.

Для лечения и профилактики послеродовых болезней у коров и свиноматок применяют препараты антимикробного действия, включающие антибиотики, сульфаниламидные, нитрофурановые, препараты хиноксалинового ряда, фторхинолоны и другие средства. Но не все они дают ожидаемый эффект. Это, прежде всего, объясняется снижением чувствительности микрофлоры матки к препаратам. В связи с чем возникает необходимость создания новых ротационных комплексных препаратов.

Несомненный теоретический интерес и практическое значение для ветеринарии представляют аэрозольные пены, которые имеют ряд преимуществ перед другими терапевтическими системами. Например, при нанесении пены на кожу или слизистые образуется сетка, поскольку она покрывает их не сплошным слоем, а дискретно. Кожа и слизистые не испытывают давления со стороны пены [З.Д.Хаджиева. Пенные терапевтические системы: технологические аспекты и классификация // Фармация. - 2007. - № 1- С.35-37]. Поэтому данная лекарственная форма предпочтительна при эндометритах, так как оказывает щадящее действие и снижается болевой синдром при контакте с раневой поверхностью. Пена разносит действующие начала по всей полости матки, способствует проникновению их в глубокие слои эндометрия, механически очищает ее поверхность от остатков плаценты и воспалительного экссудата.

Известно ранозаживляющее средство, наносимое в виде пены на поврежденные ткани и представляющее собой комбинированный препарат, в состав которого входят масло облепиховое - 5,4 г, левомицетин - 1,62 г, анастезин 1,62 г, кислота борная - 0,27 г, триэтаноламин - 1,62 г, ланолин безводный - 0,27 г, кислота стеариновая - 2,16 г, глицерин - 5,4 г, вода очищенная - 35,64 г, хладон - 12 - 6,0 г [Покрышкин А.В. Олазоль - новое ранозаживляющее средство. Э-И Минмедпром, 1982, 36].

Для лечения лучевых поражений, химических и термических ожогов используется аэрозоль «Профезоль - пенный» следующего состава: фенольный гидрофобный препарат прополиса - 0,25 г, спирт этиловый 95% - 2,5 г, препарат ОС-20 - 0,625 г (или проксанол 268 - 4,0 г), вода очищенная - 21,0 г, хладон 12 - 5,0 г [А.И.Тихонов, Е.А.Батрак, Л.В.Деримедведь. Экспериментальное изучение радиозащитных свойств препарата с фенольным гидрофобным препаратом прополиса «Профезоль - пенный»// Провизор. - 1999. - № 7. - С.45-46].

К причинам, препятствующим в аналогах получению технического результата, достигаемого в заявляемом изобретении, можно отнести то, что хотя в их состав входят антибактериальные вещества, но они предназначены для лечения ран и ожогов.

Известно лекарственное средство «Аэрозоль нитазола» [Проспект «Аэрозоль нитазола» - М.: ЦБНТИ, Минмедпром, 1985], применяемое для лечения острого и хронического трихомониаза и включающее нитазол - 1,02 г, масло оливковое - 6,783 г, эмульсионные воски - 2,397 г, глицерин - 2,55 г, спирт 95% - 2,04, вода очищенная - 36,21 г, хладон-12 - 9,0 г.

Однако, во-первых, качественный и количественный состав компонентов данного лекарственного средства не позволяет достигнуть высокого терапевтического уровня при лечении и профилактике послеродового эндометрита у коров. Во-вторых, нитазол - активно действующий компонент препарата запрещен для использования крупному и мелкому рогатому скоту [Ветеринарные препараты в России: Справочник в 2 томах. Т.1./И.Ф.Кленова, К.Л.Мальцев, Н.А.Яременко, И.А.Архипов. - М.: Сельхозиздат, 2004. - С.252].

Известен антибактериальный лекарственный препарат Энроцид в форме раствора для внутриматочного введения, содержащий энрофлоксацин (0,4 г/100 мл) и вспомогательные компоненты - диметилсульфоксид и воду дистиллированную, который применяется для профилактики и лечения воспалительных процессов матки у коров и свиноматок после оказания родовспоможения, кесарева сечения; оперативного отделения последа, при послеродовых эндометритах и метрит-мастит-агалактии у свиноматок [Ветеринарные препараты в России. Справочник. М., 2004. - 4.1. - С.494].

Основным недостатком энроцида является быстрое снижение его терапевтической и профилактической эффективности из-за снижения чувствительности микрофлоры к активнодействующему компоненту препарата.

Йодопен - препарат для профилактики и лечения воспалительных процессов матки, в том числе острого послеродового эндометрита у коров и свиноматок, содержащий, мас.%: активнодействующее вещество - комплекс йода с поливинилпирролидоном (10-20) и пенообразующую основу, включающую полиэтиленгликоль (30-36), оксиэтилированные жирные спирты (0,6-1,2), стеарат кальция (0,8-1,2), лимонную кислоту (10-14), бикарбонат натрия (10-20) и лактозу (остальное) [RU 2155046 С1, 27.08.2000].

Главный недостаток йодопена заключается в трудностях при введении в полость матки суппозиториев при лечении острых послеродовых эндометритов у коров и, особенно, у свиноматок, а также невозможности его внутриматочного введения более двух раз при терапии эндометрита, в связи с чем понижается терапевтическая эффективность.

Прототипом технического решения является нородин - комплексный препарат для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров и метрит-мастит-агалактии у свиноматок, содержащий (мас.%): норфлоксацин - 0,4-1,0, диоксидин - 0,5-0,9, диметилсульфоксид - 30-40 и дистиллированную воду - остальное [RU 2333759 С1, 20.09.2008].

Недостатком нородина является то, что основой препарата является диметилсульфоксид и дистиллированная вода, а это не обеспечивает в полной мере сохранения активнодействующих компонентов в полости матки и не достигается максимальный контакт действующих веществ со слизистой оболочкой матки, тем самым происходит снижение его терапевтической и профилактической эффективности.

Технический результат - повышение эффективности профилактики и лечения эндометрита у коров.

Технический результат достигается использованием препарата, состоящего из следующих компонентов, мас.%:

Норфлоксацина гидрохлорид - 1,0-3,5,

Диоксидин- 1,0-3,5,

Диметилсульфоксид - 10,0,

Глицерин - 10,0,

1,2 пропиленгликоль - 10,0,

Масло подсолнечное рафинированное - 12,5,

Воск эмульсионный -1,0,

Кислота стеариновая - 1,0,

Вода для инъекций - до 100%.

Оптимальным является следующее соотношение компонентов, мас.%:

Норфлоксацина гидрохлорид - 3,0,

Диоксидин - 1,5,

Диметилсульфоксид - 10,0,

Глицерин - 10,0,

1,2 пропиленгликоль - 10,0,

Масло подсолнечное рафинированное - 12,5,

Воск эмульсионный - 1,0,

Кислота стеариновая - 1,0,

Вода для инъекций - до 100%.

Обоснованность этой комбинации связана с тем, что в лекарственной форме одновременно сочетаются два бактерицидных агента. Это обеспечивает синергидный эффект за счет того, что эти препараты действуют в одну фазу клеточного роста, но на разные метаболические пути.

Имеющиеся в заявляемом средстве синергический характер антибактериального действия, а также противовоспалительные и регенеративными свойства обеспечивают высокий профилактический и терапевтический эффект, хороший отток из полости матки воспалительного экссудата и сокращение количества дней бесплодия.

Сочетанное применение норфлоксацина и диоксидина обеспечивает повышение эффективности лечения и профилактики эндометрита у коров, быстрое выздоровление больных животных, снижение расхода активнодействующих веществ и их побочного действия на организм животных.

Лекарственная форма в виде пены обеспечивает экономичное дозирование, лучший контакт со слизистой оболочкой матки и придает лекарству пролонгированное действие. Под влиянием температуры тела пена увеличивается в объеме, заполняет все свободные места и каналы в полости матки. Кожа и слизистые не испытывают давления со стороны пены. Поэтому данная лекарственная форма предпочтительна при эндометритах, так как оказывает щадящее действие, и снижается болевой синдром при контакте с раневой поверхностью. Пена разносит действующие начала по всей полости матки, способствует проникновению их в глубокие слои эндометрия, механически очищает ее поверхность от остатков плаценты и воспалительного экссудата.

Диоксидин - препарат хиноксалинового ряда - 1,4-ди-N-окись-2,3-ди (оксиметил) хиноксалин [Падейская Е.Н. Антибактериальный препарат диоксидин: особенности биологического действия и значение в терапии различных форм гнойной инфекции / Инфекции и антимикробная терапия. - Т.3. - № 5. - 2001]. В основе антибактериального действия диоксидина лежит избирательное подавление синтеза ДНК. Кроме этого, препарат снижает активность внеклеточной нуклеазы и плазмокоагулазы у микроорганизмов, что приводит к нарушению функции генетического аппарата микробной клетки и в результате подавляется биосинтез биологически активных макромолекул, являющихся факторами патогенности.

Норфлоксацин относится к группе фторхинолонов, получаемых из нафтиридинналидиксиновых кислот. Как ингибитор гиразы он действует на бактериальный синтез ДНК, обладает широким спектром антимикробного действия и активен против грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов (эшерихии, стафилококки, пастереллы, сальмонеллы, микоплазмы и другие) [Падейская Е.Н. Фторхинолоны. Препараты с широкими показаниями для лечения бактериальных инфекций. М.: 2005, - 79 с.].

Основной целью сочетанного применения норфлоксацина и диоксидина является расширение спектра антибактериального действия, восполнение пробелов в спектре каждого из компонентов комбинации и предупреждение формирования устойчивости микроорганизмов.

Диметилсульфоксид - бесцветная прозрачная жидкость или бесцветные кристаллы (плавящиеся при температуре +18,5°С) со специфическим запахом (чем-то напоминающем запах чеснока). Гигроскопичен. Смешивается во всех соотношениях с водой и спиртом. Используется для местного применения при воспалительных и некоторых других заболеваниях (главным образом при заболеваниях опорно-двигательного аппарата). Препарат обладает способностью проникать через биологические мембраны, в том числе через кожные барьеры. Основанием для применения при воспалительных заболеваниях опорно-двигательного аппарата является его анальгетическое и противовоспалительное действие. Препарат обладает умеренным антисептическим и фибринолитическим эффектом. Он также усиливает проникновение через кожу ряда лекарственных веществ (пенетрирующий эффект).

Глицерин (СН ₂ОНСНОНСН₂ОН) - это трехатомный спирт; сиропообразная бесцветная вязкая жидкость сладкого вкуса, без запаха. Глицерин смешивается во всех отношениях с водой, этиловым или метиловым спиртом, анилином, ацетоном, растворяется в смеси СНСl₃ и С₂Н₅ОН (1:1), в абсолютных С₂ Н₅ОН и (С₂Н₅)₂О (2:1) и других. Фармакологическое действие: слабительное, дегидратирующее, дерматопротективное. При ректальном использовании оказывает легкое раздражающее действие на слизистую оболочку прямой кишки и рефлекторно стимулирует сократительную способность кишечника, оказывая слабительное действие. Оказывает смягчающее и дерматопротекторное действие, обладает высокими гигроскопичными и смазывающими свойствами. При нанесении на кожу активирует в ней обменные процессы. Глицерин используют в фармацевтической практике в качестве основы для приготовления мазей и других лекарственных форм [Промышленная технология лекарств: Учебное пособие в 2 томах. Т.2./Под ред. проф. В.И.Чуешова. - X.: Основа; Издательство УкрФА, 1999. - С.55].

Пропиленгликоль - двухатомный спирт алифатического ряда, вязкая жидкость без цвета и запаха, сладковатая на вкус. Используется как гигроскопическое вещество и как несущий элемент или растворитель в лечебных жидкостях и мазях. Пропиленгликоль, как хороший растворитель природных и синтетических веществ он нашел применение при изготовлении различных тинктур, растворов для инъекций, мазей, протираний и. т.д. Пропиленгликоль входит в противовоспалительные и бактерицидные составы для лечения заболеваний носовой полости, свищей, сенной лихорадки и др., а также в составы для заживления ран после глубоких ожогов или действия химических продуктов. При применении пропиленгликоля в медицинских целях учитываются его консервирующие, стерилизующие, бактерицидные, стабилизирующие, смазочные свойства, нетоксичность, свойства растворителя [Промышленная технология лекарств: Учебное пособие в 2 томах. Т.2./Под ред. проф. В.И.Чуешова. - X.: Основа; Издательство УкрФА, 1999. - С.56].

Известно использование воска эмульсионного в качестве эмульгатора и стабилизатора косметических кремов, фармацевтических мазей, пластификаторов [Химическая энциклопедия. М: Изд. «Сов. Энциклопедия», 1989, т.1, С.584-585, RU 2350332 С1, 27.03.2009].

Стеариновая кислота входит в состав глицеридов всех животных и растительных жиров и масел в количестве от 1 до 8%. В свободном виде содержится в секрете сальных желез. В косметических композициях используется при частичной нейтрализации щелочами или триэтаноламином как эмульгирующий, солюбилизирующий и структурообразующий, загущающий компонент. Стеариновую кислоту и ее эфиры используют при получении косметических средств. Она повышает устойчивость кожи к внешним неблагоприятным факторам, улучшает ее эластичность [Химический энциклопедический словарь. М: Изд. «Сов. Энциклопедия», 1983, С.541].

В качестве жирового компонента используют натуральное подсолнечное масло (можно оливковое, кукурузное).

Воду для инъекций получают дистилляцией или осмосом. Является апирогенной, не содержит антимикробных веществ и других добавок, максимально допустимый уровень содержания бактериальных эндотоксинов 0,25 Едэ/мл [Фармакопейная статья ФС 42-2620-97, Министерство здравоохранения и медицинской промышленности Российской Федерации, Фармакопейный государственный комитет, утверждена 11.03.97, - 4 с.].

Препарат для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров перед применением подогревают при температуре 45±5°С и интенсивно встряхивают. Нажимая на распылительную головку, вводят лекарственный препарат в полость матки с помощью катетера для искусственного осеменения, закрепленного на носике головки. Препарат вводят внутриматочно по 60 г (1 доза) на животное с интервалом 24 часа с лечебной целью в течение 3-4 дней, а с профилактической целью после оказания родовспоможения или оперативного отделения последа - однократно.

Изготавливается препарат для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров следующим образом. В реактор с контактным термометром и контурным отоплением и охлаждением до температуры (50±5)°С роторно-кавитационной установки (РКУ) загружается рецептурное количество воды и диметилсульфоксида. Затем в реактор вносят последовательно, с интервалом в 10 минут, диоксидин и норфлоксацина гидрохлорид. Смешивание проводят при температуре 40±5°С до полного растворения компонентов.

В плавильный котел, обогреваемый парами, снабженный высокооборотистой мешалкой, помещают растительное масло, глицерин, пропиленгликоль и вносят тугоплавкие компоненты: воск эмульсионный и стеариновую кислоту. Смесь расплавляют при температуре 65-70°С.

Ввод жировой основы из плавильного котла осуществляется непосредственно в камеру озвучивания в процессе прохождения через нее смеси водного раствора и жировой основы. Из камеры озвучивания готовый препарат подается в бункер для фасовки. Расфасовывается препарат в алюминиевые аэрозольные баллоны, которые обкатываются и заправляются расчетным количеством хладона 12 или 134а.

Сущность технического решения поясняется примерами.

Пример 1. Изучение антимикробных свойств и определение оптимального соотношения компонентов в препарате для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров.

Изучены антимикробные свойства препарата. Выявлено оптимальное количественное содержание норфлоксацина и диоксидина в опытах in vitro. В модельных опытах установлено, что препарат обладает широким спектром антимикробного действия в отношении испытанных культур микроорганизмов.

1.1. Опыты in vitro

Изучение антимикробной активности и соотношения норфлоксацина и диоксидина в препарате для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров проводилось in vitro методом серийных разведений. В качестве тест-культур использовали референтные и полевые (патогенные) штаммы микроорганизмов - возбудителей эндометритов у коров, типированных по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим и серологическим свойствам. Соотношение норфлоксацина и диоксидина в препарате для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров изучали в следующих комбинациях:

Комбинация 1. Состав препарата для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров; компоненты, мас.%:

Норфлоксацина гидрохлорид - 2,25,

Диоксидин - 2,25,

Диметилсульфоксид - 10,0,

Глицерин - 10,0,

1,2 пропиленгликоль - 10,0,

Масло подсолнечное рафинированное - 12,5,

Воск эмульсионный - 1,0,

Кислота стеариновая - 1,0,

Вода для инъекций - до 100%.

Комбинация 2. Состав препарата для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров; компоненты, мас.%:

Норфлоксацина гидрохлорид - 3,5,

Диоксидин - 1,0,

Диметилсульфоксид - 10,0,

Глицерин - 10,0,

1,2 пропиленгликоль - 10,0,

Масло подсолнечное рафинированное - 12,5,

Воск эмульсионный - 1,0,

Кислота стеариновая - 1,0,

Вода для инъекций - до 100%.

Комбинация 3. Состав препарата для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров; компоненты, мас.%:

Норфлоксацина гидрохлорид - 3,0,

Диоксидин - 1,5,

Диметилсульфоксид - 10,0,

Глицерин - 10,0,

1,2 пропиленгликоль - 10,0,

Масло подсолнечное рафинированное - 12,5,

Воск эмульсионный - 1,0,

Кислота стеариновая - 1,0,

Вода для инъекций - до 100%

Комбинация 4. Состав препарата для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров; компоненты, мас.%:

Норфлоксацина гидрохлорид - 1,0,

Диоксидин - 3,5,

Диметилсульфоксид - 10,0,

Глицерин - 10,0,

1,2 пропиленгликоль - 10,0,

Масло подсолнечное рафинированное - 12,5,

Воск эмульсионный - 1,0,

Кислота стеариновая - 1,0,

Вода для инъекций - до 100%.

Комбинация 5. Состав препарата для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров; компоненты, мас.%:

Норфлоксацина гидрохлорид - 1,5,

Диоксидин - 3,0,

Диметилсульфоксид - 10,0,

Глицерин - 10,0,

1,2 пропиленгликоль - 10,6,

Масло подсолнечное рафинированное - 12,5,

Воск эмульсионный - 1,0,

Кислота стеариновая - 1,0,

Вода для инъекций - до 100%.

Антимикробную активность различных комбинаций состава препарата сравнивали с антимикробной активностью норфлоксацина и диоксидина.

Минимальную бактериостатическую концентрацию (МБсК) изучаемых препаратов определяли методом серийных разведений в мясопептонном бульоне (МПБ); минимальную бактерицидную концентрацию - путем высева из пробирок с прозрачной средой на плотные питательные среды (МПА), не содержащие препарат.

В качестве жидкой питательной среды применяли мясопептонный бульон. При определении чувствительности стрептококков к среде добавляли 1% глюкозы.

Содержание микробных клеток в одном мл среды составляло 250 тысяч.

Посевы инкубировали при 37°С в течение 18-20 часов. По истечении срока инкубации учитывали результат.

Результаты проведенных исследований представлены в таблице 1.

Исследованиями установлено, что оба компонента препарата имеют высокую антимикробную активность по отношению к Е. coli 866 и Staph. aureus 209Р.

При изучении бактериостатической и бактерицидной активности норфлоксацина установлено, что он обладает высокой активностью по отношению к Staph. aureus 209Р соответственно 3,12 и 6,25 мкг/мл, к Е. coli 866 - 0,39 и 0,78 мкг/мл.

Бактериостатическая и бактерицидная активности диоксидина по отношению к Staph. aureus 209Р составляла соответственно 25 мкг/мл и 50 мкг/мл, к Е. coli 866 антимикробная активность составила - МБсК - 1,56 мкг/мл и МБцК - 3,12 мкг/мл.

МБсК композиций 1, 2 и 4 в отношении Е. coli по сравнению с таковой у норфлоксацина (0,39 мкг/мл) не изменилась, композиций 3 и 5 (0,19 мкг/мл) снизилась в 2 раза. По сравнению с активностью диоксидина (1,56 мкг/мл) МБсК снизилась в 4 раза у композиций 1, 2 и 4, в 8 раз - у композиций 3 и 5. Минимальная бактерицидная концентрация для композиций 1, 2 и 4 составила 0,78 мкг/мл, для композиций 3 и 5 - 0,39 мкг/мл и превышала бактериостатическую в 2 раза.

В отношении Staph. aureus минимальная ингибирующая концентрация композиции 4 по сравнению с МБсК норфлоксацина (3,12 мкг/мл) повысилась в 8 раз (25,0 мкг/мл), композиций 1 и 5 - в 4 раза (12,5 мкг/мл), композиции 2 - не изменилась (3,12 мкг/мл), а у композиции 3 снизилась в 2 раза (1,56 мкг/мл). Минимальная бактериостатическая концентрация композиций 1 и 5 в отношении Staph. aureus по сравнению с активностью диоксидина (25,0 мкг/мл) снизилась в 2 раза (12,5 мкг/мл), композиции 2 - в 8 раз (3,12 мкг/мл), композиции 3 - в 16 раз и композиции 4 - не изменилась. Минимальная бактерицидная концентрация всех изученных композиций превышала бактериостатическую в 2 раза.

Таблица 1
Антимикробная активность норфлоксацина, диоксидина и различных композиций препарата для лечения и профилактики послеродового эндо- метрита у коров, мкг/мл
Композиция	Н	Д	Препарат
	МБсК	МБцК	МБсК	МБцК	МБсК	МБцК
Е. coli 866
К 1					0,39	0,78
К2					0,39	0,78
К3	0,39	0,78	1,56	3,12	0,19	0,39
К4					0,39	0,78
К5					0,19	0,39
Staph. aureus 209Р
К 1					12,5	25,0
К2					3,12	6,25
К3	3,12	6,25	25,0	50,0	1,56	3,12
К4					25,0	50,0
К5					12,5	25,0
Обозначения: Н - норфлоксацин; Д - диоксидин; К1 - композиция 1; К2 - композиция 2; К3 - композиция 3; К4 - композиция 4; К5 - композиция 5

На основании полученных данных установлено, что наиболее выраженным антимикробным действием обладает композиция 3. Совместное применение норфлоксацина и диоксидина в различных соотношениях позволило снизить минимальную бактериостатическую концентрацию в отношении изученных культур, что свидетельствует о синергическом действии составляющих компонентов.

1.2. Опыты in vivo

Соотношение норфлоксацина и диоксидина в препарате для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров в опытах in vivo изучали в следующих комбинациях:

Комбинация 1. Состав препарата для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров; компоненты, мас.%:

Норфлоксацина гидрохлорид - 2,25,

Диоксидин - 2,25,

Диметилсульфоксид - 10,0,

Глицерин - 10,0,

1,2 пропиленгликоль - 10,0,

Масло подсолнечное рафинированное - 12,5,

Воск эмульсионный - 1,0,

Кислота стеариновая - 1,0,

Вода для инъекций - до 100%.

Комбинация 2. Состав препарата для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров; компоненты, мас.%:

Норфлоксацина гидрохлорид - 3,5,

Диоксидин - 1,0,

Диметилсульфоксид - 10,0,

Глицерин - 10,0,

1,2 пропиленгликоль - 10,0,

Масло подсолнечное рафинированное - 12,5,

Воск эмульсионный - 1,0,

Кислота стеариновая - 1,0,

Вода для инъекций - до 100%.

Комбинация 3. Состав препарата для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров; компоненты, мас.%:

Норфлоксацина гидрохлорид - 3,0,

Диоксидин - 1,5,

Диметилсульфоксид - 10,0,

Глицерин - 10,0,

1,2 пропиленгликоль - 10,0,

Масло подсолнечное рафинированное - 12,5,

Воск эмульсионный - 1,0,

Кислота стеариновая - 1,0,

Вода для инъекций - до 100%.

Проверка эффективности препаратов проводилась на коровах ООО «Воронежпищепродукт» Новоусманского района Воронежской области.

Первый опыт проводили на коровах красно-пестрой породы, по 3-5 отелам с массой тела 450-500 кг. Диагноз ставили на основании клинического, акушерско-гинекологического обследования, данных анамнеза.

Препараты вводили в полость матки при помощи одноразовых пластмассовых катетеров в дозе 60 г на животное с 24-часовым интервалом до клинического выздоровления.

Животных контрольной группы лечили с использованием нородина, который вводили в полость матки с помощью шприца Жане в дозе 200 мл первые два введения и по 150 мл - в последующем с 48-часовым интервалом до клинического выздоровления [RU 2333759 С1, 20.09.2008].

За животными проводили ежедневное клиническое обследование, учитывая время исчезновения клинических признаков заболевания, количество выздоровевших и оплодотворившихся животных, коэффициент оплодотворения, продолжительность периода от отела до оплодотворения.

Из таблицы 2 следует, что лучший терапевтический эффект достигнут при применении композиции № 3.

Таблица 2
Терапевтическая эффективность заявленного и известного препарата при лечении эндометрита у коров
Показатели	Заявленный препарат	Прототип
№ 1	№ 2	№ 3	(нородин)
Количество животных, гол.	20	19	18	17
Сроки выздоровления, дни	14,3±0,71	12,7±1,06	12,4±0,87	13,9±1,17
Количество введений препаратов	4,49±0,34	3,46±0,18	3,30±0,21	4,20±0,35
Выздоровело, гол.	15	16	16	13
Терапевтическая эффективность, %	75,0	84,2	88,9	76,5
Период от отела до оплодотворения, дни	84,3±6,18	72,1±6,87	68,7±4,47	87,9±7,13
Оплодотворилось при первом осеменении:
гол.	12	13	13	11
%	60,0	68,4	72,2	64,7
Коэффициент оплодотворения	2,68±0,14	2,11±0,11	1,98±0,07	2,34±0,17
Токсический эффект, гол.	0	0	0	0

Второй опыт проводили на коровах красно-пестрой породы, по 3-5 отелам с массой тела 450-500 кг. Профилактику послеродового эндометрита проводили путем однократного внутриматочного введения препарата при помощи одноразовых пластмассовых катетеров сразу после оперативного отделения последа или через 6-8 часов после нормальных родов в дозе 60 г на животное однократно.

Животным контрольной группы однократно внутриматочно вводили нородин в дозе 200 мл сразу после оперативного отделения последа или через 6-8 часов после нормальных родов [RU 2333759 С1, 20.09.2008].

Животным контрольной группы без применения прототипа никаких препаратов после отела не вводили.

За животными проводили ежедневное клиническое наблюдение, учитывая уровень заболеваемости коров послеродовым эндометритом, процент оплодотворившихся животных, период от отела до оплодотворения, коэффициент оплодотворения.

Из таблицы 3 следует, что лучший профилактический эффект достигнут при применении композиции № 3.

1.3. Антимикробная активность препарата для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров

Согласно данным, представленным в таблице 4, препарат обладает выраженными антимикробными свойствами. Бактериостатическая концентрация для кокковой микрофлоры составила 1,56-6,25 мкг/мл. Активность препарата в отношении музейных штаммов эшерихий была достаточно высокой - 0,19-1,56 мкг/мл, однако в отношении полевых снижалась до 3,12 мкг/мл. Более устойчивыми к препарату оказались Strept. porcinius, МБцК к которым составила 12,5 мкг/мл, при МБсК - 3,12 мкг/мл.

Бактерицидное действие препарата в отношении изученных культур превышало бактериостатическое соответственно в 2 раза.

Таблица 4
Антимикробная активность препарата для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров
Культура микроорганизмов	МБсК, мкг/мл	МБцК, мкг/мл
Escherichia coli 57/856	1,56	3,12
Escherichia coli 04	0,39	0,78
Escherichia coli 0139 (n)	3,12	6,25
Escherichia coli 866	0,19	0,39
Staph. aureus 209P	1,56	3,12
Staph. aureus (п)	6,25	12,5
Staph. cowan-I	3,12	6,25
Strept. feccalis гр. D	6,25	12,5
Strept. porcinius	3,12	12,5

Исследования показали, что препарат для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров обладает широким спектром антимикробного действия, бактерицидная активность которого составляет от 0,39 до 12,5 мкг/мл.

Пример 5. Токсикологическая безопасность препарата для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров.

Согласно существующему положению о лекарственных средствах, предназначенных для лечения животных, проведено экспериментальное доклиническое изучение общей фармакологической активности и токсикологических свойств препарата для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров.

При проведении исследований использовали фармакологические, токсикологические, биохимические, патоморфологические методы исследования, применяемые для изучения лекарственных средств, получившие апробацию в научно-исследовательской практике.

Препарат для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров не токсичен для лабораторных животных при однократном пероральном введении. При однократном внутрижелудочном введении LD₅₀ для белых мышей составляет 53428,4 мг/кг, для белых крыс - 54048,7 мг/кг массы тела. По показателям острой токсичности он относится к веществам малоопасным - 4 класс опасности по ГОСТ 12.01.007-76. При однократном парентеральном (подкожном) введении LD₅₀ для белых мышей составляет 18575,3 мг/кг, для белых крыс - 19357,2 мг/кг массы тела. Выраженной видовой и половой чувствительности к препарату для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров не выявлено. Во всех испытанных дозах препарат для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров не оказывает существенного влияния на поведение и общее состояние животных, интенсивность роста и вегетативные функции.

При хроническом подкожном введении препарат для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров не вызывает изменений поведения и общего состояния животных, отклонений в скорости роста, нарушений гемопоэза, функций печени, почек. Препарат не влияет на биохимические показатели крови, характеризующие функциональное состояние внутренних органов, не вызывает изменений метаболических процессов в печени и нарушений ее обезвреживающей функции.

Препарат для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров не оказывает местнораздражающего действия на слизистые оболочки и кожные покровы. Препарат в исследованных дозах не обладает аллергизирующими свойствами.

Таким образом, проведенные испытания препарата для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров показали, что он обладает широким спектром антимикробного действия, выраженным лечебным действием и эффективнее прототипа, является малотоксичным. Применение препарата технологично и экономически выгодно.