способ выявления псевдоэксфолиативного материала на ранних стадиях заболевания глаза

Классы МПК:A61B8/10 исследование глаза
G01N1/28 подготовка образцов для исследования
G01N1/30 окрашивание; импрегнирование 
Автор(ы):, , , , , ,
Патентообладатель(и):Федеральное государственное учреждение "Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" имени академика С.Н. Федорова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2011-04-19
публикация патента:

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии. Для выявления псевдоэксфолиативного материала (ПЭМ) в структурах задней камеры глаза на ранних стадиях заболевания у пациентов с катарактой проводят ультразвуковую биомикроскопию. При выявлении точечных включений на поверхности структур, обращенных в заднюю камеру глаза, во время проведения факоэмульсификации после парацентеза роговицы берут соскоб в зоне расположения точечных включений. Выполняют мазок-отпечаток, высушивают его на воздухе до полного испарения влаги. Окрашивают краской-фиксатором Май-Грюнвельда по методике Паппенгейма, далее докрашивают методом гистологической окраски по Маллори. При обнаружении на мазке-отпечатке фибриллярно-гранулярных структур темно-синего цвета констатируют наличие ПЭМ. Способ позволяет выявлять псевдоэксфолиативный материал в структурах задней камеры глаза на ранних стадиях заболевания. 2 ил., 2 пр.

способ выявления псевдоэксфолиативного материала на ранних стадиях   заболевания глаза, патент № 2455937 способ выявления псевдоэксфолиативного материала на ранних стадиях   заболевания глаза, патент № 2455937

Формула изобретения

Способ выявления псевдоэксфолиативного материала (ПЭМ) в структурах задней камеры глаза на ранних стадиях заболевания, заключающийся в том, что у пациентов с катарактой проводят ультразвуковую биомикроскопию и, если в результате выявляют точечные включения на поверхности структур, обращенных в заднюю камеру глаза, то далее во время проведения факоэмульсификации после парацентеза роговицы берут соскоб в зоне расположения точечных включений, из которого выполняют мазок-отпечаток, затем полученный мазок-отпечаток высушивают на воздухе до полного испарения влаги, окрашивают краской-фиксатором Май-Грюнвельда по методике Паппенгейма, далее докрашивают методом гистологической окраски по Маллори и при обнаружении на мазке-отпечатке фибриллярно-гранулярных структур темно-синего цвета констатируют наличие ПЭМ.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для выявления псевдоэксфолиативного материала (ПЭМ) на поверхности структур глазного яблока.

В клинической офтальмологии диагноз псевдоэксфолиативного синдрома (ПЭС) выставляется на основании визуализации ПЭМ белесовато-серого цвета на передней капсуле хрусталика, что характерно для поздних, развитых стадий ПЭС с глубокими структурными и системными нарушениями, трудно поддающимися коррекции. По данным исследователей в процессе развития синдрома ПЭМ сначала последовательно появляется на структурах, обращенных в заднюю камеру глаза (на отростках цилиарного тела, задней поверхности радужки, цинновой связке, экваториальной и периэкваториальной зонах капсулы хрусталика), с перераспределением в последнюю очередь на переднюю капсулу хрусталика, заднюю поверхность роговицы, на структуры угла передней камеры. Таким образом, на ранних стадиях заболевания передняя капсула хрусталика остается клинически интактной, в связи с чем затруднена диагностика ПЭС.

В медицине существуют два основных метода морфологического исследования биологических образцов: гистологический и цитологический.

Гистологический метод предназначен для изучения структуры фрагмента тканей, представляющих единый объект.

При гистологическом методе исследования объектом выступает фрагмент тканей, который после забора погружается в фиксирующий раствор для стабилизации тканей, далее подвергается стандартной гистологической проводке, при которой происходит обезвоживание и обезжиривание путем последовательного переноса этого фрагмента тканей по спиртам восходящей концентрации, пропитывание и уплотнение (заливка парафином, целлоидином или др.) с приготовлением гистологических срезов и их последующей окраской одной из гистологических окрасок, дифференцирующей клетки и ткани исследуемого фрагмента [«Микроскопическая техника» Ромейс Б., М.: Изд. ИЛ. - 1953. - 718 с.; «Практическое руководство по патогистологической технике для офтальмологов» Архангельский В.Н., М.: Медгиз. - 1957. - 111 с.]. При этом в исследуемом образце после гистологической проводки сохраняются лишь структуры, которые крепятся между собой при помощи элементов стромы и межклеточных взаимоотношений, а гистологическая окраска дает четкую визуализацию этих структур и позволяет оценить процессы, происходящие в них.

При цитологическом методе есть возможность исследовать отдельные клетки, биологические жидкости и другие бесструктурные образцы (аспираты при тонкоигольной биопсии (ТИАБ) опухолей, кровь, соскобы, слизь, мокроту и т.д.) [Руководство по цитологии, т.1-2, М. - Л., 1965-1966 гг.]. Для этой методики достаточно разместить исследуемый объект на предметном стекле (мазок, отпечаток тканей, капля и др.), высушить его на воздухе и окрасить одним из способов цитологической окраски (по методике Паппенгейма, по методике Лейшмана и др.). Метод не требует предварительной фиксации образца, так как она осуществляется в процессе самой окраски за счет метилового спирта, на котором готовятся красители. Этот способ позволяет только визуализировать клетки, волокнистые структуры, форменные элементы крови и другие объекты, входящие в состав исследуемого образца, но, так как окраски неспецифичны, ценность его ограничивается информативностью лишь в отношении структуры и внешнего вида клеток.

Каждый из описанных методов обладает отрицательными моментами в отношении исследования ПЭМ, так как она не имеет плотной фиксации с подлежащими структурами. Поэтому при попытке выявления гистологическим методом данного материала происходит его механическое вымывание из исследуемого образца. При исследовании мазка-отпечатка по стандартной цитологической методике удается только сохранить его в образце, но неспецифичность окраски делает невозможным отдифференцировать ПЭМ и другие неклеточные структуры, входящие в состав исследуемого мазка. Эти проблемы создают значительные трудности в изучении структуры ПЭМ, вызывают сложности в исследовании этиопатогенеза ПЭС и затрудняют раннюю диагностику этого синдрома.

Авторам не известен способ выявления ПЭМ на ранних стадиях заболевания глаза.

Техническим результатом является расширение средств диагностики, выявление ПЭМ на поверхности структур глазного яблока с целью дальнейшего определения метода лечения ПЭС и профилактики осложнений, связанных с ним.

Технический результат достигается тем, что у пациентов с катарактой проводят ультразвуковую биомикроскопию (УБМ), и если в результате выявляют точечные включения на поверхности структур, обращенных в заднюю камеру глаза, то далее во время проведения факоэмульсификации (ФЭК) после парацентеза роговицы берут соскоб в зоне расположения точечных включений, из которого выполняют мазок-отпечаток, затем полученный мазок-отпечаток высушивают на воздухе до полного испарения влаги, окрашивают краской-фиксатором Май-Грюнвельда по методике Паппенгейма, далее докрашивают методом гистологической окраски по Маллори и при обнаружении на мазке-отпечатке фибриллярно-гранулярных структур темно-синего цвета констатируют наличие ПЭМ.

Изобретение поясняется изображением мазков-отпечатков с ПЭМ на фиг.1, 2.

Фиг.1. Мазки-отпечатки донорских глаз с поверхности цилиарных отростков. Окраска - по Паппенгейму-Маллори. Увеличение ×200.

Фиг.2. Мазок-отпечаток передней капсулы хрусталика. Окраска - по Паппенгейму-Маллори. Увеличение ×50.

При создании изобретения методика была изначально отработана на донорских глазах, у которых были обнаружены белесоватые отложения на цилиарных отростках и задней поверхности радужки при макромикроскопическом их препарировании. С поверхностей этих структур брали мазки-отпечатки и исследовали при помощи стандартного метода приготовления цитологических мазков по методике Паппенгейма с красителем-фиксатором Май-Грюнвальда, описанной в учебной литературе «Цитология и общая гистология», автор Быков В.Л. - Sotis, СПб., 2002. - 519 с. (с.49-51). Далее мазок-отпечаток докрашивали методом окраски по Маллори.

В результате на окрашенном мазоке-отпечатоке была обнаружена аномальная фибриллярно-гранулярная структура темно-синего цвета, что указывает белковую природу, сходную с коллагеновой и ретикулярной тканью ПЭМ (фиг.1).

Таким образом, была разработана методика, по которой мазок-отпечаток с ПЭМ проходит приготовление цитологического препарата, включающее фиксацию и частичную окраску с сохранением ПЭМ в исследуемом образце, и, не проходя все этапы стандартной гистологической обработки, окрашивается гистологической окраской по Маллори в темно-синий цвет, что делает возможным изучение структуры ПЭМ.

Данный метод использован для выявления диагноза ПЭС в трупных донорских глазах, его применение позволило изучить ранние морфологические признаки этого процесса и определить их клиническое соответствие для повышения точности установления диагноза ПЭС у офтальмологических пациентов.

Использование разработанного метода цитогистологического исследования для выявления ПЭМ на ранних стадиях заболевания глаза является необходимым, так как он отличается высокой информативностью и точностью.

При приготовлении мазка-отпечатка используется цитологический метод фиксации образца (соскоб) с сочетанием двух методик окрашивания: по методике Паппенгейма и по методике Маллори, что приводит к сохранению ПЭМ в исследуемом мазке-отпечатке для дальнейшего изучения его структуры.

Применяя методику гистологического окрашивания по Маллори, выявляют фибриллярно-гранулярные структуры, окрашенные специфически в темно-синий цвет, и таким образом подтверждают диагноз ПЭС.

Фибриллярно-гранулярная структура, окрашенная в темно-синий цвет, подтверждает его белковую природу, сходную с коллагеновой и ретикулярной тканью, но не амилоидной природы (как предполагалось ранее), так как при данной окраске амилоид приобретает красно-сиреневый цвет (фиг.2).

Способ осуществляется следующим способом.

Всем пациентам с осложненной катарактой проводят УБМ. В случаях обнаружения точечных включений на поверхности структур, обращенных в заднюю камеру глаза, с целью определения характера этих включений во время проведения ФЭК после выполнения парацентеза берут соскоб в зоне их расположения, который наносят на чистое предметное стекло, при этом образуют мазок-отпечаток. Полученный мазок- отпечаток высушивают на воздухе при комнатной температуре примерно в течение 2 часов. Подсохший на воздухе препарат окрашивают краской-фиксатором Май-Грюнвальда по методике Паппенгейма в течение 3 мин, далее, не сливая краски, к ней добавляют дистиллированную воду, увеличивая объем вдвое, через 1 минуту краску с мазка сливают и, не ополаскивая ее, приступают к гистологической окраске по методике Маллори. Наносят на мазок 10 капель Карболфуксин по Цилю, оставляют на 10 мин. Промывают в дистиллированной воде, наносят на мазок 10 капель кислотного буфера, оставляют на 10 сек, промывают в дистиллированной воде и наносят 10 капель раствора фосфорномолибденовой кислоты, оставляют на 5 мин. Далее, не промывая, наносят 10 капель полихромного раствора Маллори, оставляют на 1 мин; промывают в дистиллированной воде; обезводят в трех емкостях 96-градусного спирта по 1 минуте; просветляют в ксилоле и заключают в бальзам под покровное стекло. В результате получают мазок-отпечаток, на котором визуализируются фибриллярно-гранулярные структуры, окрашенные в темно-синий цвет, что подтверждает наличие ПЭМ.

Изобретение подтверждается следующими клиническими примерами.

Пример 1.

Пациент Р., возраст 58 лет, поступил в клинику с диагнозом: осложненная катаракта правого глаза, подвывих хрусталика 1 степени. На УБМ были отмечены множественные точечные включения в периэкваториальной зоне капсулы хрусталика, в связи с чем при выполнении ФЭК после осуществления парацентеза роговицы шпателем с передней капсулы хрусталика был взят соскоб, из чего сформировали мазок-отпечаток, который исследовали согласно изобретению. В результате обнаружили фибриллярно-гранулярную структуру, окрашенную в темно-синий цвет, что подтверждает наличие ПЭМ.

Пример 2.

Пациент С., возраст 69 лет, поступил в клинику с диагнозом: осложненная катаракта левого глаза, миопия средней степени. На УБМ были отмечены множественные точечные включения относительно высокой акустической плотности на задней поверхности радужки. С целью выяснения природы данных включений при выполнении ФЭК после проведения парацентеза роговицы взяли соскоб с задней поверхности радужки, который отправили на цитогистологическое исследование. С данного фрагмента сделали мазок-отпечаток на предметном стекле и исследовали согласно изобретению. Фибриллярно-гранулярной структуры, окрашенной в темно-синий цвет, на данном мазке-отпечатке не обнаружили, что свидетельствует об отсутствии ПЭМ.

Точный и высокоинформативный разработанный способ позволяет выявить ПЭМ на поверхности структур глазного яблока на ранних стадиях заболевания, изучить его структуру, что в дальнейшем дает возможность определить методы лечения ПЭС и профилактики связанных с ним осложнений.

Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2455937

patent-2455937.pdf

Класс A61B8/10 исследование глаза

способ диагностики прогрессирования близорукости -  патент 2512955 (10.04.2014)
способ определения показаний для лечения офтальмологических осложнений системного атеросклероза -  патент 2494679 (10.10.2013)
способ определения дифференцированных показаний к выбору режима лазерного лечения центральной серозной хориоретинопатии с длиной волны 577 нм. -  патент 2484775 (20.06.2013)
способ определения показаний к удалению прозрачного хрусталика при гиперметропии высокой степени -  патент 2476157 (27.02.2013)
способ диагностики менингиомы и глиомы зрительного нерва -  патент 2472472 (20.01.2013)
способ прогнозирования прогрессирования приобретенной миопии у детей -  патент 2471423 (10.01.2013)
способ оценки эффективности органосохраняющего лечения увеальной меланомы -  патент 2471422 (10.01.2013)
иммерсионная среда для проведения объемной эхографии орбиты при анофтальме и субатрофии глаза и способ проведения объемной эхографии орбиты при анофтальме и субатрофии глаза -  патент 2470589 (27.12.2012)
способ определения показаний к хирургической коррекции фиброза передней капсулы хрусталика при артифакии в сочетании с патологией периферической зоны глазного дна -  патент 2468774 (10.12.2012)
устройство для определения давности наступления смерти человека -  патент 2462999 (10.10.2012)

Класс G01N1/28 подготовка образцов для исследования

способ изготовления реплик для исследования микростроения мерзлых пород в растровом электронном микроскопе -  патент 2528256 (10.09.2014)
способ приготовления стандартных образцов аэрозолей -  патент 2525427 (10.08.2014)
эталонный образец с контролируемым распределением напряжений по толщине -  патент 2525153 (10.08.2014)
способ патоморфологического определения давности наступления инфаркта миокарда -  патент 2518333 (10.06.2014)
призматический образец для оценки прочности материала -  патент 2516599 (20.05.2014)
устройство для улавливания биологических частиц и его применение -  патент 2516522 (20.05.2014)
способ определения коэффициента неоднородности смеси трудноразделимых сыпучих материалов -  патент 2515009 (10.05.2014)
способ диагностики синдрома инсулинорезистентности -  патент 2506889 (20.02.2014)
анализ субстратов, на которые нанесены агенты -  патент 2505798 (27.01.2014)
способ пробоотбора и пробоподготовки твердых материалов -  патент 2503942 (10.01.2014)

Класс G01N1/30 окрашивание; импрегнирование 

способ экспериментального определения параметров пластической деформации при механической обработке металлов -  патент 2527139 (27.08.2014)
способ диагностики эндогенной интоксикации -  патент 2456596 (20.07.2012)
способ препарирования тонких пленок висмута на слюде для выявления границ блоков методом атомно-силовой микроскопии -  патент 2452934 (10.06.2012)
способ окраски ядрышковых организаторов на гистологических препаратах и цитологических мазках -  патент 2447438 (10.04.2012)
автомат для окраски мазков на предметных стеклах -  патент 2440562 (20.01.2012)
способ подготовки клеток конъюнктивы к цитологическому исследованию -  патент 2415424 (27.03.2011)
способ исследования рельефообразующих структур биологических оболочек -  патент 2413943 (10.03.2011)
способ восстановления естественной окраски кожи лица у трупов -  патент 2411950 (20.02.2011)
способ дифференциальной диагностики буллезных дерматозов -  патент 2408279 (10.01.2011)
способ оценки гормональной перестройки эндометрия в секреторной фазе менструального цикла -  патент 2371101 (27.10.2009)
Наверх