дерматологическое применение молочных белков

Формула изобретения

1. Применение белковой фракции молочной сыворотки, содержащей от 50 до 98 мас.% лактоферрина для изготовления оральной композиции для лечения акне, которую применяют без дополнительного местного лечения, и где белковую фракцию молочной сыворотки вводят в дозировке от 40 до 800 мг на пациента в день.

2. Применение по п.1, где белковая фракция молочной сыворотки дополнительно содержит основные белки или пептиды, имеющие молекулярный вес от 10 кДа до 60 кДа.

3. Применение по п.1, где белковую фракцию молочной сыворотки вводят в дозе от 60 мг до 800 мг на пациента в день.

4. Применение по любому из пп.1-3, где оральная композиция представляет собой таблетку.

5. Применение по любому из пп.1-3, где пероральная композиция представляет собой пищевой продукт или напиток, включающий, по меньшей мере, углевод и/или белок, не содержащийся в молочной сыворотке.

6. Пероральная дозированная форма для лечения акне, которая представляет собой таблетку, содержащую фракцию молочной сыворотки, содержащую от 50 до 98 мас.% лактоферрина, обеспечивающую, по меньшей мере, 20 мг лактоферрина и содержащую, по меньшей мере, 50 мас.% нередуцирующих спиртов, полисахаридов и/или сахарных спиртов.

7. Питательная композиция, которая представляет собой йогурт или напиток в дозированной форме, включающая, по меньшей мере, углевод и/или белок, не содержащийся в молочной сыворотке, и белковую фракцию молочной сыворотки, содержащую от 50 до 98 мас.% лактоферрина, где композиция включает, по меньшей мере, 20 мг лактоферрина на дозированную форму, и весовое соотношение между белковой фракцией молочной сыворотки, содержащей лактоферрин, и углеводом и/или белком, не содержащимся в молочной сыворотке, составляет от 1:4 до 1:100.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к применению фракционированных белков молока для лечения акне.

Уровень техники

Acne vulgaris представляет собой легко распознаваемое кожное заболевание. Оно является одним из самых часто встречающихся кожных заболеваний с распространенностью, достигающей почти 100% среди подростков. Маленькие невоспаленные повреждения акне могут быть не более чем незначительной неприятностью, но у людей с более грубым воспаленным узловатым акне болезненность, социальные расстройства и физические, а также и психологические рубцы могут приводить к изменению жизни.

Самое раннее микроскопическое повреждение, наблюдаемое при acne vulgaris, представляет собой микрокомедон. Данное повреждение характеризуется фолликулярным закупориванием трубочки сально-волосяной единицы (pilosebaceous unit) (которая состоит из волосяного фолликула и сальной железы). Кожный жир вырабатывается в сально-волосяной единице, и часть его может захватываться кератиновой пробкой вместе с ороговевшим материалом, вызывая увеличение фолликула. На стадии микрокомедона заметны фолликулярная эпителиальная гиперпролиферация (гиперкератоз), закупорка фолликулов, а также гиперактивность сальных желез.

Микрокомедон является предшественником других повреждений акне: с увеличением повреждения он становится клинически выраженным и превращается в невоспаленный закрытый или открытый комедон (белый угорь или черный угорь, соответственно). Со временем (микро)комедон может заполняться бактериями Propionibacterium acnes, которые секретируют хемотаксические и провоспалительные продукты клеточных стенок и биологические промежуточные продукты. Как следствие, клетки воспаления окружают фолликул, проникают сквозь стенку фолликула и вырабатывают ферменты, которые разрушают фолликулярную стенку. В свою очередь это приводит к более крупным и частым воспалительным повреждениям, таким как папулы, пустулы и узелковые кистозные поражения. Другие факторы, такие как генетическая предрасположенность, стресс и диета, также могут влиять на развитие и тяжесть акне.

Современные виды лечения

Топическая и системная терапии формируют две главные терапевтические стратегии для лечения акне сегодня. В зависимости от тяжести поражения применяют отдельную или комбинированную терапию. В общем топическая и системная терапии направлены на ингибирование гиперкератоза и закупорки фолликулов, уменьшение выработки кожного жира, снижение бактериальной нагрузки и воспалительного ответа.

Главные стратегии топической терапии (в составе геля, крема и раствора) включают местные ретиноиды и местные антибиотики. Системная или пероральная терапия в основном используется для людей со средней и тяжелой формами акне. И для мужчин и для женщин данная терапия заключается в пероральных антибиотиках и пероральных ретиноидах. Гормональное лечение, включая пероральные контрацептивы, иногда используют при большинстве типов акне у взрослых и подростков женского пола.

Однако при использовании упомянутых выше терапий выявляются многие неблагоприятные побочные эффекты, от сухости, покраснения и раздражения кожи при использовании ретиноидов, до увеличенной устойчивости к антибиотикам при использовании антибиотиков, и увеличения веса и тромбоза при применении пероральных контрацептивов.

Известный уровень техники

US 2004/0214750 раскрывает местный анти-акне крем, содержащий коровий лактоферрин и растительные компоненты, который показывает улучшение акне через 10 недель применения. Кроме того, описано, что комбинированное применение данного крема и орального продукта, содержащего лактоферрин в подсолнечном масле, приводит к значительному улучшению состояния кожи. Происхождение и природа лактоферрина не раскрыты, также не раскрыта и дозировка. В указанном документе утверждается важность местного лечения и не содержится предложений только по пероральному введению.

В WO 98/44940 описаны способы ингибирования активности интерлейкина 1 введением лактоферрина. Упомянут широкий ряд аллерген-индуцированных состояний, таких как артрит, астма, синусит, ринит и бронхит и, включая поражения кожи, такие как дерматит, псориаз, УФ-вызванное воспаление, опрелость и морщины. Уровень предпочтительной пероральной дозировки активных ингредиентов составляет от 50 мг до 500 мг на кг массы тела в день, что соответствует примерно от 3 до 40 г для взрослого человека в день. Для поражений кожи рассматривают только топические препаративные формы. В экспериментах показано, что лактоферрин оказывает ингибирующий эффект на синтез фактора некроза опухоли , который обладает активностью против аллерген-индуцированных заболеваний, но нет экспериментальных данных о том, что лактоферрин обладает активностью против кожных заболеваний, таких как акне.

JP-A 7-300425 описывает напитки и другие композиции, содержащие лактоферрин для предотвращения адгезии патогенных бактерий (например, E. coli) и кариогенных грибов. Также описан лосьон для предотвращения кожного воспаления и прыщей.

Целью настоящего изобретения является предоставить средства и способы для лечения акне, в которых используют натуральные или подобные натуральным агенты и которые имеют повышенную эффективность.

Описание изобретения

Согласно изобретению было обнаружено, что акне можно эффективно лечить введением пероральной композиции, содержащей фракцию белков молочной сыворотки, включающей лактоферрин. Дополнительное топическое лечение не является необходимым и фактически нежелательно. Таким образом, изобретение относится к способу лечения акне, включающему пероральное введение человеку, страдающему от акне, эффективного количества фракции белков молочной сыворотки, включающей лактоферрин.

Лактоферрин, который используют в способе изобретения, предпочтительно, является нативным коровьим лактоферрином. Коровий нативный лактоферрин представляет собой гликопротеин, имеющий молекулярный вес 80 кДа и связывающий железо, который содержится в экзокринных выделениях, которые подвергаются действию нормальной флоры: молоко, слезы, назальный экссудат, бронхиальная слизь, желудочно-кишечные жидкости, цервиковагинальная слизь, семенная жидкость и слюна. Обычными источниками коровьего лактоферрина являются молозиво, молоко или молочная сыворотка. Особенно привлекательным материалом является фракция белков сыворотки, обогащенная лактоферрином, содержащая от 50 до 98% мас. лактоферрина, более предпочтительно, от 60 до 95% мас., остатком являются другие сывороточные белки или пептиды. Содержание, превышающее 95% или даже 98%, также может быть использовано, но обнаружено, что оно не дает дополнительных преимуществ и, с другой стороны, увеличивает стоимость. В отдельных воплощениях содержание лактоферрина фракции составляет от 75 до 90% мас., или, альтернативно, от 90 до 98% мас. В связи с этим, белки и пептиды, такие как GMP (гликомакропептиды) и протеозопептоны, которые происходят из казеина молока, также называют белками молочной сыворотки. Предпочтительно, чтобы другие белки молочной сыворотки являлись основными, то есть, чтобы они элюировались из кислой ионообменной смолы и имели изоэлектрическую точку выше pH 6, и в частности, выше 7. Также предпочтительно, чтобы другие белки молочной сыворотки имели молекулярный вес от 10 кДа до 60 кДа.

Предпочтительно белки молочной сыворотки или пептиды молочной сыворотки включают N-терминальные последовательности, выбранные из следующей группы:

- Ile-Gln-Arg-Pro-Pro-Lys-Ile-Gln-Val-Tyr

- Xaa-Pro-Val-Thr-[Asp или Arg]-Glu-Asn-Thr-Pro-Ile

(Xaa представляет собой аминокислоту, в частности, Gly, Ala, Arg, Met, Val, Phe или Thr)

- Xab-Lys-Glu-Thr-Asn-Tyr-Pro-Asn-Lys-Gly

(Xab представляет собой Ser, Gly или Asp).

Отмечают, что в данных последовательностях один или два индивидуальных аминокислотных остатка могут быть заменены другим аминокислотным остатком и, кроме того, что N-конец может быть обеспечен одним или двумя дополнительными аминокислотными остатками.

Предпочтительно, белковая фракция молочной сыворотки содержит менее чем 5% мас. иммуноглобулинов, в частности, менее чем 2% мас. Кроме того, предпочитают, чтобы во фракциях было мало лактопероксидазы, а именно менее чем 10% мас., в частности, менее чем 4% мас. Предпочтительно весовое соотношение между лактопероксидазой и лактоферрином составляет менее 0,4, более предпочтительно, между 0,01 и 0,2.

Лактоферрин белковой фракции молочной сыворотки предпочтительно имеет содержание железа (Fe³⁺) от 50 до 400 мд (миллионных долей) (ppm, part per million), более предпочтительно от 75 до 300 мд и наиболее предпочтительно от 100 до 200 мд, для чистого лактоферрина. Содержание железа белковой фракции молочной сыворотки составляет предпочтительно от 40 до 350 мд, более предпочтительно от 60 до 250 мд и наиболее предпочтительно от 80 до 180 мд веса белков молочной сыворотки. Лактоферрин предпочтительно является нативным, а именно не денатурированным.

Фракция, содержащая лактоферрин, может быть получена фракционированием белков молочной сыворотки с помощью аффинной хроматографии, ионообменной хроматографии, ультрафильтрации и подобными методами и их комбинациями. Процесс, как правило, начинается с молочного продукта, который обычно обезжиривают, например, микрофильтрацией или центрифугированием. Процесс может далее включать в себя загрузку на кислую ионообменную смолу, промывку, элюирование основной фракции, концентрирование, обессоливание основной фракции и высушивание (например, сушка распылением).

Источником молочного продукта может быть человек, корова, коза, овца, лама, як, буйвол, лошадь и т.д. Молочной продукт может быть молоком, концентрированным молоком, безлактозным молоком, пастеризованным молоком, термически обработанным молоком; сывороткой, обезжиренной сывороткой, сырной сывороткой, казеиновой сывороткой, молочнокислой сывороткой, концентрированной сывороткой, безлактозной сывороткой, ультрафильтрованной или нанофильтрованной сывороткой, сывороточным белковым концентратом (WPC) и другими молочными фракциями, содержащими большинство или все молочные белки помимо интактного казеина.

Ионообменная смола может быть сильно кислого типа (сульфокислота), или слабо кислого типа (карбоновая кислота). Последний тип является предпочтительным. Предпочтительными являются макропористые синтетические полимеры, например, основанные на полиметакрилате. Примерные типы включают в себя Sepabeads FP-SP от Mitsubishi (Италия) и Amberlite IRC 50 от Röhm&Haas (США).

Также нативный коровий лактоферрин представляет собой предпочтительный компонент сывороточной белковой фракции для использования в качестве активного агента, часть (например, до 50% по весу или более) или он весь может быть замещен другими лактоферринами, такими как лактоферрин других млекопитающих (людей или других приматов, лошадей, коз, верблюдов и других), рекомбинантный лактоферрин (человеческий, коровий или другой), произведенный в животных или растениях, усеченный лактоферрин, пептиды - производные лактоферрина (лактоферрицин, лактоферрампин и другие), обработанный кислотой лактоферрин, как описано в находящейся на рассмотрении заявке PCT/EP2004/001849, и иммобилизованный лактоферрин, как указано в WO 0072874. Лактоферрин может быть составной частью лактоферрин-содержащих жидкостей (сыворотка, молоко, молозиво) или композиции, включающей в себя лактоферрин и ростовые факторы, происходящие из молока, как описано в EP 869134 A1.

Лактоферрин и другие сывороточные белки могут быть использованы как таковые или в сочетании с другими активными агентами или вспомогательными компонентами. Примеры добавочных компонентов, которые могут быть использованы, представляют собой биоактивные белки, полученные от млекопитающих (такие как лактопероксидаза), гликопротеины, ферменты, углеводы, полисахариды (например, пектин, карбоксиметилцеллюлоза, каррагенан, гепарины), жирные кислоты, пептиды, аминокислоты, факторы роста, лизоцим, гистатины, цистатины, казеин, казеин фосфопептид (CPP), пептиды или смеси пептидов, обогащенные одной или более, например, (условно) незаменимыми аминокислотами, такими как глутамин, цистеин, глицин, аргинин, триптофан и т.д.; антигипертензивные пептиды, ретиноиды, витамины и гормоны; неживотные компоненты, например, растительного, рекомбинантного, химического или другого происхождения, антибиотики, волокна, пробиотики, пребиотики, ретиноиды, витамины, гормоны, бактериоцины, молочная кислота и травы.

Белковая фракция, содержащая лактоферрин, может быть представлена таким образом, который является общепринятым для пероральных фармацевтических или пищевых композиций. Где композиция для введения представляет собой питательную композицию, она может быть в виде пищевой добавки, плитки, напитка, йогурта, конфеты, жевательной резинки и т.д. Такие пищевые продукты содержат, по меньшей мере, один углевод и белки, не содержащиеся в молочной сыворотке, такие как казеин, необязательно вместе с другими пищевыми компонентами, такими как жиры, волокна, витамины, минералы и необязательные добавки, такие как ароматизаторы, подсластители, стабилизаторы и тому подобное. Предпочтительно весовое соотношение белковой фракции молочной сыворотки, содержащей лактоферрин, и углевода и/или белка, не содержащихся в молочной сыворотке, равно от 1:4 до 1:100, более предпочтительно, от 1:9 до 1:49.

В случае если композиция представляет собой фармацевтическую композицию, она может быть, например, таблеткой, гранулой, порошком, сиропом, капсулой, раствором, гелем, пастилкой и т.д., содержащей стандартные наполнители, такие как вода, крахмал, производные крахмала (например, натрий крахмал гликолят) или фракции крахмала, микрокристаллическая целлюлоза или производные целлюлозы, пектин, другие полисахариды, лактоза, другие сахара и т.д. Таблетки, особенно жевательные таблетки, представляют собой предпочтительное воплощение фармацевтической композиции изобретения, поскольку всасывание через слизистую оболочку полости рта, минуя желудочно-кишечный тракт, считают дополнительным преимуществом. Жевательная таблетка является предпочтительно мягкой и предпочтительно имеет общий вес, по меньшей мере, 750 мг. Предпочитают, чтобы в таблетке содержание (восстановленных) сахаров было относительно низким (например, меньше чем 25% мас., особенно меньше чем 10% мас. сухого вещества таблетки), и чтобы наполнители были выбраны из, например, не восстановленных сахаров, полисахаридов, сахароспиртов для, по меньшей мере, 50% мас., или даже, по меньшей мере, 70% мас. композиции. Твердые дозированные формы могут быть покрыты оболочкой, растворимой в кишечнике. Несмотря на то, что могут быть использованы другие системные пути введения, такие как ректальный, назальный или парентеральный пути, предпочтительным является пероральный путь введения.

Дозировка зависит от различных индивидуальных факторов, таких как возраст, физическое и обусловленное питанием состояние, тяжесть акне, которая может быть оценена средним медицинским персоналом или врачом. Типичные дозировки будут в пределах от 10 мг до 2 г белковой фракции молочной сыворотки, содержащей лактоферрин, для одного пациента, в один день, предпочтительно от 20 мг до 1,2 г. Для эффективного лечения предпочтительными являются дозы, по меньшей мере, 40 мг или предпочтительно, по меньшей мере, 60 мг или даже, по меньшей мере, 80 мг в день, например, от 40 мг до 800 мг или до 600 мг лактоферрина для одного пациента в день. В пересчете на вес тела дозы обычно составляют от 0,1 до 50 мг лактоферрина на кг веса в день, предпочтительно, от 0,25 до 25 мг, более предпочтительно, от 0,5 до 15 мг/кг день или даже от 1 до 10 мг/кг день.

Дневная доза может быть введена в однократной дозированной форме или, предпочтительно, путем множественной дневной дозы, например, 2-4 раза в день. Таким образом, в случае, когда используют суточную однократную дозированную форму (например, таблетку), дозированная форма содержит, по меньшей мере, 10 мг, но предпочтительно, по меньшей мере, 40 мг лактоферрина на форму. В случае двух дозированных форм в день, дозированная форма содержит, по меньшей мере, 10 мг, но предпочтительно, по меньшей мере, 20 мг и еще более предпочтительно, по меньшей мере, 30 мг на форму.

При использовании более частых суточных дозировок количество лактоферрина является сходным, так что общее суточное количество составляет предпочтительно, по меньшей мере, 40 мг, предпочтительно, по меньшей мере, 80 мг.

Лечение может продолжаться в течение периода времени от нескольких дней до нескольких месяцев, например, от 1 недели до 6 месяцев, или даже дольше, если необходимо. Дозировки могут оставаться постоянными в течение периода лечения. Альтернативно и преимущественно лечение можно начинать с относительно высоких доз, например, от уровня доз, указанных выше, до удвоенного уровня данных доз для первого периода, например, между 1 и 6 неделями, с последующими относительно низкими дозами, например, половина от уровней, указанных выше, для второго периода, например, между 4 неделей и 1 годом или даже дольше.

Лечению может подвергаться любой человек, страдающий от акне или склонный к акне. В случаях тяжелого акне, которое без лечения имеет тенденцию к увеличению, данное лечение может быть проведено как способ подавления дальнейшего распространения акне. Данное лечение от акне можно проводить в период менструации.

Данное изобретение также относится к композиции, содержащей лактоферрин, кроме того включающей от 2 до 25% мас., от общего содержания белка, основных белков с молекулярным весом от 10 до 60 кДа, как описано выше.

Кроме того, изобретение относится к пероральной дозированной форме, содержащей, по меньшей мере, 10 мг лактоферрина или более высокие количества, которые указаны выше, в зависимости от способа введения (однократная или многократная суточная доза). Дозированная форма может быть фармацевтической композицией (например, таблетка) или питательной композицией, как подробно представлено ранее.

Примеры

Пример I: приготовление фракции белков молочной сыворотки, содержащей лактоферрин

Молочную сыворотку от сыра чеддер выдерживают при 60°C в течение 20 сек и концентрируют 3-5 раз обратным осмосом. Стадию концентрирования проводят при максимальной температуре 30°C при pH 6,2. Концентрированную молочную сыворотку пропускают через колонку, заполненную кислой ионообменной смолой типа Amberlite IRC-50. Загрузку колонки выполняют 6-8 основными объемами в час и менее чем 20 основных объемов на цикл. При данных условиях связывается до 2 г лактоферрина на 1 литр ионообменной смолы. Затем смолу отмывают, по меньшей мере, 4 основными объемами воды с последующей отмывкой солевым раствором с концентрацией менее чем 0,5 М NaCl. Желаемую фракцию элюируют 1 М NaCl или раствором с более высокой концентрацией. Нет необходимости включать какой-либо буфер в состав элюирующего раствора. Элюированную фракцию освобождают от солей и концентрируют ультрафильтрацией/диафильтрацией, как известно в данной области техники. Затем проводят микрофильтрацию концентрата и высушивают распылением.

Анализ продукта проводят электрофорезом в ПААГ геле (20% акриламид) и Вестерн блоттингом геля на PVFD мембране. Затем вырезают большие полоски и обрабатывают их методом автоматической последовательной деградации по Эдману для определения первых 10 N-концевых аминокислот или пептидов.

Пример II: таблетки, содержащие композицию, полученную в примере I.

Следующие ингредиенты используют для получения таблеток, содержащих 50 мг лактоферрина

Ингредиент	мг на таблетку
Сорбит P60W	700
Маннит DS200	200
Примогель (натрий крахмал гликолят; DMV International)	40
Продукт примера I (79,6% лактоферрина)	62,8
Яблочная кислота	6
Mg стеарат (Witco Regular)	5
Апельсиновая вкусовая добавка (натуральная) Ottens S-627	3,2
Апельсиновый краситель FD&C желтый № 6, квасцовый лак 35-42%	1,4
Итого	1018,4

Приготовление таблеток:

Все ингредиенты кроме Mg стеарата смешивают в течение 10 минут. Затем добавляют Mg стеарат и продолжают смешивание 3 минуты. Жевательные таблетки размера 5/8 изготовляют прямым прессованием.

Пример III: изучение in vivo эффекта белковой фракции молочной сыворотки на контролирование акне

В исследовании участвуют сорок четыре подростка (23 юноши и 21 девушка, средний возраст 15,3 года (в диапазоне от 13 до 19 лет)). Испытуемые получают по четыре жевательные таблетки, содержащие белковую фракцию коровьей молочной сыворотки, содержащей лактоферрин (полученный согласно примеру I), в 251 мг белковой фракции молочной сыворотки в день (200 мг лактоферрина в день) в течение последующих 12 недель, потребляемые в виде двух таблеток утром и двух таблеток вечером. Делали фотографии испытуемых в фас и профиль, и их оценивал дерматолог. Данные обследованных собирали в неделю 1, которая была до начала исследования, и в недели 2, 4, 8 и 12. Исследование продолжалось 12 недель. Фотографии оценивали вплоть до недели 8 и проводили опрос подростков на неделе 12. Число черных угрей (открытых комедонов) и нечерных угрей (включая белые угри (закрытые комедоны), папулы, пустулы и узелково-кистозные повреждения) подсчитывают на лбу, правой щеке, левой щеке, подбородке и на носу. Суммируют черные угри и нечерные угри на всех участках лица для каждого испытуемого каждую неделю. Результаты представлены в таблице 1 ниже. Все данные последовательные изменения являются статистически значимыми (P<0,001 для всех случаев).

При опросе на неделе 12, 80% подростков отметили улучшения, а именно уменьшение акне, и пожелали продолжить лечение. Более 90% популяции обследованных рекомендовали бы данное лечение другим, страдающим от акне. Кроме того, подростки также отметили дополнительные положительные эффекты. Они чувствовали себя более здоровыми и меньше болели или не болели совсем (по сравнению с членами семьи или друзьями, которые не принимали лактоферрин).

Таблица 1 Подсчет черных угрей, нечерных угрей (включая белые угри (закрытые комедоны), папулы, пустулы и узелково-кистозные повреждения) и всех дефектов (черные угри + нечерные угри) в неделю.
Результат	Неделя	Среднее значение (стандартное отклонение)	Минимум	Медиана	Максимум
Черные угри	1	56 (72)	0	33	404
2	25 (43)	0	12	267
4	18 (32)	0	9	194
8	4 (7)	0	1	27
Нечерные угри	1	16 (18)	0	8	77
2	8 (8)	0	5	35
4	5 (5)	0	2	21
8	1 (3)	0	0	12
Все дефекты	1	71 (81)	2	44	452
2	33 (48)	1	18	302
4	22 (34)	0	11	207
8	5 (8)	0	1	30

Данные, полученные при исследовании подростков, показывают, что пероральное введение коровьего лактоферрина способно существенно уменьшить acne vulgaris. С помощью регрессионных моделей показано, что указанные изменения в динамике по времени не зависят от пола и возраста. Это означает, что мужчины и женщины следуют аналогичному продольному распределению, как и испытуемые по всему возрастному диапазону от 13 до 19 лет. Неблагоприятные побочные эффекты не описаны. Большинство популяции, вошедшей в исследование, подтверждало лечебные эффекты приема белковой фракции молочной сыворотки. Они отмечали уменьшение акне, чувствовали себя лучше и более здоровыми, и решили продолжать прием таблеток.

В целом, результат исследования дает веское основание для положения натуральной композиции биоактивной сыворотки, полученной из коровьего молока, включающей в себя прием лактоферрина, в качестве новой стратегии предотвращения и лечения acne vulgaris. В противоположность существующей системной и топической терапиям (основанным на антибиотиках, ретиноидах и других соединениях), композиция лактоферрин/молочная сыворотка не сопровождается побочными эффектами и может быть использована на постоянной основе.

Пример IV: Изучение in vivo различных форм введения лактоферрина на акне

Жевательные таблетки А и В (содержащие 6,25 и 25 мг лактоферрина на таблетку, соответственно) готовят, используя количества, которые даны ниже (количества в мг на таблетку). Таблетки готовят, как описано в примере I.

	А (6,25 мг)	В (25 мг)
Сорбит P60W	756,7	732,4
Маннит DS200	200	200
Натрий крахмал гликолят	40	40
Лактоферрин продукт; 77,2% лактоферрин	8,1	32,4
Яблочная кислота	6,0	6,0
Магний стеарат (Witco Regular)	5,0	5,0
Апельсиновая вкусовая добавка (натуральная) Ottens S-627	3,2	3,2
Апельсиновый краситель FD&C желтый № 6, квасцовый лак 35-42%	1,4	1,4
Общий вес	1020,4	1020,4

Топический крем С готовят из следующих ингредиентов (количества в г)

Фаза 1	С
Тефоза 63 неионный эмульгатор (ПЭГ-6 стеарат, гликоль стеарат,& ПЭГ-32 стеарат)	200,0
Лабрафил М 1944 CS (олеоил макрогол-6 глицериды)	30,0
Минеральное масло	30,0
Деионизированная вода (стерильно отфильтрованная)	616,9
Фосфорная кислота 80%	1,6
Фаза 2
Лактоферрин (77,2% лактоферрин), 15% водный раствор	121,5
Общий вес	1000,0

Перемешивают фазу 1 и нагревают до 75°C. Затем смесь медленно охлаждают при перемешивании. Добавляют фазу 2 при 50°C. Конечную смесь распределяют в тюбики по 30 г каждый, содержащие 14,2 мг лактоферрина на г.

Сорок (40) испытуемых в возрасте 12-19 лет, юношей и девушек, отвечающих следующим критериям:

- акне от слабого до умеренного;

- нет текущего перорального приема лекарств или OTC медикаментов для лечения акне;

- не имеется хронических заболеваний с проявлениями на коже лица;

- нет лечения антибиотиками в течение 1 месяца до исследования;

- отсутствие беременности, кормления грудью или намерения забеременеть;

- не имеется известной аллергии на коровье молоко и молочные продукты;

были распределены по трем группам:

группа 1 (N=14; 9 юношей, 5 девушек; средний возраст 15,0 лет; средняя продолжительность акне 3,9 лет): испытуемые получают таблетки А, содержащие лактоферрин, с рекомендуемым потреблением 2 таблетки утром и 2 таблетки вечером, что соответствует 25 мг лактоферрина в день в течение 6 недель.

Группа 2 (N=14; 7 юношей, 7 девушек; средний возраст 15,1 лет; средняя продолжительность акне 3,8 лет): испытуемые получают таблетки В, содержащие лактоферрин, с рекомендуемым потреблением 2 таблетки утром и 2 таблетки вечером, что соответствует 100 мг лактоферрина в день в течение 6 недель.

Группа 3 (N=12; 6 юношей, 6 девушек; средний возраст 15,2 лет; средняя продолжительность акне 3,6 лет): испытуемые получают таблетки А, содержащие лактоферрин, с рекомендуемым потреблением 2 таблетки утром и 2 таблетки вечером, что соответствует 25 мг лактоферрина в день плюс топический крем С с лактоферрином для местного применения 2,45 мл в день.

При Т=0, делают фотографии испытуемых в фас и профиль, которые оценивает независимый дерматолог, и проводят осмотр воспаленных и поврежденных участков лица. Испытуемые получают таблетки или таблетки и крем с инструкциями по применению, а также опросники для документирования их впечатлений во время исследования, включая чувства жжения и зуда.

На 2, 4 и 6 неделях после этого испытуемых вновь фотографировали и опрашивали и собирали их заполненные опросники.

Ввиду возможных сезонных эффектов оценивают только соответственные результаты. Результаты представлены в таблицах 2 и 3.

Таблица 2 Общая дерматологическая оценка акне (комедоны, папулы, пустулы, узелки и кисты) после 2 недель и медианы общей оценки (средние значения), и невоспалительные явления (комедоны) через 6 недель лечения (средние значения).
	2-0 общее среднее (%)	6-0 медиана, невосп. (%)
Группа 1 (перорально 25)	+21	+12
Группа 2 (перорально 100)	-12	-10
Группа 3 (перорально 25 + местно)	+19	+7

Таблица 3 Дерматологическая оценка открытых комедонов, закрытых комедонов и субъективных оценок зуда через 6 недель лечения (значения медиан)
	Изменения в открытых комедонах (%)	Изменения в закрытых комедонах (%)	Изменение в зуде (%)
Группа 1 (перорально 25)	+14	-16	+50
Группа 2 (перорально 100)	-36	-37	0
Группа 3 (перорально 25 + местно)	+35	-27	+67

Результаты показывают, что пероральное лечение 25 мг лактоферрина в день не дает существенного общего эффекта и оказывает незначительный благоприятный эффект на закрытые комедоны, сезонные эффекты не учитывали. Дополнительное местное лечение 35 мг лактоферрина в день не усиливало эффект и фактически могло приводить к обратным результатам, особенно в воздействии на открытые комедоны и зуд. Пероральное лечение 100 мг лактоферрина в день, тем не менее, оказывало устойчивый улучшающий эффект, в частности, на невоспалительные явления (открытые и закрытые комедоны).