способ оценки тяжести острого поражения печени в эксперименте

Формула изобретения

Способ оценки тяжести острого поражения печени в эксперименте, включающий проведение лабораторному животному после токсического поражения печени углеводных нагрузочных тестов, отличающийся тем, что в конце первых суток после токсического повреждения печени лабораторному животному натощак проводят нагрузку галактозой путем внутрибрюшинного ее введения в дозе 4 г/кг массы тела и через 1 ч регистрируют изменение содержания глюкозы в крови, на 2-е сутки проводят нагрузку глюкозой путем ее внутрибрюшинного введения в дозе 2 г/кг массы тела и через 1 ч определяют содержание глюкозы в крови, после чего подсчитывают коэффициент, отражающий отношение глюкозы в крови в конце 1-го часа глюкозотолерантного теста к аналогичному значению глюкозы при выполнении галактозотолерантного теста и, и если полученное отношение превышает 1.1, но меньше 2, то степень некрозов достигает 12-20%, а при значениях коэффициента, превышающих 2 - степень некрозов достигает 30-40%.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к экспериментальной медицине, в частности к патофизиологии, гепатологии. Оно может быть использовано в клинике для ранней диагностики тяжести поражения печени.

В качестве ближайшего аналога были выбраны широко известные диагностические тесты, такие как глюкозотолерантный (ГТТ) и галактозотолерантный (ГалТТ).

ГТТ включает изучение «сахарной кривой» после нагрузки глюкозой. Обычно доза вводимой внутрь глюкозы для проведения этого теста составляет 1 г на 1 кг массы тела, и контроль концентрации глюкозы в крови проводят ежечасно на протяжении 3 часов.

На современном этапе этот метод преимущественно применяется для диагностики нарушений углеводного обмена в эндокринологии (Недосугова Л.В. РМЖ, № 12) и для оценки функциональных нарушений при хронических процессах, протекающих в печени (Гриневич В.Б. Рос. Журн. Гастроэнтер., гепат., колопрокт. - Прил. № 28, Мат.12 Российской гастро. недели, 16-18 ноября 2006 г., М. - № 5, T.XVI, 2006. - С.88).

Также для диагностики функциональных нарушений печени можно проводить галактозотолерантный тест.

С этой целью галактозу вводят внутрь в количестве 40 г, растворенную в 400 мл воды, и определяют концентрацию галактозы в крови и моче каждый час в течение 3-6 часов, а также регистрируют изменение содержания глюкозы в крови (А.В. Древаль. Лабораторное дело, 1988. - № 6. С.30-33).

Недостатками указанных методов являются большая продолжительность теста по времени и необходимость многократного определения концентрации глюкозы в крови в ходе нагрузочных тестов. Помимо этого, указанные дозы не позволяют в полной мере оценить степень функциональных нарушений.

Целью изобретения является упрощение методики, сокращение времени проводимых манипуляций и повышение информативности указанных тестов.

Сущность предложенного способа диагностики состоит в том, что в конце первых суток после токсического повреждения печени лабораторному животному натощак проводят нагрузку галактозой путем в/б введения в дозе 4 г/кг массы тела и через 1 час регистрируют изменение содержания глюкозы в крови, на 2 сутки проводят нагрузку глюкозой путем в/б введения в дозе 2 г/кг массы тела и через 1 час определяют содержание глюкозы в крови, затем подсчитывают коэффициент, отражающий соотношение глюкозы в крови в конце 1 часа ГТТ к аналогичному значению глюкозы при выполнении ГалТТ, если полученное соотношение превышает 1,1, но меньше 2, степень некроза достигает 12-20%, а при значениях коэффициента выше 2 - степень некрозов достигает 30-40%.

Полученные результаты показали, что чем значительнее повреждение гепатоцитов, тем существеннее различия в содержании глюкозы в крови при проведении ГТТ и ГалТТ, при этом отсутствие значимого увеличения уровня глюкозы в крови в конце 1 часа ГалТТ при патологии печени свидетельствует о нарушении метаболической функции печени с нарушением трансформации галактозы в глюкозу, а выраженность гипергликемии в конце 1 часа при выполнении ГТТ отражает нарушение гликогенсинтетической функции печени. Выбор указанных доз глюкозы и галактозы, используемых для нагрузки, основан на том, что именно такое их количество вызывает максимальное напряжение метаболической и синтетической функции гепатоцитов у здоровых животных, а следовательно, позволяет выявлять минимальные нарушения на ранней стадии патологии.

Способ осуществляется следующим образом.

Натощак лабораторной крысе в/б вводят галактозу в дозе 1 мл на 100 г массы тела в виде 40% раствора, и регистрируют изменение в содержании глюкозы в крови в конце 1 часа. На следующий день проводят ГТТ, для чего вводят глюкозу в дозе 0,5 мл на 100 г массы тела в виде 40% раствора, и через 1 час оценивают уровень глюкозы в крови. После завершения исследования проводят анализ соотношения концентраций глюкозы в крови с помощью указанного коэффициента, и если полученное соотношение превышает 1,1 но меньше 2, имеет место умеренное повреждение гепатоцитов, а при значениях, превышающих 2, тяжелое поражение печени.

Пример 1.

Крысе № 1 для индукции поражения печени был введен в/б 50% масляный раствор четыреххлористого углерода в дозе 0,25 мл на 100 г веса.

После этого через 24 часа этому животному в/б был введен 40% раствор галактозы в дозе 1 мл на 100 г массы тела, и через 1 час концентрация глюкозы в крови составила 5,7 ммоль/л.

На следующие сутки крысе также в/б ввели 40% раствор глюкозы в дозе 0,5 г на 100 г массы тела. Через 1 час уровень глюкозы в крови оказался 8,4 ммоль/л. Коэффициент соотношения концентрации глюкозы составил 1,5, что характеризует поражение гепатоцитов как среднетяжелое. Данный факт был подтвержден морфологически (степень некрозов 12-20%).

Пример 2

Крыса № 2 в/б получила ЧХУ в виде 50% масляного раствора в дозе 0,5 мл на 100 г веса.

Через 24 часа у этого животного после аналогичной нагрузки галактозой через 1 час от начала теста уровень глюкозы в крови оказался 4,2 ммоль/л, а через 48 часов ее уровень через 1 час после введения глюкозы составил 10,1 ммоль/л. Коэффициент соотношения концентрации глюкозы в крови был 2,4, а следовательно, можно предполагать тяжелое поражение клеток печени гепатотропным ядом. При морфологическом исследовании печени этого животного выявлено значительно более значительные деструктивные изменения в ткани (степень некрозов 30-40%).

Данный способ применен при исследовании функционального состояния печени у 10 интактных и 20 опытных крыс после токсического ее поражения разной степени тяжести, обусловленной введением ЧХУ в дозе 0,25 на 100 г массы тела (1 опытная группа) и 0,5 мл на 100 г массы тела (2 опытная группа). Наличие поражения печени у опытных животных было подтверждено биохимическими и морфологическими исследованиями.

Результаты исследований представлены в таблице.

Так, у контрольных животных этот коэффициент не превышал 1, у животных первой опытной группы, получивших ЧХУ в дозе 0,25 мл на 100 г массы тела, этот коэффициент варьировал от 1,1 до 1,9, ay животных второй опытной группы, которым ЧХУ был введен в 2 раза большем количестве, указанное соотношение превышало 2 (значения коэффициента варьировали от 2 до 2,8).

Для обработки полученных данных и проведения статистического анализа в исследованных группах была использована программа статистической обработки информации «Statgraph». Вычисляли среднюю и ошибку средней (М±m). Сравнение осуществляли с помощью критериев Стьюдента (t). Уровень достоверности оценивался значением р. Различия при сравнении считались значимыми с вероятностью более 95% при р<0,05.

Уровень глюкозы в крови мМоль
	В конце 1 часа ГТТ	В конце 1 часа ГалТТ	Коэффициент
Контроль	7,4±0,12	7,1±0,13	1±0,02
1 опытная группа	8,2±0,3*	5,4±0,24*	1,5±0,05*
2 опытная группа	10,4±0,8*,**	4,6±0,19*,**	2,3±0,04*, **

* значимость различий с контрольными данными,

** значимость различий между данными опытных групп.

Использование предложенного способа диагностики имеет следующие преимущества:

1) позволяет всесторонне оценить уровень метаболических нарушений в клетках печени при их остром повреждении;

2) позволяет сократить продолжительность манипуляций;

3) метод прост в применении;

4) позволяет своевременно скорректировать комплекс лечебных мероприятий.