производное аминофосфата и модулятор рецептора s1p, содержащий его в качестве активного ингредиента

Формула изобретения

1. Аминофосфатное производное, представленное общей формулой (1а)



в которой R³ представляет собой неразветвленную алкильную группу, содержащую 1-3 атомов углерода; X представляет собой атом кислорода или атом серы, а n обозначает 2 или 3, или его фармацевтически приемлемая соль или гидрат.

2. Аминофосфатное производное по п.1, отличающееся тем, что представляет собой соединение общей формулы (1а), в котором R ³ является метильной группой, или его фармацевтически приемлемую соль или гидрат.

3. Аминофосфатное производное по п.1, отличающееся тем, что указанное соединение, представленное общей формулой (1а), представляет собой:

моноэфир (R)-2-амино-5-[2-хлор-4-(3-трифторметил-фенокси)фенил]-2-метилпентил фосфорной кислоты,

моноэфир (R)-2-амино-5-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенил-тио)фенил]-2-метилпентил фосфорной кислоты,

моноэфир (R)-2-амино-4-[2-хлор-4-(3-трифторметил-фенокси)фенил]-2-метилбутил фосфорной кислоты,

моноэфир (R)-2-амино-4-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенил-тио)фенил]-2-метилбутил фосфорной кислоты,

моноэфир (R)-2-амино-5-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенил-тио)фенил]-2-пропилпентил фосфорной кислоты; или их фармацевтически приемлемую соль или гидрат.

4. Аминофосфатное производное по п.1, синтезированное с помощью стадии, позволяющей соединению, представленному общей формулой (2),



в которой R¹ представляет собой трифторметильную группу, R² представляет собой атом хлора, А представляет собой атом галогена, X представляет собой атом кислорода или атом серы, а n означает 2 или 3, и соединению, представленному общей формулой (12),



в которой R³ представляет собой неразветвленную алкильную группу, содержащую 1-3 атомов углерода, a R⁴ представляет собой алкильную группу, содержащую 1-6 атомов углерода, взаимодействовать в присутствии основания; стадии, на которой полученный в результате продукт подвергают разложению под действием кислот, защищая атом азота трет-бутоксикарбонильной группой при последующем восстановлении полученного продукта; стадии взаимодействия восстановленного продукта с соединением, представленным общей формулой (10)



в которой R⁶ представляет собой алкильную группу с 1-6 атомами углерода или бензильную группу, а также стадии, на которой полученный на предыдущей стадии продукт подвергают ацидолизу или обработке галоидсиланом;

или его фармацевтически приемлемая соль или гидрат.

5. Аминофосфатное производное по п.1, отличающееся тем, что указанное соединение, представленное общей формулой (1а), является соединением, представленным формулами (1b), (1c), (1d), (1e) или (1f):











или его фармацевтически приемлемая соль или гидрат.

6. Модулятор рецептора S1P, содержащий в качестве активного ингредиента аминофосфатное производное, или его фармацевтически приемлемую соль или гидрат по любому из пп.1-5.

7. Фармацевтическое средство для лечения или предотвращения артериосклероза, облитерирующего артериосклероза, облитерирующего тромбангиита, фиброза почек, фиброза печени, хронической бронхиальной астмы, диффузного гамартоангиомиоматоза легких, синдрома респираторного дистресса взрослых (ARDS), хронического обструктивного заболевания легких (COPD), пневмонита, идиопатической интерстициальной пневмонии, рака легких, гиперчувствительной пневмонии, болезни Бургера, диабетической нефропатии периферических сосудов, септицемии, ангиита, нефрита, пневмонии, церебрального инфаркта, инфаркта миокарда, эдематозного состояния, варикозного расширения вен, расслаивающей аневризмы аорты, стенокардии, диссеминированного внутрисосудистого свертывания (ДВС-синдром), плеврита, застойной сердечной недостаточности, полиорганной недостаточности, пролежней, ожогов, язвенного колита, болезни Крона, содержащее в качестве активного ингредиента указанное аминофосфатное производное или его фармацевтически приемлемую соль или гидрат по любому из пп.1-5.

Описание изобретения к патенту

Техническая область

Настоящее изобретение касается безопасного аминофосфатного производного, полезного в качестве модулятора рецептора S1P (сфингозин-1-фосфат), а также его соли и гидрата.

Несмотря на то, что сфингозин-1-фосфат (S1P) рассматривался только как промежуточный продукт метаболизма сфингозина, имеется сообщение относительно его активности в качестве стимулятора роста клеток, а также регулятора их миграции. Таким образом становится ясным, что S1P представляет собой новый медиатор липидов, демонстрирующий разнообразные физиологические функции, типа активности в отношении апоптоза, регулирования морфологии клеток и сужения кровеносных сосудов (непатентные документы 1 и 2). Несмотря на две функции этого липида - в качестве второго внутриклеточного переносчика и межклеточного медиатора, особенно активными были исследования, касающиеся его действия как межклеточного медиатора. Отмечалось, что передача сигналов осуществляется с помощью рецепторов слитых G белков (дифференциальный ген эндотелия, EDG), находящихся на поверхности клеточной мембраны (непатентные документы 3 и 4). В настоящее время известно 5 подтипов рецептора S1P: Edg-1, Edg-3, Edg-5, Edg-6 и Edg-8, называемых соответственно S1P₁, S1P₂, S1P₃, S1P₄ и S1P₅.

В различных исследованиях, касающихся рецепторов S1P, отмечалось, что так называемый модулятор рецептора S1P, обладающий агонистической или антагонистической активностью в отношении этих рецепторов, демонстрирует эффективность при многих заболеваниях. Например, раскрывается, что соединение, действующее на Edg-5 (S1P₂) эффективно при артериосклерозе, почечном и печеночном фиброзе (патентный документ 1). Кроме того, раскрывается, что соединение, действующее на Edg-1(S1P₁ ), Edg-3(S1P₃) или Edg-5, эффективно в качестве лечебного и профилактического средства при респираторных заболеваниях, таких как хроническая бронхиальная астма, диффузный гамартоангиомиоматоз легких, сидром респираторного дистресса взрослых (ARDS), хроническое обструктивное заболевание легких (COPD), пневмония, идиопатическая интерстициальная пневмония, рак легких и гиперчувствительная пневмония (патентный документ 2). Далее раскрывается, что соединение, обладающее агонистической активностью Edg-1, эффективно в качестве лечебного и профилактического средства при облитерирующем артериосклерозе, облитерирующем тромбангиите, болезни Буергера, диабетической нефропатии периферических сосудов, септимии, ангиите, нефрите, пневмонии, церебральном инфаркте, инфаркте миокарда, эдематозном состоянии, артериосклерозе, расширении вен (типа геморроя), анальных трещинах, анальных фистулах, аневризме аорты, стенокардии, плеврите, застойной сердечной недостаточности, полиорганной недостаточности, внутрибольничной гангрене, ожогах, язвенном колите, болезни Хорна, трансплантации сердца, почек, кожи, печени и костного мозга, потере костной массы, хроническом гепатите, циррозе печени, хронической почечной недостаточности и очаговом гломеросклерозе (патентный документ 3).

Помимо этого, отмечалось, что соединения, обладающие агонистической активностью рецептора S1P, регулируют миграцию лейкоцитов (непатентные документы 4 и 5). Также раскрывалось, что производные, описываемые в указанных непатентных документах, помимо эффективности при трансплантации различных органов, обладают эффективностью при ревматоидном артрите, системной красной волчанке, болезни Хашимото, множественном склерозе, бульбоспинальном параличе, сахарном диабете I и II типа, аутоиммунных заболеваниях (таких, как болезнь Хорна), аллергических заболеваниях (таких, как атопический дерматит, аллергический ринит, аллергический конъюнктивит и аллергический контактный дерматит), а также воспалительных заболеваниях (таких, как воспалительные заболевания кишечника или язвенный колит (непатентные документы 4 и 5). Помимо этого, фосфатные производные, аналогичные производным, раскрытым в непатентных документах 4 и 5, также описываются как антагонисты рецептора S1P (непатентный документ 6). В настоящее время различные соединения (типа производных аминоспиртов, фосфатных производных и карбоксилатных производных) раскрыты как модуляторы рецептора S1P₁ - S1P₅ или в качестве иммунодепрессивных средств (патентные документы 7-62).

Далее, поскольку рецепторы S1P₄ в основном сконцентрированы в иммуннокомпетентных клетках (типа лейкоцитов), а также в органах, которые вносят основной вклад в иммунную систему, то предполагают, что эти рецепторы S1P ₄ имеют значительный вклад в указанную систему. Действительно, раскрыта агонистическая активность соединений S1P₄ в отношении аутоиммунных заболеваний (таких, как ревматизм, астма), аллергических заболеваний (типа атопического дерматита) и воспалительных заболеваний (патентные документы 30, 35 и 46).

Таким образом, в то время как большое внимание уделяется лекарственным средствам - агонистам рецептора S1P, которые могут иметь скрытый потенциал для широкого ряда медицинских приложений, однако не все лекарственные агонисты рецептора S1P обеспечивают нужное воздействие на организм.

Например, было установлено, что агонист рецептора S1P, который в клинических испытаниях продемонстрировал эффективность по подавлению отторжения трансплантированных органов, вызывает брадикардию, являющуюся побочным действием введения этого лекарственного средства. Отмечается, что, вероятно, этот эффект может быть вызван агонистической активностью в отношении рецептора S1P₃ (непатентные документы 6 и 7).

Кроме того, отмечалось также, что агонистическая активность в отношении рецептора S1P₃ препятствует току крови миокарда (непатентный документ 8), вызывает спазмы церебральных артерий (непатентный документ 9) и отек легких (непатентный документ 10).

Патентный документ 1 WO 0198301 проспект

Патентный документ 2 WO 03020313 проспект

Патентный документ 3 WO 02092068 проспект

Патентный документ 4 WO 0218395 проспект

Патентный документ 5 WO 02076995 проспект

Патентный документ 6 выложенная заявка Японии № 2003-137894

Патентный документ 7 WO 03040097 проспект

Патентный документ 8 WO 02064616 проспект

Патентный документ 9 WO 02062389 проспект

Патентный документ 10 выложенная заявка Японии № 2002-316985

Патентный документ 11 выложенная заявка Японии № 2003-267936

Патентный документ 12 WO 03051876 проспект

Патентный документ 13 WO 03061567 проспект

Патентный документ 14 WO 03062248 проспект

Патентный документ 15 WO 03062252 проспект

Патентный документ 16 WO 03073986 проспект

Патентный документ 17 WO 03074008 проспект

Патентный документ 18 WO 03105771 проспект

Патентный документ 19 WO 04010949 проспект

Патентный документ 20 WO 04024673 проспект

Патентный документ 21 WO 04058149 проспект

Патентный документ 22 WO 04071442 проспект

Патентный документ 23 WO 04096752 проспект

Патентный документ 24 WO 04096757 проспект

Патентный документ 25 WO 04103279 проспект

Патентный документ 26 WO 04103306 проспект

Патентный документ 27 WO 04103309 проспект

Патентный документ 28 WO 04110979 проспект

Патентный документ 29 WO 04113330 проспект

Патентный документ 30 WO 04074297 проспект

Патентный документ 31 WO 05014603 проспект

Патентный документ 32 WO 05020882 проспект

Патентный документ 33 WO 04002531 проспект

Патентный документ 34 WO 05032465 проспект

Патентный документ 35 WO 05041899 проспект

Патентный документ 36 WO 05058848 проспект

Патентный документ 37 WO 05070886 проспект

Патентный документ 38 WO 05082089 проспект

Патентный документ 39 WO 05082841 проспект

Патентный документ 40 WO 05021503 проспект

Патентный документ 41 WO 05040091 проспект

Патентный документ 42 WO 05085179 проспект

Патентный документ 43 WO 05118523 проспект

Патентный документ 44 WO 05014525 проспект

Патентный документ 45 WO 06020951 проспект

Патентный документ 46 WO 06001463 проспект

Патентный документ 47 WO 03029184 проспект

Патентный документ 48 WO 03029205 проспект

Патентный документ 49 WO 04026817 проспект

Патентный документ 50 WO 04074297 проспект

Патентный документ 51 WO 04074297 проспект

Патентный документ 52 выложенная заявка Японии № 2004-307439

Патентный документ 53 выложенная заявка Японии № 2004-307440

Патентный документ 54 выложенная заявка Японии № 2004-307441

Патентный документ 55 выложенная заявка Японии № 2004-307442

Патентный документ 56 WO 06041015 проспект

Патентный документ 57 выложенная заявка Японии № 2004-137208

Патентный документ 58 выложенная заявка Японии № 2005-47899

Патентный документ 59 выложенная заявка Японии № 2005-47899

Патентный документ 60 WO 05040091 проспект

Патентный документ 61 WO 05063671 проспект

Патентный документ 62 WO 05079788 проспект

Непатентный документ 1 - Y.Takuma et al., Mol.Cell. Endocrinol., 177, 3 (2001).

Непатентный документ 2 - Y.Igarashi, Ann, N.Y. Acad. Sci., 845, 19 (1998).

Непатентный документ 3 - Okazaki et al., Biochem. Biophs. Res. Commun., 190, 1104 (1993).

Непатентный документ 4 - S.Mandala et al., Science, 296, 346 (2002).

Непатентный документ 5 - V.Brinkmann et al., J.Biol. Chem., 277 and 21453 (2002).

Непатентный документ 6 - M.G.Sanna et al., J. Biol. Chem., 279, 13839 (2004).

Непатентный документ 7 - М.Forrest et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 309, 758 (2004).

Непатентный документ 8 - В.Levkau et al., Circulation, 100 3358 (2004).

Непатентный документ 9 - S.Salomone et al., Eur. J. Pharmacol., 469, 125 (2003).

Непатентный документ 10 - Y. Gon et al., PNAS 102, 9270 (2005).

Раскрытие настоящего изобретения. Задачи, которые должно решить настоящее изобретение

Целью настоящего изобретения является обеспечение аминофосфатного производного, обладающего слабой агонистической активностью в отношении рецептора S1P₃, очень высокой агонистической активностью в отношении рецептора S1P₁ и/или S1P ₄, а также незначительными побочными эффектами.

Способы решения указанных задач

В результате продолжительных и интенсивных исследований по созданию безопасного соединения, обладающего агонистической активностью в отношении рецепторов S1P₁ и S1P₄, а также слабой агонистической активностью в отношении рецептора S1P₃, заявителями обнаружили, что новое аминофосфатное производное способно достичь указанной выше цели; для этого было разработано настоящее изобретение.

В частности, настоящее изобретение касается:

1. аминофосфатного производного, представленного общей формулой (1a)

в которой R³ представляет собой неразветвленную алкильную группу, содержащую 1-3 атомов углерода; Х представляет собой атом кислорода или атом серы, а n обозначает 2 или 3, или его фармацевтически приемлемой соли или гидрата.

2. аминофосфатного производного указанной общей формулы (1а), в которой R является метильной группой, или его фармацевтически приемлемой соли или гидрата.

3. аминофосфатного производного указанной общей формулы (1а), представляющего собой:

моноэфир (R)-2-амино-5-[2-хлор-4-(3-трифторметил-фенокси)фенил]-2-метилпентил фосфорной кислоты,

моноэфир (R)-2-амино-5-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенил-тио)фенил]-2-метилпентил фосфорной кислоты,

моноэфир (R)-2-амино-4-[2-хлор-4-(3-трифторметил-фенокси)фенил]-2-метилбутил фосфорной кислоты,

моноэфир (R)-2-амино-4-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенил-тио)фенил]-2-метилбутил фосфорной кислоты,

моноэфир (R)-2-амино-5-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенил-тио)фенил]-2-пропилпентил фосфорной кислоты; или его фармацевтически приемлемую соль или гидрат.

4. аминофосфатного производного указанной общей формулы (1а), синтезированного с помощью стадии, позволяющей соединению, представленному общей формулой (2),

в которой R¹ представляет собой трифторметильную группу, R² представляет собой атом хлора, А представляет собой атом галогена, X представляет собой атом кислорода или атом серы, а n означает 2 или 3, и соединению, представленному общей формулой (12),

в которой R³ представляет собой неразветвленную алкильную группу, содержащую 1-3 атома углерода, a R⁴ представляет собой алкильную группу, содержащую 1-6 атомов углерода, взаимодействовать в присутствии основания; стадии, на которой полученный в результате продукт подвергают разложению под действием кислот, защищая атом азота трет-бутоксикарбонильной группой при последующем восстановлении полученного продукта; стадии взаимодействия восстановленного продукта с соединением, представленным общей формулой (10),

в которой R⁶ представляет собой алкильную группу с 1-6 атомами углерода или бензильную группу, а также стадии, на которой полученный на предыдущей стадии продукт подвергается ацидолизу или обработке галоидсиланом;

или его фармацевтически приемлемая соль или гидрат.

5. аминофосфатного производного указанной общей формулы (1а), являющегося соединением, представленным формулами (1b), (1c), (1d), (1e) или (1f):

или его фармацевтически приемлемая соль или гидрат.

6. модулятора рецептора S1P, содержащего в качестве активного ингредиента любое из указанных аминофосфатных производных общей формулы (1а) или его фармацевтически приемлемую соль или гидрат.

7. фармацевтического средства для лечения или предотвращения артериосклероза, облитерирующего артериосклероза, облитерирующего тромбангиита, фиброза почек, фиброза печени, хронической бронхиальной астмы, диффузного гамартоангиомиоматоза легких, синдрома респираторного дистресса взрослых (ARDS), хронического обструктивного заболевания легких (COPD), пневмонита, идиопатической интерстициальной пневмонии, рака легких, гиперчувствительной пневмонии, болезни Бургера, диабетической нефропатии периферических сосудов, септицемии, ангиита, нефрита, пневмонии, церебрального инфаркта, инфаркта миокарда, эдематозного состояния, варикозного расширения вен, расслаивающей аневризмы аорты, стенокардии, диссеминированного внутрисосудистого свертывания (ДВС-синдром), плеврита, застойной сердечной недостаточности, полиорганной недостаточности, пролежней, ожогов, язвенного колита, болезни Крона, содержащее в качестве активного ингредиента указанное аминофосфатное производное или его фармацевтически приемлемую соль или гидрат по любому из п.1-5.

Наилучший способ реализации настоящего изобретения

В настоящем изобретении неразветвленная алкильная группа, содержащая 1-3 атома углерода (R¹ и R ³) представляет собой метильную группу, этильную группу, или н-пропильную группу.

В настоящем изобретении термин «галоген» в выражении для R¹ «группа низшего алкила, содержащая 1-3 атомов углерода, необязательно замещенных галогенами» означает атом фтора или атом хлора.

Исходя из перспективы безопасного получения предпочтительно, чтобы R¹ представлял собой этильную группу, пропильную группу или трифторметильную группу, более предпочтительно - трифторметильную группу. Помимо этого, предпочтительно, чтобы R³ представлял собой метильную группу, a n - предпочтительно равно 3.

Далее, исходя из перспективы получения высокой агонистической активности в отношении рецептора S1P₁ предпочтительно, чтобы Х представлял собой атом серы, а предпочтительной является такая конфигурация R³, которую имеет основной продукт, полученный согласно описанной ниже схеме синтеза по варианту В (с использованием соединения (12)).

В настоящем изобретении примеры фармацевтически приемлемых солей включают соли щелочных металлов (типа солей натрия и калия), соли магния, кальция и алюминия.

Согласно настоящему изобретению соединение, представленное общей формулой (1), может быть получено, например, согласно приведенному ниже варианту А.

Вариант синтеза А

[Химическая формула 5]

При синтезе по варианту А соединение, представленное общей формулой (3)

[Химическая формула 6]

(в которой R¹, R, R ³, R⁴, Х и n имеют описанные выше значения), может быть получено при возможности взаимодействия соединения, представленного общей формулой (2)

[Химическая формула 7]

(в которой R¹, R² , А, Х и n имеют описанные выше значения) и соединения, представленного общей формулой (8)

[Химическая формула 8]

(в которой R³ и R⁴ имеют описанные выше значения) в присутствии основания (стадия А-1).

Реакция может быть проведена с использованием в качестве растворителя метанола, этанола, 1,4-диоксана, диметилсульфоксида (ДМСО), N,N-диметилформамида (ДМФ), тетрагидрофурана (ТГФ) или им подобных. Указанная реакция проводится в присутствии неорганического основания типа гидрида натрия, гидрида калия, метоксида натрия, этоксида натрия, трет-бутоксида натрия, метоксида калия, этоксида калия, трет-бутоксида калия и карбоната калия; температура реакции составляет от 0°C до температуры дефлегмации (предпочтительно от 80°C до 100°C).

При синтезе по варианту А соединение, представленное общей формулой (4)

[Химическая формула 9]

(в которой R¹, R² , R³, R⁴, Х и n имеют описанные выше значения), можно получить гидролизом соединения, представленного общей формулой (3) (стадия А-2).

Реакция может быть проведена в присутствии основания типа водного гидроксида натрия, водного гидроксида калия и водного гидроксида лития; в качестве растворителя используют метанол, этанол, 1,4-диоксан, ДМСО, ДМФ, ТГФ или им подобные. Температура реакции находится в диапазоне от 0°C до температуры дефлегмации. Особенно предпочтительно проведение реакции в среде этанола при 50°C с использованием в качестве основания гидроксида калия.

Несмотря на то, что соединение по настоящему изобретению предпочтительно является оптически активным, время оптического разделения специально не ограничено. На этой стадии оптическое разделение проводят методом ВЭЖХ на специальной хроматографической колонке, при этом возможно получение целевого соединения с хиральным центром.

При синтезе по варианту 1 соединение, представленное общей формулой (5)

[Химическая формула 10]

(в которой R⁵ представляет собой алкильную группу с 1-6 атомами углерода, a R¹ , R², R³, R⁴, Х и n имеют описанные выше значения), может быть получено из соединения, представленного общей формулой (4), путем перегруппировки Куртиуса (стадия А-3).

В этой реакции можно использовать стандартную методику превращения карбоксильной группы в карбамат. Например, может быть использована методика, при которой соединяются, например, хлорэтилкарбонат и NaN₃ или оксалилхлорид и NaN ₃; или методика, при которой возможно применение одного азида дифенилфосфорила (DPPA). Указанную реакцию предпочтительно проводят после нагревания азида дифенилфосфорила до дефлегмации, процесс осуществляют в присутствии органического основания (типа триэтиламина), используя в качестве растворителя бензол или толуол. При этом получаемый в результате продукт насыщают спиртом, представленным общей формулой (9)

(в которой R⁵ имеет значения, указанный выше), а получаемый раствор продолжают нагревать при встряхивании или после удаления перегонкой бензола или толуола; реакция протекает при нагревании до дефлегмации спирта, представленного общей формулой (9) (стадия А-3).

На этой стадии оптическое разделение проводят методом ВЭЖХ на специальной хроматографической колонке, при этом возможно получение целевого соединения с хиральным центром.

При синтезе по варианту А соединение, представленное общей формулой (6)

[Химическая формула 11]

(в которой R¹, R² , R³, R⁵, Х и n имеют описанные выше значения), может быть получено путем восстановления соединения, представленного общей формулой (5) (стадия А-4).

Указанная реакция может быть осуществлена с использованием производного алкилборана (типа 9-борабицикло[3.3.1]нонана (9-BBN) или комплексного соединения гидрида металла типа гидрида дииизобутилалюминия ((iBu)₂ AlH), борогидрида натрия (NaBH₄), борогидрида лития (Li BH₄) и литий-алюминий гидрида (LiAl H₄ ); при этом предпочтителен Li BH₄. В качестве растворителя применяют ТГФ, 1,4-диоксан, этанол или метанол, а реакцию проводят при температуре от 0°C до температуры дефлегмации (предпочтительна комнатная температура).

Далее, на этой стадии оптическое разделение проводят методом ВЭЖХ на специальной хроматографической колонке, при этом возможно получение целевого соединения с хиральным центром.

При синтезе по варианту А соединение, представленное общей формулой (7)

[Химическая формула 12]

(в которой R⁶ представляет собой алкильную группу с 1-6 атомами углерода или бензильную группу, а R¹, R², R³, R ⁵, Х и n имеют описанные выше значения), может быть получено путем взаимодействия соединения, представленного общей формулой (6) с соединением общей формулы (10)

(в которой R⁶ имеет значения, указанные выше).

Указанная реакция может быть проведена в присутствии четырехбромистого углерода и пиридина при отсутствии растворителя (или используя небольшие количества растворителя типа метиленхлорида, хлороформа, ацетонитрила, этилацетата, тетрагидрофурана и простого эфира) при температуре в диапазоне от 0°C до комнатной температуры.

Кроме того, на этой стадии оптическое разделение проводят методом ВЭЖХ на специальной хроматографической колонке, при этом возможно получение целевого соединения с хиральным центром.

При синтезе по варианту А соединение, представленное общей формулой (1), можно получить, осуществляя ацидолиз соединения, представленного общей формулой (7), или обрабатывая это соединение галогенсиланом (типа бромида триметилсилила или иодида триметилсилила) (стадия А-6).

При ацидолизе указанная реакция может быть проведена в неорганической кислоте (типа соляной кислоты или бромистоводородной кислоты) или в смешанном растворе органического растворителя (типа метанола или этанола) и неорганической кислоты, процесс осуществляют путем нагревания до дефлегмации. Кроме того, в качестве растворителя предпочтительно используют метиленхлорид или ацетонитрил, а также бромид триметилсилила или иодид триметилсилила, процесс осуществляют при температуре в диапазоне от 0°С до комнатной температуры, допустимо воздействие хлорида триметилсилила и бромида натрия или иодида натрия.

При синтезе по варианту А среди соединений, представленных общей формулой (5), в которых R⁵ представляет собой трет-бутильную группу, в частности присутствует соединение, представленное общей формулой (5а)

[Химическая формула 13]

(в которой Boc представляет трет-бутоксикарбонильную группу, а R¹, R², R³, R ⁴, Х и n имеют значения, указанные выше); при синтезе по варианту А среди соединений, представленных общей формулой (6), в которых R⁵ представляет собой трет-бутильную группу, в частности, присутствует соединение, представленное общей формулой (6а)

[Химическая формула 14]

(в которой R¹, R² , R³, X, Boc и n имеют значения, указанные выше); при синтезе по варианту А из соединений, представленных общей формулой (7), соединений, в которых R⁵ представляет собой трет-бутильную группу, присутствует, в частности, соединение, представленное общей формулой (7а)

[Химическая формула 15]

(в которой R¹, R² , R³, R⁶, X, Boc и n имеют значения, указанные выше), и они могут быть синтезированы согласно варианту В.

Вариант синтеза В

[Химическая формула 16]

При синтезе по варианту В соединение, представленное общей формулой (11)

[Химическая формула 17]

(в которой R¹, R² , R³, R⁴ Х и n имеют значения, указанные выше), может быть получено, предоставляя возможность соединению, представленному общей формулой (2), и соединению, представленному общей формулой (12).

[Химическая формула 18]

(в которой R³ и R⁴ имеют значения, указанные выше), взаимодействовать в присутствии основания (стадия В-1).

Указанную реакцию можно осуществить, используя в качестве растворителя 1,4-диоксан, ТГФ и простой эфир, а в качестве основания - основание типа н-бутиллития и амид диизопропиллития. Процесс проводят путем обработки соединения, представленного общей формулой (12), при температуре, составляющей -78°C, с последующей возможностью действия соединения, представленного общей формулой (2) при указанной температуре, а также их взаимодействия при постепенном повышении температуры до значения комнатной температуры.

При синтезе по варианту В соединение, представленное общей формулой (5а), может быть получено путем разложения под действием кислоты соединения, представленного общей формулой (11), при последующей защите атома азота трет-бутоксикарбонильной группой (группа Вое) (стадия В-2).

Предпочтительно проведение указанной реакции с использованием метанола, этанола, ТГФ, 1,4-диоксана или этилацетата, в которых растворяют соляную кислоту (предпочтителен 1,4-диоксан, содержащий соляную кислоту) путем дефлегмации при комнатной температуре. Затем для получения аминного эфира проводят нейтрализацию основанием при последующем использовании этилацетата, ТГФ, ДМФ, 1,4-диоксана, метиленхлорида, хлороформа, метанола, этанола, ацетонитрила, или им подобных, в качестве растворителя и возможности взаимодействия с Вос ₂О в диапазоне температур от 0°С до комнатной температуры.

При варианте синтеза В соединение, представленное общей формулой (6а), может быть получено восстановлением соединения, представленного общей формулой (5а) (стадия В-3).

Указанная реакция может быть осуществлена с использованием борана, производного алкилборана (типа 9-BBN) или комплексного соединения гидрида металла (типа гидрида дииизобутилалюминия ((iBu) ₂AlH), борогидрида натрия (NaBH₄), борогидрида лития (Li BH₄) и литий-алюминий гидрида (LiAl H ₄)); при этом предпочтителен Li BH₄. В качестве растворителя применяют ТГФ, 1,4-диоксан, этанол или метанол, а реакцию проводят при температуре от 0°C до температуры дефлегмации (предпочтительна комнатная температура).

При синтезе по варианту В соединение, представленное общей формулой (7а), может быть получено взаимодействием соединения, представленного общей формулой (6а), и соединения, представленного общей формулой (10) (стадия В-4).

Такая реакция может быть проведена в присутствии четырехбромистого углерода или пиридина без растворителя (или используя небольшие количества такого растворителя, как метиленхлорид, хлороформ, ацетонитрил, этилацетат, ТГФ и простой эфир) в диапазоне температур от 0°C до комнатной температуры.

Относительно способа синтеза соединения, представленного общей формулой (2), отмечается, что указанное соединение может быть получено способами, описанными в проспектах заявок WO 03029184, WO 03029205, WO 04026817, WO 04074297 и WO 050444780.

Соединение по настоящему изобретению эффективно в качестве лечебного и превентивного средства при артериосклерозе, облитерирующем артериосклерозе, облитерирующем тромбангиите, фиброзе почек, фиброзе печени, хронической бронхиальной астме, диффузном гамартоангиомиоматозе легких, сидроме респираторного дистресса взрослых (ARDS), хронических обструктивных заболеваниях легких (COPD), пневмоните, идиопатической интерстициальной пневмонии, раке легких, гиперчувствительной пневмонии, болезни Бургера, диабетической нефропатии периферических сосудов, септицемии, ангиите, нефрите, пневмонии, церебральном инфаркте, инфаркте миокарда, эдематозном состоянии, варикозном расширении вен, расслаивающей аневризме аорты, стенокардии, диссеминированного внутрисосудистого свертывания (ДВС-синдром) плеврите, застойной сердечной недостаточности, полиорганной недостаточности, пролежнях, ожогах, язвенном колите, болезни Крона и им подобных. Оно также эффективно в качестве лечебного и превентивного средства при отторжении трансплантата сердца, трансплантата почек, кожного трансплантата, трансплантата печени и трансплантата костного мозга; оно также эффективно в качестве лечебного и превентивного средства при ревматоидном артрите, системной красной волчанке, болезни Хашимото, множественном склерозе, бульбоспинальном параличе, сахарном диабете, атопическом дерматите, аллергическом рините, аллергическом конъюнктивите и им подобных состояниях. При использовании в указанных выше случаях требуемая курсовая доза зависит от способа введения, специфики заболевания, а также от нужного эффекта. Однако обычно предпочтительна суточная доза, которая составляет от приблизительно 0,03 мг до 2,5 мг на 1 кг массы тела. Для млекопитающих (человека) рекомендуемая суточная доза представляет собой диапазон от приблизительно 0,5 мг до приблизительно 100 мг. Предпочтительно введение производят отдельными дозами 4 раза в сутки (или менее), или использованная единичная доза составляет приблизительно 1-50 мг активного ингредиента.

Соединение по настоящему изобретению может быть введено любым удобным способом, в частности энтерально (например перорально) в виде таблетки или капсулы; или парентерально, например в виде инъекционного раствора или суспензии; местно, например в виде лосьона, геля, мази или крема; или назально, или в форме суппозитория. Фармацевтический состав, содержащий соединение по настоящему изобретению в свободном виде или в виде фармацевтически приемлемой соли в сочетании по меньшей мере с одним видом фармацевтически приемлемого носителя или разбавителя, можно получить стандартным способом путем смешивания с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем.

Настоящее изобретение может создать еще более высокий эффект при использовании вместе с иммунодепрессантом и/или фармацевтическим соединением, обладающим противовоспалительным действием на основе другого механизма. Примеры веществ, которые можно использовать совместно, включают: иммунодепрессанты, применяемые при лечении и предотвращении острого или хронического отторжения аллогенных трансплантатов и гетерологичных трансплантатов, при воспалительных заболеваниях и аутоиммунных заболеваниях; иммунодепрессанты с иммуномодулирующей активностью; и/или противовоспалительные средства, обладающие противовоспалительной активностью или способные подавлять рост злокачественных клеток. Специфические примеры включают ингибиторы кальциневрина - циклоспорин А и FK506, mTOR ингибиторы рапамицина - 40-O-(2-гидроксиметил)рапамицин, СС1779 и АВТ578, аскомицины АВТ281 и ASM981, которые обладают иммуннодепрессивным действием; микофенольную кислоту, мофетилмикофенолят, азатиоприн, мизорибин, циклофосфамид и им подобные. Другие примеры включают антифолат метотрексата, кортикостероиды надпочечников, обладающие широкой противовоспалительной активностью; ауронофин, актарит, месалазин или сульфалазин и им подобные, которые имеют иммунномодулирующее действие; инфликсимаб, являющийся антителом в отношении TNF , MRA, являющийся антителом в отношении рецептора анти-IL-6, натализумаб, являющийся антителом в отношении антиинтегрина, и им подобные.

Далее настоящее изобретение будет описано со ссылкой на следующие специфические примеры, которые, однако, они не ограничивают настоящее изобретение.

Справочный пример 1

O-3-(дифторметил)фенилдиметилкарбамотиоат

[Химическая формула 19]

1,4-диазабицикло[2.2.2] октан (9,0 г) и хлорид диметилтиокарбамоила (9,95 г) добавили в раствор 3-дифторметилфенола (6,44 г) в N,N-диметилформамиде (149 мл); полученный в результате раствор встряхивали при комнатной температуре в течение 4 ч. В реакционную смесь добавили воду, провели экстракцию этилацетатом, затем промыли водой и насыщенным солевым раствором и высушили над безводным сульфатом натрия. После этого растворитель удалили дистилляцией, а для получения целевого продукта остаток очистили на хроматографической колонке с силикагелем (гексан:этилацетат = 3:1). В результате был получен целевой продукт (7,04 г) в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl ₃, 400 MHz): 3.36 (3H, s), 3.46 (3H, s), 6.66 (1H, t, J=57 Hz), 7.19 (1H, dt, J=7.9, 1.2 Hz), 7.23 (1H, br s), 7.39 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.48 (lH,t,J=7.9Hz).

EIMS (+): 231 [М] ⁺.

Справочный пример 2

S-3-(дифторметил)фенилдиметилкарбамотиоат

[Химическая формула 20]

Раствор соединения из справочного примера 1 (2,34 г) в дифениловом эфире (12 г) встряхивали в течение 2,5 ч при 25°C. Температура реакционного раствора была доведена до величины комнатной температуры. Для получения целевого продукта остаток очистили на хроматографической колонке с силикагелем (гексан: этилацетат = 3:2). В результате был получен целевой продукт (1,92 г) в виде желтого масла.

¹ Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 3.04 (3H, s), 3.10 (3H, s), 6.65 (1H, t, J=57 Hz), 7.48 (1H, t, J=7.9 Hz), 7.54 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.61 (1H, t, J=7.9 Hz), 7.64 (1H, s).

EIMS (+): 231 [М]⁺ .

Справочный пример 3

2-хлор-4-(3-дифторметилфенилтио)бензальдегид

[Химическая формула 21]

Раствор соединения из справочного примера 2 (4,17 г) в диэтиловом эфире (12 мл) по каплям добавляли в раствор литий-алюминий гидрида (959 г) в диэтиловом эфире (48 мл), процесс проводили при охлаждении льдом. Затем полученный в результате раствор перемешивали в течение 20 мин, охлаждая льдом. К реакционной смеси добавили 0,5 мол/л соляной кислоты (30 мл), провели экстракцию этилацетатом, промыли водой и насыщенным солевым раствором, высушили над безводным сульфатом натрия. Растворитель выпарили, а полученный остаток привели во взаимодействие с 2-хлор-4-фторбензальдегидом, процесс проводили согласно методике из справочного примера 1 проспекта заявки WO 03029184; в результате был получен целевой продукт в виде бесцветного порошка.

¹ Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 6.67 (1H, t, J=56 Hz), 7.09 (1H, dd, J=7.9, 1.8 Hz), 7.16 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.53-7.64 (3H, m), 7.68 (1H, s), 7.79 (1H, d, J=7.9 Hz), 10.37 (1H, s)

EIMS (+): 298 [М] ⁺.

Справочный пример 4

2-фтор-4-(3-трифторметилфенилдиметилтио)бензальдегид

[Химическая формула 22]

В атмосфере аргона в раствор 4-бром-2-фторбензальдегида (4,06 г) в 1,4-диоксане (42 мл) ввели этилдиизопропиламин (7,0 мл), хлороформенный аддукт трис(дибенилидегацетон)дипалладия(0) (518 мг) и 3-трифтор-метилтиофенол (3,56 г); процесс проводили при комнатной температуре. Полученный в результате раствор нагревали в течение 5 ч вплоть до дефлегмации. К реакционной смеси добавили воду, провели экстракцию этилацетатом, промыли водой и насыщенным солевым раствором, а затем высушили над безводным сульфатом натрия. Растворитель выпарили, а для получения целевого продукта образовавшийся остаток очистили на хроматографической колонке с силикагелем (гексан: этилацетат 30:1; в результате был получен целевой продукт (4,08 г) в виде бесцветного масла.

¹ Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 6.86 (1H, dd, J=10,1.8 Hz), 7.02 (1H, dd, J=7.9, 1.8 Hz), 7.58 (1H, t, J=7.9 Hz), 7.68-7.73 (2H, m), 7.76 (1H, t, J=7.9 Hz), 7.80 (1H, s), 10.26 (1H, s)

EIMS (+): 300 (М]⁺.

Справочный пример 5

2-хлор-4-(3-хлорфенилтио)бензальдегид

[Химическая формула 23]

3-хлорбензилтио и 2-хлор-4-фторбензальдегид взаимодействовали между собой согласно экспериментальной методике из справочного примера 1 заявки WO 03029205, в результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 7.11 (1H, dd, J=9.2, 1.8 Hz), 7.17 (1H, d, J=1.8 Hz), 7.36-7.44 (3H, m), 7.52 (1H, t, J=1.8 Hz), 7.80 (1H, d, J=7.9 Hz), 10.37 (1H, s).

EIMS (+): 282 [М]⁺ .

Справочный пример 6

2-хлор-4-(3-метилфенокси)бензальдегид

[Химическая формула 24]

м-крезол и 2-хлор-4-фторбензальдегид взаимодействовали между собой согласно экспериментальной методике из справочного примера 1 заявки WO 03029184, в результате был получен целевой продукт в виде бесцветного порошка.

¹ Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 2.38 (3H, s), 6.87-6.96 (4H, m), 7.07 (1H, d, J=7.3 Hz), 7.31 (1H, t, J=7.6 Hz),7.90 (1H, d, J=8.6 Hz), 10.36 (1H, s).

EIMS (+): 246 [M]⁺.

Справочный пример 7

2-хлор-4-(3-этилфенилтио)бензальдегид

[Химическая формула 25]

3-этилбензилтиол и 2-хлор-4-фторбензальдегид взаимодействовали между собой согласно экспериментальной методике из справочного примера 1 заявки WO 03029205, в результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 1.26 (3H, t, J=7.3 Hz), 2.680 (2H, q, J=7.3 Hz), 7.04-7.11 (2H, m), 7.28-7.40 (4H, m), 7.76 (1H, d, J=8.6 Hz), 10.35 (1H, s).

EIMS(+):276[M]⁺.

Справочный пример 8

2-хлор-4-(3-пропилфенокси)бензальдегид

[Химическая формула 26]

3-пропилфенол и 2-хлор-4-фторбензальдегид взаимодействовали между собой согласно экспериментальной методике из справочного примера 1 заявки WO 03029184, в результате был получен целевой продукт в виде бледно-коричневого масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 0.95 (3H, t, J=7.3 Hz), 1.62-1.68 (2H, m), 2.61 (2H, t, J=7.3 Hz), 6.89-6.94 (3H, m), 6.96 (1H, d, J=2.1 Hz), 7.08 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.31-7.35 (1H, m), 7.90 (1H, d, J=8.9 Hz), 10.36 (1H, d, J=0.6 Hz).

EIMS (+): 274 [M]⁺ .

Справочный пример 9

[2-хлор-4-(3-этилфенилтио)фенил] ацетальдегид

[Химическая формула 27]

Соединение из справочного примера 7 взаимодействовало согласно экспериментальной методике из справочного примера 326 заявки WO 04074297, в результате был получен целевой продукт в виде бледно-желтого масла.

Справочный пример 10

Этил 3-[2-хлор-4-(3-этилфенилтио)фенил] акрилат

[Химическая формула 28]

Соединение из справочного примера 7 взаимодействовало согласно экспериментальной методике из справочного примера 10 заявки WO 03029205, в результате был получен целевой продукт в виде бледно-желтого масла.

EIMS (+): 346 [M]⁺.

Справочный пример 11

3-[2-хлор-4-(3-этилфенилтио)фенил]пропан-1-ол

[Химическая формула 29]

Соединение из справочного примера 10 взаимодействовало согласно экспериментальной методике из справочного примера 19 заявки WO 03029205, полученный продукт восстановили по экспериментальной методике из справочного примера 35 заявки WO 03029205, в результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz,): 1.22 (3H, t, J=7.3 Hz), 1.84-1.90 (2H, m), 2.62 (2H, q, J=7.6 Hz), 2.78-2.82 (2H, m), 3.69 (2H, t, J=6.1 Hz), 7.10-7.18 (4H, m), 7.23-7.29 (3H, m).

Справочный пример 12

3-[2-хлор-4-(3-пропилфенокси)фенил]пропан-1-ол

[Химическая формула 30]

Соединение из справочного примера 8 успешно взаимодействовало согласно экспериментальным методикам из справочного примера 10, а затем из справочного примера 11, в результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz,): 0.94 (3H, t, J=7.3 Hz), 1.37 (1H, br s), 1.58-1.68 (2H, m), 1.85-1.92 (2H, m), 2.57 (2H, t, J=7.6 Hz), 2.80 (2H, t, J=7.6 Hz), 3.70 (2H, dt, J=6.1, 4.6 Hz), 6.80-6.85 (3H, m), 6.95 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.00 (1H, d, J=2.8 Hz), 7.17 (1H, d, J=8.3 Hz), 7.24 (1H, t, J=7.9 Hz).

EIMS (+): 304 [M] ⁺.

Справочный пример 13

3-[2-фтор-4-(3-трифторметилфенилтио)фенил]пропан-1-ол

[Химическая формула 31]

Соединение из справочного примера 4 успешно взаимодействовало согласно экспериментальным методикам из справочного примера 10, а затем из справочного примера 11, в результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 1.88 (2H, tt, J=6.7, 6.1 Hz), 2.75 (2H, t, J=6.7 Hz), 3.69 (2H, t, J=6.1 Hz), 7.05 (1H, dd, J=10, 1.8 Hz), 7.10 (1H, dd, J=7.9, 1.8 Hz), 7.20 (1H, t, J=7.9 Hz), 7.38-7.51 (3H, m), 7.55 (1H, s).

Справочный пример 14

3-[2-хлор-4-(3-хлорметилфенилтио)фенил]пропан-1-ол

[Химическая формула 32]

Соединение из справочного примера 5 успешно взаимодействовало согласно экспериментальным методикам из справочного примера 10, а затем из справочного примера 11, в результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 1.33 (1H, br s), 1.83-1.95 (2H, m), 2.81-2.85 (2H, m), 3.70 (2H, br. s), 7.15-7.23 (5H, m), 7.24-7.29 (1H, m), 7.38 (1H, d, J=1.8 Hz).

Справочный пример 15

3-[2-хлор-4-(3-метилфенокси)фенил]пропан-1-ол

[Химическая формула 33]

Соединение из справочного примера 6 успешно взаимодействовало согласно экспериментальным методикам из справочного примера 10, а затем из справочного примера 11, в результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 1.31 (1H, brs), 1.87-1.90 (2H, m), 2.34 (3H, s), 2.80 (2H, t, J=7.3 Hz), 3.70 (2H, dd, J=11.6, 6.1 Hz), 6.79-6.86 (3H, m), 6.94 (1Н, d, J=7.3 Hz), 6.99 (1H, d, J=2.4 Hz), 7.18 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.22 (1H, t, J=7.3 Hz).

EIMS (+): 276 [M]⁺.

Справочный пример 16

3-[2-хлор-4-(3-дифторметилфенилтио)фенил]пропан-1-ол

[Химическая формула 34]

Соединение из справочного примера 3 успешно взаимодействовало согласно экспериментальным методикам из справочного примера 10, а затем из справочного примера 11, в результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 1.32 (1H, t, J=4.9 Hz), 1.85-1.93 (2H, m), 2.81-2.85 (2H, m), 3.70 (2H, q, J=6.7 Hz), 6.59 (1H, t, J=56 Hz), 7.17-7.23 (2H, m), 7.36-7.41 (4H, m), 7.45 (1H, s)

Справочный пример 17

2-хлор-4-(3-этилфенилтио)-1-(2-иодоэтил)бензол

[Химическая формула 35]

Соединение из справочного примера 9 успешно взаимодействовало согласно экспериментальным методикам из справочного примера 327 заявки WO 04074297, в результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹ Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 1.22 (ЗН, t, J=7.3 Hz), 2.63 (2H, q, J=7.3 Hz), 3.23-3.28 (2H, m), 3.32-3.35 (2H, m), 7.09-7.29 (7H, m).

EIMS (+): 402 [M]⁺.

Справочный пример 18

2-хлор-4-(3-этилфенилтио)-1-(3-иодопропил)бензол

[Химическая формула 36]

Соединение из справочного примера 11 успешно взаимодействовало согласно экспериментальным методикам из справочного примера 164 заявки WO 03029184, в результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹ Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 1.22 (3H, t, J=7.3 Hz), 2.12 (2H, quintet, J=7.3 Hz), 2.63 (2H, q, J=7.3 Hz), 2.81 (2H, t, J=7.3 Hz), 3.19 (2H, t, J=7.3 Hz), 7.09-7.19 (4H, m), 7.24-7.28 (3H, m).

EIMS (+): 416 [M]⁺.

Справочный пример 19

2-хлор-4-(3-иодопропил)-4-(3-пропилфенокси)бензол

[Химическая формула 37]

Соединение из справочного примера 12 взаимодействовало согласно экспериментальным методикам из справочного примера 164 заявки WO 03029184, в результате был получен целевой продукт в виде бледно-желтого масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 0.94 (3H, t, J=7.3 Hz), 1.60-1.68 (2H, m), 2.10-2.17 (2H, m), 2.57 (2H, t, J=7.6 Hz), 2.81 (2H, t, J 20=7.6 Hz), 3.21 (2H, t, J=7.0 Hz), 6.80-6.85 (3H, m), 6.96 (1H, d, J=7.9 Hz), 6.99 (1H, d, J=2.4 Hz), 7.19 (1H, d, J=8.3 Hz), 7.25 (1H, t, J=7.9 Hz).

EIMS (+): 414 [M]⁺.

Справочный пример 20

2-фтор-1-(3-иодопропил)-4-(3-трифторметилфенилтио)бензол

[Химическая формула 38]

Соединение из справочного примера 13 взаимодействовало согласно экспериментальным методикам из справочного примера 164 заявки WO 03029184, в результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl ₃, 400 MHz): 2.13 (2Н, quintet, J=7.3 Hz), 2.76 (2H, t, J=7.3 Hz), 3.18 (2H, t, J=6.7 Hz), 7.03 (1H, dd, J=10, 1.8 Hz), 7.09 (1H, dd, J=7.9, 1.8 Hz), 7.20 (1H, t, J=7.9 Hz), 15 7.39-7.52 (3H, m), 7.57 (1H, s).

EIMS (+): 404 [M]⁺ .

Справочный пример 21

2-хлор-4-(3-хлорфенилтио)-1-(3-иодопропил)бензол

[Химическая формула 39]

Соединение из справочного примера 14 взаимодействовало согласно экспериментальным методикам из справочного примера 164 заявки WO 03029184, в результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl ₃, 4 00 MHz): 2.14 (2H, tt, J=7.3, 6.7 Hz), 2.84 (2H, t, J=7.3 Hz), 3.20 (2H, t, J=6.7 Hz), 7.16-7.25 (5H, m), 7.28 (1H, t, J=1.8 Hz), 7.36 (1H, d, J=1.8 Hz).

EIMS (+): 422 [M] ⁺.

Справочный пример 22

2-хлор-1-(3-иодопропил)-4-(3-метилфенокси)бензол

[Химическая формула 40]

Соединение из справочного примера 15 взаимодействовало согласно экспериментальным методикам из справочного примера 164 заявки WO 03029184, в результате был получен целевой продукт в виде желтого масла.

¹Н-ЯМР (CDCl ₃, 400 MHz): 2.13 (2Н, quint, J=7.3 Hz), 2.34 (3H, s), 2.81 (2H, t, J=7.3 Hz), 3.21 (2Н, t, J=7.3 Hz), 6.81-6.84 (3H, m), 6.95 (1H, d, J=7.9 Hz), 6.99 (1H, d, J=2.4 Hz), 7.18 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.23 (1H, t, J=7.9 Hz).

EIMS (+): 386 [M] ⁺.

Справочный пример 23

2-хлор-4-(3-дифторметилфенилтио)-1-(3-иодопропил)бензол

[Химическая формула 41]

Соединение из справочного примера 16 взаимодействовало согласно экспериментальным методикам из справочного примера 164 заявки WO 03029184, в результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР(CDCl ₃, 400 MHz): 2.10-2.17 (2Н, m), 2.84 (2Н, t, J=7.3 Hz), 3.20 (2Н, t, J=6.7 Hz), 6.60 (1H, t, J=56 Hz), 7.18 (1H, 15 dd, J=7.9, 1.2 Hz), 7.22 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.36 (1H, d, J=1.2 Hz), 7.41 (3H, d, J=1.2 Hz), 7.47 (1H, s).

Пример 1

(2R,5S)-2-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенокси)фенил]пропил-3,6-диэтокси-5-изопропил-2-метил-2,5-дигидропиразин

[Химическая формула 42]

В раствор (5S)-3,6-диэтокси-5-изопропил-2-метил-2,5-дигидропиразина (905 мг) в ТГФ (16 мл) добавили раствор н-бутиллития в гексане (1,54 мол/л, 3,59 мл), процесс проводили в атмосфере аргона при -78°C. Полученный раствор перемешивали при -78°C в течение 30 мин. Затем в реакционную смесь добавили раствор 2-хлор-1-(3-иодопропил)-4-(3-трифторметилфенокси) бензола (2,47 г) в ТГФ (4 мл), полученный раствор перемешивали при -78°C в течение 30 мин, а затем в течение 1 ч при 0°C. В реакционную смесь добавили воду, провели экстракцию этилацетатом, последовательно промыли водой и насыщенным солевым раствором, а затем высушили над безводным этилацетатом. После этого растворитель выпарили, а для получения целевого продукта остаток очистили на хроматографической колонке с силикагелем (гексан:этилацетат = 60:1). В результате был получен целевой продукт (1,59 г) в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl ₃, 400 MHz): 0.70 (3H, d, J=6.7 Hz), 1.05 (3H, d, J=6.7 Hz), 1.18-1.50 (9H, m), 1.32 (3H, s), 1.86-1.97 (1H, m), 2.21-2.30 (1H, m), 2.65 (2H, t, J=7.6 Hz), 3.90 (1H, d, J=2.1 Hz), 3.97-4.21 (4H, m), 6.84 (1H, dd, J=7.9, 2.4 Hz), 7.00 (1H, d, J=2.4 Hz), 7.15 (2H, d, J=7.9 Hz), 7.24 (1H, br s), 7.36 (1H, d, J==7.9 Hz), 7.44 (1H, t, J=7.9 Hz).

Пример 2

(2R,5S)-2-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенилтио)фенил]пропил-3,6-диэтокси-5-изопропил-2-метил-2,5-дигидропиразин

[Химическая формула 43]

(5S)-3,6-диэтокси-5-изопропил-2-метил-2,5-дигидропиразин и 2-хлор-1-(3-иодопропил)-4-(3-трифторметилфенокси)бензол взаимодействовали между собой так же, как это описано в примере 1. В результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 0.63 (3Н, d, J=6.7 Hz), 1.07 (3H, d, J=6.7 Hz), 1.18-1.2, 9.10H, m), 1.34-1.66 (2H, m), 1.79-1.91 (1H, m), 2.25-2.33 (1H, m), 2.70 (2H, t, J=7.6 Hz), 3.85 (1H, br s), 3.99-4.23 (4H, m), 7.16 (2H, d, J=7.9 Hz), 7.20 (1H, dd, J=7.9, 1.8 Hz), 7.36-7.42 (3Н, m), 7.44-7.50 (1H, m), 7.52 (1H, brs).

Пример 3

(2R,5S)-2-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенокси)фенил]этил-3,6-диэтокси-5-изопропил-2-метил-2,5-дигидропиразин

[Химическая формула 44]

(5S)-3,6-диэтокси-5-изопропил-2-метил-2,5-дигидропиразин и 2-хлор-1-(2-иодоэтил)-4-(3-трифторметилфенокси)бензол взаимодействовали между собой так же, как это описано в примере 1. В результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 0.72 (3Н, d, J=6.7 Hz), 1.08 (3Н, d, J=6.7 Hz), 1.29 (6H, t, J=7.3 Hz), 1.36 (3Н, s), 1.74-1.82 (1H, m), 2.13-2.20 (1H, m), 2.25-2.32 (1H, m), 2.39-2.56 (2H, m), 3.95 (1H, d, J=3.1 Hz), 4.02-4.22 (4H, m), 6.83 (1H, dd, J=8.6, 2.4 Hz), 6.99 (1H, d, J=2.4 Hz), 7.12-7.15 (2H, m), 7.23 (1H, br s), 7.35 (1H, d, J=7.8 Hz), 7.44 (1H, t, J=7.8 Hz).

EIMS (+): 524 [М]⁺.

Пример 4

(2R,5S)-2-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенилтио)фенил]этил-3,6-диэтокси-5-изопропил-2-метил-2,5-дигидропиразин

[Химическая формула 45]

(5S)-3,6-диэтокси-5-изопропил-2-метил-2,5-дигидропиразин и 2-хлор-1-(2-иодоэтил)-4-(3-трифторметилфенилтио)бензол взаимодействовали между собой так же, как это описано в примере 1. В результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 0.72 (3Н, d, J=6.7 Hz), 1.08 (3H, d, J=6.7Hz), 1.28 (6H, t, J=7.3Hz), 1.35 (3H, s), 1.68-1.90 (1H, m), 2.10-2.19 (1H, m), 2.38-2.57 (1H, m), 3.95 (1H, d, J=3.1 Hz), 4.02-4.22 (4H, m), 7.13 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.18 (1H, dd, J=7.9, 2.4 Hz), 7.35-7.42 (3H, m), 7.43-7.48 (1H, m), 7.54 (1H, br s).

Пример 5

(2R,5S)-2-[2-хлор-4-(3-этилфенилтио)фенил]этил-3,6-диэтокси-5-изопропил-2-метил-2,5-дигидропиразин

[Химическая формула 46]

(5S)-3,6-диэтокси-5-изопропил-2-метил-2,5-дигидропиразин и соединение из справочного примера 17 взаимодействовали между собой так же, как это описано в примере 1. В результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 0.72 (3H, d, J=6.7 Hz), 1.07 (3H, d, J=6.7 Hz), 1.21 (3H, t, J=7.3 Hz), 1.28 (3H, t, J=7.3 Hz), 1.29 (3H, t, J=7.3 Hz), 1.34 (3H, s), 1.70-1.79 (1H, m), 2.09-2.16 (1H, m), 2.24-2.32 (1H, m), 2.35-2.52 (2H, m), 2.61 (2H, q, J=7.3 Hz), 3.95 (1H, d, J=3.1 Hz), 4.03-4.20 (4H, m), 7.04-7.15 (4H, m), 7.21-7.26 (3H, m).

ESIMS (+): 501 [M+H]⁺.

Пример 6

(2R,5S)-2-[2-хлор-4-(3-метилфенокси)фенил]пропил-3,6-диметокси-5-изопропил-2-метил-2,5-дигидропиразин

[Химическая формула 47]

(5S)-3,6-диэтокси-5-изопропил-2-метил-2,5-дигидропиразин и соединение из справочного примера 22 взаимодействовали между собой так же, как это описано в примере 1. В результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР(CDCl₃, 400 MHz): 0.68 (3H, d, J=6.7 Hz), 1.07 (3H, d, J=6.7 Hz), 1.33 (3H, s), 1.36-1.43 (1H, m), 1.55-1.62 (1H, m), 1.86-1.92 (1H, m), 2.24-2.26 (1H, m), 2.34 (3H, s), 2.62 (2H, t, J=7.9 Hz), 3.65 (3H, s), 3.66 (3H, s), 3.94 (1H, d, J=3.7 Hz), 6.79-6.82 (3H, m), 6.93 (1H, d, J=7.3 Hz), 6.96 (1H, d, J=2.4 Hz), 7.09 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.22 (1H, t, J=7.9 Hz).

EIMS (+): 456 [M]⁺.

Пример 7

(2R,5S)-2-[2-хлор-4-(3-этилфенилтио)фенил]пропил-3,6-диэтокси-5-изопропил-2-метил-2,5-дигидропиразин

[Химическая формула 48]

(5S)-3,6-диэтокси-5-изопропил-2-метил-2,5-дигидропиразин и соединение из справочного примера 18 взаимодействовали между собой так же, как это описано в примере 1. В результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 0.68 (3Н, d, J=6.7 Hz), 1.04 (3H, d, J=6.7 Hz), 1.20-1.26 (9H, m), 1.31 (3H, s), 1.36-1.43 (1H, m), 1.50-1.57 (1H, m), 1.85-1.92 (1H, m), 2.21-2.28 (1H, m), 2.60-2.65 (4H, m), 3.88 (1H, d, J=3.7 Hz), 4.00-4.16 (4H, m), 7.06-7.16 (4H, m), 7.22-7.27 (3H, m).

ESIMS (+): 515 [M+H]⁺.

Пример 8

(2R,5S)-2-[2-хлор-4-(3-хлорфенилтио)фенил]пропил-3,6-диэтокси-5-изопропил-2-метил-2,5-дигидропиразин

[Химическая формула 49]

(5S)-3,6-диэтокси-5-изопропил-2-метил-2,5-дигидропиразин и соединение из справочного примера 21 взаимодействовали между собой так же, как это описано в примере 1. В результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 0.69 (3H, d, J=6.7 Hz), 1.08 (3H, d, J=6.7 Hz), 1.18-1.29 (7H, m), 1.31 (3Н, s), 1.34-1.47 (1H, m), 1.50-1.63 (1H, m), 1.85-1.95 (1H, m), 2.20-2.30 (1H, m), 2.65 (2H, t, J- 7.6 Hz), 3.89 (1HV d, J=3.1 Hz), 3.99-4.23 (4H, m), 7.11-7.23 (6H, m), 7.35 (1H, d, J=1.8 Hz).

ESIMS (+):521 [M+H] ⁺.

Пример 9

(2R,5S)-2-[2-фтор-4-(3-фторметилфенилтио)фенил]пропил-3,6-диэтокси-5-изопропил-2-метил-2,5-дигидропиразин

[Химическая формула 50]

(5S)-3,6-диэтокси-5-изопропил-2-метил-2,5-дигидропиразин и соединение из справочного примера 20 взаимодействовали между собой так же, как это описано в примере 1. В результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 0.67 (3Н, d, J=6.7 Hz), 1.06 (3H, d, J=6.7 Hz), 1.18-1.29 (7H, m), 1.33 (3H, s), 1.36-1.66 (2H, m), 1.85-1.95 (1H, m), 2.23-2.33 (1H, m), 2.67 (2H, t, J=7.6 Hz), 3.89 (1H, d, J=3.1 Hz), 3.99-4.23 (4H, m), 7.02 (1H, dd, J=9.8 Hz, 1.8 Hz), 7.08 (1H, dd, J=7.9 Hz, 2.4 Hz), 7.13 (1H, t, J=7.9 Hz), 7.38-7.50 (3H, m), 7.55 (1H, s).

Пример 10

(2R,5S)-2-аллил-2-[2-хлор-4-(3-фторметилфенилтио)фенил]пропил-3,6-диэтокси-5-изопропил-2-метил-2,5-дигидропиразин

[Химическая формула 51]

(5S)-2-аллил-3,6-диэтокси-5-изопропил-2,5-дигидропиразин и 2-хлор-1-(3-иодопропил)-4-(3-трифторметилфенилтио)бензол взаимодействовали между собой так же, как это описано в примере 1. В результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 0.67 (3H, d, J=6.7 Hz), 1.05 (3H, d, J=6.7 Hz), 1.23 (3H, t, J=6.4 Hz), 1.25 (3H, t, J=6.4 Hz), 1.30-1.64 (3H, m), 1.80-1.90 (1H, m), 2.23-2.39 (2H, m), 2.53 (1H, dd, J=12.4, 7.3 Hz), 2.65 (2H, t, J=7.6 Hz), 3.83 (1H, d, J=3.1 Hz), 4.03-4.18 (4H, m), 4.92-5.04 (2H, m), 5.60-5.73 (1H, m), 7.13 (2H, d, J=7.9 Hz), 7.18 (1H, dd, J=7.9 Hz, 1.8 Hz), 7.36 (1H, d, J=1.8 Hz), 7.38-7.42 (2H, m), 7.44-7.49 (1H, m), 7.55 (1H, br s).

Пример 11

(2R,5S)-2-[2-хлор-4-(3-дифторметилфенилтио)фенил]пропил-3,6-диэтокси-5-изопропил-2-метил-2,5-дигидропиразин

[Химическая формула 52]

(5S)-3,6-диэтокси-5-изопропил-2-метил-2,5-дигидропиразин и соединение из справочного примера 23 взаимодействовали между собой так же, как это описано в примере 1. В результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 0.70 (3H, d, J=6.7 Hz), 1.06 (3H, d, J=6.7 Hz), 1.20-1.32 (7H, m), 1.33 (3H, s), 1.35-1.48 (1H, m), 1.58-1.60 (1H, m), 1.85-1.95 (1H, m), 2.24-2.32 (1H, m), 2.66 (2H, t, J=7.3 Hz), 3.90 (1H, d, J=3.7 Hz), 3.99-4.22 (4H, m), 6.61 (1H, t, J=56 Hz), 7.14 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.19 (1H, dd, J=7.9, 1.8 Hz), 7.36 (1H, d, J=1.8 Hz), 7.39 (3H, s), 7.46 (1H, s).

ESIMS (+): [M+H]⁺.

Пример 12

Этил(R)-2-трет-бутоксикарбониламино-5-[2-хлор-4(3-трифторметилфенокси)фенил]-2-метилпентаноат

[Химическая формула 53]

К раствору соединения из примера 1 (1,59 г) в 1,4-диоксане (60 мл) добавили 0,5 мол/л соляной кислоты (30 мл). Полученный раствор встряхивали в течение 1 ч при комнатной температуре, а затем оставили при этой температуре на ночь. Раствор упарили, провели нейтрализацию водным раствором кислого карбоната натрия, а затем экстракцию этилацетатом. После этого экстракт последовательно промыли водой и насыщенным солевым раствором и высушили над безводным сульфатом натрия. Экстракт упарили, а полученный остаток растворили в ацетонитриле (15 мл). К этому раствору добавили ди-трет-бутокси-дикарбонат (1,55 г), полученный раствор встряхивали в течение 4 ч при комнатной температуре, а затем оставили при этой температуре на ночь. К реакционной смеси добавили воду, провели экстракцию этилацетатом. После этого экстракт последовательно промыли водой и насыщенным солевым раствором и высушили над безводным сульфатом натрия. Растворитель выпарили, а образовавшийся осадок очистили колоночной хроматографией на силикагеле (гексан: этилацетат = 9:1). В результате был получен целевой продукт (1,00 г) в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 1.26 (3H, t, J=7.3 Hz), 1.43 (9H, s), 1.53 (3H, s), 1.45-1.68 (2H, m), 1.80-1.90 (1H, m), 2.12-2.30 (1H, m), 2.69 (2H, t, J=7.6 Hz), 4.16-4.24 (2H, m), 5.33 (1H, br s), 6.85 (1H, dd, J=7.9 Hz, 2.4 Hz), 7.02 (1H, d, J=2.4 Hz), 7.15 (1H, dd, J=7.9 Hz, 2.4 Hz), 7.17 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.24 (1H, br s), 7.37 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.45 (1H, t, J=7.9 Hz).

Пример 13

Этил(R)-2-трет-бутоксикарбониламино-5-[2-фтор-4-(3-трифторметилфенилтио)фенил]-2-метилпентаноат

[Химическая формула 54]

Соединение из примера 9 взаимодействовало таким же образом, как и в примере 12. В результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 1.26 (3H, t, J=7.3 Hz), 1.42 (9H, s), 1.51 (3H, s), 1.45-1.68 (2H, m), 1.77-1.86 (1H, m), 2.09-2.20 (1H, m), 2.69 (2H, t, J=7.6 Hz), 4.13-4.23 (2H, m), 5.29 (1H, br s), 7.02 (1H, dd, J=9.8 Hz, 1.8 Hz), 7.08 (1H, dd, J - 7.9 Hz, 2.4Hz), 7.13 (1H, t, J=7.9 Hz), 7.38-7.50 (3H, m), 7.55 (1H, s).

Пример 14

Этил(S)-2-аллил-2-трет-бутоксикарбониламино-5-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенилтио)фенил]пентаноат

[Химическая формула 55]

Соединение из примера 10 взаимодействовало таким же образом, как и в примере 12. В результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹H-ЯMP (CDCl₃, 400 MHz): 1.24 (3H, t, J=7.3 Hz), 1.29-1.39 (1H, m), 1.43 (9H, s), 1.60-1.70 (1H, m), 1.78-1.86 (1H, m), 2.32-2.50 (2H, m), 2.66-2.73 (2H, m), 2.99-3.10 (1H, m), 4.19 (2H, q), 5.03(1H, d, J=3.1 Hz), 5.09 (1H, s), 5.49 (1H, br s), 5.54-5.68 (1H, m), 7.16 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.19 (1H, dd, J=7.9, 1.8 Hz), 7.35 (1H, d, J=1.8 Hz), 7.39-7.44 (2H, m), 7.45-7.50 (1H, m), 7.54 (1H, brs).

Пример 15

Этил(R)-2-трет-бутоксикарбониламино-5-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенилтио)фенил]-2-пропилпентаноат

[Химическая формула 56]

К раствору соединения из примера 14 (400 мг) в этилацетате (20 мл) добавили комплекс палладий-углерод/этилендиамин (100 мг). Полученный раствор встряхивали в атмосфере водорода при комнатной температуре в течение 24 ч. Реакционный раствор отфильтровали через цеолит, растворитель выпарили, а образовавшийся осадок очистили колоночной хроматографией на силикагеле (гексан: этилацетат = 30:1). В результате был получен целевой продукт (293 мг) в виде бесцветного масла.

¹ Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 0.91 (3H, t, J=7.3 Hz), 1.42 (9H, s) 1.15-1.77 (8H, m), 2.72 (2H, t, J=7.3 Hz), 3.63 (1H, d, J=12 Hz), 3.67 (1H, d, J=12 Hz), 4.52 (1H, br s), 7.19-7.22 (2H, m), 7.39 (1H, s), 7.40-7.50 (3H, m), 7.54 (1H, br s).

FABMS (+): 532 [M+H] ⁺.

Пример 16

(R)-2-трет-бутоксикарбониламино-5-[2-хлор-(3-трифторметилфенилфенокси)фенил]-2-метилпентан-1-ол

[Химическая формула 57]

К раствору соединения из примера 12 (1,00 г) в ТГФ (14 мл) при охлаждении на льду сначала добавили борогидрид лития (229 мг), а затем - по каплям этанол (1,4 мл). Полученный в результате раствор встряхивали в течение 1 ч при охлаждении на льду, добавили 10% водную лимонную кислоту. После этого провели экстракцию этилацетатом, промыли сначала водой, а потом насыщенным солевым раствором. Растворитель выпарили, а образовавшийся осадок очистили колоночной хроматографией на силикагеле (гексан: этилацетат = 4:1). В результате был получен целевой продукт (910 мг) в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 1.16 (3Н, s), 1.43 (9H, s), 1.53-1.74 (3H, m), 1.81-1.93 (1H, m), 2.73 (2H, t, J=7.3 Hz), 3.61 (1H, d, J=12 Hz), 3.65 (1H, d, J=12 Hz), 4.58 (1H, br s), 4.58 (1H, br s), 6.86 (1H, dd, J=7.9, 2.4 Hz), 7.03 (1H, d, J=2.4 Hz), 7.16 (1H, dd, J=7.9 Hz, 2.4 Hz), 7.21 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.24 (1H, br s), 7.37 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.45 (1H, t, J=7.9 Hz).

Пример 17

(R)-2-трет-бутоксикарбониламино-5-[2-хлор-(3-трифторметилфенилфенокси)фенил]-2-метилпентан-1-ол

[Химическая формула 58]

Соединение из примера 2 взаимодействовало таким же образом, как и в примере 12. В результате был получен сложный эфир, который затем взаимодействовал таким же образом, как в примере 16. Результирующий целевой продукт был получен в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl ₃, 400 MHz): 1.14 (3H, s), 1.42 (9H, s), 1.48-1.76 (4H, m), 1.81-1.90 (1H, m), 2.74 (2H, t, J=6.7 Hz), 3.61 (1H, d, J- 12 Hz), 3.65 (1H, d, J=12 Hz), 4.56 (1H, br s), 4.58 (1H, br s), 7.20 (2H, d, J=1.2 Hz), 7.37-7.50 (4H, m), 7.54 (1H, br s).

Оптическое вращение: [ ]_D ²⁷ + 14.31 (с 0.63, CHCI₃).

Пример 18

(R)-2-трет-бутоксикарбониламино-4-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенокси)фенил]-2-метилбутан-1-ол

[Химическая формула 59]

Соединение из примера 3 взаимодействовало таким же образом, как и в примере 12. В результате был получен сложный эфир, который затем взаимодействовал таким же образом, как в примере 16. Результирующий целевой продукт был получен в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl ₃, 400 MHz): 1.26 (3Н, s), 1.45 (9H, s), 1.80-1.88 (1H, m), 2.05-2.12 (1H, m), 2.66-2.80 (2H, m), 3.68 (1H, d, J=11.6 Hz), 3.73 (1H, d, J=11.6 Hz), 4.70 (1H, br s), 6.86 (1H, dd, J=8.5, 2.5 Hz), 7.03 (1H, d, J=2.5 Hz), 7.13-7.16 (1H, m), 7.22-7.24 (2H, m), 7.37 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.45 (1H, t, J=7.9 Hz).

FABMS (+): 474 [M+H]⁺.

Пример 19

(R)-2-трет-бутоксикарбониламино-4-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенилтио)фенил]-2-метилбутан-1-ол

[Химическая формула 60]

Соединение из примера 4 взаимодействовало таким же образом, как и в примере 12. В результате был получен сложный эфир, который затем взаимодействовал таким же образом, как в примере 16. Результирующий целевой продукт был получен в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl ₃, 400 MHz): 1.25 (3Н, s), 1.44 (9H, s), 1.79-1.89 (1H, m), 2.05-2.13 (1H, m), 2.66-2.83 (2H, m), 3.68 (1H, d, J=12 Hz), 3.71 (1H, d, J=12 Hz), 4.69 (1H, br s), 7.20-7.23 (2H, m), 7.37-7.42 (3H, m), 7.45-7.50 (2H, m), 7.55(1H, br s).

Пример 20

(R)-2-трет-бутоксикарбониламино-4-[2-хлор-4-(3-этилфенилтио)фенил]-2-метилбутан-1-ол

[Химическая формула 61]

Соединение из примера 5 взаимодействовало таким же образом, как и в примере 12. В результате был получен сложный эфир, который затем взаимодействовал таким же образом, как в примере 16. Результирующий целевой продукт был получен в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl ₃, 400 MHz): 1.22 (3H, t, J=7.3 Hz), 1.24 (3H, s), 1.44 (9H, s), 1.77-1.85 (1H, m), 2.02-2.09 (1H, m), 2.62 (2H, q, J=7.3 Hz), 2.63-2.78 (2H, m), 3.64-3.73 (2H, m), 4.08 (1H, br), 4.68 (1H, br s), 7.10-7.17 (4H, m), 7.22-7.28 (3H, m).

ESIMS (+): 450 [M+H] ⁺.

Пример 21

(R)-2-трет-бутоксикарбониламино-5-[2-хлор-4-(3-метил-фенокси)фенил]-2-метилпентан-1-ол

[Химическая формула 62]

Соединение из примера 6 взаимодействовало таким же образом, как и в примере 12. В результате был получен сложный эфир, который затем взаимодействовал таким же образом, как в примере 16. Результирующий целевой продукт был получен в виде бесцветного масла.

¹H-ЯМР (CDCl ₃, 400 MHz): 1.15 (3H, s), 1.43 (9H, s), 1.61-1.67 (3H, m), 1.83-1.87 (1H, m), 2.34 (3H, s), 2.70 (2Н, t, J=7.0 Hz), 3.62-3.65 (2H, m), 4.57 (1H, s), 6.81-6.84 (3H, m), 6.94 (1H, d, J=7.3 Hz), 6.98 (1H, d, J=3.1 Hz), 7.15 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.22 (1H, t, J=7.9 Hz).

ESIMS (+): 434 [M+H]⁺.

Пример 22

(R)-2-трет-бутоксикарбониламино-5-[2-хлор-4-(3-этилфенилтио)фенил]-2-метилпентан-1-ол

[Химическая формула 63]

Соединение из примера 7 взаимодействовало таким же образом, как и в примере 12. В результате был получен сложный эфир, который затем взаимодействовал таким же образом, как в примере 16. Результирующий целевой продукт был получен в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl ₃, 400 MHz): 1.14 (3H,s), 1.22 (3H,t,J=7.3 Hz), 1.43 (9H, s), 1.54-1.70 (3H, m), 1.79-1.89 (1H, m), 2.62 (2H, q, J=7.3 Hz), 2.70 (2H, t, J=7.0 Hz), 3.57-3.66 (2H, m), 4.05 (1H, br), 4.55 (1H, br s), 7.10-7.17 (4H, m), 7.17-7.28 (3H, m)

ESIMS (+): 464 [M+H]⁺.

Пример 23

(R)-2-трет-бутоксикарбониламино-5-[2-хлор-4-(3-пропилфенокси)фенил]-2-метилпентан-1-ол

[Химическая формула 64]

Соединение из справочного примера 19 и (5S)-3,6-диэтокси-5-изопропил-2-метил-2,5-дигидропиразин взаимодействовали между собой таким же образом, как в примере 1. Полученное соединение взаимодействовало так же, как в примере 12, в результате был получен сложный эфир. Затем этот сложный эфир взаимодействовал таким же образом, как в примере 16. Результирующий целевой продукт был получен в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 0.94 (3H, t, J=7.3 Hz), 1.15 (3H, s), 1.24-1.28 (2H, m), 1.43 (9H, s), 1.60-1.69 (3H, m), 1.80-1.90 (1H, m), 2.57 (2H, t, J=7.6 Hz), 2.70 (2H, t, J=7.6 Hz), 3.58-3.67 (2H, m), 4.11 (1H, br s), 4.58 (1H, br s), 6.79-6.85 (3H, m), 6.95 (1H, d, J=7.9 Hz), 6.99 (1H, d, J=2.8 Hz), 7.15 (1H, d, J=8.3 Hz), 7.24(1H, t, J=7.9Hz).

Пример 24

(R)-2-трет-бутоксикарбониламино-5-[2-хлор-4-(3-хлорфенилтио)фенил]-2-метилпентан-1-ол

[Химическая формула 65]

Соединение из примера 8 взаимодействовало таким же образом, как и в примере 12. В результате был получен сложный эфир, который затем взаимодействовал таким же образом, как в примере 16. Результирующий целевой продукт был получен в виде бесцветного масла.

¹H-ЯМР (CDCl ₃, 400 MHz): 1.14 (3H, s), 1.43 (9H, s), 1.58-1.74 (3H, m), 1.79-1.92 (1H, m), 2.73 (2H, t, J=6.7 Hz), 3.61 (1H, d, J=12 Hz), 3.64 (1H, d, J=12 Hz), 4.08 (1H, br s), 4.57 (1H, br s), 7.17-7.27 (6H, m), 7.37 (1H, s).

ESIMS (+): 470 [М+Н] ⁺.

Пример 25

(R)-2-трет-бутоксикарбониламино-5-[2-фтор-4-(3-трифторметилфенилтио)фенил]-2-метилпентан-1-ол

[Химическая формула 66]

Соединение из примера 13 взаимодействовало таким же образом, как в примере 16. Результирующий целевой продукт был получен в виде бесцветного масла.

¹ Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 1.14 (3H, s), 1.42 (9H, s), 1.55-1.74 (3H, m), 1.75-1.85 (1H, m), 2.65 (2H, t, J=6.7 Hz), 3.58-3.64 (2H, m), 4.03 (1H, br s), 4.55 (1H, br s), 7.04 (1H, dd, J=9.8 Hz, 1.8 Hz), 7.10 (1H, dd, J=7.9 Hz, 1.8 Hz), 7.17 (1H, t, J=7.9 Hz), 7.38-7.50 (3H, m), 7.54 (1H, br s).

Пример 26

(R)-2-трет-бутоксикарбониламино-5-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенилтио)фенил]-2-пропилпентан-1-ол

[Химическая формула 67]

Соединение из примера 15 взаимодействовало таким же образом, как в примере 16. Результирующий целевой продукт был получен в виде бесцветного масла.

¹ Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 0.92 (3H, t, J=7.3 Hz), 1.42 (9H, s), 1.14-1.80 (8H, m), 2.72 (2H, t, J=7.3 Hz), 3.62 (1H, d, J=12 Hz), 3.66 (1H, d, J=12 Hz), 4.54 (1H, br s), 7.16-7.22 (2H, m), 7.39 (1H, s), 7.40-7.48 (3H, m), 7.55 (1H, br s).

FABMS (+): 532 [М+Н] ⁺.

Пример 27

(R)-2-трет-бутоксикарбониламино-5-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенилтио)фенил]-2-метилпентан-1-ол

[Химическая формула 68]

Соединение из примера 11 взаимодействовало таким же образом, как в примере 12. Был получен сложный эфир, который затем взаимодействовал таким же образом, как в примере 16. Результирующий целевой продукт был получен в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 1.14 (3H, s), 1.42 (9H, s), 1.51-1.73 (3H, m), 1.79-1.92 (1H, m), 2.73 (2H, t, J=6.7 Hz), 3.57-3.67 (2H, m), 4.05 (1H, br s), 4.57 (1H, br s), 6.60 (1H, t, J=56 Hz), 7.19 (2H, d, J=1.2 Hz), 7.36 (1H, s), 7.39 (3H, br s), 7.44 (1H, s)

ESIMS (+): 537 [М+Н]⁺.

Пример 28

(R)-2-трет-бутоксикарбониламино-5-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенокси)фенил]-1-диметоксифосфорилокси-2-метилпентан

[Химическая формула 69]

К раствору соединения из примера 16 (456 мг) в пиридине (5 мл) добавили четырехбромистый углерод (620 мг) и триметилфосфит (219 мкл), процесс проводили при охлаждении льдом. Полученный в результате раствор перемешивали в течение 1 ч при 0°C. К реакционному раствору добавили 10% водную лимонную кислоту, провели экстракцию этилацетатом, затем промыли сначала водой, а потом насыщенным солевым раствором. Растворитель выпарили, а образовавшийся остаток очистили колоночной хроматографией на силикагеле (гексан: этилацетат = 1:2). В результате был получен целевой продукт (910 мг) в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 1.26 (3H, s-), 1.42 (9H, s), 1.52-1.70 (3Н, m), 1.86-1.97 (1H, m), 2.71 (2H, t, J=7.6 Hz), 3.78 (6H, d, J=11 Hz), 4.00 (1H, dd, J=9.8, 4.9 Hz), 4.16 (1H, dd, J=9.8, 4.9 Hz), 4.52 (1H, br s), 6.86 (1H, dd, J=7.9, 2.4 Hz), 7.03 (1H, d, J=2.4 Hz), 7.16 (1H, dd, J=7.9, 2.4 Hz), 7.19 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.24 (1H, br s), 7.37 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.45 (1H, t, J=7.9 Hz).

Пример 29

(R)-2-трет-бутоксикарбониламино-5-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенилтио)фенил]-1-диметоксифосфорилокси-2-метилпентан

[Химическая формула 70]

Соединение из примера 17 взаимодействовало таким же образом, как в примере 28. В результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 1.25 (3Н, s), 1.42 (9H, s), 1.53-1.68 Hz (3H, m), 1.85-1.97 (1Н, m), 2.73 (2H, t, J=7.6 Hz), 3.77 (6H, d, J=11 Hz), 3.98 (1H, dd, J=9.8, 4.9 Hz), 4.15 (1H, dd, J=9.8, 4.9 Hz), 4.52 (1H, br s), 7.18-7.21 (2H, m), 7.38 (1H, d, J=2.4 Hz), 7.40-7.43 (2H, m), 7.46-7.50 (1H, m), 7.54 (1H, br s).

Пример 30

(R)-2-трет-бутоксикарбониламино-4-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенокси)фенил]-1-диметоксифосфорилокси-2-метилбутан

[Химическая формула 71]

Соединение из примера 18 взаимодействовало таким же образом, как в примере 28. В результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 1.38 (3Н, s), 1.45 (9H, s), 1.77-1.85 Hz (1H, m), 2.04-2.17 (1H, m), 2.66-2.79 (2H, m), 3.79 (6H, d, J=11 Hz), 4.04 (1H, dd, J=9.8, 4.9 Hz), 4.24 (1H, dd, J=9.8, 4.9 Hz), 4.64 (1H, br s), 6.86 (1H, dd, J=8.5, 2.5 Hz), 7.02 (1H, d, J=2.5 Hz), 7.14-7.16 (1H, m), 7.21 (1H, d, J=8.5 Hz), 7.24 (1H, bs s), 7.36-7.38 (1H, m), 7.45 (1H, t, J=8.0 Hz).

FABMS (+): 582 [М+Н] ⁺.

Пример 31

(R)-2-трет-бутоксикарбониламино-4-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенилтио)фенил]-1-диметоксифосфорилокси-2-метилбутан

[Химическая формула 72]

Соединение из примера 19 взаимодействовало таким же образом, как в примере 28. В результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 1.37 (3Н, s), 1.45 (9H, s), 1.74-1.84 (1H, m), 2.06-2.18 (1H, m), 2.64-2.81 (2H, m), 3.79 (6H, d, J=11.0 Hz), 4.03 (1H, dd, J=9.8, 4.9 Hz), 4.23 (1H, dd, J=9.8, 4.9 Hz), 4.64 (1H, br s), 7.20 (2H, d, J=1.2 Hz), 7.38 (1H, d, J=2.4 Hz), 7.40-7.42 (1H, m), 7.42 (1H, d, J=1.2 Hz), 7.45-7.50 (1H, m), 7.55 (1H, br s).

Пример 32

(R)-2-трет-бутоксикарбониламино-4-[2-хлор-4-(3-этилфенилтио)фенил]-1-диметоксифосфорилокси-2-метилбутан

[Химическая формула 73]

Соединение из примера 20 взаимодействовало таким же образом, как в примере 28. В результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 1.22 (3Н, t, J=7.3 Hz), 1.36 (3H, s), 1.44 (9H, s), 1.73-1.81 (1H, m), 2.06-2.18 (1H, m), 2.64 (2H, q, J - 7.3 Hz), 2.65-2.76 (2H, m), 3.78 (6H, d, J=11.0 Hz), 4.03 (1H, dd, J=9.8, 4.9 Hz), 4.22 (1H, dd, J=9.8, 4.9 Hz), 4.62 (1H, br s), 7.09-7.17 (4H, m), 7.22-7.27 (3H, m).

ESIMS (+): 558 [М+Н] ⁺.

Пример 33

(R)-2-трет-бутоксикарбониламино-5-[2-хлор-4-(3-метил-фенокси)фенил]-1-диметоксифосфорилокси-2-метилпентан

[Химическая формула 74]

Соединение из примера 21 взаимодействовало таким же образом, как в примере 28. В результате был получен целевой продукт в виде желтого масла.

¹ Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 1.26 (3Н, s), 1.42 (9H, s), 1.58-1.65 (3Н, m), 1.89-1.91 (1H, m), 2.34 (3Н, s), 2.69 (2H, t, J=7.3 Hz), 3.77 (6H, t, J=11.0 Hz), 4.00 (1H, dd, J=9.8, 4.9 Hz), 4.15 (1H, dd, J-9.8, 4.9 Hz), 4.52 (1H, br s), 6.79-6.84 (3H, m), 6.94 (1H, d, J=7.3 Hz), 6.98 (1H, d, J=2.4 Hz), 7.13 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.22 (1H, t, J=7.9 Hz).

ESIMS (+): 542 [М+Н]⁺.

Пример 34

(R)-2-трет-бутоксикарбониламино-5-[2-хлор-4-(3-этилфенилтио)фенил]-1-диметоксифосфорилокси-2-метилпентан

[Химическая формула 75]

Соединение из примера 22 взаимодействовало таким же образом, как в примере 28. В результате был получен целевой продукт в виде желтого масла.

¹ Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 1.22 (3Н, t, J=7.3Hz), 1.26 (3H, s), 1.41 (9H, s), 1.53-1.65 (3H, m), 1.84-1.93 (1H, m), 2.63 (2H, q, J=7.3 Hz), 2.66-2.71 (2H, m), 3.76 (3H, d, J=11.0 Hz), 3.78 (3H, d, J=11.0 Hz), 3.98 (1H, dd, J=9.8, 4.9 Hz), 4.14 (1H, dd, J=9.8, 4.9 Hz), 4.50 (1H, br s), 7.11-7.27 (7H, m).

ESIMS (+): 572 [M+H] ⁺.

Пример 35

(R)-2-трет-бутоксикарбониламино-5-[2-хлор-4-(3-пропилфенокси)фенил]-1-диметоксифосфорилокси-2-метилпентан

[Химическая формула 76]

Соединение из примера 23 взаимодействовало таким же образом, как в примере 28. В результате был получен целевой продукт в виде желтого масла.

¹ Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 0.94 (3Н, t, J=7.3 Hz), 1.26 (3H, s), 1.42 (9H, s), 1.56-1.68 (5H, m), 1.85-1.95 (1H, m), 2.57 (2H, t, J=7.6 Hz), 2.69 (2H, t, J=7.3 Hz), 3.77 (3H, d, J=11.0 Hz), 3.78 (3H, d, J=11.0 Hz), 4.00 (1H, dd, J=9.8, 4.9 Hz), 4.15 (1H, dd, J=9.8, 4.9 Hz), 4.52 (1H, br s), 6.79-6.85 (3H, m), 6.95 (1H, d, J=7.9 Hz), 6.98 (1H, d, J=2.4 Hz), 7.13 (1H, d, J=8.3 Hz), 7.24 (1H, t, J=7.9 Hz). ESIMS(+): 570 [М+H]⁺.

Пример 36

(R)-2-трет-бутоксикарбониламино-5-[2-хлор-4-(3-хлорфенилтио)фенил]-1-диметоксифосфорилокси-2-метилпентан

[Химическая формула 77]

Соединение из примера 24 взаимодействовало таким же образом, как в примере 28. В результате был получен целевой продукт в виде желтого масла.

¹ Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 1.25 (3H, s), 1.42 (9H, s), 1.58-1.67 Hz (3H, m), 1.86-1.96 (1H, m), 2.72 (2H, t, J=6.7 Hz), 3.77 (6H, d, J=11 Hz), 3.98 (1H, dd, J=9.8, 4.9 Hz), 4.15 (1H, dd, J=9.8, 4.9 Hz), 4.52 (1H, br s), 7.15-7.24 (5H, m), 7.36 (1H, d, J=1.8 Hz).

ESIMS (+) 578 [M+H]⁺.

Пример 37

(R)-2-трет-бутоксикарбониламино-5-[2-фтор-4-(3-фторметилфенилтио)фенил]-1-диметоксифосфорилокси-2-метилпентан

[Химическая формула 78]

Соединение из примера 25 взаимодействовало таким же образом, как в примере 28. В результате был получен целевой продукт в виде желтого масла.

¹ H-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 1.25 (3H, s), 1.42 (9H, s), 1.53-1.68 Hz (3H, m), 1.85-1.97 (1H, m), 2.73 (2H, t, J=6.7 Hz), 3.56 (3H, d, J=11 Hz), 3.57 (3H, d, J=11 Hz), 3.98 (1H, dd, J=9.8, 4.9 Hz), 4.13 (1H, dd, J=9.8, 4.9 Hz), 4.50 (1H, br s), 7.03 (1H, dd, J=9.8 Hz, 1.8 Hz), 7.08 (1H, dd, J=7.9 Hz, 1.8 Hz), 7.16 (1H, t, J=7.9 Hz), 7.38-7.51 (3H, m), 7.55 (1H, br s).

Пример 38

(R)-2-трет-бутоксикарбониламино-5-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенилтио)фенил]-2-пропил-1-диметоксифосфорилоксипентан

[Химическая формула 79]

Соединение из примера 26 взаимодействовало таким же образом, как в примере 28. В результате был получен целевой продукт в виде желтого масла.

¹ Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 0.91 (3H, t, J=7.3 Hz), 1.18-1.31 (3H, m), 1.41 (9H, s), 1.48-1.58 (4H, m), 1.75-1.88 (1H, m), 2.71 (2H, t, J=7.3 Hz), 3.76 (6H, d, J=10 Hz), 4.07 (1H, dd, J=9.7, 4.3Hz), 4.14 (1H, dd J=9.7, 4.3 Hz), 4.40 (1H, brs), 7.19 (1H, s), 7.20 (1H, d, J=1.8 Hz), 7.38 (1H, d, J=1.8 Hz), 7.41-7.49 (3H, m), 7.55(1H, br s).

FABMS (+): 640 [M+H]⁺.

Пример 39

(R)-2-трет-бутоксикарбониламино-5-[2-хлор-4-(3-дифторметилфенилтио)фенил]-1-диметоксифосфорилокси-2-метилпентан

[Химическая формула 80]

Соединение из примера 27 взаимодействовало таким же образом, как в примере 28. В результате был получен целевой продукт в виде желтого масла.

¹ Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 1.24 (3H, s), 1.42 (9H, s), 1.51-1.67 Hz (3H, m), 1.83-1.99 (1H, m), 2.7 3 (2H, t, J=7.6 Hz), 3.77 (6H, d, J=11 Hz), 4.00 (1H, dd, J=9.8, 4.9 Hz), 4.17 (1H, dd, J=9.8, 4.9 Hz), 4.54 (1H, br s), 6.61 (1H, t, J=56 Hz), 7.19 (2H, d, J=1.2 Hz), 7.34-7.42 (4H, m), 7.45 (1H, s).

ESIMS (+): 594 [M+H] ⁺.

Пример 40

Моноэфир (R)-2-амино-5-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенокси)фенил]-2-метилпентилфосфорной кислоты

[Химическая формула 81]

К раствору соединения из примера 28 (533 мг) в ацетонитриле (8 мл) по каплям добавляли иодотриметилсилан (478 мкл), процесс проводили в атмосфере аргона при охлаждении льдом. Полученный в результате раствор встряхивали в течение 30 мин при охлаждении льдом, затем в раствор добавили воду (100 мл) и при охлаждении льдом встряхивание продолжали еще в течение 30 мин. После этого осажденные кристаллы отфильтровали, тщательно промыли водой и этилацетатом, а затем высушили. В результате был получен целевой продукт (310 мг) в виде белого порошка.

¹Н-ЯМР (DMSO-d₆-dTFA, 400 MHz): 5 1.16 (3Н, s), 1.51-1.71 (4Н, m), 2.66 (2Н, t, J=7.9 Hz), 3.78 (1H, dd, J=11.0, 4.9 Hz), 3.83 (1H, dd, J=11.0, 4.9 Hz), 6.98 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.13 (1H, br s), 7.26 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.27 (1H, br s), 7.35 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.44 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.57 (1H, t, J=7.9 Hz).

FABMS (+): 468 [M+H] ⁺.

Элементный анализ: Измерено: С 48,28%, Н 4,62%, N 2,86%; Вычислено: для C₁₉H₂₂ ClF₃NO₅P· ¼Н₂О: С 48,32%, Н 4,80%, N 2,97%.

Оптическое вращение: [ ]_D ²⁵+6,62 (с 0,55, ДМСО -1% ТГФ)

Пример 41

Моноэфир (R)-2-амино-5-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенилтио)фенил]-2-метилпентилфосфорной кислоты

[Химическая формула 82]

Соединение из примера 29 взаимодействовало таким же образом, как в примере 40. В результате был получен целевой продукт в виде белого порошка.

¹ H-ЯМР (DMSO-d₆-dTFA, 400 MHz): 1.15 (3Н, s), 1.49-1.68 (4Н, m), 2.67 (2Н, t, J=7.4 Hz), 3.76 (1H, dd, J=11.0, 4.9 Hz), 3.81 (1H, dd, J=11.0, 4.9 Hz), 7.32 (1H, dd, J=7.9, 2.4 Hz), 7.38 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.46 (1H, d, J=2.4 Hz), 7.53 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.56 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.60 (1H, br s), 7.62 (1H, t, J=7.9 Hz).

FABMS (+): 484 [M+H]⁺.

Элементный анализ: Измерено: С 46,85%, Н 4,35%, N 2,6%; Вычислено: для C₁₉ H₂₂ClF₃NO₄PS: С 47,16%, Н 4,58%, N 2,89%.

Оптическое вращение: [ ]_D ²⁵+7,27 (с 0,55, ДМСО - 1% ТГФ).

Пример 42

Моноэфир (К)-2-амино-4-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенокси)фенил]-2-метилбутилфосфорной кислоты

[Химическая формула 83]

Соединение из примера 30 взаимодействовало таким же образом, как в примере 40. В результате был получен целевой продукт в виде белого порошка.

¹ Н-ЯМР (DMSO-d₆-dTFA, 400 MHz): 1.30 (3H, s), 1.70-1.90 (2Н, m), 2.72 (2Н, t, J=8.6 Hz), 3.88 (1H, dd, J=11.0, 5.5 Hz), 3.94 (1H, dd, J=11.0 Hz, 5.5 Hz) 7.04 (1Н, dd, J=7.9, 2.4 Hz), 7.20 (1H, d, J=2.4 Hz), 7.30 (1H, dd, J=7.9, 2.4 Hz), 7.34 (1H, br s), 7.39 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.51 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.62 (1Н, d, J=7.9 Hz).

FABMS (+): 454 [M+H]⁺.

Элементный анализ: Измерено: С 47,83%, Н 4,33%, N 3,02%; Вычислено: для C₁₈H₂₀ClF₃NO₅P·¼Н ₂О: С 46,72%, Н 4,57%, N 3,03%.

Оптическое вращение: [ ]_D ²⁵+6,62 (с 0,55, ДМСО -1% ТГФ)

Пример 43

Моноэфир (R)-2-амино-4-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенилтио)фенил]-2-метилбутилфосфорной кислоты

[Химическая формула 84]

Соединение из примера 31 взаимодействовало таким же образом, как в примере 40. В результате был получен целевой продукт в виде белого порошка.

¹ Н-ЯМР (DMSO-d₆-dTFA, 400 MHz): 1.28 (3Н, s), 1.70-1.90 (2Н, m), 2.73 (2Н, t, J=8.6 Hz), 3.87 (1H, dd, J=11.0, 4.9 Hz), 3.94 (1H, dd, J=11.0, 4.9 Hz), 7.33 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.39 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.46 (1H, br s), 7.50-7.58 (3H, m).

FABMS (+): 470 [M+H] ⁺.

Элементный анализ: Измерено: С 45,32%, Н 4,09%, N 2,90%; Вычислено: для C₁₈H₂₀ ClF₃NO₄PS·¼Н₂О:С 45,57%, Н 4,36%, N 2,95%.

Пример 44

Моноэфир (R)-2-амино-4-[(3-этилфенилтио)фенил]-2-метилбутилфосфорной кислоты

[Химическая формула 85]

Соединение из примера 32 взаимодействовало таким же образом, как в примере 40. В результате был получен целевой продукт в виде белого порошка.

¹ H-ЯМР (DMSO-d₆-dTFA, 400 MHz): 1.37 (3Н, t, J=7.3 Hz), 1.28 (3Н, s), 1.72-1.85 (2H, m), 2.58 (2H, t, J=7.3 Hz), 2.67-2.72 (2H, m), 3.86 (1H, dd, J=11.0, 4.9 Hz), 3.93 (1H, dd, J=11.0, 4.9 Hz), 7.17-7.21 (3H, m), 7.25-7.26 (2H, m), 7.31 (2H, t, J=7.3 Hz).

ESIMS (+): 430 [M+H]⁺.

Элементный анализ: Измерено: С 52.56%, Н 5.79%, N 3.21%, Вычислено для C₁₉H ₂₅ClNO₄PS·¼H₂O:С 52.53%, Н 5.79%, N 3.21%.

Пример 45

Моноэфир (R)-2-амино-5-[2-хлор-4-(3-метилфенокси)фенил]-2-метилпентилфосфорной кислоты

[Химическая формула 86]

Соединение из примера 33 взаимодействовало таким же образом, как в примере 40. В результате был получен целевой продукт в виде белого порошка.

¹ Н-ЯМР (DMSO-d₆-dTFA, 400 MHz): 1.17 (3Н, s), 1.53-1.71 (4Н, m), 2.28 (3Н, s), 2.59-2.69 (2Н, m), 3.78-3.83 (2Н, m), 6.80 (1H, dd, J=7.9, 2.4 Hz), 6.84 (1H, s), 6.92 (1H, dd, J=7.9, 2.4 Hz), 6.98 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.02 (1H, d, J=2.4 Hz), 7.27 (1H, t, J=7.9 Hz), 7.33 (1H, d, J=7.9 Hz).

HRESIMS (+): 414.12313 (Вычислено для C₁₉H₂₆CINO₅P 414.12371).

Элементный анализ: Измерено: С 54.87%, Н 5.89%, N 3.27%, Вычислено для C₁₉H₂₅CINO₅ P: С 55.14%, Н 6.09%, N 3.38%.

Оптическое вращение: [ ]_D ²⁵+7.93 (с 1.20, ДМСО -1% TFA).

Пример 46

Моноэфир (R)-2-амино-5-[2-хлор-4-(3-этилфенилтио)фенил]-2-метилпентилфосфорной кислоты

[Химическая формула 87]

Соединение из примера 34 взаимодействовало таким же образом, как в примере 40. В результате был получен целевой продукт в виде белого порошка.

¹ Н-ЯМР (DMSO-d₆-dTFA, 400 MHz): 1.41 (3Н, t, J=7.3 Hz), 1.16 (3Н, s), 1.51-1.69 (4H, m), 2.58 (2H, t, J=7.3 Hz), 2.63-2.80 (2H, m), 3.78 (1H, dd, J=11.0, 4.9 Hz), 3.81 (1H, dd, J=11.0, 4.9 Hz), 7.16-7.33 (7H, m).

ESIMS(+): 444 [M+H]⁺.

Элементный анализ: Измерено: С 53.87%, Н 6.04%, N 3.11%, Вычислено для C₂₀H₂₇CINO₄PS:С 54.11%, Н 6.13%, N 3.16%.

Пример 47

Моноэфир (R)-2-амино-5-[2-хлор-4-(3-пропилфенокси)фенил]-2-метилпентилфосфорной кислоты

[Химическая формула 88]

Соединение из примера 35 взаимодействовало таким же образом, как в примере 40. В результате был получен целевой продукт в виде белого порошка.

¹ Н-ЯМР (DMSO-d₆-dTFA, 400 MHz): 0.86 (3Н, t, J=7.3 Hz), 1.17 (3Н, s), 1.51-1.67 (6Н, m), 2.53 (2Н, t, J=7.3 Hz), 2.64 (2H, t, J=7.3 Hz), 3.78 (1H, dd, J=11.0, 4.9 Hz), 3.83 (1H, dd, J=11.0, 4.9 Hz), 6.81 (1H, dd, J=7.9, 1.8 Hz), 6.86 (1H, t, J=1.8 Hz), 6.91 (1H, dd, J=8.6, 2.4 Hz), 7.00 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.02 (1H, d, J=2.4 Hz), 7.29 (1H, t, J=7.9 Hz), 7.33 (1H, t, J=8.6 Hz).

ESIMS (+): 442 [M+H]⁺.

Элементный анализ: Измерено: С 56.80%, Н 6.40%, N 3.04%, Вычислено для C₂₁ H₂₉CINO₅P:С 57.08%, Н 6.61%, N 3.17%.

Оптическое вращение: [ ]_D ²⁵+8.33 (с 0.90, DMSO -1% TFA).

Пример 48

Моноэфир (R)-2-амино-5-[2-фтор-4-(3-хлорфенилтио)фенил]-2-метилпентилфосфорной кислоты

[Химическая формула 89]

Соединение из примера 36 взаимодействовало таким же образом, как в примере 40. В результате был получен целевой продукт в виде белого порошка.

¹ Н-ЯМР (DMSO-d₆-dTFA, 400 MHz): 1.17 (3Н, s), 1.53-1.71 (4Н, m), 2.68 (2Н, t, J=6.7 Hz), 3.78 (1H, dd, J=11, 4.9 Hz), 3.83 (1H, dd, J=11, 4.9 Hz), 7.24 (1H, dt, J=7.3, 1.8 Hz), 7.28-7.40 (5H, m), 7.43 (1H, d, J=1.8 Hz).

ESIMS (+): 450 [M+H]⁺.

Элементный анализ: Измерено: С 47.64%, Н 4.72%, N 3.07%, Вычислено для C₁₈H₂₂Cl₂NO₄PS:С 48.01%, Н 4.92%, N 3.11%.

Оптическое вращение: [ ]_D ²⁵+8.12 (с 0.55, DMSO -1% TFA).

Пример 49

Моноэфир (R)-2-амино-5-[2-фтор-4-(3-трифторметилфенилтио)фенил]-2-метилпентилфосфорной кислоты

Химическая формула 90]

Соединение из примера 37 взаимодействовало таким же образом, как в примере 40. В результате был получен целевой продукт в виде белого порошка.

¹ Н-ЯМР (DMSO-d₆-dTFA, 400 MHz): 1.16 (3Н, s), 1.54-1.66 (4Н, m), 2.60 (2Н, br s), 3.77 (1H, dd, J=11, 4.9 Hz), 3.82 (1H, dd, J=11, 4.9 Hz), 7.19 (1H, dd, J=7.9, 1.8 Hz), 7.23 (1H, dd, J=9.8, 1.8 Hz), 7.36 (1H, t, J=7.9 Hz), 7.52-7.66 (4H, m).

ESIMS (+): 468 [M+H]⁺.

Элементный анализ: Измерено: С 48.00%, Н 4.59%, N 2.88%, Вычислено для C₁₉H ₂₂F₄NO₄PS·1/2H₂O:С 47.90%, Н 4.87%, N 2.94%.

Пример 50

Моноэфир (R)-2-амино-5-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенилтио)фенил]-2-пропилпентилфосфорной кислоты

[Химическая формула 91]

Соединение из примера 38 взаимодействовало таким же образом, как в примере 40. В результате был получен целевой продукт в виде белого порошка.

¹ Н-ЯМР (DMSO-d₆-dTFA, 400 MHz): 0.84 (3Н, t, J=7.3 Hz), 1.21 (2H, q, J=7.4 Hz), 1.42-1.62 (6H, m), 2.64-2.71 (2H, m), 3.81 (2H, d, J=4.9 Hz), 7.34 (1H, dd, J=7.9, 1.8 Hz), 7.40 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.48 (1H, d, J=1.8 Hz), 7.53 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.54-7.66 (3H, m).

FABMS (+): 512 [M+H] ⁺.

Элементный анализ: Измерено: С 47.89%, Н 4.94%, N 2.65, Вычислено для C₂₁H₂₆CIF ₃NO₄PS·H₂O:С 47.65%, Н 5.33%, N 2.65%.

Пример 51

Моноэфир (R)-2-амино-5-[2-хлор-4-(3-дифторметилфенилтио)фенил]-2-метилпентилфосфорной кислоты

[Химическая формула 92]

Соединение из примера 39 взаимодействовало таким же образом, как в примере 40. В результате был получен целевой продукт в виде белого порошка.

¹ Н-ЯМР (DMSO-d₆-dTFA, 400 MHz): 1.16 (3Н, s), 1.50-1.71 (4Н, m), 2.62-2.73 (2Н, m), 3.78 (1H, dd, J=11.0, 4.9 Hz), 3.83 (1H, dd, J=11.0, 4.9 Hz), 6.98 (1H, dd, J=56, 1.8 Hz), 7.27 (1H, dd, J=7.9, 1.8 Hz), 7.37 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.39 (1H, d, J=1.8 Hz), 7.43-7.56 (4H, m).

ESIMS (+): 466 [M+H]⁺.

Элементный анализ: Измерено: С 48.51%, Н 4.79%, N 2.93%, Вычислено для C ₁₉H₂₃ClF₂NO₄PS·1/5H ₂O:С 48.51%, Н 5.02%, N 2.98%.

Оптическое вращение: [ ]_D ²⁵+5.32 (c 0.50, DMSO -1% TFA).

Пример 52

Диэтил [2-хлор-4-(3-трифторметилфенилтио)фенил]пропил-2-метилмалонат

[Химическая формула 93]

2-хлор-1-(3-иодопропил)-4-(3-трифторметилфенилтио)бензол и диэтил-2-метилмалонат взаимодействовали между собой согласно методике из примера 152 заявки WO 04026817. В результате был получен целевой продукт в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 1.25 (6H, t, J=7.4 Hz), 1.40 (3H, s), 1.51-1.63 (2H, m), 1.90-1.97 (2H, m), 2.73 (2H, t, J=7.9 Hz), 4.17 (4H, q, J=7.4 Hz), 7.17-7.23 (2H, m), 7.38 (1H, d, J=2.2 Hz), 7.39-7.44 (2H, m), 7.45-7.50 (1H, m), 7.55 (1H, s).

ESIMS (+): 502 [M]⁺.

Пример 53

(±)-5-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенилтио)]фенил-2-этоксикарбонил-2-метилпентаноевая кислота

[Химическая формула 94]

К раствору соединения из примера 52 (16,8 г) в этаноле (167 мл) добавили гидроксид калия (2,40 г), получившийся в результате раствор встряхивали при 50°C в течение 24 ч. Затем в раствор добавили воду, провели нейтрализацию, используя 2 мол/л соляной кислоты, и экстрагировали этилацетатом. Органический слой промыли сначала водой, а потом насыщенным солевым раствором и высушили над безводным сульфатом натрия. Растворитель выпарили, а остаток очистили колоночной хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат = 1:1). В результате был получен целевой продукт (11,2 г) в виде бесцветного масла.

¹ Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 1.26 (3H, t, J=7.4 Hz), 1.47 (3H, s), 1.55-1.66 (2H, m), 1.87-2.06 (2H, m), 2.73 (2H, t, J=7.9 Hz), 4.22 (2H, q, J=7.4 Hz), 7.18 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.20 (1H, dd, J=7.9, 1.8 Hz), 7.38 (1H, d, J=1.8 Hz), 7.39-7.44 (2H, m), 7.45-7.50 (1H, m), 7.54 (1H, s).

ESIMS (+): 475 [М+Н]⁺.

Пример 54

Этил (±)-5-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенилтио)]фенил-2-метоксикарбониламино-2-метилпентаноат

[Химическая формула 95]

К раствору соединения из примера 53 (15,8 г) в бензоле (166 мл) добавили азид дифенилфосфорила (7,86 мл) и триэтиламин (6,01 мл), получившийся раствор нагревали до дефлегмации в течение 1,5 ч. Температуру реакционной смеси вернули до значения комнатной температуры, и к указанной смеси по каплям в течение 20 мин добавляли метанол (20 мл). Получившийся раствор нагревали до дефлегмации в течение 30 мин, а затем в реакционную смесь добавили метоксид натрия (3,58 г) и раствор нагревали до дефлегмации в течение 1,5 ч. После этого в раствор добавили насыщенный водный хлорид аммония и провели экстракцию этилацетатом. Органический слой промыли сначала водой, а потом насыщенным солевым раствором и высушили над безводным сульфатом натрия. Растворитель выпарили, а остаток очистили колоночной хроматографией на силикагеле (гексан: этилацетат = 5:1). В результате был получен целевой продукт (11,2 г) в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 MHz): 1.25 (3Н, t, J=7.3 Hz), 1.32-1.47 (1H, m), 1.52-1.67 (1H, m), 1.57 (3Н, s), 1.80-1.90 (1H, m), 2.20-2.37 (1H, m), 2.62-2.76 (2H, m), 3.64 (3Н, s), 4.15-4.25 (2H, m), 5.62 (1H, br s), 7.16 (1H, d, J=7.9 Hz), 7.20 (1H, dd, J=7.9, 1.8 Hz), 7.38 (1H, d, J=1.8 Hz), 7.40-7.44 (2H, m), 7.45-7.50 (1H, m), 7.55 (1H, s).

ESIMS (+): 504 [M+H]⁺.

Пример 55

(±)-5-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенилтио)]фенил-2-метоксикарбониламино-2-метилпентан-1-ол

[Химическая формула 96]

К раствору соединения из примера 54 (15,6 г) в ТГФ (249 мл) сначала добавили борогидрид лития (3,75 г), а затем по каплям добавляли этанол (16,6 мл); процесс проводили при охлаждении льдом. После этого в реакционный раствор добавили 10% водную лимонную кислоту и провели экстракцию этилацетатом. Затем промыли сначала водой, а потом насыщенным солевым раствором и высушили над безводным сульфатом натрия. Растворитель выпарили, а остаток очистили колоночной хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат = 1:1). В результате был получен целевой продукт (12,9 г) в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl ₃, 400 MHz): 1.18 (3H, s), 1.54-1.74 (3H, m), 1.78-1.89 (1H, m), 2.73 (2H, t, J=7.9 Hz), 3.63 (3H, s), 3.56-3.70 (2H, m), 4.23 (1H, br s), 7.17-7.22 (2H, m), 7.38-7.50 (4H, m), 7.54 (1H, s).

ESIMS (+): 462 [М+Н]⁺.

Пример 56

(±)-2-трет-бутоксикарбониламино-5-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенилтио)]фенил-2-метилпентан-1-ол

[Химическая формула 97]

К раствору соединения из примера 55 (12,9 г) в ТГФ (60 мл) и метаноле (120 мл) добавили 5 мол/л водного раствора гидроксида калия (60 мл); процесс проводили при охлаждении льдом. Получившийся в результате раствор нагревали до дефлегмации в течение 86 ч. После этого в реакционный раствор добавили воду и провели экстракцию этилацетатом. Затем промыли сначала водой, а потом насыщенным солевым раствором и высушили над безводным сульфатом натрия. Экстракт упарили, остаток растворили в 1,4-диоксане (279 мл) и в получившийся раствор ввели ди-трет-бутоксидикарбонат (9,13 г). Раствор встряхивали в течение 2 ч при комнатной температуре, а затем оставили на ночь при комнатной температуре. После этого в реакционный раствор добавили воду и провели экстракцию этилацетатом. Затем промыли сначала водой, а потом насыщенным солевым раствором и высушили над безводным сульфатом натрия. Растворитель выпарили, а остаток очистили колоночной хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат = 2:1). В результате был получен целевой продукт (13,0 г) в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl ₃, 400 MHz): 1.14 (3Н, s), 1.42 (9H, s), 1.53-1.74 (3H, m), 1.79-1.92 (1H, m), 2.74 (2H, t, J=7.9 Hz), 3.58-3.69 (2H, m), 4.05 (1H, br s), 4.57 (1H, br s), 7.20-7.22 (2H, m), 7. 38-7.50 (4H, m), 7.54 (1H, s).

ESIMS (+): 504 [M+H]⁺ .

Примеры 57 и 58

(+)-2-трет-бутоксикарбониламино-5-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенилтио)]фенил-2-метилпентан-1-ол и

(-)-2-трет-бутоксикарбониламино-5-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенилтио)]фенил-2-метилпентан-1-ол

Оптическое разделение соединения из примера 56 было проведено с использованием жидкостной хроматографии высокого разрешения (CHIRALCEL OJ-H, гексан:изопропанол:диэтиламин = 98:2:0,1 объем/объем); измерения осуществляли при длине УФ-волны 278 нм, скорость расхода 1,0 мл/мин). Из порции до вымывания было получено бесцветное масло, имеющее [ ]_D ²⁵+15,08 (с 0,63, CHCl₃) (пример 57), а из порции после вымывания получили бесцветное масло, имеющее [ ]_D ²⁶-13,91 (с 0,63, CHCl₃) (пример 58).

Пример 59

Моноэфир (+)-2-амино-5-[2-хлор-4-(3-трифторметилфенокси)фенил]-2-метилпентилфосфоновой кислоты

Соединение из примера 57 взаимодействовало таким же образом, как в примере 16. Полученное соединение взаимодействовало таким же образом, как в примере 28, в результате этой реакции был получен фосфат. Фосфат, взаимодействуя таким же образом, как в примере 40, привел к целевому продукту в виде белого порошка.

FABMS (+): 484 [М+Н]

Оптическое вращение: [ ]_D ²⁵+8,86 (с 1,00, ДМСО -1% ТГФ).

Далее результаты, которые подтверждают полезность соединения по настоящему изобретению, показаны с помощью примера, полученного в результате эксперимента.

Пример, полученный в результате эксперимента 1

Индуцируемая мобилизация внутриклеточного кальция. Тест обсуждаемого соединения на экспрессию клеток против рецептора сфингозин-1-фосфат (S1P) человека.

Рецепторы S1P человека, экспрессирующие клетки СНО-К1 (рецепторы hS1P₁, экспрессирующие клетки СНО-К1, рецепторы hS1P₃, экспрессирующие клетки СНО-К1 и рецепторы hS1P ₄, экспрессирующие клетки СНО-К1), выдерживали в среде Ham s F-12, которая содержала 10% фетальную бычью сыворотку и 400 мкг/мл Geneticin. На черную культуральную пластину с прозрачной нижней частью (BD Falcon), состоящую из 96 ячеек, были помещены рецепторы hS1P₁ и hS1P₃, которые обладают экспрессией клеток СНО-К1, в количестве 7×10⁴ клеток/ячейка, а также рецепторы hS1P₄, экспрессирующие клетки СНО-К1 в количестве 1×10⁴ клеток/ячейка. Указанные клетки инкубировали в течение ночи при 37°C и 5% содержании СО₂, после этого среду из ячеек удалили. В качестве флуоресцентного Са²⁺-связывающего индикатора был добавлен буфер загрузки, содержащий реагент Calcium Kit-Fluo 3 (Dojindo Laboratories). Клетки инкубировали при 37°C и 5% содержании CO₂. По окончании инкубирования клетки промыли фосфатно-солевым буфером и добавили буфер считки, содержащий реагент Calcium Kit-Fluo 3. Затем клетки инкубировали в течение 20 мин при 37°C и 5% содержании СО₂. Интенсивность флуоресценции измеряли с помощью спектрофотофлуорометра для микропластин (FLEX Station, Molecular Devices), измерения проводили при длине волны возбуждения флуоресценции, составляющей 485 нм, и длине волны выявления, составляющей 525 нм. S1P и обсуждаемое соединение были подготовлены таким образом, чтобы их концентрация составляла 10-кратную величину от значения конечной концентрации (конечная концентрация ДМСО составляла 0,1%). Указанный раствор был введен спустя 18 с после начала измерения флуоресценции, после этого интенсивность флуоресценции непрерывно измеряли каждые 1,5 с вплоть до 100 с от момента введения. Исходя из измеренных данных подсчитали величину (рост флуоресценции), вычитая минимальную интенсивность флуоресценции из ее максимального значения. Приняв за 100% разницу между ростом флуоресценции в случае добавления растворителя и в результате действия S1P (в концентрации 10 ^-6 М), был подсчитан относительный процентный рост флуоресценции обсуждаемого соединения. Полученную величину приняли за индуцированную активность внутриклеточной мобилизации кальция и определили значение ЕС₅₀ обсуждаемого соединения (использовав для этого программное обеспечение PRISM, GraphPad. В приведенной ниже таблице величина 10 нмоль/л > ЕС₅₀ 1 нмоль/л обозначена +, а величина 1 нмоль/л > EC ₅₀ обозначена как ++.

Номер примера	S1P1	S1P3	S1P4
40	++	>10 мкмоль/л	+
41	++	>10 мкмоль/л	+
42	++	>10 мкмоль/л	+
43	++	>10 мкмоль/л	+
44	++	>10 мкмоль/л	+
45	++	>10 мкмоль/л	+
46	++	>10 мкмоль/л	+
47	++	>10 мкмоль/л	+
48	++	>10 мкмоль/л	++
49	++	>10 мкмоль/л	+
50	++	>10 мкмоль/л	+
51	+	>10 мкмоль/л	+

Из приведенных выше результатов установлено, что соединение по настоящему изобретению обладает слабой активностью в отношении рецептора S1P₃ человека и сильной активностью в отношении рецепторов S1P ₁ и S1P₄.

Техническое назначение

Настоящее изобретение привело к обнаружению нового аминофосфатного производного и его солей, обладающих очень высоким модулирующим воздействием на S1P рецепторы.

Соединение, имеющее такое модулирующее воздействие на рецептор S1P, эффективно в качестве лечебного и превентивного средства при артериосклерозе, облитерирующем артериосклерозе, облитерирующем тромбангиите, фиброзе почек, фиброзе печени, хронической бронхиальной астме, диффузном гамартоангиомиоматозе легких, синдроме респираторного дистресса взрослых (ARDS), хронических обструктивных заболеваниях легких (COPD), пневмонии, идиопатической интерстициальной пневмонии, раке легких, гиперчувствительной пневмонии, болезни Буергера, диабетической нефропатии периферических сосудов, септицемии, ангиите, нефрите, пневмоните, церебральном инфаркте, инфаркте миокарда, эдематозном состоянии, расширении вен, аневризме аорты, стенокардии, плеврите, застойной сердечной недостаточности, полиорганной недостаточности, пролежнях, ожогах, язвенном колите, болезни Крона и им подобных. Помимо этого, соединение, имеющее такое воздействие на рецептор S1P, эффективно в качестве лечебного и превентивного средства при отторжении трансплантата сердца, почек, кожи, печени и костного мозга; оно также эффективно в качестве лечебного и превентивного средства при ревматоидном артрите, системной красной волчанке, болезни Хашимото, множественном склерозе, бульбоспинальном параличе, сахарном диабете, атопическом дерматите, аллергическом рините, аллергическом конъюнктивите, а также аллергическом контактном дерматите и им подобных состояниях.