способ получения лечебных препаратов из пуповины плода

Формула изобретения

Способ получения лечебных препаратов из пуповины плода, включающий выделение Вартонова студня, пуповинной крови, центрифугирование и разделение крови на составные части, замораживание всех полученных материалов в жидком азоте, отличающийся тем, что у плодов-телят в первую половину внутриутробного развития пуповину ампутируют в области пупочного кольца и на границе амнионо-хориальной части детской плаценты, выделяют кровь из пупочных вен и артерий, фиксируют ампутированные концы пуповины, сепарируют пуповинную кровь, отделяют составные части, пропускают через нанофильтры, ампутированную пуповину дезинфицируют и выделяют Вартонов студень, извлекают пуповинные артерии, вены и фиксируют их в 0,9%-ном растворе хлористого натрия, извлекают пуповинную оболочку и фиксируют в 0,9%-ном растворе хлористого натрия.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к способам получения из пуповины Вартонова студня, кордовой крови, пуповинных вен и артерий и пуповинной эмбриональной оболочки для будущих биоконтейнеров, для адресной доставки лекарств при лечении коров с болезнями половых органов после патологических родов и болезней новорожденных телят с диареей.

Известен способ получения ядросодержащих клеток из пуповинной крови. Суть этого способа заключается в заборе пуповинной крови и последующем выделении из крови ядросодержащих клеток, в последующем их консервировании [1]. Недостатком этого способа является трудоемкость и длительность получения и переработки пуповинной крови перед криоконсервацией и после размораживания.

Известен способ получения трасплантата вотоларингологии, где при создании типаноластического материала получают и используют Вартонов студень. В способе резицируют участок пуповины плода, отжимают от кровяных сгустков из пуповинной вены и артерии. После продольного рассечения пуповины и отделения Вартонова студня его укладывают на капроновую сетку, такая прозрачная пленка, толщиной 0,5 мл накладывается на рану [2].

Недостатком этого способа является то, что при заготовке Вартонова студня его укладывают отдельными тяжами на капроновую сетку, подвергая ультрафиолетовому воздействию, и орошают 1% раствором диоксидина, что снижает качество получаемого эмбрионального материала. В качестве ближайшего аналога принят способ получения эмбробластоподобных клеток из пупочного канатика новорожденного [3]. Способ заключается в том, что фибробластоподобные клетки получают из пупочного канатика новорожденного ребенка, когда фрагмент пупочного канатика подвергают воздействию коллагеназы-1 и коллагеназы-4 в соотношении 1:1 в пропорции гомогената к раствору 1:5, удаляя из вены пупочного канатика эндотелиальные клетки.

Недостатком этого изобретения является то, что для получения природных лечебных веществ авторы используют ферментативные воздействия, создаваемые химическим способом, что уменьшает лечебные качества получаемых вытяжек, меняя структуру плацентарных ферментов, снижают дифференциальные свойства природно-эмбриональных клеток.

Задачей изобретения является создание способа получения из пуповины плода-теленка в возрасте первой половины внутриутробного развития не только кордовой крови, но и Вартонового студня, пуповинных вен и артерии как нанотрубчатых контейнеров, эмбрионально-плодную пористую оболочку пуповины, позволяющего заготовить и сохранить для успешной трансплантации максимально возможного количества стволовых клеток, наноферментативных плацентарных фракций, повысить надежность и гарантию сохранения их жизнеспособности при адресной доставке лекарства к больному органу.

Целесообразность применения стволовых клеток, кордовой крови и ферментативных препаратов фетоплацентарного комплекса предназначены для лечения коров с болезнями половых органов после патологических родов. Высокий пролиферативный потенциал стволовых клеток, содержание ростовых факторов в препартах, стимулирующих деление клеток и бактерицидность, делают их уникальными и незаменимыми в лечении животных.

Применение биологических препаратов включает механизмы физиологической регенерации и воспалительной пролиферации в области ожоговых и колото-резаных ран молочной железы у коров. Препараты, изготовленные нами в жидкой и мазевой форме, в которых имеется от 10 до 30% фракций пуповинной крови или Вартонова студня, стимулируют пролиферацию клеток гранулезы и фибробластов. Наличие стволовых клеток в биоконтейнерах из пуповинных вен или артерий, а также в пуповинной амниохориальной оболочке, введенных в больной организм, проявляют миграцию и пролифирацию в тканях воспалительных процессов в половых органах коровы или в желудочно-кишечном тракте новорожденных телят.

В пуповине плодов-телят, находящихся в матке у стельной коровы в первой половине беременности, сконцентрировано большое количество недифференцированных стволовых клеток нанорегуляторного характера ферментативных препаратов, эффективно выполняющих лечебную роль.

Способ получения лечебных препаратов из пуповины, предлагаемый нами, включает в себя проведение ампутации пуповины в области пупочного кольца и на границе амнионо-хориальной части детской плаценты, вакуумированием производят забор пуповинной крови из пуповинных вен и артерий, фиксируя, перевязывают биологической нитью (кетгут) концы ампутированной пуповины, проводят сепарирование крови, отделяют эритроциты, нанофильтрируют плазменную и лейкоцитарную фракции, помещают пуповину в тепловую камеру, проводят продольное рассечение ампутированной пуповины для свободного стекания расплавленного Вартонова студня, извлекают пуповинные вены, артерии, пуповинную оболочку, проводят их криоконсервацию.

Предлагаемый способ получения лечебных препаратов из пуповины плода выполняется в следующей последовательности:

1. ампутируют пуповину в области пупочного кольца и на границе амнионо-хориальной части детской плаценты у плодов-телят в первую половину внутриутробного развития;

2. фиксируют перевязыванием биологической нитью (кетгут) концы отрезков пуповины (фиг.1);

3. делают забор крови из пупочных вен и артерий вакуумированием (фиг.2);

4. сепарируют пуповинную кровь, отделяют эритроцитарную фракцию, фракцию с плазмой и ядросодержащими клетками нейтрофильной группы пропускают через нанофильтр от 20 до 100 нм;

5. дезинфицируют ампутированную пуповину кварцеванием в течение 20 минут;

6. помещают пуповину в тепловую (35-40°С) камеру, подвешивая ее в изогнутом состоянии за перевязанные концы (фиг.3);

7. делают продольное рассечение стенки пуповины, фиксируя ее разрезом вниз для создания свободного стекания расплавленного при температуре 40°С Вартонова студня в емкость (фиг.3);

8. извлекают пуповинную оболочку, имеющую пористые эндотелиальные рыхлые стенки и ее фиксируют 0,9% раствором хлористого натрия;

9. извлекают пуповинные артерии и вены их фиксируют в 09% растворе хлористого натрия;

10. готовят к замораживанию в жидком азоте пуповинные вены и артерии, пуповинную оболочку, пуповинную кровь, Вартонов студень для длительного хранения, для создания биоконтейненров в использовании адресной доставки лекарств к больному органу животных.

Практическое применение

Использование составных частей, составляющих пуповину плодов, переработанных в лечебные фракции в течение 2 часов после убоя стельных коров на больных коровах после отела, отражено в таблице 1.

Таблица 1
Лечебная эффективность препаратов
Лечебные фракции	Заболевания коров	Коров (всего)	Из них выздоровело
число	%
Пуповинная кровь (30% мазь)	Колото-резаные раны бедра	11	10	90,9
Биоконтейнер - Вартонов студень	Послеродовой эндометрит	12	10	88,3
Биоконтейнер (фракции: плазма, нейтрофилы, Вартонов студень)	Гнойный эндометрит	9	7	77,7
Контроль	Эндометрит	12	8	66,6

Из таблицы 1 видно, что после лечения коров с колото-резаными ранами бедра, голени мазями с 30% фракционированной пуповинной кровью ежедневно в течение 7 дней выздоровление коров наступило через 10-11 дней у 90,9% коров. Благодаря лечению коров с помощью биоконтейнеров, в состав которых входит Вартонов студень, упакованный в пуповинную оболочку и введенный в истмическую часть рога матки через 24 часа 3 раза, выздоровело 88,3% коров через 12 дней. После введения коровам с гнойным эндометритом биоконтейнера (плазма, нейтрофилы, Вартонов студень) в тазовую полость коровам 3 раза выздоровление наступило у 77,7% коров. Процесс выздоровления наблюдался по яркому проявлению половой охоты. В контрольной группе, когда коров лечили по общепринятой методике, используя антибиотики, маточные средства, выздоровление наступило у 66,6% коров через 35-40 дней после отела.

Литература

1. Исаев А.А., Мхеидзе Д.М., Гришина В.В., Приходько А.В. «Способ получения ядросодержащих клеток из пуповинной крови», RU № 2343928 С1, 2007.04.03, заявка № 2007112126/15.

2. Забиров Р.А, Каган И.И., Рахматуллин P.P. «Способ получения тимпластического трансплантата», патент RU № 2174016 С1, заявка № 2000115520/14, 14.06.2000.

3. Приходько А.В., Исаев А.А., Киселев С.Л., Лагарькова М.А., Кошелева Н.В., Сабурина И.Н., Мелихова B.C. Заявка на изобретение RU № 2008111708 А, заявка № 200811708/13, 27.13.2008.