способ уточняющей диагностики обострения хронической обструктивной болезни легких

Формула изобретения

Способ уточняющей диагностики обострения хронической обструктивной болезни легких путем исследования крови, отличающийся тем, что показатели крови оценивают по цитолейкограмме гранулоцитосвязывающих лимфоцитов с дальнейшим вычислением индексов розеткообразования (ИРО) как соотношения между ЛСГ-1 (лимфоцит+1 гранулоцит) к количеству свободнолежащих лимфоцитов, ЛСГ-2 (лимфоцит +2 гранулоцита) к количеству свободнолежащих лейкоцитов, и при ИРО ЛСГ-1 более 0,8, уменьшении ИРО ЛСГ-2 менее 0,11 у больных диагностируют обострение хронической обструктивной болезни легких.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, и может быть использовано для уточняющей диагностики обострения хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ).

ХОБЛ является одной из ведущих причин заболеваемости и летальности в современном мире. Летальность от ХОБЛ занимает 4-е место среди всех причин смерти в общей популяции, что составляет около 4% в структуре общей летальности. Особенностью течения ХОБЛ, как и любой другой хронической патологии, являются обострения, каждое из которых усугубляет прогрессирование ХОБЛ, тем самым ускоряя и утяжеляя развитие ДН.

Критериями обострения ХОБЛ является клиническая симптоматика (усиление выраженности одышки и кашля, нарастание числа свистящих хрипов, увеличение продукции мокроты и повышение ее гнойности, появление заложенности в грудной клетке, появлением периферических отеков), ухудшение показателей ФВД и газов крови, снижение толерантности к физической нагрузке, возникающие внезапно и длящиеся не менее 2-х дней.

Однако довольно часто, особенно при тяжелом обострении ХОБЛ, наблюдается не увеличение выделения мокроты, а, наоборот, ее задержка, что делает невозможным оценить степень ее гнойности. Обострения могут начинаться постепенно, с невыраженной клинической симптоматикой, что затрудняет своевременное распознавание обострения. Кроме этого у большинства больных ХОБЛ имеется сочетанная внелегочная патология, чаще всего сердечно-сосудистые заболевания, которые нередко декомпенсируются на фоне обострений ХОБЛ, что, в свою очередь, ухудшает прогноз и затрудняет ведение данной категории пациентов.

Поэтому своевременная диагностика, купирование и профилактика обострений выходят на первый план при ведении больного с ХОБЛ.

Ближайшим аналогом является способ, предложенный в заявке № 97114285 с датой поступления 05.08.1997 г., по которому получен патент на изобретение № 2178176 от 10.01.2002 г.

Цель изобретения - ускорение и повышение точности способа уточняющей диагностики обострения ХОБЛ.

Способ основан на способности лимфоцитов и нейтрофилов образовывать in vitro аутологичные розетки.

Способ осуществляется следующим образом.

У обследуемого берут кровь из вены (3 мл) в пробирку с гепарином, на 1 мл крови 25 единиц гепарина. Кровь разводят раствором Хенкса в соотношении 1:1. На дно сухой пробирки наливают 3 мл градиента плотности р=1,077 г/мл. Для контроля жизнеспособности клетки окрашивали трипановым синим. Процент окрашенных клеток не превышал 3-4. Наслаивают разбавленную кровь на градиент плотности, не допуская перемешивания сред. Центрифугируют 40 минут при 1500 оборотах в минуту. После центрифугирования убирают надосадочную жидкость пипеткой и собирают верхнее кольцо, состоявшее из лимфоцитов, в сухую пробирку. Нижний слой плазмы, содержащий гранулоциты, собирают в другую пробирку. Добавляют раствор Хенкса до 5 мл, ресуспендируют и отмывают при 1500 оборотах в минуту 10 минут. Убирают надосадочную жидкость до 0,1 мл. Добавляют раствор Хенкса, чтобы получилась суспензия лимфоцитов в объеме 1 мл, гранулоцитов - 0,7 мл. Ресуспендируют. Подсчитывают клетки в камере Горяева и доводят до нужной концентрации (лимфоциты - 4,5×10 ⁹/л, гранулоциты - 3,0×10⁹/л). Переносят лимфоциты в бакпечатку, гранулоциты на покровное стекло и инкубируют 1 час при температуре 37°С в термостате. После инкубирования убирают надосадочную жидкость с гранулоцитов и добавляют к гранулоцитам лимфоциты. Инкубируют при температуре 37°С 1 час в термостате. Затем добавляют 1 каплю глютарового альдегида 3% и выдерживают в течение 5 минут при комнатной температуре. Убирают надосадочную жидкость. Мазки высушивают. Окрашивают по Маю-Грюнвальду. Высушивают при комнатной температуре. С помощью светового микроскопа определяют количество свободнолежащих лимфоцитов и розеткообразующих. Для повышения точности результатов подсчет ведут на 300 клеток в 3-х полях зрения с дальнейшим построением цитолейкограммы.

Анализ цитолейкограммы проводят следующим образом. Оценивают в процентном содержании количество свободнолежащих лимфоцитов и розеткообразующих - лимфоцит +1 гранулоцит (ЛСГ-1), лимфоцит +2 гранулоцита (ЛСГ-2), лимфоцит +3 гранулоцита. Вычисляют индекс розеткообразования (ИРО) - соотношение значений между ЛСГ-1, ЛСГ-2, ЛСГ-3 и свободнолежащими лимфоцитами и при увеличении ИРО ЛСГ-1 более 0,8, уменьшении ИРО ЛСГ-2 менее 0,11 у больных диагностируют обострение хронической обструктивной болезни легких.

Нами изучены особенности цитолейкограммы ЛСГ у больных ХОБЛ (без учета степени тяжести) при стабильном течении (1 группа) и при обострении (2 группа). По возрасту, полу, продолжительности заболевания, индексу курильщика группы были равноценны. Диагноз выставлялся на основании клинико-инструментальных методов обследования, согласно стандартам по диагностике и лечению больных ХОБЛ (2006 г.).

Полученные результаты, характеризующие особенности цитолейкограммы ЛСГ у больных ХОБЛ при стабильном течении и в период обострения представлены в таблице 1.

Как видно из таблицы, у больных ХОБЛ при обострения, в отличие от группы больных со стабильным течением, достоверно (р<0,001) увеличиваются показатели ЛСГ-1, свидетельствующие о воспалительном процессе и достоверно (р<0,001) снижаются показатели ЛСГ-2, указывающие на наличие иммунодефицита, достоверно увеличивается ИРО ЛСГ-1 и уменьшается ИРО ЛСГ-2. Достоверных различий в содержании ЛСГ-3 не выявлено.

Разработанный способ диагностики позволяет получить достоверные данные в течение 4-х часов. Способ не требует особой стерильности, дефицитных реактивов, дорогостоящих приборов и прост в исполнении, экономичен и не имеет противопоказаний.

Таблица 1
Показатели гранулоцитосвязывающих лимфоцитов у больных ХОБЛ при стабильном течении и при обострении
Группа	п	Гранулоцитосвязывающие лимфоциты (М±m)%
		СВЛ	ЛСГ-1	ЛСГ-2	ЛСГ-3
1 группа	23	56,48±0,55	30,46±0,34	9,47±0,40	0,63±0,75
ИРО			0,5	0,16	0,01
2 группа	25	53,25±0,55**	43,0±0,66****	6,12±0,25***	0,60±0,45
ИРО			0,8**	0,11**	0,01
Примечание: *- показатель достоверности между группой ХОБЛ среднетяжелого течения при стабильном течении и группой ХОБЛ при обострении и контрольной группой; р>0,05; **р<0,01, ***р<0,001 СВЛ - свободнолежащие лимфоциты; ЛСГ-1 - лимфоцит +1 гранулоцит), ЛСГ-2 - (лимфоцит +2 гранулоцита), ЛСГ-3 - (лимфоцит +3 гранулоцита); ИРО - индекс розеткообразования, ХОБЛ - хроническая обструктивная болезнь легких

Источники информации

1. Емельянов А.В. Диагностика и лечение обострений хронической обструктивной болезни легких // Русский медицинский журнал. - 2004. - Т. 13, № 4. - С.183-189.

2. Чучалин А.Г. Белая книга. Пульмонология. М., 2003. - С.67.

3. Georgupolos D, Antonisen NR. Symptoms and signs of COPD. In: Chemiak NS, ed. Chronic obstructive pulmonary disease. Philadelphia: Saunders, 1991. - P.357-363.

4. Стандарты по лечению и диагностике хронической обструктивной болезни легких: Пер. с англ. под ред. А.Г.Чучалина М., 2004.

5. Овчаренко С.И., Лещенко И.В. Современные проблемы диагностики хронической обструктивной болезни легких. Русский медицинский журнал. 2003. - № 4. - т.11. - С. 160-164.

6. Респираторная медицина. Руководство под редакцией акад. РАМН А.Г.Чучалина, том 1. М., «ГЗОТАР-Медиа», 2007. - С.616-632.