способ диагностики инфицированности панкреонекроза

Формула изобретения

Способ диагностики инфицированности панкреонекроза, включающий в себя исследование крови больного, отличающийся тем, что определяют уровень апоптоза в популяциях свежевыделенных нейтрофилов больного методом проточной цитометрии с помощью окрашивания клеток пропидиумом иодидом, и при уровне апоптоза нейтрофилов менее 4% прогнозируют высокую вероятность инфицированности панкреонекроза, а при уровне апоптоза 4% и более - отсутствие высокого риска инфицированности.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу диагностики с помощью иммунологических методов наличия бактериальной инфекции в области некротизированных тканей поджелудочной железы и парапанкреатической клетчатки и может быть использовано для выбора тактики лечения, определения показаний к операции.

Известен способ диагностики инфицированное панкреонекроза с помощью тонкоигольной пункции под контролем компьютерной томографии или УЗИ с последующим бактериологическим исследованием (Rau B.et al, 1997). Данный способ хотя и мало, но инвазивен, требует специального оборудования.

Известен также способ определения уровня прокальцитонина в крови у больных с сепсисом. Повышенное содержание прокальцитонина указывает на наличие бактериальной инфекции, в том числе и при панкреонекрозе. По данным Б.Р.Гельфанда и соавт. (2003), чувствительность данного метода составила 85,2%, а специфичность 84%.

Mandi Y. et al.(2000) приводят данные о 90% чувствительности и 100% специфичности определения прокальцитонина для дифференциальной диагностики между стерильным и инфицированным панкреонекрозом. В то же время Muller С.А. et al. (2000) исследовали уровень прокальцитонина у 64 больных с различными формами панкреатита и установили, что данный показатель может помочь для раннего отличия умеренного течения острого панкреатита от тяжелого, однако не подходит для раннего определения инфицированности панкреонекроза.

В настоящее время подход к лечению больных с панкреонекрозом определяется в зависимости от наличия или отсутствия инфицирования некрозов поджелудочной железы и окружающей жировой клетчатки. Наличие бактериальной инфекции является абсолютным показанием к операции, тогда как стерильный панкреонекроз лечится консервативно, а показания к операции при стерильном некрозе минимальны. При этом важно диагностировать наличие инфекции как можно раньше, до развития у больного полиорганной недостаточности. Клиническая картина стерильного и инфицированного панкреонекроза во многом похожа, данные КТ и других методов помогают только косвенно предполагать наличие инфекции.

Задачей изобретения является своевременная точная диагностика наличия инфицирования панкреонекроза.

Задача решается тем, что в крови больных с панкреонекрозом определяли уровень апоптоза в популяциях свежевыделенных нейтрофилов методом проточной цитометрии с помощью окрашивания клеток пропидиумом иодидом. Сравнение больных с инфицированным и стерильным панкреонекрозом показало, что низкий уровень апоптоза нейтрофилов является характерным признаком у больных с гнойными осложнениями независимо от исхода заболевания. Данный феномен обусловлен повышенной активностью провоспалительных цитокинов. Так, если у пациентов с гнойными осложнениями уровень апоптоза нейтрофилов составил в среднем менее 4%, то в группе больных со стерильным панкреонекрозом - 4% и более (Р<0,001).

Способ осуществляется следующим образом.

Лейковзвесь больного однократно отмывается забуференным фосфатами 0,15 М раствором хлорида натрия рН 7,2-7,4 (РВС). Осадок клеток ресуспендируется (5×10 ⁵ - 1×10⁶клеток на пробу) в 100 мкл РВС и в цитометрические пробирки добавляется 0,5 мл параформальдегида, пробы ставятся в холодильник на 12 часов. Через 12 часов пробы отмываются в 3 мл РВС, к осадку добавляется 0,5 мл РВС с 20 мкл РНК-азы (25 мг/мл) и 20 мкл йодистого пропидия (50 мкг/мл), после чего пробы инкубируются 30 минут в темноте при комнатной температуре. Затем проводится анализ на проточном цитофлуориметре. В качестве негативного контроля используют неокрашенные фиксированные клетки. Апоптирующие клетки формируют гипохромный пик, расположенный левее диплоидного пика. Величина гиподиплоидного пика пропорциональна относительному количеству клеток, находящихся в стадии позднего апоптоза. Чувствительность предлагаемого способа 80,0%. Специфичность 92,31%.

Клинические примеры:

Пример 1. Мужчина, 33 лет, поступил в Городскую клиническую больницу № 34 г.Новосибирска 2.06.03 с диагнозом панкреонекроз. С 3.06.03 по 7.06.03 находился в отделении интенсивной терапии, состояние улучшилось, стабилизировалась гемодинамика, однако сохранялась гипертермия до 38,4°, лейкоцитоз. Заподозрено инфицирование панкреонекроза, однако при контрольном УЗИ кроме подозрения на инфильтрат в области хвоста поджелудочной железы других изменений не обнаружено. Кроме того у больного имелись сопутствующие заболевания - гормонзависимая бронхиальная астма и ожирение 4 степени. 18.06.03 сделана иммунограмма по данным которой апоптоз нейтрофилов равнялся 2, что характерно для инфицированного панкреонекроза. 20.06.03 - лапаротомия, при которой обнаружена флегмона забрюшинного пространства и корня брыжейки. Таким образом, определение уровня апоптоза помогло поставить показания к операции.

Пример 2. Женщина, 54 лет, поступила в городскую клиническую больницу № 34 3.11.03 г.Новосибирска с диагнозом: панкреонекроз, ферментативный перитонит. С 4.11.03 по 7.11.03 проводилось лечение в отделении интенсивной терапии. Состояние улучшилось, однако в эпигастральной области пальпировался инфильтрат и сохранялась гипертермия до 38.0°, лейкоцитоз. 24.11.03 при УЗИ в проекции поджелудочной железы обнаружено неоднородное гиперэхогенное образование с анэхогенными включениями 105×71 мм с четкими неровными контурами - подозрение на парапанкреатический абсцесс.25.11.03 сделана иммунограмма, апоптоз нейтрофилов - 9, что характерно для стерильного панкреонекроза. От операции решено воздержаться, смена антибиотиков. Состояние постепенно улучшилось, нормализовались показатели крови и температура тела. 9.12.03 больная выписана в удовлетворительном состоянии.

Таким образом, использование предложенного способа позволяет определить наличие инфицированности панкреонекроза на ранней стадии, что является принципиальным для своевременного и правильного выбора метода лечения.

Литература

1. Гельфанд Б.Р., Бражник Т.Б., Сергеева НА., Бурневич С.З. Новое в диагностике инфекционных осложнений и сепсиса в хирургии // Инфекции в хирургии 2003. - том 1. - № 1. - стр.8-13.

2. Mandi Y., Farcas G., Takacs T. et al. Diagnostic relevance of procalcitonin, IL-6, and sICAM-1 in the prediction of infected necrosis in acute pancreatitis // Int. J. Pancreatol., - 2000. - vol.28. - #1. - p.41-49.

3. Muller C.A., Uhl W., Printzen G., Gloor В., Bischofberger H., Tchjiakov O. Role of procalcitonin and granulocyte colony stimulating factor in the early prediction of infected necrosis in severe acute pancreatitis // Gut-2000. - vol.46. - #2. - p.233-238.

4. Rau В., Uh1 W., Buchler M.W., Beger H.G. Surgical treatment of infected necrosis // World J.Surg. - 1997. - vol.21. -. № 2. - p.l55-161.