способ фармакологической коррекции ишемии конечности, в том числе при l-name индуцированном дефиците оксида азота
Классы МПК: | G09B23/28 в медицине A61K38/18 стимуляторы роста; регуляторы роста A61P9/10 для лечения ишемических или атеросклеротических заболеваний, например антиангинозные средства, коронарные вазодилататоры, средства для лечения инфаркта миокарда, ретинопатии, цереброваскулярной недостаточности почечного артериосклероза |
Автор(ы): | Покровский Михаил Владимирович (RU), Лазаренко Виктор Анатольевич (RU), Колесник Инга Михайловна (RU), Покровская Татьяна Григорьевна (RU), Даниленко Людмила Михайловна (RU), Королев Антон Евгеньевич (RU), Корокин Михаил Викторович (RU), Рагулина Вера Алексеевна (RU), Гудырев Олег Сергеевич (RU), Бежин Александр Иванович (RU), Лопатин Дмитрий Владимирович (RU), Егорова Екатерина Олеговна (RU), Новиков Олег Олегович (RU), Арустамова Анна Александровна (RU), Нарыков Роман Александрович (RU), Денисюк Татьяна Алексеевна (RU), Титарева Людмила Викторовна (RU), Сытник Михаил Владимирович (RU), Гуреев Владимир Владимирович (RU), Лосенок Полина Игоревна (RU), Сароян Карен Ванушевич (RU), Корокина Лилия Викторовна (RU), Локтионова Инна Леонидовна (RU), Мальцева Наталья Викторовна (RU), Орлова Анжелика Юрьевна (RU) |
Патентообладатель(и): | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (RU) |
Приоритеты: |
подача заявки:
2010-03-29 публикация патента:
10.08.2011 |
Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для коррекции ишемии конечности. Для этого моделируют ишемию конечности удалением участка магистрального сосуда, в том числе при одновременном дополнительном моделировании дефицита оксида азота (NO) внутрибрюшинным введением в течение 7 суток блокатора синтеза NO N-нитро-L-аргинин метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг ежедневно. Для коррекции ишемии и в том, и другом случае подкожно вводят рекомбинантный эритропоэтин в дозе 50 МЕ/кг на первые, третьи и пятые сутки эксперимента. Способ обеспечивает эффективное лечение ишемии в эксперименте за счет улучшения микроциркуляции конечности, в том числе в случае дефицита оксида азота. 1 табл.
Формула изобретения
Способ фармакологической коррекции ишемии конечности, в том числе при L-NAME индуцированном дефиците оксида азота, отличающийся тем, что коррекция ишемии конечности, в том числе при моделировании дефицита оксида азота (NO) внутрибрюшинным введением лабораторному животному в течение 7 суток блокатора синтеза NO N-нитро-Е-аргинин метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг ежедневно, осуществляют путем подкожного введения рекомбинантного эритропоэтина в дозе 50 МЕ/кг на первые, третьи и пятые сутки эксперимента.
Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции ишемии.
Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции ишемии конечности с помощью ежедневного однократного введения L-аргинина в дозе от 30 до 200 мг/кг, предложенный М.В.Покровским и соавт. Патент на изобретение RU 2302239 C1.
Однако в данном решении не проводится оценка влияния рекомбинантного эритропоэтина на ишемию конечности, в том числе при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота.
Задачей изобретения является разработка способа коррекции ишемии конечности, в том числе при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота, включающего применение рекомбинантного эритропоэтина.
Поставленная задача достигается тем, что коррекция ишемии конечности, в том числе при моделировании дефицита оксида азота (NO) внутрибрюшинным введением лабораторному животному в течение 7 суток блокатора синтеза NO N-нитро-L-аргинин метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг ежедневно, проводится путем подкожного введения рекомбинантного эритропоэтина в дозе 50 МЕ/кг на первые, третьи и пятые сутки эксперимента.
СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ
Опыты проводят на белых крысах-самках линии Wistar массой 200-220 г. Моделирование дефицита оксида азота осуществляется внутрибрюшинным введением лабораторному животному в течение 7 суток блокатора синтеза NO N-нитро-L-аргинин метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг ежедневно.
Моделирование ишемии конечности проводится на вторые сутки эксперимента под наркозом (хлоралгидрат 50 мг/кг веса внутрибрюшинно) путем удаления участка магистрального сосуда, включающего бедренную артерию, подколенную артерию и начальные отделы артерии голени.
Оценка микроциркуляции в мышцах голени животного проводится при помощи лазер-Доплер флоуметра Biopac-systems MP-100 и датчика TSD-144 (США). Для этого под наркозом (хлоралгидрат 50 мг/кг веса внутрибрюшинно) иссекают участок кожи в переднебоковом участке области голени. Запись уровня микроциркуляции осуществляют в пяти точках (середина длины мышцы, точки на 3-5 мм выше и ниже, латеральнее и медиальнее первой).
Регистрация уровня микроциркуляции проводится в группах с моделированием ишемии конечности, с моделированием ишемии конечности при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота и в группах животных, которым проводилась коррекция ишемии конечности и ишемии конечности при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота рекомбинантным эритропоэтином.
Рекомбинантный эритропоэтин («Эпокрин» эпоэтин альфа; ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых препаратов» Федерального медико-биологического агентства г.Санкт-Петербург, РОССИЯ) вводится подкожно в дозе 50 МЕ/кг на первые, третьи и пятые сутки эксперимента в утренние часы.
При статистической обработке данных рассчитывается среднее значение, величина стандартного отклонения. Различия считаются достоверными при p<0,05.
ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ
Уровень микроциркуляции в правой и левой мышцах голени интактных животных не отличался друг от друга и составлял 533,2±9,7 п.е. (перфузионных единиц). Экспериментальные животные были разделены на следующие группы:
1. моделирование ишемии конечности (n=20);
2. моделирование ишемии конечности + рекомбинантный эритропоэтин (n=20);
3. моделирование ишемии конечности при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота (n=20);
4. моделирование ишемии конечности при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота + рекомбинантный эритропоэтин (n=20).
Всем животным осуществляли моделирование ишемии конечности на вторые сутки эксперимента под наркозом (хлоралгидрат 50 мг/кг веса внутрибрюшинно) путем удаления участка магистрального сосуда, включающего бедренную артерию, подколенную артерию и начальные отделы артерий голени. Моделирование дефицита оксида азота (NO) осуществляли животным 3-й и 4-й групп внутрибрюшинным введением в течение первых 7 суток блокатора синтеза NO N-нитро-L-аргинин метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг ежедневно. Коррекцию ишемии конечности производили у животных 2-й и 4-й групп подкожным введением рекомбинантного эритропоэтина в дозе 50 МЕ/кг на первые, третьи и пятые сутки эксперимента.
Оценку микроциркуляции в мышцах голени животного проводили при помощи лазер-Доплер флоуметра Biopac-systems MP-100 и датчика TSD-144 (США) на 21 и 28 сутки. Для этого под наркозом (хлоралгидрат 50 мг/кг веса внутрибрюшинно) иссекали участок кожи в переднебоковой области голени. Запись уровня микроциркуляции осуществляют в пяти точках (середина длины мышцы, точки на 3-5 мм выше и ниже, латеральнее и медиальнее первой). Запись кривой уровня микроциркуляции проводили в течение 30 секунд в каждой точке. Из полученных пяти значений выводили среднее, которое вносили в протокол и принимали за уровень микроциркуляции в мышцах голени у данного животного. Из 10 полученных значений выводили среднее, которое принимали за уровень микроциркуляции в данной группе животных на данном сроке исследования.
Результаты оценки уровня микроциркуляции у животных с моделированием ишемии задней конечности, с моделированием ишемии задней конечности при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота и групп, получавших лечение, представлены в таблице (табл.1).
Таблица 1 | ||
Результаты оценки уровня микроциркуляции в мышцах голени (М±m) | ||
21 сутки(n=10) | 28 сутки(n=10) | |
Ишемия конечности | 322,43±13,9 | 361,454±11,955 |
Ишемия конечности+эритропоэтин | 435,33±27,3* | 768,83±14,575* |
Ишемия конечности+L-NAME | 350,757±35,111 | 427,253±12,902 |
Ишемия конечности+L-NAME+эритропоэтин | 359,93±18,078 | 682,2393±42,794** |
* - p<0,05 в сравнении с группой животных с ишемией конечности; | ||
** - p<0,05 в сравнении с группой животных с ишемией конечности, получавших L-NAME. |
Из таблицы видно, что уровень микроциркуляции после операции моделирования ишемии задней конечности на 21 сутки 322,43±13,9 п.е., на 28 сутки 361,454±11,955 п.е., что достоверно ниже значения в группе интактных животных (p<0,001).
На фоне лечения рекомбинантным эритропоэтином на 21 сутки уровень микроциркуляции достоверно возрастает до 435,33±27,3 п.е. (p<0,05), а на 28 до 768,83±14,575 п.е. (p<0,0000000087).
При моделировании ишемии конечности на фоне L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота уровень микроциркуляции на 21 сутки в пролеченной группе достоверно не отличается от группы животных, не получавших лечение (359,93±18,078 п.е. против 350,757±35,111 п.е.). Статистически значимая разница отмечена в данных группах на 28 сутки 682,2393±42,794 п.е. против 427,253±12,902 (p<0,0002).
Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать фармакологическую коррекцию ишемии конечности, в том числе ишемии конечности при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота рекомбинантным эритропоэтином.
Класс A61K38/18 стимуляторы роста; регуляторы роста
Класс A61P9/10 для лечения ишемических или атеросклеротических заболеваний, например антиангинозные средства, коронарные вазодилататоры, средства для лечения инфаркта миокарда, ретинопатии, цереброваскулярной недостаточности почечного артериосклероза