ПАТЕНТНЫЙ ПОИСК В РФ
НОВЫЕ ПАТЕНТЫ, ЗАЯВКИ НА ПАТЕНТ
БИБЛИОТЕКА ПАТЕНТОВ НА ИЗОБРЕТЕНИЯ

способ определения суммарной антиокислительной активности растительного масла

Классы МПК:G01N33/03 пищевых масел или жиров
Автор(ы):,
Патентообладатель(и):Учреждение Российской академии наук Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина Российской академии наук (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2010-05-12
публикация патента:

Изобретение относится к медицинской и пищевой технологии. Способ включает стадию получения хромогенного радикала путем окисления 2,2'-азинобис-(3-этилбензотиазолин-6-сульфоновой кислоты) лакказой, восстановление радикала антиоксидантами растительного масла или стандартным антиоксидантом в н-бутанол-пропанольном растворе, измерение оптической плотности растворов при 405 или 750 нм на планшетном фотометре и расчет суммарной антиокислительной активности растительного масла по предложенной формуле. Достигается упрощение и повышение надежности определения. 1 табл.

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к способам оценки суммарной антиокислительной активности (АОА) антиоксидантов в составе растительных масел и может найти применение в медицинской и пищевой технологии.

Уровень техники

Процесс старения, возникновение и развитие широкого круга заболеваний (атеросклероза, гипертонии, ишемии, рака, катаракты и др.) сопровождаются активацией свободнорадикальных реакций перекисного окисления фосфолипидов клеточных мембран, приводящих к их деградации. Этому процессу противодействуют жирорастворимые антиоксиданты. Для поддержания необходимой концентрации в организме жирорастворимых антиоксидантов применяют содержащие их лекарственные препараты, биологически активные вещества, в том числе в виде пищевых продуктов или БАДов. Растительные масла являются природным источником жирорастворимых антиоксидантов (токоферолов, каротиноидов, ликопинов, полифенолов, флавоноидов и др.), поэтому их с успехом используют при антиоксидантной терапии. В состав растительных масел входят жирные кислоты, представляющие большую пищевую ценность. Жирные кислоты, особенно полиненасыщенные, склонны к окислению, а продукты окисления (перекиси, альдегиды) являются токсичными примесями, что делает пищевые продукты непригодными к употреблению. Природные антиоксиданты, входящие в состав растительных масел, предохраняют их от окисления. В связи с этим разработка простого и надежного способа определения концентрации антиоксидантов в растительном масле в виде экспресс-метода является актуальной.

Известен способ определения суммарной АОА биологически активных веществ (патент RU 2238554, 20.10.2004). Способ основан на электрохимическом окислении анализируемого и стандартного веществ в ячейке амперометрического детектора, усилении электрических сигналов, их регистрацию и расчет АОА по предложенной математической зависимости. Недостатками известного способа являются использование только водных растворов анализируемого и стандартного веществ, то есть он неприемлем в случае жирорастворимых антиоксидантов.

Известен способ определения суммарной АОА биологически активных веществ, основанный на взаимодействии анализируемой пробы с перманганатом калия до обесцвечивания последнего (патент RU 2170930, 20.07.2001). Недостатком этого способа является необходимость осуществления трудоемкой стадии пробоподготовки (предварительное извлечений антиоксидантов этиловым спиртом из растительного сырья). Кроме того, в данном способе применяют метод титрования раствора перманганата калия анализируемой пробой - метод трудоемкий и не приемлемый при анализе большого числа проб.

Наиболее близким к предлагаемому способу оценки АОА является способ определения АОА липофильных антиоксидантов, основанный на реакции восстановления антиоксидантом хромогенного радикала АБТС+. (Re R; Pellegrini N; Proteggente A; Pannala A; Yang M; Rice-Evans C. Antioxidant activity applying an improved ABTS radical cation decolorization assay // Free Radio Biol Med 1999, Vol.26, P.1231-1237). Прототип имеет следующие недостатки. Во-первых, хромогенный радикал, полученный в условиях окисления АБТС (2,2'-азинобис-(3-этилбензотиазолин-6-сульфоновая кислота)) персульфатом калия, оказался нестабильным (наблюдается уменьшение оптической плотности его растворов при хранении более 3-4 часов). Во-вторых, измерения проводят после растворения липофильных антиоксидантов в этаноле, однако растительное масло в этаноле не растворяется, то есть требуется проведение стадии пробоподготовки - получение этанольных извлечений жирорастворимых антиоксидантов из растительного масла.

Сущность изобретения

Технической задачей предлагаемого изобретения является: 1) использование для определения суммарной АОА растительного масла хромогенного радикала АБТС+., образованного при ферментативном окислении АБТС; 2) подбор реакционной среды для растворения растительного масла и последующего проведения в ней реакции восстановления хромогенного радикала антиоксидантами растительного масла; 3) использование для оптических измерений серийного спектрофотометрического оборудования - планшетного фотометра (типа «Униплан», Россия).

Поставленная техническая задача решается описываемым способом определения суммарной АОА растительного масла, который включает окисление АБТС лакказой (п-дифенол:кислород оксидоредуктаза, КФ 1.10.3.2, фермент, относящийся к группе медьсодержащих оксидаз, окисляющих различные органические и неорганические субстраты с одновременным восстановлением молекулярного кислорода), в результате чего образуется хромогенный радикал АБТС+., который в условиях реакционной смеси может храниться не менее 15 дней при комнатной температуре. Реакцию восстановления радикала антиоксидантами растительного масла проводят в н-бутанол-изопропанольном растворе при комнатной температуре в пластиковых 96-луночных планшетах. Показателем суммарной АОА служит величина уменьшения оптической плотности раствора, измеряемой на планшетном фотометре.

Сущность предлагаемого способа определения суммарной АОА заключается в следующем:

1) к раствору растительного масла в н-бутаноле (проба) или к н-бутанолу без масла (контроль), помещенных в лунки 96-луночного планшета, добавляют изопропанол до 70% (v/v), перемешивают и затем вносят раствор хромогенного радикала АБТС +., перемешивают, выдерживают 1-3 мин при комнатной температуре; 2) проводят измерение оптической плотности растворов при 450 или 750 нм на планшетном фотометре. Уменьшение значения оптической плотности пробы по отношению к контролю прямо пропорционально суммарной АОА растительного масла. Расчет концентрации антиоксидантов проводят по формуле в пересчете к стандартному антиоксиданту.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения

Пример 1. Получение хромогенного радикала АБТС+..

232 мг натрия уксуснокислого 2-водного растворяют в 1 мл дистиллированной воды, смешивают с 1 мл 10% уксусной кислоты, получают буферный раствор (pH=4,7). 219 мг АБТС растворяют в 4 мл дистиллированной воды, получают 0,1 М раствор АБТС. Реакцию окисления АБТС проводят следующим образом: смешивают 0,2 мл буферного раствора, 0,4 мл раствора АБТС и 9,4 мл дистиллированной воды, добавляют 10 мкл фермента (100 ед./мл грибной LacCl/C2 Cerrena unicolor или бактериальной CotA Bacillus pumilus лакказы; за единицу активности принимают минимальное количество фермента, которое в течение 1 мин окисляет 1 мкмоль АБТС при комнатной температуре), инкубируют 30 мин при 50°C. АБТС окисляется в хромогенный радикал АБТС+. практически полностью.

Пример 2. Определение суммарной АОА растительного масла.

5 мг ретинола ацетата (полного трансретинола ацетата, витамина А ацетата) растворяют в 1 мл н-бутанола. 5-10 мкл полученного раствора смешивают с 50-55 мкл н-бутанола (конечный объем 60 мкл) и 140 мкл изопропанола в лунке 96-луночного планшета, перемешивают, добавляют 8 мкл раствора хромогенного радикала, перемешивают и инкубируют 1-3 мин при комнатной температуре. Далее проводят измерение оптической плотности раствора при 405 или 750 нм на планшетном фотометре (показание стандартного антиоксиданта). 0,1 г растительного масла растворяют в 1 мл н-бутанола. Затем разные аликвоты этого раствора смешивают в лунках 96-луночного планшета с н-бутанолом таким образом, чтобы конечный объем раствора в лунке был равен 60 мкл. Добавляют в каждую лунку по 140 мкл изопропанола, перемешивают, добавляют 8 мкл раствора хромогенного радикала, перемешивают и спустя 1-3 мин проводят измерение оптической плотности при 405 или 750 нм на планшетном фотометре (показание анализируемой пробы). При расчете количественной оценки суммарной АОА используют показания для лунки с таким разведением растительного масла, при котором оно составляет от 20 до 80% от показаний оптической плотности в контроле. За контроль принимают показания для лунки, раствор бутанола которой не содержит растительное масло (показание контроля). Количественно суммарную АОА в пересчете на стандартный антиоксидант (ретинола ацетат) рассчитывают согласно формуле

способ определения суммарной антиокислительной активности растительного   масла, патент № 2421719

где Aк, Ас, A п - оптическая плотность контроля, стандартного антиоксиданта и анализируемой пробы соответственно;

сс , сп, vc, vп - концентрации и объемы аликвот исходных растворов стандартного антиоксиданта и анализируемой пробы соответственно.

Пояснение к таблице

В таблице приводятся значения суммарной АОА в растительных маслах в пересчете на стандартный антиоксидант - ретинола ацетат (мг%).

Таблица
Метрологическая характеристика способа оценки суммарной антиокислительной активности растительного масла
ПробаЧисло измерений Среднеарифметическое значение (мг%)Стандартное отклонениеКоэффициент вариации
Подсолнечное масло, рафинированное* 540,3 1,22,9
Подсолнечное масло, нерафинированное* 5 51,41,3 2,5
Льняное масло*5 78,22,2 2,8
Масло шиповника **5 92,5 3,43,7
Облепиховое масло** 5 289,84,5 1,5
* - измерения проводились при 405 нм
** - при 750 нм

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ определения суммарной антиокислительной активности (АОА) растительного масла, включающий получение хромогенного радикала, его восстановление антиоксидантами растительного масла и расчет показателя суммарной антиокислительной активности, отличающийся тем, что хромогенный радикал, полученный в реакции окисления 2,2'-азинобис-(3-этилбензотиазолин-6-сульфоновой кислоты) лакказой, восстанавливают антиоксидантами растительного масла в н-бутанол-изопропанольном растворе, за ходом реакции следят по уменьшению оптической плотности раствора, измеренной на планшетном фотометре при длине волны 405 или 750 нм и расчет показателя суммарной АОА осуществляют согласно формуле:

способ определения суммарной антиокислительной активности растительного   масла, патент № 2421719

где Ак, Ac, Aп - оптическая плотность контроля, стандартного антиоксиданта и анализируемой пробы соответственно;

сс, сп, vc, vп - концентрации и объемы аликвот исходных растворов стандартного антиоксиданта и анализируемой пробы.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2421719

patent-2421719.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс G01N33/03 пищевых масел или жиров

Патенты РФ в классе G01N33/03:
способ прогнозирования медико-социальной эффективности комплексного лечения больных артериальной гипертонией -  патент 2522389 (10.07.2014)
способ и устройство для количественного определения содержания восков и воскоподобных веществ в рафинированных растительных маслах -  патент 2522239 (10.07.2014)
способ идентификации оливкового масла -  патент 2445619 (20.03.2012)
способ определения содержания олеиновой кислоты в оливковом масле -  патент 2442977 (20.02.2012)
способ определения безопасности растительных масел -  патент 2415417 (27.03.2011)
способ идентификации семян подсолнечника олеинового типа -  патент 2413217 (27.02.2011)
способ идентификации семян подсолнечника линолевого типа -  патент 2413216 (27.02.2011)
способ выделения изопреноидов из жиросодержащего эмульсионного продукта питания -  патент 2377559 (27.12.2009)
способ оценки чистоты растительных масел и устройство для его осуществления -  патент 2366943 (10.09.2009)
способ определения содержания олеиновой кислоты в масле семян подсолнечника -  патент 2366935 (10.09.2009)


Наверх