липазные порошковые составы

Классы МПК:C12N9/20 расщепление триглицерида, например с помощью липазы
C12P7/64 жиры; жирные масла; воски эфирного типа; высшие жирные кислоты, те содержащие не менее семи атомов углерода в непрерывной цепи, связанной с карбоксильной группой; окисленные масла или жиры
C12R1/645 грибы
Автор(ы):, , ,
Патентообладатель(и):ДЗЕ НИССИН ОЙЛЛИО ГРУП, ЛТД. (JP),
НОВОЗИМС А/С (DK)
Приоритеты:
подача заявки:
2006-06-07
публикация патента:

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен порошковый состав, обладающий липазной активностью. Состав содержит фильтрующий вспомогательный материал(ы) и продукт, полученный тонким измельчением липазы, происходящей из Thermomyces sp., иммобилизированной на кремниевом носителе(ях), до среднего диаметра частиц 1 мкм или более до менее чем 300 мкм. Предложены также способы для переэтерификации жиров и масел и для этерификации с использованием полученного липазного порошкового состава. Порошковый состав по данному изобретению обладает улучшенной липазной активностью. 3 н. и 7 з.п. ф-лы, 1 ил., 2 табл. липазные порошковые составы, патент № 2412245

липазные порошковые составы, патент № 2412245

Формула изобретения

1. Порошковый состав, обладающий липазной активностью и включающий вспомогательный фильтрующий материал(ы) и продукт, полученный тонким измельчением липазы, происходящей из Thermomyces sp., иммобилизованной на кремниевом носителе(ях), до среднего диаметра частиц 1 мкм или более до менее чем 300 мкм.

2. Состав по п.1, в котором средний диаметр частицы тонко измельченного продукта составляет от 1 до 200 мкм.

3. Состав по п.2, в котором средний диаметр частицы тонко измельченного продукта составляет от 1 до 100 мкм.

4. Состав по п.1, в котором массовое соотношение тонко измельченного продукта к вспомогательному фильтрующему материалу(ам) составляет от 1/10 до 10/1.

5. Состав по п.1, в котором вспомогательный фильтрующий материал представляет собой целлюлозу.

6. Состав по п.1, в котором вспомогательный фильтрующий материал является порошкообразным.

7. Состав по п.6, в котором средний диаметр частицы вспомогательного фильтрующего материала составляет от 10 до 90 мкм.

8. Состав по п.1, который используется для переэтерификации или этерификации.

9. Способ переэтерификации жиров и масел, включающий проведение реакции переэтерификации жиров и масел в присутствии липазного порошкового состава по любому из пп.1-8 и последующее собирание липазного порошкового состава и возвращение его в повторный цикл.

10. Способ этерификации, включающий проведение этерификации в присутствии вспомогательного фильтрующего материала(ов) и продукта, полученного тонким измельчением липазы, происходящей из Thermomyces sp., иммобилизованной на кремниевом носителе(ях), до среднего диаметра частиц 1 мкм или более до менее чем 300 мкм; и последующее собирание измельченного продукта и вспомогательного фильтрующего материала(ов) и возвращение их в повторный цикл.

Описание изобретения к патенту

Область техники изобретения

Данное изобретение относится к липазным порошковым составам, которые могут быть соответствующим образом использованы в различных реакциях этерификации и реакциях переэтерификации, и способам переэтерификации жиров и масел, где используются липазные порошковые составы.

Уровень техники изобретения

Липазы широко используются в реакциях этерификации различных карбоновых кислот, таких как жирная кислота со спиртами, такими как моноспирт или полиспирт, или реакциях переэтерификации между несколькими сложными эфирами. Среди них реакции переэтерификации являются важной технологией, включающей модификацию жиров и масел животного и растительного происхождения, и способом получения сложных эфиров разнообразных жирных кислот, сахарных сложных эфиров и стероидов. Когда липазы, то есть жирные и масляные гидролазы, используются как катализатор в подобных реакциях, реакции переэтерификации могут быть проведены при температурных условиях от комнатной температуры до около 70°С. Следовательно, использование липаз может не только ингибировать побочные реакции и сократить энергетические затраты по сравнению с предыдущими химическими реакциями, но и обеспечивать более высокую безопасность, потому что липазы как катализатор являются натуральными продуктами. Более того, целевые соединения могут быть эффективно получены благодаря их субстратной специфичности или позиционной специфичности. Однако липазная активность развита не в достаточной мере, когда липазный порошок напрямую используется в реакциях переэтерификации. Кроме того, трудно равномерно диспергировать по существу водорастворимые липазы в исходных материалах на масляной основе и затем собрать их. Следовательно, условно, общим является то, что липазы иммобилизуются некоторыми носителями, такими как анионообменные смолы (Патентная Литература 1), фенол-адсорбированные смолы (Патентная Литература 2), гидрофобные носители (Патентная Литература 3), катионообменные смолы (Патентная Литература 4) и хелатные смолы (Патентная Литература 5), и затем используются в этерификациях и реакциях переэтерификации.

Однако, так как липазная активность понижается при иммобилизации липазы носителями, были разработаны различные технологии, использующие липазный порошок.

Более конкретно, был предложен способ, включающий этапы диспергирования липазного порошка в исходном материале, содержащем сложные эфиры, в присутствии или отсутствие неактивного органического растворителя(й); и затем проведения реакции переэтерификации так, чтобы 90% или более частиц диспергированного липазного порошка сохраняли диаметр частицы от 1 до 100 мкм в реакции переэтерификации (Патентная Литература 6). В дальнейшем был предложен способ использования ферментативных порошков, полученных высушиванием ферментативных растворов, содержащих фосфолипид(ы) и липофильный витамин(ы) (Патентная Литература 7).

[Патентная Литература 1] Japanese Patent Unexamined Publication № Sho 60-98984

[Патентная Литература 2] Japanese Patent Unexamined Publication № Sho 61-202688

[Патентная Литература 3] Japanese Patent Unexamined Publication № Hei 2-138986

[Патентная Литература 4] Japanese Patent Unexamined Publication № Hei 3-61485

[Патентная Литература 5] Japanese Patent Unexamined Publication № Hei 1-262795

[Патентная Литература 6] Japanese Patent № 2668187

[Патентная Литература 7] Japanese Patent Unexamined Publication № 2000-106873

Описание сущности изобретения

Задача, на решение которой направлено данное изобретение, состоит в разработке липазных порошковых составов с улучшенной липазной активностью, удобных в применении.

Более того, данное изобретение относится к способам переэтерификации жиров и масел, где используются липазные порошковые составы.

Еще одним объектом данного изобретения являются способы этерификации, где используются липазные порошковые составы.

Данное изобретение полностью основано на том, что вышеупомянутые проблемы могут быть решены комбинированием мелко измельченных продуктов специфических иммобилизованных липаз с вспомогательными фильтрующими материалами.

То есть данное изобретение предоставляет липазный порошковый состав, содержащий вспомогательный фильтрующий материал(ы) и продукт, полученный измельчением липазы, происходящей из Thermomyces sp., иммобилизованной на кремниевом носителе(ях), до среднего диаметра частицы от 1 мкм или более до менее чем 300 мкм.

Данное изобретение также предоставляет способ для переэтерификации жиров и масел, который включает проведение реакции переэтерификации жиров и масел в присутствии вспомогательного фильтрующего материала(ов) и продукта, полученного измельчением липазы, происходящей из Thermomyces sp., иммобилизованной на кремниевом носителе(ях), до среднего диаметра частиц от 1 мкм или более до менее чем 300 мкм, с последующим собиранием вспомогательного фильтрующего материала(ов) и измельченного продукта и возвратом их в повторный цикл.

Данное изобретение дополнительно предоставляет способ этерификации, который включает проведение реакции этерификации в присутствии фильтрующего вспомогательного материала(ов) и продукта, полученного измельчением липазы, происходящей из Thermomyces sp., иммобилизованной на кремниевом носителе(ях), до среднего диаметра частиц от 1 мкм или более до менее чем 300 мкм, с последующим собиранием вспомогательного фильтрующего материала(ов) и измельченного продукта и возвратом их в повторный цикл.

Краткое описание чертежей

Чертеж показывает изменения скоростей переэтерификации при использовании липазного порошкового состава данного изобретения (Пример 4) и иммобилизованной липазы перед измельчением (Lipozyme TL-IM).

Наилучший способ осуществления изобретения

В данном изобретении используются липазы, происходящие из Thermomyces sp., и продукт, полученный измельчением липаз, иммобилизованных на кремниевом носителе(ях), до среднего диаметра частиц 1 мкм или более до менее чем 300 мкм. Предпочтительно, чтобы средний диаметр частиц липаз, иммобилизованных на кремниевом носителе(ях), являлся от 300 до 1000 мкм. Эти иммобилизованные липазы могут быть получены, например, как Lipozyme TL-IM от Novozymes A/S.

Предпочтительно измельчать подобные иммобилизованные липазы обычными дробилками до среднего диаметра частиц от 1 мкм или более до менее чем 300 мкм, более предпочтительно от 1 до 200 мкм, более предпочтительно от 1 до 100 мкм и наиболее предпочтительно от 20 до 100 мкм. Дробилки включают ступки, растирающие дробилки, резательные дробилки, жерновые мельницы (миколлоидеры (mycolloiders), массколоидеры (masscolloiders)), кофемолки, электрические мельницы, игольчатые мельницы, ударные дробилки (молотковые мельницы, шаровые мельницы), роликовые мельницы, обдувные мельницы, гомогенизаторы и ультразвуковые дробилки.

Между тем, вспомогательные фильтрующие материалы, используемые в данном изобретении, включают неорганические вспомогательные фильтрующие материалы, такие как целит, и органические вспомогательные фильтрующие материалы, такие как волокна, например целлюлоза и ее измельченные продукты. Органические вспомогательные фильтрующие материалы и особенно органические полимерные вспомогательные фильтрующие материалы являются предпочтительными. Целлюлоза, кроме того, более предпочтительна среди них и продается, например, под торговой маркой KC Flock от Nippon Paper Chemicals Co., Ltd. Предпочтительно, чтобы вспомогательные фильтрующие материалы являлись порошкообразными и имели средний диаметр частиц от 10 до 90 мкм.

Массовое отношение липазного измельченного продукта к вспомогательному фильтрующему материалу(ам) предпочтительно от 1/10 до 10/1 и более предпочтительно от 1/7 до 2/1.

Липазные порошковые составы согласно данному изобретению должны содержать липазный измельченный продукт и вспомогательный фильтрующий материал(ы).

Липазные порошковые составы согласно данному изобретению могут быть использованы как таковые в реакциях переэтерификации жиров и масел и реакциях этерификации. Кроме того, они могут также быть очищены посредством контактирования с триглицеридом(ами) длинноцепочечных жирных кислот и триглицеридом(ами) среднецепочечных жирных кислот с последующим их собиранием. Этот метод в то же время может улучшить липазную активность.

Триглицериды длинноцепочечных жирных кислот, используемые в этом способе, представляют собой предпочтительно триглицериды, имеющие от 14 до 24 углеродных атомов в составе жирной кислоты. Чрезвычайно предпочтительными являются растительные масла, выбранные из группы, состоящей из масла канолы, соевого масла, подсолнечного масла, сафлорового масла и кукурузного масла.

Среднецепочечные триглицериды представляют собой предпочтительно триглицериды, имеющие от 6 до 12 углеродных атомов в составе жирной кислоты. Такие триглицериды жирных кислот могут быть получены общеизвестными способами, или могут быть использованы коммерчески доступные продукты. Что касается коммерчески доступных продуктов, то используют, например, продукты с торговой маркой ODO от The Nisshin OilliO Group, Ltd.

Предпочтительно, чтобы триглицерид(ы) длинноцепочечных жирных кислот и триглицерид(ы) среднецепочечных жирных кислот использовались в массовом соотношении от 95:5 до 50:50. Предпочтительно контактирование от 2 до 100 кратной массы триглицеридов с общей массой липазы.

Что касается реакций этерификации, где используются липазные порошковые составы согласно данному изобретению, предпочтительно проведение реакций этерификации способом, включающим этерификацию жиров и масел в присутствии липазных порошковых составов, и собирание и возвращение липазных порошковых составов в повторный цикл.

Более того, предпочтительно проводить этерификацию жиров и масел в присутствии вспомогательного фильтрующего материала(ов) и продукта, полученного измельчением липазы, происходящей из Thermomyces sp., иммобилизованной на кремниевом носителе(ях), до среднего диаметра частиц от 1 мкм или более до менее чем 300 мкм, с последующим собиранием и возвращением в повторный цикл вспомогательного фильтрующего материала(ов) и тонкоизмельченного продукта.

Согласно данному изобретению, поскольку практичность (удобство) использования липазных порошковых составов в реакциях этерификации и реакциях переэтерификации улучена наряду с улучшением липазной активности, эти составы могут быть многократно использованы в этих реакциях за счет их возвращения в повторный цикл. Кроме того, липазные порошковые составы данного изобретения могут быть соответствующим образом использованы в модификации жиров и масел путем их переэтерификации в промышленном масштабе. В дополнение посредством данного изобретения может быть улучшен аромат переэтерифицированного масла.

Далее примеры будут дополнительно иллюстрировать данное изобретение.

Пример 1

5 г Lipozyme TL-IM, изготовленного Novozymes A/S, было измельчено миколлоидером L-типа, изготовленным Tokushu Kika Kogyo Co., Ltd. Когда диаметры частиц измельченной липазы были измерены анализатором распределения размера частиц LA-500, изготовленным HORIBA, Ltd., средний диаметр частиц был 66,4 мкм. 5 г целлюлозного порошка (Nippon Paper Chemicals Co., Ltd.: средний диаметр частиц от 30 мкм) было добавлено в качестве вспомогательного фильтрующего материала к порошку для приготовления липазного порошкового состава. Активность переэтерификации этого липазного состава была определена нижеследующим способом. Результат показан в таблице 1 как ее относительное значение.

Способ измерения липазной активности

Липазный состав был добавлен к маслу, где триолеин и трикаприлин были смешаны в соотношении 1:1 (вес) и прореагировали при 60°С. Отбирали 10 мкл полученного продукта. После разжижения его 1,5 мкл гексана липазный состав был профильтрован и его фильтрат был использован как образец для газовой хроматографии (ГХ). Образец был проанализирован с помощью ГХ (колонна: DB-1ht), и скорость протекания реакции была рассчитана в соответствии с нижеследующей формулой. Условиями ГХ являются: температура колонны: начальная 150°С; температурное повышение: 15°С/минуту; и финальная 370°С.

Скорость протекания реакции(%)={C34область/(C24область+C34область)}×100, где C24 представляет трикаприлин; C34 означает трикаприлин, в котором одна жирная кислота замещена олеиновой кислотой; и область означает размерность области этого. Основываясь каждый раз на скорости протекания реакции, константа скорости протекания реакции К была подсчитана с помощью аналитической компьютерной программы (оригинальная версия 6.1.).

Липазная активность была показана как относительная активность, где значение К Lipozyme TL-IM было признано как 100.

Пример 2

5 г Lipozyme TL-IM, изготовленного Novozymes A/S, было измельчено ступкой. Когда диаметры частиц измельченной липазы были измерены анализатором распределения размера частиц LA-500, изготовленным HORIBA, Ltd., средний диаметр частиц был 52,1 мкм. 2,5 г целлюлозного порошка (Nippon Paper Chemicals Co., Ltd.) было добавлено в качестве вспомогательного фильтрующего материала к порошку для приготовления липазного порошкового состава. Активность переэтерификации этого липазного состава была определена тем же способом, как в примере 1. Результат показан в таблице 1 как ее относительное значение.

Пример 3

50 г масла канолы было добавлено к 5 г Lipozyme TL-IM, изготовленного Novozymes A/S, и измельчено гомогенизатором (Multipro395), изготовленным DREMEL, при 12500 оборотов в минуту в течение 3 минут при охлаждении льдом. Когда диаметры частиц измельченной липазы были измерены анализатором распределения размера частиц LA-500, изготовленным HORIBA, Ltd., средний диаметр частиц был 91,5 мкм. К этому было добавлено 5 г целлюлозного порошка (Nippon Paper Chemicals Co., Ltd.) в качестве вспомогательного фильтрующего материала, и масло канолы было профильтровано при пониженном давлении для получения липазного состава. Активность переэтерификации этого липазного состава была определена тем же способом, как в примере 1. Результат показан в таблице 1 как ее относительное значение.

Таблица 1
липазные порошковые составы, патент № 2412245 Средний диаметр частиц (мкм)Относительная активность переэтерификации к массе липазного препарата
До измельчения (TL-IM)800 100
Пример 166,4 201
Пример 252,1 304
Пример 391,5 202

Пример 4

90 г масла канолы и 10 г ODO (Nisshin OilliO Group, Ltd.) было добавлено к 5 г липазного состава, полученного в примере 1. Смесь перемешивалась при 25°С в течение 5 часов и профильтровывалась, чтобы собрать липазный состав.

Далее, 0,5% липазного состава, предварительно обработанного вышеописанным способом, было добавлено к 50 г ODO (Nisshin OilliO Group, Ltd.) и 850 г масла канолы (Nisshin OilliO Group, Ltd.) и перемешано при 50°С в течение 15 часов для проведения реакции переэтерификации. Скорость переэтерификации была рассчитана во времени, и протекание реакции было подтверждено. Между тем, скорость переэтерификации была определена посредством анализа глицеридного состава газовой хроматографией и вычислением коэффициента переэтерификационного реагента в измеренном образце. Чертеж показывает изменения в скорости переэтерификации данного образца и Lipozyme TL-IM (до измельчения).

После реакции липазный состав был профильтрован и собран. Полученное масло раскислялось, обесцвечивалось и дезодорировалось обычными способами для очищения переэтерифицированного масла. Аромат полученного переэтерифицированного масла был оценен обученными дегустаторами. В результате его оценка была существенно лучше, чем оценка переэтерифицированного масла, полученного переэтерификацией, используя липазный состав, который не был предварительно обработан маслом канолы и ODO.

Более того, когда собранные ферменты были использованы для проведения реакции переэтерификации, они были пригодны для повторного использования 10 раз без проблем.

Пример 5

1 кг Lipozyme TL-IM, изготовленного Novozymes A/S, был измельчен игольчатой мельницей, изготовленной HOSOKAWAMICRON CORPORATION (Тонкая Ударная Мельница 100UPZ) при 17600 оборотах в минуту. Когда диаметры частиц измельченной липазы были измерены анализатором распределения размера частиц LA-500, изготовленным HORIBA, Ltd., средний диаметр частиц был 13,8 мкм. 1 кг целлюлозного порошка (Nippon Paper Chemicals Co., Ltd.: средний диаметр частиц от 30 мкм) был добавлен в качестве вспомогательного фильтрующего материала к порошку для приготовления липазного порошкового состава.

Пример 6

90 г обесцвеченного масла канолы и 10 г ODO (The Nisshin OilliO Group, Ltd.) были добавлены к 5 г липазного состава, полученного в примере 5. Смесь была перемешана при 60°С в течение 2 часов и профильтрована для сбора липазного состава. Активность переэтерификации этого липазного состава была определена тем же способом, как в примере 1. Результат показан в таблице 2 как ее относительное значение.

Пример 7

90 г обесцвеченного масла канолы и 10 г ODO (The Nisshin OilliO Group, Ltd.) были добавлены к 5 г липазного состава, полученного в примере 5. Смесь была перемешана при комнатной температуре в течение 24 часов и отфильтрована для сбора липазного состава. Активность переэтерификации этого липазного состава была определена тем же способом, как в примере 1. Результат показан в таблице 2 как ее относительное значение.

Пример 8

50 г обесцвеченного масла канолы и 50 г ODO (The Nisshin OilliO Group, Ltd.) были добавлены к 5 г липазного состава, полученного в примере 5. Смесь была перемешана при комнатной температуре в течение 24 часов и профильтрована для сбора липазного состава. Активность переэтерификации этого липазного состава была определена тем же способом, как в примере 1. Результат показан в таблице 2 как ее относительное значение.

Таблица 2
липазные порошковые составы, патент № 2412245 Относительная активность переэтерификации

к массе липазного препарата
До измельчения (TL-IM)100
Пример 5 474
Пример 6557
Пример 7 714
Пример 8600

Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2412245

patent-2412245.pdf

Класс C12N9/20 расщепление триглицерида, например с помощью липазы

биокатализатор для переэтерификации жиров и способ его получения -  патент 2528778 (20.09.2014)
способ получения сложных метиловых эфиров жирных кислот с использованием смеси липаз (варианты) -  патент 2520093 (20.06.2014)
рекомбинантная плазмидная днк pyp2, кодирующая ферментативно-активную часть полипептида липазы, белка пищеварительного тракта пчелиной огневки -  патент 2507261 (20.02.2014)
рекомбинантный штамм бактерий bacillus licheniformis - продуцент термостабильной липазы -  патент 2500812 (10.12.2013)
способ получения лектинов, обладающих противокандидной активностью -  патент 2486241 (27.06.2013)
способ получения фосфатидилсерина -  патент 2482186 (20.05.2013)
варианты липолитического фермента -  патент 2474611 (10.02.2013)
способ получения твердого масла -  патент 2473694 (27.01.2013)
способ восстановления переэтерификационной активности липазы и способ переэтерификации -  патент 2465329 (27.10.2012)
рекомбинантный штамм дрожжей yarrowia-lipolytica - продуцент липазы -  патент 2451075 (20.05.2012)

Класс C12P7/64 жиры; жирные масла; воски эфирного типа; высшие жирные кислоты, те содержащие не менее семи атомов углерода в непрерывной цепи, связанной с карбоксильной группой; окисленные масла или жиры

нуклеиноваяя кислота, обладающая активностью гена фосфатазы фосфатидной кислоты (варианты), белок, рекомбинантный вектор, трансформант и способ получения композиции жирной кислоты -  патент 2528875 (20.09.2014)
гидролазы, кодирующие их нуклеиновые кислоты и способы их получения и применения -  патент 2525675 (20.08.2014)
способ получения сложных метиловых эфиров жирных кислот с использованием смеси липаз (варианты) -  патент 2520093 (20.06.2014)
мультизимы и их использование в получении полиненасыщенных жирных кислот -  патент 2517608 (27.05.2014)
гены диацилглицерол-ацилтрансферазы и их использование -  патент 2514655 (27.04.2014)
штамм микроводоросли chlorella vulgaris для получения липидов в качестве сырья для производства моторного топлива -  патент 2508398 (27.02.2014)
гомологи фосфатазы фосфатидной кислоты и их применение -  патент 2507264 (20.02.2014)
новые гены ацилтрансферазы лизофосфатидной кислоты -  патент 2507263 (20.02.2014)
композиция на основе лецитина и ее применение в пище -  патент 2489893 (20.08.2013)
способ получения твердого масла -  патент 2473694 (27.01.2013)

Класс C12R1/645 грибы

мутантный штамм glarea lozoyensis и его применение -  патент 2507252 (20.02.2014)
штамм дрожжей yarrowia lipolytica - продуцент клеточно-связанной липазы -  патент 2475532 (20.02.2013)
способ получения липидов -  патент 2468077 (27.11.2012)
способ диагностики микроспории -  патент 2458991 (20.08.2012)
способ очистки сточных вод от органических примесей, содержащихся в первичных продуктах бактериальной деструкции растительных отходов и/или марли -  патент 2452694 (10.06.2012)
ферментный препарат тромболитического и фибринолитического действия из базидиального гриба рода coprinus -  патент 2435848 (10.12.2011)
штамм clonostachys rosea f. catenulata (j.c.gilman et e.v.abbott) schroers - биодеструктор поливинилового спирта -  патент 2415915 (10.04.2011)
способ 11 бета-гидроксилирования дельта4-3-кетостероидов -  патент 2399674 (20.09.2010)
способ изготовления гранул, содержащих мицелиальные грибы -  патент 2395566 (27.07.2010)
способ получения пищевых волокон -  патент 2393228 (27.06.2010)
Наверх