Поиск патентов
ПАТЕНТНЫЙ ПОИСК В РФ

функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной активностью

Классы МПК:C07F15/00 Соединения, содержащие элементы VIII группы периодической системы Менделеева
C07F5/02 соединения бора 
C07F1/08 соединения меди 
C07F1/10 соединения серебра 
B22F1/02 включающая покрытие порошка
A61K31/295  металлы группы железа
A61K31/30  медь
A61P17/00 Лекарственные средства для лечения дерматологических заболеваний
Автор(ы):, , , ,
Патентообладатель(и):НМ ТЕК ЛТД. НАНОМАТЕРИАЛЗ ЭНД МИКРОДЕВАЙСИЗ ТЕКНОЛОДЖИ (GB)
Приоритеты:
подача заявки:
2006-04-24
публикация патента:

Изобретение относится к нанокристаллическим соединениям формулы

функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 где АОX представляет оксид металла, где А выбран из Ti или Zr, x=2; Men+ представляет собой ион металла, обладающий антибактериальной активностью, выбранный из Ag + и Сu++, где n=1 или 2; L представляет собой бифункциональную молекулу, или органическую, или металлорганическую, способную одновременно связываться с оксидом металла и ионом металла Men+; где органическая молекула выбрана из пиридина, дипиридила, трипиридила, функционализированных карбоксильными группами (-СООН), бороновыми группами (-В(ОН)2) или фосфоновыми группами (-РО3Н2), или 4-меркаптофенилбороновой кислоты; где металлорганическая молекула представляет собой металлорганический комплекс, содержащий органический лиганд, координированный центральным атомом металла и содержащий бороновую (-В(ОН)2), фосфоновую (-РО3Н2) или карбоксильную (-СООН) функциональную группу, и группы координированы центральным атомом металла, способные связываться с ионами металлов с антибактериальной активностью; где указанный органический лиганд, координированный центральным атомом металла, выбран из пиридина, дипиридила, трипиридила, функционализированных карбоксильными группами (-СООН), бороновыми группами (-В(ОН)2), или фосфоновыми группами (-РО 3Н2), или 4-меркаптофенилбороновой кислоты; i представляет число групп L-Men+, связанных с наночастицей АОх. Также предложены композиция, обладающая антибактериальной и/или противовирусной активностью, дерматологические композиции, применение нанокристаллических соединений, способ регенерации нанокристаллических соединений. Технический результат - нанокристаллические соединения обнаруживают эффективное антибактериальное действие. 7 н. и 20 з.п. ф-лы, 4 ил., 4 табл.

Рисунки к патенту РФ 2404988

функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988

Описание

Область применения изобретения

Изобретение относится к наноматериалам, состоящим из оксидов металлов, соединенных с катионобразующими металлами, обладающими антибактериальной активностью.

Уровень техники

Известна антибактериальная активность некоторых ионов металлов, также называемая функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 олигодинамическим эффектомфункциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 .

Ионы металлов, обладающие наибольшей антибактериальной активностью, представляют собой, в порядке убывания силы, ионы следующих металлов:

Hg > Ag > Cu > Zn > Fe > Pb > Bi.

Включение таких металлов, в частности ионов серебра, в пластики, керамические материалы и материалы на основе волокон или углерода создает возможность элиминации или уменьшения роста колоний бактерий. Такой эффект особенно выгоден в свете совместимости Ag+ с организмом человека и возрастающей резистентности многих бактерий к антибиотикам. Таким образом, использование материалов, которые содержат серебро, может служить цели избежания или ограничения бактериальной пролиферации.

Что касается механизма действия серебра, то известно, что антибактериальная активность реализуется одновалентным положительным ионом Ag+. Отмечалось, что присутствие платины в смеси с серебром промотирует окисление Ag до Ag+ из-за гальванического эффекта; это приводит к соответствующему усилению антибактериальной активности пленки, состоящей из платины и серебра. Более того, фармацевтические препараты на основе серебра, например сульфадиазин серебра, используемые для предотвращения инфекций в случае тяжелых ожогов, действуют путем постепенного высвобождения ионов Ag+, которые могут обратимо адсорбироваться в бактериальных клетках за счет ассоциации с группами -SH цистеина в бактериальных белках, присутствующих в клеточных стенках. Цитотоксическое действие Ag+ также связано со способностью данного иона вытеснять существенно важные ионы из клеток, такие как ионы кальция (Са2+ ) и цинка (Zn2+). Предшествующие исследования (см., например, Carr H.S., Wlodkowski T.J. and Rosenkranz H.S., 1973, функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 Antimicrobial agents and chemotherapyфункциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 , vol.4, p.585) показали, что антибактериальная активность инов Ag+ прямо пропорциональна их концентрации и эффективна против большого числа видов бактерий. Подобные соображения высказаны для ионов меди (Cu2+), которые известны в сельском хозяйстве как антибактериальные средства.

По состоянию на сегодня в технике известно получение нанокристаллических материалов на основе оксидов металлов (МОх) с высокой площадью поверхности, таких как диоксид титана, оксид цинка, оксид олова (SnO2), диоксид циркония и коллоидный диоксид кремния, которые можно осаждать на различные сусбстраты с прочным сцеплением. Также известны наноматериалы на основе диоксида титана, включающие ионы серебра, которые получают смешиванием суспензий наноматериала с растворами, содержащими ионы Ag+. Адгезия ионов Ag+ к нанокристаллической структуре оксида металла весьма вероятно связана с внедрением ионов между нанокристаллами.

Однако для того, чтобы получить гомогенные пленки, которые обнаруживают эффективное антибактериальное действие, необходимо использовать взаимодействия, которые распространяются равномерно по поверхности наноматериала и которые допускают гомогенное осаждение ионов серебра в высокой концентрации.

Данная проблема решается настоящим изобретением, посредством которого также можно получать пленки, которые можно осаждать на различные материалы и на фильтры, используемые для очистки окружающей атмосферы.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к получению новых антибактериальных и антивирусных наноматериалов на основе оксидов металлов, таких как, например, TiO2, ZrO2 , SnO2, ZnO и SiO2, функционализированных молекулами органической или неорганической природы, способными одновременно связываться с оксидом и с ионами переходных металлов, такими как Ag+ или Cu2+.

Для целей иллюстрации составные блоки таких новых материалов можно представить, например, формулой (I)

функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988

где АОх представляет оксид металла или оксид металлоида, где х = 1 или 2;

Men+ представляет собой ион металла, обладающий антибактериальной активностью, где n = 1 или 2, предпочтительно, Ag+ или Cu++;

L представляет собой бифункциональную молекулу, или органическую или металлорганическую, способную одновременно связываться с оксидом металла или оксидом металлоида и ионом металла Меn+;

i представляет число групп L-Men+, связанных с наночастицей АО х.

Оксиды металлов или оксиды металлоидов АОх для применения в настоящем изобретении представляют собой, например, коллоидный диоксид кремния, диоксид титана, диоксид циркония, оксид олова и оксид цинка. Они являются изоляционными материалами или полупроводниками, которые способны сцепляться, или сами по себе, или с применением подходящего подслоя, с большим числом материалов, включая дерево, пластмассу, стекло, металлы, керамику, цемент и внутренние и наружные поверхности зданий, и могут быть получены в виде наночастиц размерами порядка нанометров. Такие наноматериалы способны адсорбировать, за счет электростатического или химического взаимодействия, такого как эфирные связи, молекулы, имеющие подходящие функциональные группы, такие как следующие группы: карбоксильная (-СООН) (или карбоксилатная), фосфоновая (-РО3Н2) (или фосфонатная) или бороновая (-В(ОН)2) (или боронатная), которые может предоставить бифункциональная молекула L. С учетом малых размеров лигандов L и ионов металлов Men+, например, ионов серебра или меди, которые могут являться размерами порядка пикометров, результат таков, что какждая наночастица оксида металла может быть равномерно покрыта ионами металлов, такими как Ag+ или Cu 2+, что схематично иллюстрируется, например, Фиг. 1.

В результате такие наноматериалы, содержащие положительно заряженные наночастицы, могут образовывать суспензии или в водных растворителях, или в полярных растворителях органической природы, которые устойчивы и прозрачны.

Другой существенный аспект связан с возможностью смешивания суспензий наноматериалов по изобретению с катионогенными поверхностно-активными веществами, такими как алкиламмониевые соли. С учетом этого бактерицидную активность наноматериалов по изобретению можно усилить за счет присутствия алкиламмониевой соли. Действительно, поверхностно-активные вещества такого типа проявляют бактерицидную активность, которая может быть комплементарна активности антибактериально активных ионов металла. Неожиданно авторы обнаружили, что алкиламмониевые соли, например хлорид бензалкония, который имеет склонность выпадать в осадок в щелочной среде или в присутствии высоких концентраций анионов, устойчивы в присутствии суспензий, полученных из положительно заряженных наночастиц по настоящему изобретению.

Экспериментальные данные, описанные в данном описании ниже, также показывают, что катионогенные поверхностно-активные вещества, такие как хлорид бензалкония, могут вызывать адсорбцию на наноматериалах на основе диоксида титана при значениях рН, близких к нейтральному. Это предоставляет дополнительное преимущество уменьшения летучести алкиламмониевых солей после нанесениях их на поверхность.

Вследствие широкого спектра антибактериального действия материалов, содержащих ионы серебра и меди, применение таких материалов в качестве покрытий для внутренней отделки зданий, ванных комнат, кухонь, элементов фурнитуры и арматуры вообще, стеклянных поверхностей (таких как двери и окна) и рабочих комнат, и для фильтров, используемых для очистки воздуха в различных средах, а также фильтров для воды, бесспорно представляет область применений существенной важности. Получение фильтров, изготовленных из керамики, стекла или целлюлозных материалов и содержащих ионы серебра или ионы меди и включение указанных материалов в установки кондиционирования или устройства принудительной рециркуляции воздуха дают возможность предотвращать многие заболевания.

Конструирование таких фильтров требует, чтобы материалы, которые наносят как покрытие на фильтры, допускали высокую скорость потока воздуха и чтобы бактерицидной активности можно было достичь в условиях короткого времени контакта.

Данная проблема решена с помощью наноматериалов по изобретению в том отношении, что они являются причиной заметного повышения площади поверхности с показателями площади поверхности, возрастающими на порядок 103, и они способны реально проявлять бактерицидное действие при времени контакта порядка 5 минут, как предусматрено в стандартах UNI-EN 1276, апрель 2000, и UNI-EN 13697, декабрь 2001.

Фильтры с покрытием из наноматериалов по изобретению также можно легко восстанавливать до их начальной антибактериальной эффективности погружением в спиртовые растворы, содержащие ионы металлов, такие как Ag+ или Cu 2+.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 схематически иллюстрирует структуру наночастицы по изобретению;

Фиг. 2 иллюстрирует электронный спектр поглощения, показывающий степень адсорбции 4-меркаптофенилбороновой кислоты на TiO2;

Фиг. 3 иллюстрирует электронный спектр поглощения, показывающий степень адсорбции ТВА (Hdcb) на TiO2;

Фиг. 4 является схематическим представлением определенного варианта осуществления наночастицы по изобретению.

Подробное описание изобретения

Согласно особенности настоящего изобретения получают нанокристаллические субстраты, содержащие АОх, которые модифицируют бифункциональными лигандами L, состоящими из органических молекул, содержащих функциональные группы, способные связывать органическую молекулу с нанокристаллическим субстратом, а также функциональные группы, способные связываться с ионами металлов, обладающими антибактериальной активностью, например ионами Ag+ или Cu2+.

Согласно другой особенности настоящего изобретения получают нанокристаллические субстраты, содержащие АОх, которые модифицируют бифункциональными лигандами L, состоящими из металлоорганических молекул, таких как комплексы переходных металлов, содержащих функциональные группы, способные связывать комплекс с нанокристаллическим субстратом, а также функциональные группы, способные связываться с ионами металлов, обладающими антибактериальной активностью, например ионами Ag+ или Cu2+.

Такие нанокристаллические соединения представлены формулой (I)

функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988

где АОх представляет оксид металла или оксид металлоида, где х = 1 или 2;

Men+ представляет собой ион металла, обладающий антибактериальной активностью, где n = 1 или 2, предпочтительно, Ag+ или Cu++;

L представляет собой бифункциональную молекулу, или органическую, или металлорганическую, способную одновременно связываться с оксидом металла или оксидом металлоида и ионом металла Меn+;

i представляет число групп L-Men+, связанных с наночастицей АО х.

Величина параметра i будет зависеть от различных факторов, таких как размер наночастицы АОх , природа лиганда L и способ, используемый для его получения. В контексте настоящего изобретения i соответствует числу лигандов L, с которыми наночастица способна связываться, когда указанную наночастицу АОх вводят в контакт с раствором лиганда L в течение времени в интервале от 10 мин до 72 час, предпочтительно в интервале 3-24 часа.

Наночастицы по изобретению имеют размер менее 40 нм, предпочтительно менее 30 нм, предпочтительнее менее 15 нм. Наночастицы размером менее 15 нм дают прозрачные суспензии, которые имеют относительно широкий интервал применений.

Оксиды металлов или оксиды металлоидов АОх, которые можно использовать согласно настоящему изобретению, представляют собой, например, коллоидный диоксид кремния, диоксид титана, диоксид циркония, диоксид олова и оксид цинка.

Согласно общей особенности настоящего изобретения антибактериальная и антивирусная активность описанных наноматериалов проявляется даже в отсутствие слабого излучения.

Согласно другой особенности настоящего изобретения нанокристаллические материалы по изобретению или нанокристаллические материалы, состоящие только из оксида АОх, смешивают с катионогенными поверхностно-активными веществами, обладающими антибактериальной активностью, которые способны адсорбироваться на поверхности наночастиц АОх или которые способны образовывать смеси, устойчивые во времени, содержащие суспензии описанных наноматериалов.

Согласно еще одной особенности настоящего изобретения возможно восстановление начальной бактерицидной активности субстратов в случае обеднения антибактериальными ионами металлов (Ag+ или Cu2+) до ее начальной величины просто путем погружения субстратов в спиртовый раствор, содержащий определнный(ые) ион(ы) металла(ов).

Согласно еще одной своей особенности настоящее изобретение относится к дерматологическим композициям для лечения дерматологических расстройств, например акне и пролежней.

Бифункциональные лиганды L на основе комплексов переходных металлов

Комплексы переходных металлов, которые можно использовать для описанной цели, должны содержать органические лиганды, координируемые центральным атомом металла, с одной из следующих функциональных групп: бороновой (-В(ОН)2), фосфонильной (-РО 3Н2) или карбоксильной (-СООН). Такие функциональные группы служат для связывания комплекса с нанокристаллическим субстратом АОх. Другие группы, которые координирует центральный атом металла, способны связываться с ионами металлов с антибактериальной активностью. Примерами таких групп являются лиганды типа Cl-, Br-, I-, CNS -, NH2, CN- и NCS-.

Металлоорганические комплексы L по изобретению предпочтительно содержат органические лиганды типа дипиридила и/или трипиридила, координируемые центральным атомом металла (М) и содержащие следующие функциональные группы: карбоксильную (-СООН), фосфоновую (-РО 3Н2) или бороновую (-В(ОН)2), способные связываться с наночастицами, состоящими из АОх; и также содержащие следующие функциональные группы: Cl- , Br-, I-, CNS-, NH2 , СN- и NCS-, координируемые указанным центральным атомом металла (М) и способные связываться с ионами Ag+ или Cu2+. Предпочтительно указанные дипиридильные и трипиридильные группы замещены карбоксильными группами, предпочтительнее в пара-положении относительно азота пиридина. В случае, когда в указанном металлоорганическом комплексе L присутствуют более одной дипиридильной или трипиридильной группы, необязательно, одна из таких групп может быть незамещенной.

Что касается ионов металла (М), присутствующих в L, имеющих координации октаэдрического типа или имеющих другие типы координации, соответствующие тетраэдрической конфигурации, конфигурации плоского прямоугольника или конфигурации плоского квадрата, конфигурации тригональной пирамиды или конфигурации пирамиды с квадратным или прямоугольным основанием, кандидатами являются любые металлы, находящиеся в первом, втором или третьем ряду переходных металлов в Периодической таблице элементов, которые могут образовывать устойчивые бифункциональные молекулы описанного типа.

Предпочтительнее, описанные металлоорганические комплексы L имеют координацию октаэдрического типа. Предпочтительно, переходные металлы, координирующие такие комплексы, выбирают из Cr, Mn, Fe, Co, Ni, Cu, Zn, Ru, Rh, Pd, Re, Os, Ir и Pt.

С другой стороны, металлоорганические комплексы L по изобретению могут иметь отрицательный заряд и могут образовывать соли с катионами, предпочтительно органическими катионами, такими как тетраалкиламмониевые катионы. Такие катионы создают возможность солюбилизации таких частиц в органических растворителях, что вносит вклад в процесс адсорбции наноматериалов на основе оксидов металлов или оксидов металлоидов.

Таким образом, такие молекулы могут служить в качестве бифункциональных лигандов, образующих однородный адсорбированный слой на наночастицах АО х, и в то же время могут связываться с ионами металлов с антибактериальной активностью.

Примеры таких комплексов с октаэдрической координацией представлены в данном описании ниже.

функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988

ТВА = катион тетрабутиламмония

Н3Tcterpy = 4,4',4функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 -трикарбокситрипиридил

функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988

Группу ТВА можно заменить другими тетраалкиламмониевыми катионами, которые создают возможность солюбилизации комплекса в органических растворителях.

функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988

H2dcb = 2,2'-дипиридил-4,4'-дикарбоновая кислота

Бифункциональные лиганды L на основе органических соединений

Бифункциональные лиганды L органического типа, которые применимы в контексте настоящего изобретения, включают виды молекул, содержащих группы, которые могут привести к взаимодействию с наночастицами АОх , и также содержат функциональные группы, которые могут связываться с ионами, обладающими антибактериальной активностью. Примеры таких видов молекул включают органические молекулы, содержащие функциональные группы: карбоксильную (-СООН), фосфоновую (-РО3Н2) и бороновую (-В(ОН)2), которые способны внести вклад в адсорбцию на поверхности оксида АОх; и функциональные группы >N, >NH2, -CN, -NCS или -SH, которые способны связываться с ионами металлов с антибактериальной активностью, такими как Ag+ или Cu2+.

Такие органические лиганды, предпочтительно, выбирают из

-- азотсодержащих гетероциклов с 6-18 членами, предпочтительно пиридина, дипиридила или трипиридила, замещенных одним или несколькими заместителями, выбранными из карбоксила (-СООН), бороновой группы (-В(ОН)2), фосфоновой группы (-РО3Н2), меркаптановой группы (-SH) и гидроксила (-ОН);

-- арилов С6-С18, предпочтительно выбранных из фенила, нафтила и бифенила, замещенных одним или несколькими заместителями, выбранными из карбоксила (-СООН), бороновой группы (-В(ОН)2), фосфоновой группы (-РО3Н2), меркаптановой группы (-SH) и гидроксила (-ОН); и

-- монокарбоновых и дикарбоновых кислот С2-С18, замещенных одной или несколькими меркаптановыми группами (-SH) и/или гидроксильными группами (-ОН).

Предпочтительнее, примеры таких бифункциональных органических лигандов включают

-- пиридин, дипиридил или трипиридил, функционализированные карбоксильными группами, бороновыми группами или фосфоновыми группами; меркаптоянтарную кислоту, меркаптоундекановую кислоту, меркаптофенол, меркаптоникотиновую кислоту, 5-карбоксипентантиол, меркаптомасляную кислоту и 4-меркаптофенилбороновую кислоту.

Экспериментальные методы

Теперь будут описываться экспериментальные методы, относящиеся к получению наноматериалов, состоящих из АОх, используемых при разработке настоящего изобретения, характеристики указанных наноматериалов и антибактериальные свойства указанных наноматериалов.

Получение прозрачных суспензий наноматериалов на основе диоксида титана и диоксида циркония

Наноматериалы на основе диоксида титана можно получить с наночастицами таких размеров, что они образуют прозрачные или непрозрачные суспензии в водных или органических растворителях. Суспензии TiO2, состоящие из наночастиц размером менее 15 нанометров, обычно являются прозрачными и при нанесении на поверхность они не изменяют ее цвет. Коммерческие продукты диоксиды титана, такие как функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 Biossido di Titanio P 25функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 (поставляются Degussa), дают суспензии, которые являются белыми и непрозрачными, поскольку средний диаметр наночастиц TiO2 находится в интервале 25-30 нм. Для целей настоящего изобретения можно использовать или непрозрачные или прозрачные наноматериалы. Однако прозрачные наноматериалы представляют больший интерес, поскольку они предоставляют более широкий интервал возможных применений. Прозрачные коллоидные суспензии на основе коллоидного диоксида кремния или диоксида олова являются коммерчески доступными.

Способы получения суспензий на основе диоксида титана и диоксида циркония будут описаны далее. Указанные количества реагентов можно изменять без отхода от новизны и объема настоящего изобретения.

(А) Прозрачные суспензии на основе TiO2

В химический стакан загружают 300 мл дистиллированной Н2О и 2,1 мл сильной кислоты, например концентрированной HNO3 (65%, мас./мас.). Через 10 мин при перемешивании через капельную воронку добавляют 50 мл изопропоксида титана (поставляемого Fluka). Сразу же образуется выпадающий в осадок TiO2 молочного цвета. Затем смесь греют при 80°С в течение 8-12 часов, обеспечивая продолжение перемешивания и поддержание постоянной температуры. Во время нагревания осадок снова растворяется, и смесь становится опалесцирующей. Во время фазы нагревания коллоидную суспензию концентрируют до конечного объема 100-200 мл, что соответствует концентрации TiO 2 150-75 г/л. Наночастицы диоксида титана, полученные по окончании процесса, имеют диаметр в интервале 6-15 нм. Затем суспензию, сконцентрированную до 100 мл, разбавляют дистиллированной водой и этанолом, и получают конечный прозрачный раствор (рН функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 2), который содержит, в объеме 1 литр, TiO2 в концентрации 1,5% и спирт в интервале 10-50%, предпочтительно, 25%.

(В) Прозрачные суспензии на основе ZrO 2

В химический стакан загружают 300 мл дистиллированной Н2О и 2,1 мл сильной кислоты, например концентрированной HNO3 (65%). Через примерно 10 мин при перемешивании с помощью капельной воронки добавляют 76 мл 70% раствора тетраизопропоксида циркония в изопропаноле.

Сразу же видно образование выпадающего в осадок ZrO 2 беловато-молочного цвета. Затем смесь греют при 90°С в течение 8-12 часов, обеспечивая продолжение перемешивания и поддержание постоянной температуры. Во время нагревания осадок снова растворяется, причем образуется суспензия на вид молочного цвета, которую концентрируют до 140-280 мл, что соответствует концентрации ZrO2 150-75 г/л. Затем суспензию, сконцентрированную до 140 мл, разбавляют дистиллированной водой и этанолом, и получают опалесцирующую суспензию (рН функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 2), которая содержит ZrO2 в концентрации 1,5% и спирт в интервале 10-50%, предпочтительно 25%.

(С) Непрозрачные суспензии на основе TiO2

Нейтральные водные непрозрачные суспензии на основе диоксида титана можно получить, добавляя диоксид титана Р 25 в водные растворы функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 Тритона Х 100функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 (поставляемого Fluka).

Нейтральные водные опалесцирующие суспензии на основе диоксида титана также можно получить из пероксититановой кислоты путем модификации процедуры, описанной в литературе (Ichinose H., Terasaki M. and Katsuki H., 1996, J. Ceramic Soc. Japan, 104, 715).

При типичном получении 150 мл TiCl4 в 20% HCl загружают в 1-л химический стакан и к полученному раствору добавляют 826 мл NH4OH, разбавленного 1:9 дистиллированной водой. Полученный раствор имеет нейтральный рН (рН 7), и выпадает в осадок титановая кислота Ti(OH)4. Полученный преципитат белый по цвету и имеет консистенцию геля. Преципитат собирают на фильтре пористостью G3 и промывают 750-1000 мл дистиллированной воды (до тех пор, пока не достигнут полного удаления хлорида, что можно показать обработкой жидкого фильтрата AgNO3 ). Если хлорид присутствует, отмечают выпадение в осадок белого творожистого AgCl. Преципитат, содержащий титановую кислоту (Ti(OH) 4), собирают и суспендируют в 200 мл дистиллированной воды, имеющей проводимость менее 1,5 мкСм с рН в интервале 5-7; к полученной смеси постепенно в течение 20-30 минут добавляют 92 мл 30% Н 2О2. Отмечают растворение преципитата и образование раствора желтого цвета, содержащего пероксититановую кислоту общей формулы

функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988

где х равен величине в интервале 3-6.

Наконец, раствор греют в течение 1 часа при 70°С для разложения избытка Н2О2, и затем обрабатывают в автоклаве в течение 8 час при 120°С. На данном этапе процедуры пероксититановая кислота разлагается до диоксида титана, преимущественно, в аллотропной форме анатаза. Полученная суспензия наночастиц имеет рН, близкий к нейтральному, непрозрачна по внешнему виду и является устойчивой во времени.

Получение суспензий наноматериалов, обладающих антибактериальной и антивирусной активностью

Для того чтобы придать суспензиям наноматериалов бактерицидную активность и антивирусную активность, осуществляют первую стадию адсорбции, на которой адсорбируется бифункциональный лиганд L, с последующим смешиванием с водным или спиртовым раствором, содержащим ионы Ag+ или Cu 2+. Затем к суспензии наноматериалов, функционализированной ионами Ag+ или Cu2+, можно добавить аммониевую соль, действующую как катоиногенное поверхностно-активное вещество, которая имеет антибактериальную активность, или можно добавить независимо к или адсорбировать на наноматериалах, которые являются предметом настоящего изобретения; такое получение описано выше.

Как правило, для адсорбции бифункционального лиганда L на наноматериале АОх, описанном в настоящем изобретении, требуется время порядка 12-36 час, в то время как связывание ионов Ag+ или Cu2+ с лигандом L стабилизируется почти мгновенно добавлением растворов, содержащих указанные ионы, к суспензиям наноматериалов, функционализированных лигандом L. Накопленные экспериментальные данные, описанные в данном описании ниже, показывают, что катионогенные поверхностно-активные вещества, такие как алкиламмониевые соли, также могут частично адсорбироваться на поверхности наноматериалов.

Способы получения, описанные ниже, детально показывают препаративную методологию получения суспензий наноматериалов с бифункциональными лигандами L, с ионами Ag+ и с катионогенными поверхностно-активными веществами. Аналогичные способы получения можно использовать для получения таких суспензий с ионами Cu2+. Указанные количества реагентов можно изменять в пределах объема настоящего изобретения.

(D) Адсорбция 4-меркаптофенилбороновой кислоты и ионов Ag+ на функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 TiO2 P25функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 (поставляется Degussa)

К раствору, содержащему 2×10-5 молей 4-меркаптофенилбороновой кислоты, растворенной в 50 мл этанола, добавляют 1 г TiO2 P25 (поставляется Degussa). Суспензию перемешивают 24 часа. 4-Меркаптофенилбороновая кислота имеет полосу поглощения при 255 нм, которую можно приписать переходу функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 -функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 * в фенольном цикле. Такая полоса электронного поглощения создает возможность контроля за адсорбцией бороновой кислоты на поверхности наноматериала как функции времени. Известно, что адсорбция происходит за счет взаимодействия бороновой функциональной группы с поверхностью полупроводника. Спектры электронного поглощения на Фиг. 2 показывают, что количество 4-меркаптофенилбороновой кислоты, адсорбированной на поверхности функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 TiO2 P25функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 , достигает 35% от начальной концентрации за 24 часа.

Раствор центрифугируют 10 мин при 4000 об/мин, получая прозрачный раствор, твердое вещество промывают 20 мл этанола и затем ресуспендируют в 50 мл этанола при перемешивании. К полученной суспензии добавляют 7,2×10-6 молей растворимой соли серебра, предпочтительно лактата серебра или ацетата серебра. Полученная суспензия белая по цвету, не имеет запаха и устойчива во времени.

(Е) Адсорбция 4-меркаптофенилбороновой кислоты и ионов Ag+ на прозрачных суспензиях TiO 2 по способу (А) и на продуктах фирмы NM Tech

Разбавляют 100 мл прозрачного раствора диоксида титана, полученного согласно способу (А) и содержащего 15% TiO2, 100 мл дистиллированной воды и 200 мл раствора 0,052 г 4-меркаптофенилбороновой кислоты в этаноле. Суспензию перемешивают 24 часа, и по окончании указанного периода спектрофотометрическое определение показывает, что бороновая кислота полностью адсорбирована на наночастицах полупроводника. Небольшие размеры наночастиц относительно функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 TiO2 P25функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 и являющаяся результатом большая площадь поверхности суспендированного вещества ответственны за полную адсорбцию бифункционального лиганда. К прозрачной, не имеющей запаха, суспензии при перемешивании добавляют стехиометрическое количество (относительно L) соли серебра, например, лактата серебра (0,06 г) или ацетата серебра (0,05 г). После 1-час непрерывного перемешивания добавляют 10-20 мл, предпочтительно, 12 мл, 50% (мас./об.) водного раствора хлорида бензалкония, и суспензию перемешивают еще в течение 1 часа. Затем концентрированную суспензию разбавляют дистиллированной водой и этанолом и получают 1 л опалесцирующей суспензии (рН функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 2), которая содержит TiO2 в концентрации 1,5% и этанол в интервале 10-50%, предпочтительно 25%.

Обнаружено, что прозрачная суспензия неограниченно устойчива. Ниже в данном описании такой продукт для краткости называется функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 бактерклиномфункциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 (функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 Bacterclineфункциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 ).

Такую же процедуру можно использовать для модификации прозрачных суспензий наноматериалов, продаваемых NM Tech. Ltd. и называемых функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 PSO 419функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 , когда количества бифункционального лиганда и ионов серебра подбирают на основании количества диоксида титана в продукте. Например, продукт функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 PSO 419функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 , который схож с продуктом, полученным согласно способу (А), и в котором содержание TiO2 составляет 2%, и рН примерно равен 2, можно превратить в антибактериальный и антивирусный продукт с использованием способа, аналогичного описанному выше.

В частности, 50 мл раствора функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 PSO 419D2функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 , содержащего 2% TiO2, разбавляют 2,2 мг 4-меркаптофенилбороновой кислоты (2,05×10-5 М), и суспензию перемешивают 24 часа. К полученному раствору, не имеющему запаха, добавляют 2,05×10-5 М лактата серебра или ацетата серебра. Наконец, после 1-час непрепрывного перемешивания добавляют 8-20 мл, предпочтительно 12 мл, водного раствора хлорида бензалкония, и суспензию перемешивают еще в течение 1 часа. Полученная прозрачная суспензия неограниченно устойчива.

Следует отметить, что другие непрозрачные продукты на основе TiO2, продаваемые NM Tech. Ltd., такие как функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 AT-01функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 и функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 AT-03функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 , можно обрабатывать согласно описанным способам по настоящему изобретению и получать устойчивые суспензии или порошки, которые обладают антибактериальной и антивирусной активностью. Например, образец в 50 мл раствора функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 AT-01функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 , содержащего 1,7% TiO2, разбавляют 50 мл этанола, содержащего 3,8 мг растворенной 4-меркаптофенилбороновой кислоты (1,9×10-5 М), суспензию перемешивают 24 часа, и получают продукт, не имеющий запаха. Затем добавляют 1,9×10 -5 М лактата серебра или ацетата серебра. Полученная суспензия со временем дает тонкий осадок.

(F) Адсорбция катионогенных поверхностно-активных веществ на диоксиде титана

Катионогенные поверхностно-активные вещества с антибактериальной активностью, как правило, адсорбируются на наноматериалах на основе TiO2, ZrO2, SnO2, ZnO и SiO2. Адсорбция на отрицательно заряженных или нейтральных наночастицах происходит почти мгновенно. В случае суспензий наноматериалов с щелочным рН добавление солей типа солей бензалкония, таких как, например, хлорид бензилдодецилдиметиламмония или хлорид бензилгексадецилдиметиламмония или хлорид бензалкония, вызывает осаждение суспензий; в то время как в случае суспензий наноматериалов с нейтральным или кислотным рН суспензия устойчива.

В косвенных испытаниях по адсорбции хлорида бензалкония на наноматериалах на основе TiO2 при нейтральном рН используют кондуктометрические измерения. Ассоциация через адсорбцию катиона бензилдиалкиламмония на TiO2 должна, как и ожидалось, вызывать уменьшение проводимости, что подтверждается экспериментом, описанным далее.

Разбавленный 1:10 50% (мас./об.) раствор хлорида бензалкония имеет проводимость 4,7 мСм. Если объем такого раствора увеличить от 10 до 15 мл добавлением дистиллированной воды, проводимость снижается до 3,90 мСм. Если вместо этого разбавить раствор, добавляя 5 мл нейтральной суспензии диоксида титана, полученной из пероксититановой кислоты согласно способу (С), или эквивалентного продукта функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 AT-03функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 при нейтральном рН, измеренная проводимость составляет 3,60 мСм. Уменьшение проводимости на 300 мкСм можно отнести к адсорбции катионогенного поверхностно-активного вещества на поверхности диоксида титана.

(G) Адсорбция 2,2'-дипиридил-4-карбокси-4'-карбоксилаткислоты, Ag+ и Cu2+ на функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 TiO2 P25функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 (поставляется Degussa)

Анион 2,2'-дипиридил-4-карбокси-4'-карбоксилаткислоты (сокращенно функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 Hdcbфункциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 ) получают, добавляя один эквивалент гидроксида тетрабутиламмония (сокращенно ТВАОН) к 2,2'-дипиридил-4,4'-дикарбоновой кислоте (сокращенно функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 H2dcbфункциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 ), которая плохо растворима в воде и находится в твердой форме. Лиганд в форме монокарбоксилата (также называемой функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 монопротонированной формойфункциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 ) и в виде соли тетрабутиламмония (сокращенно функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 TBA(Hdcb)функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 ) таким образом можно солюбилизировать в метаноле или этаноле и можно адсорбировать на диоксиде титана.

К раствору 1х10-4 молей TBA(Hdcb) в 100 мл этанола добавляют 5 г функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 TiO2 P25функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 (поставляется Degussa). Суспензию перемешивают 24 часа. Лиганд TBA(Hdcb) имеет полосу поглощения при 294 нм из-за переходов функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 -функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 *, что допускает контроль за его адсорбцией на наноматериалах как функции времени.

Спектры на Фиг. 3 показывают, что через 24 часа лиганд полностью адсорбирован на поверхности нанокристаллического субстрата. Известно, что адсорбция происходит за счет взаимодействия карбоксильных функциональных групп с поверхностью полупроводника.

Затем суспензию центрифугируют 10 мин при 4000 об/мин, и твердое вещество промывают 50 мл метанола. Затем полученный наноматериал, функционализированный лигандом (сокращенно TiO2/TBA(Hdcb)), окончательно сушат в вакууме при температуре окружающей среды.

Две порции TiO2/TBA(Hdcb) по 2 г каждая ресуспендируют в 100 мл этанола. К одной суспензии при перемешивании добавляют 8 мг лактата серебра; а к другой суспензии добавляют 7 мг CuCl 2. Две суспензии имеют различные заместители: суспензия, функционализированная ионами меди - TiO2/TBA[Hdcb]/Cu 2+ - остается устойчивой, TiO2/TBA[Hdcb]/Ag + со временем образует осадок.

(Н) Адсорбция металлоорганических лигандов (L) и ионов Ag+ на нейтральных суспензиях TiO2

Бифункциональные металлорганические лиганды L, описанные выше, можно закрепить на нейтральных суспензиях диоксида титана, полученных согласно способу (С), причем наноматериалы суспендируют в спиртовых растворах металлорганических лигандов концентрации примерно 10-3-10-4 М. Суспензию перемешивают 12 час, в течение которых металлорганический лиганд L полностью адсорбируется на поверхности наноматериалов.

Добавление стехиометрических количеств серебра относительно лиганда L в спиртовом растворе соответствует образованию аддуктов, в которых ион серебра Ag+ закреплен на неорганическом лиганде, что схематически иллюстрируется на Фиг. 4 в случае комплекса (H2dcb)2Ru(NCS)2 (H2 dcb = 2,2'-дипиридил-4,4'-дикарбоновая кислота). Присутствие карбоксильных функциональных групп делает возможной адсорбцию комплекса и равномерного покрытия нанокристаллического материала за время порядка 2-3 час при 50°С и за 12 час при температуре окружающей среды. На следующей стадии к метанольному раствору добавляют соль сербера, например нитрат серебра, лактат серебра или ацетат серебра, в стехиометрическом отношении 2:1 к числу молей (H2dcb)2Ru(NCS)2. Наличие двух групп NCS дает возможность ионам Ag+ связываться моментально, как показано на Фиг. 4.

Согласно частному варианту осуществления настоящего изобретения нанокристаллические материалы формулы (I) можно включать в дерматологические композиции для лечения бактериальных дерматологических болезней, таких как, например, акне или пролежни.

Получение некоторых таких композиций описано в данном описании ниже в качестве примеров.

Получение гелей и кремов

Суспензии наноматериалов на основе диоксида титана по изобретению можно использовать в качестве активных ингредиентов при получении гидрофильных гелей и кремов для дерматологического применения. Получение гидрофильных гелей включает смешивание активных ингредиентов с эксципиентами и желирующими компонентами, такими как, например, глицерин, амидопропиленгликоль, силикат магния и силикат алюминия. Получение гидрофильных кремов включает смешивание фармацевтически эффективного количества активных ингредиентов с поверхностно-активными веществами и эмульгаторами, включая, например, вазелин, жидкий парафин, стеариловый спирт, стеарат полиэтиленгликоля, карбоксиполиметилен и натриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты. Конечно, любой эксципиент, принятый для таких целей (из эксципиентов, хорошо известных специалистам в данной области техники), можно использовать при получении дерматологических композиций по изобретению.

Антибактериальная и антивирусная активность функционализированных наноматериалов

Функционализированные наноматериалы, полученные согласно способам (D), (E), (F), (G) и (Н), обладают антибактериальной активностью против Escherichia coli. Испытания проводят, осаждая пленки, состоящие из различных наноматериалов, на чашки Петри в контакте с числом колоний более 104 кое (колониеобразующих единиц). Во всех случаях наблюдают полную гибель колоний.

Более полные измерения осуществляют согласно стандартам UNI-EN 1276, апрель 2000, и UNI-EN 13697, декабрь 2001, для продукта, синтезированного согласно способу (Е) (продукт, названный бактерклином), который является прозрачным и, таким образом, применимым в более широком интервале применений.

Оценка бактерицидной активности суспензии: способ разведения и нейтрализации (UNI-EN 1276, апрель 2000)

Микроорганизмы

Для испытания используют следующие штаммы:

Pseudomonas aeruginosa,

Staphylococcus aureus,

Staphylococcus epidermidis,

Enterococcus faecalis,

Escherichia coli,

Salmonella,

Listeria.

Источники бактерий

Все испытываемые бактериальные штаммы предоставлены Департаментом экспериментальной и диагностической медицины, секция микробиологии университета Ferrara.

Испытываемый продукт бактерклин разбавляют до 80%.

Испытываемое вещество считают бактерицидным, если для каждого бактериального штамма при 20°С после времени контакта 5 мин в результате получают снижение жизнеспособности, по меньшей мере, 105 единиц.

Полученные результаты показывают, что во всех случаях получают снижение жизнеспособности превышает 105 единиц.

Выводы

На основании полученных результатов и критерия применимости испытаний испытанное вещество функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 бактерклинфункциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 является бактерицидным против Escherichia coli, Enterococcus faecalis, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Salmonella и Listeria, когда используется в концентрации 80% (которая становится максимальной возможно испытываемой концентрацией) при времени контакта 5 мин в присутствии бычьего сывороточного альбумина в конечной концентрации 0,3% согласно способу стандарта UNI-EN 1276, апрель 2000.

Оценка бактерицидной активности: поверхностные испытания (UNI-EN 13697, декабрь 2001)

Микроорганизмы

Кроме штаммов, используемых для испытания суспензий, см. выше, в данном случае испытание распространяется на Legionella pneumophila.

Таким образом, перечень штаммов, используемых в испытаниях, следующий:

Pseudomonas aeruginosa,

Staphylococcus aureus,

Staphylococcus epidermidis,

Enterococcus faecalis,

Escherichia coli,

Salmonella,

Listeria,

Legionella pneumophila.

Испытываемое вещество считают бактерицидным против предусмотренных бактериальных штаммов согласно Европейскому стандарту, если для каждого бактериального штамма при 20°С после времени контакта 5 мин в результате получают снижение жизнеспособности, по меньшей мере, 104 единиц.

Полученные результаты, приведенные в таблице 1, показывают, что во всех случаях десятичный логарифм антимикробной активности превышает 4.

Таблица 1
функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 Время контакта и логарифм антимикробной активности
Испытываемые микроорганизмы 5 минут
функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 [концентрация] 100%
Staphylococcus aureus> 4,02
Staphylococcus epidermidis> 4,00
Pseudomonas aeruginosa> 4,00
Escherichia coli> 4,00
Enterococcus faecalis> 4,19
Salmonella > 4,00
Listeria > 4,00
Legionella pneumophila > 4,26

Выводы

На основании полученных результатов и критерия применимости испытаний вещество функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 бактерклинфункциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 , испытанное в установленных условиях испытания, является бактерицидным против Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Enterococcus faecalis, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Salmonella, Listeria и Legionella pneumophila, когда используется в концентрации 100%, при времени контакта 5 мин в присутствии бычьего сывороточного альбумина в конечной концентрации 0,3% согласно способу стандарта UNI-EN 13697, декабрь 2001.

Оценка фунгицидной активности способом разбавления и нейтрализации с суспензией (стандарт UNI-EN 1650, октябрь 2000)

Микроорганизмы

Для испытания используют следующие штаммы:

Candida albicans,

Aspergillus niger.

Испытываемые штаммы предоставлены Департаментом экспериментальной и диагностической медицины, секция микробиологии, университета Ferrara.

Испытываемое вещество считают фунгицидным, если для каждого грибного штамма при 20°С после времени контакта 15 мин результатом является снижение жизнеспособности, по меньшей мере, на 10 4 единиц.

Результаты

Снижение жизнеспособности в случае различных концентраций функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 бактерклинафункциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 представлено в таблице 2.

Таблица 2
функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 Время контакта и снижение жиэнеспособности
Испытываемые микроорганизмы 15 минут
25%50% 80%
Candida albicans> 1,13×10 4> 1,13×10 4> 1,13×10 4
Aspergillus niger < 1,87×103 > 1,37×104 > 1,37×104

Выводы

На основании полученных результатов и критерия применимости испытаний испытанное вещество функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 бактерклинфункциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 является фунгицидным против Candida albicans в концентрациях 25%, 50% и 80%, и против Aspergillus niger в концентрациях 50% и 80% (которая становится максимальной возможно испытываемой концентрацией) после 15-мин контакта в присутствии бычьего сывороточного альбумина в конечной концентрации 0,3% согласно способу стандарта UNI-EN 1650, октябрь 2000.

Оценка фунгицидной активности: поверхностные испытания (стандарт UNI-EN 13697, декабрь 2001)

Микроорганизмы

Для испытания используют следующие штаммы:

Candida albicans,

Aspergillus niger.

Испытываемые штаммы предоставлены Департаментом экспериментальной и диагностической медицины, секция микробиологии, университета Ferrara.

Испытываемое вещество считают фунгицидным, если десятичный логарифм антимикробной активности против микробных штаммов, полученной согласно Европейскому стандарту, равен или превышает 3, в случае 15-минутного контакта при 20°С.

Результаты

Логарифмы снижения представлены в таблице 3.

Таблица 3
функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 Время контакта и логарифм антимикробной активности
функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 15 минут
функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 50% 100%
Candida albicans2,02 > 3,18
Aspergillus niger 1,14 > 3,04

Выводы

На основании полученных результатов и критерия применимости испытаний испытанное вещество функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 бактерклинфункциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 в установленных условиях испытания является фунгицидным против Candida albicans и Aspergillus niger, когда используется в концентрации 100%, после 15-мин контакта в присутствии бычьего сывороточного альбумина в конечной концентрации 0,3% согласно способу стандарта UNI-EN 13697, декабрь 2001.

Вирулицидная активность

Эксперименты, описанные в данном описании ниже, показывают, что продукт бактерклин в очень небольших концентрациях обладает вирулицидной активностью против вируса HSV-1 (вирус-1 герпеса).

Экспериментальная процедура

Получают различные количества суспензий вирусов в модифицированной среде Дульбекко (D-MEM), к которой добавлен 1% сыворотки плода коровы (BFS). Вирус используют в концентрации (титр вируса) 1х106 цитолитических бляшкообразующих единиц (бое, (Pfu)). Различные количества бактерклина добавляют к различным образцам с временем предварительной обработки 1 и 5 час. Необработанные суспензии вирусов сохраняют как контроль. По окончании периода инкубации при температуре окружающей среды все образцы разбавляют до известных объемов для определения титров вируса. Титры вируса контроля и образцов, обработанных бактерклином, определяют способом, описанным в данном описании ниже.

При определении титра вируса вычисляют число инфекционных начал, присутствующих в 1 мл раствора. Один из способов заключается в определении числа цитолитических бляшек, продуцированных значительно разбавленной суспензией вирусов и приведенных в контакт с монослоем клеток. В этой серии экспериментов используют ренальные клетки африканской обезьяны (Vero). Клетки культивируют при 37°С в присутствии 5% СО2 в функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 D-MEMфункциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 , в которую добавлено 10% BFS, 1% L-глутамина и 1% пенициллина/стрептомицина. Определение титра осуществляют на планшетах с 12 лунками. Когда культуры почти сольются, вирусную массу разбавляют до известных концентраций в среде, содержащей 2% BFS. Каждое разведение вносят в 2 лунки на планшете. После инкубации в течение 1 часа при 37°С инокулят извлекают, и инфекцию блокируют, добавляя среду, содержащую 1% BFS и 2% человеческого гамма-глобулина, обладающего функцией ингибирования образования вторичных бляшек.

Инокулированные культуры инкубируют при 37°С в течение 2 суток и контролируют до тех пор, пока лизис бляшек не станет видимым. В этот момент клетки фиксируют и окрашивают генциановым фиолетовым. Под оптическим микроскопом считают бляшки, присутствующие в лунках, и полученное число умножают на фактор разведения, и получают титр вируса в единицах бое/мл.

Результаты и обсуждение

Вирулицидная активность продукта бактерклина

Продукт бактерклин в количестве 10 и 50 микролитров вводят в контакт с HSV-1 с титром вируса 1х106 бое. Инкубацию осуществляют в 1 мл среды D-MEM, в которую добавлен 1% BFS. Используют различное время инкубации: 1 час и 5 час. По окончании заданного периода инкубации вирус разводят до концентраций 1х103 и 1х102 бое, и инокулируют почти слившиеся культуры. Как видно из таблицы 4, приведенной ниже, клетки, инокулированные вирусом, предварительно обработанные бактерклином, не имеют бляшек лизиса для любого времени предварительной обработки и любого разведения вируса.

Таблица 4
Число бое и процент ингибирования образования цитолитических бляшек после предварительной обработки HSV-1, 1×106 , бактерклином, 1 мкл/мл, в сравнении с контролем
Предварительная обработка HSV-1 с титром 1×106 10 мкл и 50 мкл испытываемого продукта
Разведение HSV-1 (1×103 бое)
Среднее контроля (бое) Среднее образцов, обработанных 10 мкл (бое) Ингибирование бляшко-образования (%) Среднее образцов, обработанных 50 мкл (бое) Ингибирование бляшко-образования (%) Титр вируса контроля
1 час5 час 1 час 5 час1 час и 5 час1 час 5 час1 час и 5 час1 час 5 час
63 78 функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 100 функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988 100 2,63х105 1,78х105

Титр вируса HSV-1 контроля, указанный выше в Таблице 4, вычисляют, умножая среднее число бляшек цитолиза на фактор разведения (10 3). Как видно из Таблицы 4, обработанные образцы испытывают 100% снижение образования бляшек цитолиза по сравнению с контролем.

Для обоих времен предварительной обработки и обоих разведений вируса имеется почти полное снижение присутствующих частиц вируса. Продукт снижает титр вируса с примерно 300000 присутствующих вирусных частиц (в контроле) до титра менее 1000. Так, при 1-часовом контакте бактерклин, разведенный до концентрации 1% (10 мкл/мл), вызывает почти полную гибель вирусных частиц.

Выводы

Данное исследование антивирусной активности продукта бактерклина показывает, что продукт обладает антивирусной активностью в случае прямого контакта с вирусом HSV-1 даже при самых сильных разведениях продукта при времени контакта 1 час.

Осуществленные эксперименты показывают, что при уровне разведения продукта порядка 1:100 достигается полная гибель вирусных частиц.

Композиции по изобретению можно использовать при любых применениях, при которых желательно достижение антибактериального и/или антивирусного действия, таких как для обработки поверхностей, таких как поверхности в окружающей среде в системе здравоохранения (клиники, госпитали и т.д.), в особенности, полы, стены, столы, операционные столы и т.д. Другим применением, в случае которого композиции по изобретению проявляют выгодную активность, является обработка воздуха в различных средах, в частности общественных мест и/или мест области здравоохранения, или других средах, в которых желательно иметь почти полностью стерильный воздух, таких как заводы по производству фармацевтических препаратов и заводы по переработке пищевых продуктов. При таких применениях композиции по изобретению можно использовать для нанесения покрытий на фильтры, используемые в различных типах вентиляционных систем, для обработки пространств больших или небольших размеров.

Согласно другому варианту осуществления изобретения получают дерматологические композиции для лечения бактериальных инфекций, которые содержат или вместе с или вместо нанокристаллические материалы формулы (I) фотокаталитические суспензии TiO2 в сочетании с серебром или производным серебра и/или медью или производным меди(II), такие как описанные в качестве примеров в заявке на патент Италии № IS2005А2, поданной 01 сент. 2005.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Нанокристаллические соединения формулы (I)

функциональные наноматериалы с антибактериальной и антивирусной   активностью, патент № 2404988

где АОX представляет оксид металла, где А выбран из Ti или Zr, x=2;

Men+ представляет собой ион металла, обладающий антибактериальной активностью, выбранный из Ag+ и Сu++, где n=1 или 2;

L представляет собой бифункциональную молекулу, или органическую или металлорганическую, способную одновременно связываться с оксидом металла и ионом металла Men+; где органическая молекула выбрана из пиридина, дипиридила, трипиридила, функционализированных карбоксильными группами (-СООН), бороновыми группами (-В(ОН) 2) или фосфоновыми группами (-РО3Н2 ), или 4-меркаптофенилбороновой кислоты; где металлорганическая молекула представляет собой металлорганический комплекс, содержащий органический лиганд, координированный центральным атомом металла и содержащий бороновую

(-В(ОН)2), фосфоновую (-РО3Н2) или карбоксильную (-СООН) функциональную группу, и группы координированы центральным атомом металла, способные связываться с ионами металлов с антибактериальной активностью; где указанный органический лиганд, координированный центральным атомом металла, выбран из пиридина, дипиридила, трипиридила, функционализированных карбоксильными группами (-СООН), бороновыми группами (-В(ОН)2) или фосфоновыми группами

(-РО3Н2), или 4-меркаптофенилбороновой кислоты;

i представляет число групп L-Men+ , связанных с наночастицей АОX.

2. Нанокристаллические соединения по п.1, где Men+ выбирают из Ag+ и Cu++.

3. Нанокристаллические соединения по п.1 или 2, где указанные оксиды металлов или оксиды металлоидов АОх выбирают из диоксида титана или диоксида циркония.

4. Нанокристаллические соединения по п.1, где L представляет собой металлоорганический комплекс, содержащий органический лиганд, координированный центральным атомом металла и содержащий бороновую (-В(ОН)2), фосфоновую (-РО3Н2 ) или карбоксильную (-СООН) функциональную группу, и группы координированы центральным атомом металла, способные связываться с ионами металлов с антибактериальной активностью.

5. Нанокристаллические соединения по п.4, где указанные группы, способные связываться с ионами металлов с антибактериальной активностью, выбирают из Сl-, Вr-, I-, CNS- , NН2, CN- и NCS-.

6. Нанокристаллические соединения по п.4, где указанный органический лиганд, координированный центральным атомом металла, представляет собой дипиридил- и/или трипиридилсодержащий лиганд, функционализированный группами карбоксильной (-СООН), бороновой (-В(ОН)2 ) или фосфоновой (-РО3Н2).

7. Нанокристаллические соединения по п.6, где указанные дипиридильные и/или трипиридильные группы замещены карбоксильными группами, предпочтительно, в пара-положении относительно азота пиридина, и где, в случае, когда в металлоорганическом комплексе L присутствуют более одной дипиридильной и/или трипиридильной группы, одна из указанных групп, необязательно, может быть незамещена.

8. Нанокристаллические соединения по любому из пп.4-7, где указанный металл, который координирует органические лиганды, и который координирует группы, способные связываться с ионами металлов с антибактериальной активностью, представляет собой металл, который находится в первом, втором или третьем ряду переходных металлов Периодической таблицы элементов, и который может образовывать устойчивые бифункциональные молекулы описанного типа; где указанный металл выбирают, предпочтительно, из Сr, Мn, Fe, Со, Ni, Сu, Zn, Ru, Rh, Pd, Re, Os, Ir и Pt.

9. Нанокристаллические соединения по любому из пп.4-7, где указанные металлоорганические комплексы имеют координационную структуру типа октаэдрического, тетраэдрического, плоского прямоугольника или плоского квадрата, тригональной пирамиды или пирамиды с квадратным или прямоугольным основанием, и предпочтительно, октаэдрического типа.

10. Нанокристаллические соединения по любому из пп.4-7, где указанные соединения выбирают из [(Н3Tcterpy)М(СN)3 ]ТВА, [(Н3Tcterpy)М(МСS)3]ТВА, [M(H 3Tcterpy)(bpy)NCS]TBA и M(H2dcb)2 (NCS)2,

где Н3Tcterpy представляет 4,4',4"-трикарбокситрипиридил,

ТВА представляет катион тетрабутиламмония,

bpy представляет 2,2'-дипиридил, и

H2dcb представляет 2,2'-дипиридил-4,4'-дикарбоновую кислоту.

11. Нанокристаллические соединения по п.1, где L представляет собой органическую молекулу, содержащую функциональные группы карбоксильную (-СООН), фосфонильную (-РО3Н 2) или бороновую (-В(ОН)3), способные внести вклад в адсорбцию на оксиде АОX; и группы >N, >NH 2, CN-, NCS-, CNS- или SH, способные связываться с ионами металлов с антибактериальной активностью.

12. Нанокристаллические соединения по п.11, где лиганд L выбирают из

пиридина, дипиридила и трипиридила, функционализированных карбоксильными группами, бороновыми группами или фосфоновыми группами;

4-меркаптофенилбороновой кислоты.

13. Нанокристаллические соединения по п.1, причем указанные нанокристаллические соединения содержат частицы размером менее 40 нм, предпочтительно менее 30 нм.

14. Нанокристаллические соединения по п.13, причем указанные нанокристаллические соединения содержат частицы размером менее 15 нм.

15. Композиция, обладающая антибактериальной и/или противовирусной активностью, включающая нанокристаллические соединения по любому из пп.1-14 вместе с катионогенным поверхностно-активным веществом.

16. Композиция по п.15, где указанное катионогенное поверхностно-активное вещество представляет собой соль алкиламмония, предпочтительно, выбранную из: соединений четвертичного аммония, бензил С12-С14диалкиламмонийхлорида или хлорида бензалкония.

17. Композиция по п.15 или 16, представляющая собой прозрачный раствор.

18. Нанокристаллические соединения по п.1, где на поверхности молекул указанных нанокристаллических соединений адсорбирована соль алкиламмония, предпочтительно, выбранная из солей четвертичных аммониевых оснований, бензил С12-С14диалкиламмонийхлорида или хлорида бензалкония.

19. Дерматологические композиции, включающие, по меньшей мере, одно нанокристаллическое соединение по любому из пп.1-14 или 18 вместе с фармацевтически или косметологически приемлемыми эксципиентами.

20. Дерматологические композиции по п.19, причем указанные композиции находятся в форме геля или крема.

21. Дерматологические композиции по п.20, где, если указанная композиция находится в форме гидрофильного геля, эксципиенты выбирают из глицерина, амидопропиленгликоля, силиката магния и силиката алюминия; и если указанная композиция находится в форме гидрофильного крема, эксципиенты выбирают из поверхностно-активных веществ и эмульгаторов, включающих, например, вазелин, жидкий парафин, стеариловый спирт, стеарат полиэтиленгликоля, карбоксиполиметилен и натриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты.

22. Применение нанокристаллических соединений по одному из пп.1-14 или 18 для получения лекарственного средства, обладающего антибактериальной и/или антивирусной активностью.

23. Применение нанокристаллических соединений по любому из пп.1-14 или 18 в качестве антибактериальных и/или антивирусных средств для покрытий для интерьеров зданий, элементов фурнитуры, стеклянных поверхностей и рабочих комнат и для фильтров для очистки воздуха или воды.

24. Способ регенерации нанокристаллических соединений по любому из пп.1-14 или 18, включающий стадию контактирования указанных нанокристаллических соединений с раствором соли серебра (I) или раствором соли меди (II).

25. Дерматологические композиции, включающие, по меньшей мере, одно нанокристаллическое соединение формулы (I) по п.1 вместе с фармацевтически или косметологически приемлемыми эксципиентами.

26. Дерматологические композиции по п.25, причем указанные композиции находятся в форме геля или крема.

27. Дерматологические композиции по п.26, где, если указанные композиции находятся в форме гидрофильного геля, эксципиенты выбирают из глицерина, амидопропиленгликоля, силиката магния и силиката алюминия; и если указанные композиции находятся в форме гидрофильного крема, эксципиенты выбирают из поверхностно-активных веществ и эмульгаторов, включающих, например, вазелин, жидкий парафин, стеариловый спирт, стеарат полиэтиленгликоля, карбоксиполиметилен и натриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2404988

patent-2404988.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс C07F15/00 Соединения, содержащие элементы VIII группы периодической системы Менделеева

Патенты РФ в классе C07F15/00:
способ получения тонкодисперсной жидкой формы фталоцианинового катализатора демеркаптанизации нефти и газоконденсата -  патент 2529492 (27.09.2014)
способ получения трифторацетата палладия -  патент 2529036 (27.09.2014)
способ получения гетероаннулярных 1,1'-бис-(диметилалкоксисилил)ферроценов -  патент 2524692 (10.08.2014)
способ получения бета-дикетоната или бета-кетоимината палладия (ii) -  патент 2513021 (20.04.2014)
способ получения (ацетилацетонато)(циклооктадиен)палладия тетрафторбората -  патент 2508293 (27.02.2014)
способ получения бета-кетоиминатов палладия -  патент 2506268 (10.02.2014)
способ получения ацетилацетонатов металлов платиновой группы -  патент 2495880 (20.10.2013)
комплексное соединение самонамагничивающегося металла с саленом -  патент 2495045 (10.10.2013)
моноядерные динитрозильные комплексы железа, способ получения моноядерных динитрозильных комплексов железа, донор монооксида азота, применение моноядерного динитрозильного комплекса железа в качестве противоопухолевого лекарственного средства -  патент 2494104 (27.09.2013)
краситель, содержащий закрепляющую группу в молекулярной структуре -  патент 2490746 (20.08.2013)

Класс C07F5/02 соединения бора 

Патенты РФ в классе C07F5/02:
способ региоселективного синтеза моногалогенпроизводных 1,2-, 1,7-, 1,12-дикарба-клозо-додекаборанов(12) -  патент 2521592 (27.06.2014)
способ получения 7,8(7,9)-додекагидродикарба-нидо-ундекаборатов алкиламмония -  патент 2517439 (27.05.2014)
способ получения (ацетилацетонато)(циклооктадиен)палладия тетрафторбората -  патент 2508293 (27.02.2014)
способ получения 1-бром-3-алкилбороланов -  патент 2507208 (20.02.2014)
способ получения 1-хлор-2,3-диалкилборациклопент-2-енов -  патент 2507207 (20.02.2014)
способ определения пиридина в воздухе -  патент 2499249 (20.11.2013)
ингибиторы гидролаз амидов жирных кислот -  патент 2492174 (10.09.2013)
способ получения 1,2-бис(гидроксиметил)-о-карборана -  патент 2486191 (27.06.2013)
аналоги бензохинонсодержащих ансамицинов (варианты), способ их получения, фармацевтическая композиция (варианты) и способ лечения рака (варианты) -  патент 2484086 (10.06.2013)
способ получения 1-фтор-2,3-диалкилбороциклопент-2-енов -  патент 2478641 (10.04.2013)

Класс C07F1/08 соединения меди 

Патенты РФ в классе C07F1/08:
способ получения координационных соединений меди (ii) с 5,5-диметил-1,3-циклогександионом -  патент 2493161 (20.09.2013)
карборанилпорферины и их применение -  патент 2477161 (10.03.2013)
ингибиторы теломеразы и способ их получения -  патент 2468030 (27.11.2012)
металлокомплексы тетра-4-[(4'-карбокси)фениламино]фталоцианина -  патент 2463324 (10.10.2012)
конъюгаты rgd-пептидов и фотосенсибилизаторов порфирина или (бактерио)хлорофилла и их применение -  патент 2450018 (10.05.2012)
способ получения бета-дикетоната палладия (ii) или меди (ii) -  патент 2433114 (10.11.2011)
способ получения комплексных растворов ацетиленидов меди -  патент 2429239 (20.09.2011)
способ получения диацетата-ди- -капролактамата меди -  патент 2425048 (27.07.2011)
1-ацетил-5,10-диокси-5,10-дигидро-2н-антра[2,3-d][1,2,3]триазол-7,8-дикарбоновая кислота -  патент 2421450 (20.06.2011)
биядерные координационные соединения биологически активных d-элементов с алифатическими тиолами как средства повышения эффективности лекарственных препаратов -  патент 2417999 (10.05.2011)

Класс C07F1/10 соединения серебра 

Класс B22F1/02 включающая покрытие порошка

Патенты РФ в классе B22F1/02:
способ получения модифицированных наночастиц железа -  патент 2513332 (20.04.2014)
порошковая ферромагнитная композиция и способ ее получения -  патент 2510993 (10.04.2014)
смазка для композиций порошковой металлургии -  патент 2510707 (10.04.2014)
способ получения нанопорошков оксида цинка с поверхностным модифицированием для использования в строительных герметиках -  патент 2505379 (27.01.2014)
устройство для нанесения покрытий на порошки -  патент 2486990 (10.07.2013)
способ получения полимерного нанокомпозиционного материала -  патент 2477763 (20.03.2013)
стабилизированный порошок металлического лития для литий-ионного применения, состав и способ -  патент 2467829 (27.11.2012)
плазменная обработка поверхности с использованием диэлектрических барьерных разрядов -  патент 2462534 (27.09.2012)
способ получения композиционного порошкового материала системы металл - керамика износостойкого класса -  патент 2460815 (10.09.2012)
способ нанесения медного покрытия на частицы порошка гидрида титана -  патент 2459685 (27.08.2012)

Класс A61K31/295  металлы группы железа

Патенты РФ в классе A61K31/295:
средство против гипоксии миокарда -  патент 2522953 (20.07.2014)
способ лечения деструктивных форм хронического периодонтита -  патент 2510271 (27.03.2014)
составы, содержащие триазиноны и железо -  патент 2506081 (10.02.2014)
способ эндоскопического гемостаза при желудочно-дуоденальных кровотечениях -  патент 2498800 (20.11.2013)
комплексное соединение самонамагничивающегося металла с саленом -  патент 2495045 (10.10.2013)
моноядерные динитрозильные комплексы железа, способ получения моноядерных динитрозильных комплексов железа, донор монооксида азота, применение моноядерного динитрозильного комплекса железа в качестве противоопухолевого лекарственного средства -  патент 2494104 (27.09.2013)
способ нормализации активности 2 антиплазмина у новорожденных телят с железодефицитной анемией -  патент 2480205 (27.04.2013)
способ получения тетра(1-винилимидазол)кобальтдихлорида -  патент 2473553 (27.01.2013)
способ нормализации спонтанной агрегации эритроцитов у новорожденных поросят с железодефицитной анемией -  патент 2472501 (20.01.2013)
способ нормализации активности антитромбина iii в крови у новорожденных телят с железодефицитной анемией -  патент 2472500 (20.01.2013)

Класс A61K31/30  медь

Патенты РФ в классе A61K31/30:
способ лечения деструктивных форм хронического периодонтита -  патент 2510271 (27.03.2014)
ингибиторы теломеразы и способ их получения -  патент 2468030 (27.11.2012)
палладиево-медные катализаторы гомогенного селективного окисления тиольных групп, комбинация и композиция на их основе и способ терапевтического воздействия -  патент 2451010 (20.05.2012)
средство, обладающее иммунодепрессивной активностью -  патент 2448696 (27.04.2012)
способ коррекции иммунобиохимического гомеостаза глубокосупоросных и подсосных свиноматок, поросят-сосунов -  патент 2393848 (10.07.2010)
способ получения комплексного препарата для профилактики и лечения нарушений обмена веществ, микроэлементозов, повышения резистентности организма животных -  патент 2351323 (10.04.2009)
лекарственное средство, повышающее иммунологическую реактивность -  патент 2349335 (20.03.2009)
средство эндоэкологической коррекции и способ эндоэкологической коррекции, основанный на его применении -  патент 2297843 (27.04.2007)
композиция для профилактики и лечения анемии сельскохозяйственных животных и птицы -  патент 2282441 (27.08.2006)
агенты для кровяного депо для диагностики с помощью ядерного магнитного резонанса -  патент 2250765 (27.04.2005)

Класс A61P17/00 Лекарственные средства для лечения дерматологических заболеваний

Патенты РФ в классе A61P17/00:
способ выбора лечения акне у женщин -  патент 2529789 (27.09.2014)
способ лечения трофических язв -  патент 2528973 (20.09.2014)
новое производное пиразол-3-карбоксамида, обладающее антагонистической активностью в отношении рецептора 5-нт2в -  патент 2528406 (20.09.2014)
ранозаживляющее средство на основе штамма trichoderma harzianum rifai -  патент 2528065 (10.09.2014)
новый агонист бета рецептора тиреоидного гормона -  патент 2527948 (10.09.2014)
композиция внутреннего применения для коррекции гормонального старения кожи -  патент 2527344 (27.08.2014)
лечение инфекции поверхности тела человека или животного -  патент 2527341 (27.08.2014)
мазь доктора рустамова -  патент 2527335 (27.08.2014)
концентрированная гидрогелевая микрокапсульная композиция и перевязочное средство из нее -  патент 2527331 (27.08.2014)
эмульсия "масло-в-воде" мометазона и пропиленгликоля -  патент 2526911 (27.08.2014)


Наверх