средство и способ лечения эндометрита у коров

Формула изобретения

1. Средство для лечения эндометрита у коров, включающее антимикробные действующие вещества и основу, отличающееся тем, что в качестве действующих веществ в средство включены антимикробные препараты пефлоксацин, метронидазол и хлоргексидина биглюконат, а основой является водорастворимое кремнийорганическое соединение - производное глицерина, обладающее трансмукозной активностью, состав которого отвечает формуле (СН₃)₂Si(С₃ Н₇O₃)₂·С₃Н ₈O₃, при соотношении компонентов в средстве, мас.%:

пефлоксацин	0,75-1,0
метронидазол	1,0-1,5
хлоргексидина биглюконат	0,05-0,1
водорастворимое кремнийорганическое
соединение - производное глицерина	до 100.

2. Способ лечения эндометрита у коров, включающий проведение комплексной терапии с внутриматочным введением антимикробных препаратов, отличающийся тем, что в процессе лечения внутриматочно коровам вводят комплексное средство по п.1. с повышенным проникающим эффектом, причем средство вводят внутриматочно 3-5 раз, с интервалом 48 ч, из расчета 50-100 г на одно введение, при этом средство перед применением разводят стерильной дистиллированной водой в соотношении 1:1.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области ветеринарной медицины, в частности к способам и средствам лечения акушерско-гинекологических заболеваний у коров, и может быть использовано как на крупных животноводческих комплексах, так и в фермерских и личных хозяйствах.

Известен «Антибактериальный препарат «Дорин» (варианты), способ лечения мастита и способ лечения эндометрита у животных с его использованием», при котором заболевшим коровам внутриматочно с периодичностью 1 раз в сутки вводят состав, включающий рифамицин, доксициклин в смеси с фармакологически приемлемым растворителем, в дозе 0,2-0,4 мг на 1 кг массы при курсе 1-2 введения (см. Патент РФ № 2142804, А61К 31/65, опубл. 20.12.99, Бюл. № 35).

При хороших результатах лечения этим препаратом, недостатком такого способа лечения является использование в препарате сильнодействующих антибиотиков, что может приводить к выбраковке молока и к потере части продукции, кроме того, такая форма водного раствора затрудняет проникновение действующих веществ средства в ткани животного.

Известен также препарат энроцид, включающий энрофлоксацин, диметилсульфоксид и дистиллированную воду, применяемый для лечения и профилактики послеродовых, гинекологических заболеваний у коров и свиноматок. Энроцид применяют внутриматочно с помощью шприца Жане коровам в дозе 100 мл не более 5 раз, через 48 часов в комплексе с другими лекарственными средствами (см. Наставление по применению препарата Энроцид ЗАО НПП «Агрофарм». Воронеж, 2003 г. № ПВР-2-0.31215).

К недостаткам препарата следует отнести его действующий моносостав, что может ограничивать спектр его действия при лечении животных, при этом диметилсульфоксид, повышающий всасываемость препарата, имеет некоторую токсичность, неприятный запах и может вызывать аллергические реакции у животных и обслуживающего персонала.

Задачей изобретения является разработка средства широкого спектра действия для внутриматочного введения и способа его применения для лечения эндометрита у коров, имеющего не только повышенную проникающую способность в ткани животного при внутриматочном введении, не вызывающего аллергических реакций у животных и обслуживающего персонала, но и с повышенной адгезией к тканям животного, обеспечивающего в процессе комплексной терапии пролонгированное действие средства при высоком качестве лечения и низких затратах на изготовление и применение средства.

Задача решается тем, что предложено и клинически апробировано в лабораторных и производственных условиях средство и способ лечения острого и хронического эндометрита у коров с использованием для осуществления способа в процессе комплексной терапии внутриматочного введения нового антимикробного средства, содержащего пефлоксацин, метронидазол и хлоргексидина биглюконат, а в качестве основы средства использовано водорастворимое кремнийорганическое производное глицерина, обладающее трансмукозной активностью, состав которого отвечает формуле (CH₃)₂Si(C₃ H₇O₃)₂·С₃Н ₈О₃, при соотношении компонентов в средстве, мас.%:

пефлоксацин -	0,75÷1,0
метронидазол -	1,0÷1,5
хлоргексидина биглюконат -	0,05÷0,1
водорастворимое кремнийорганическое соединение - производное глицерина -	до 100.

По предложенному способу введение средства проводят в процессе комплексной терапии внутриматочно 3-5 раз, с интервалом 48 часов, из расчета 50-100 г на одно введение при помощи шприца Жане и полистироловой пипетки для искусственного осеменения, при этом перед введением средство разводят стерильной дистиллированной водой в соотношении 1:1.

Динамическая вязкость водорастворимого кремнийорганического производного глицерина, (CH₃)₂Si(C₃H₇O ₃)₂·С₃Н₈О₃ , равна 18,0 Па·сек (20±0,5°С), определение проводилось на ротационном вискозиметре Viscotester 6. Кинематическая вязкость 50%-ного раствора (композиции) составляет 8,88 сантистокс (мм ²/с), определяли на вискозиметре Уббелоде с диаметром капилляра 0,86 мм (ошибка определения ±1%).

Соотношение основных действующих компонентов средства подобрано опытным путем на основе аналитического обзора и производственного опыта авторов, как способствующее получению стабильного не расслаивающегося состава, удобного для внутриматочного введения с достаточным сроком использования и практически доказанным высоким лечебным эффектом.

Выбор набора противомикробных препаратов основан на подавлении максимально широкого спектра болезнетворных микроорганизмов, включая аэробные грамположительные бактерии, аэробные грамотрицательные бактерии, анаэробные бактерии (споро- и не спорообразующие), простейшие.

Хлоргексидин биглюконат - 1,6-ди-(пара-хлорфенилгуанидо)-гексан -является одним из наиболее активных местных антисептических средств. Оказывает быстрое и сильное бактерицидное действие на грамположительные и грамотрицательные бактерии. В зависимости от используемой концентрации проявляет в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий как бактериостатическое, так и бактерицидное действие. Бактериостатическое действие проявляется в концентрации 0,01% и менее; бактерицидное - в концентрации более 0,01%. Фунгицидное действие - при концентрации 0,05%. Вирулицидное действие проявляется при концентрации 0,01-1,0% (www.remedium.ru/drugs/).

В предложенном средстве в качестве гидрофильной основы используют водорастворимое кремнийорганическое производное глицерина, состав которого отвечает формуле (СН ₃)₂Si(C₃H₇O₃ )₂·С₃Н₈О₃, которое обладает комплексом положительных свойств: высокой трансмукозной и противоотечной активностью, благоприятно влияет на процессы эпителизации, не токсично, имеет оптимальную вязкость и адгезивные свойства.

Соединение представляет собой прозрачную бесцветную вязкую жидкость, растворимую в воде, спирте, не растворимую в хлороформе и эфире. Получено взаимодействием диметилдиэтоксисилана с глицерином в мольном соотношении 1,00:2,65 при нагревании реакционной массы до 120-130°С, выдержкой при этой температуре не менее 4-х часов при интенсивном перемешивании с последующим удалением образующегося этилового спирта.

Соединение разработано в Институте органического синтеза им. И.Я.Пестовского Уральского отделения Российской академии наук (см. Шадрина Е.В., Хонина Т.Г., Бойко А.А. и др. Синтез и исследование водорастворимых полиолатов кремния и гидрогелей на их основе. Сборник трудов XI молодежной конференции по органической химии. Екатеринбург, 2008 г. - С.221-224).

Водорастворимое кремнийорганическое соединение производное глицерина, (CH₃)₂ Si(C₃H₇O₃)₂·С ₃Н₈О₃, оказывает положительное влияние на морфофункциональное состояние пораженных тканей, способствуя репаративным процессам и улучшению трофики тканей.

В настоящее время в научно-технической и патентной литературе неизвестно внутриматочное антимикробное средство, содержащее в качестве активной проводящей основы водорастворимое кремнийорганическое производное глицерина, состав которого отвечает формуле (СН ₃)₂Si(C₃H₇O₃ )₂·С₃Н₈О₃; а также характеризуемое совокупностью предлагаемых компонентов в заявляемых пределах их содержания.

Предлагаемое комплексное средство обладает широким спектром антимикробного действия и высокой способностью стимулировать регенерацию пораженных и поврежденных тканей при осуществлении предложенного способа лечения.

Эффективность предлагаемого средства обусловлена наличием в его составе трех активных компонентов широкого спектра действия: пефлоксацин, метронидазол, хлоргексидина биглюконат и биологически активной основы - водорастворимое кремнийорганическое производное глицерина, состав которого отвечает формуле (СН ₃)₂Si(C₃H₇O₃ )₂·С₃Н₈О₃.

Используемое в предлагаемом способе средство включает в качестве действующих веществ пефлоксацин, метронидазол, хлоргексидина биглюконат, которые являются коммерческими препаратами при лечении различных бактериальных инфекций.

Приготовление комплексного средства проводят путем последовательного механического смешивания компонентов.

После проведения многочисленных лабораторных опытов и исследований на животных разработаны и утверждены временный регламент и наставление на проведение производственных испытаний.

Осуществление способа с предлагаемым средством на основе водорастворимого кремнийорганического соединения - производного глицерина, состав которого отвечает формуле (CH ₃)₂Si(C₃H₇O₃ )₂·С₃Н₈О₃, в виде удобной формы для внутриматочного использования обеспечивает пролонгированное действие активных лекарственных компонентов, входящих в состав средства, наряду с положительным действием эссенциального элемента кремния, входящего в состав средства и способствующего улучшению протекающих в тканях матки репаративных процессов. При этом трансмукозная активность основы позволяет не только использовать малые концентрации активных компонентов в средстве, но и приводит к их более глубокому проникновению в пораженные ткани матки, ускоряя заживление. Все это в целом увеличивает эффективность действия средства и ускорят процесс выздоровления при осуществлении способа лечения, показывая неочевидную эффективность предложенного способа.

Исследования, проведенные авторами, показали хорошую совместимость активных компонентов и основы - водорастворимого кремнийорганического производного глицерина, состав которого отвечает формуле (СН ₃)₂Si(C₃H₇O₃ )₂·С₃Н₈О₃, и позволили выявить пределы их количественного содержания в средстве, обеспечивающие проявление максимального лечебного эффекта. Так, при содержании пефлоксацина менее чем 0,5 мас.% и метронидазола менее чем 0,5 мас.%, а хлоргексидина биглюконата менее чем 0,01 мас.% (хлоргексидин биглюконат в форме 0,05-0,2% раствора) наблюдается замедление проявления терапевтического эффекта. Повышение содержания соединения ряда фторхинолонов более чем 1,0 мас.% и метронидазола более чем 1,0 мас.%, хлоргесидина биглюконата более чем 0,05 мас.% (хлоргексидин биглюконат в форме 0,2% раствора), нецелесообразно, так как при этом возможно возникновение побочных последствий, связанных с нарушением морфофункционального состояния тканей.

Разносторонние производственные испытания средства и способа введения при акушерских и гинекологических заболеваниях коров проведены в сельскохозяйственных организациях Свердловской области.

Первый научно-производственный опыт проведен на молочном комплексе учхоза «Уралец» Уральской ГСХА. На основании результатов гинекологического исследования по принципу аналогов было сформировано две группы коров с послеродовыми эндометритами по 22 головы в каждой.

Схема лечения коров приведена в таблице 1. Базисная терапия включала внутримышечное введение раствора синэстрола (завод ООО «Фармадон»), окситоцина (ЗАО «Мосагроген») и тетрамага (ЗАО «Мосагроген»).

Дополнительно к базисной схеме лечения (базисная терапия) коровам контрольной группы проводили внутриматочное введение противомикробного препарата эндометрол (производства УрНИВИ). Коровам опытной группы в полость матки вводили предложенное средство - противомикробную композицию на основе водорастворимого кремнийорганического производного глицерина.

Таблица 1
Схемы лечения коров при острых эндометритах
Препарат	Способ введения	Доза	Дни курса
Базисная терапия
Раствор синэстрола 2%	внутримышечно	2 мл	1, 2
Окситоцин	внутримышечно	40 ЕД	2, 3, 4, 5
Тетрамаг	внутримышечно	6 мл	1,8
Контрольная группа (дополнительно)
Эндометрол	в полость матки	100 мл	2, 4, 6, 8
Опытная группа (дополнительно)
Средство на основе водорастворимого кремнийорганического производного глицерина (водный раствор в соотношении 1:1)	в полость матки	100 мл	2, 4, 6

За животными обеих групп вели постоянное наблюдение, при этом учитывали кратность введения препаратов, срок лечения, терапевтическую эффективность. После окончания курса проводили повторное гинекологическое исследование. При сохранении клинических признаков заболевания назначали дополнительное введение противомикробных препаратов. Для контроля результатов наряду с клиническими, использовали иммунологические показатели. Для оценки иммунного статуса была использована группа сравнения, в которую были включены 12 голов клинически здоровых животных. Иммунологические исследования проводили на базе лаборатории клинической иммунологии МУ «Клинико-диагностический центр» по стандартным методикам.

Данные гинекологического исследования коров перед началом лечения свидетельствовали о типичном течении заболевания. У животных отмечалось разжижение лохий, причем участки разжижения приобретали сероватый цвет, затем выделение экссудата увеличивалось, он имел слизисто-гнойный характер, без запаха. Повышение общей температуры тела до 39,6-39,8°С отмечено у 13,63% животных, у остальных коров температура тела была равна 39,0-39,5°С. При вагинальном исследовании обнаруживали гиперемию и отечность слизистой оболочки влагалища и влагалищной части шейки матки, наложения экссудата. При ректальном исследовании матка была увеличена, свешивалась в брюшную полость, рукой не обводилась, стенки ее были утолщены, сократимость была слабая или не выявлялась.

Результаты изучения иммунного статуса коров перед началом лечения приведены в таблице 2. Установлено, что у больных с послеродовым эндометритом достоверно повышено содержание в крови лейкоцитов, в сыворотке С-реактивного белка и снижен лизосомально-катионный тест. Эти данные совпадают с результатами клинического исследования и подтверждают наличие у животных воспалительного процесса. Кроме того, у коров с послеродовым гнойно-катаральным эндометритом наблюдается повышенная концентрация в сыворотке иммунных комплексов, что может служить одним из интегральных показателей участия их в формировании патологического процесса.

Состояние фагоцитарного звена иммунитета у коров оценивали по данным спонтанного и индуцированного НСТ-теста (тест восстановления нитросинего тетразолия), который позволяет выявить компоненты, образующиеся только при стимуляции фагоцитов, и поэтому он дает возможность дифференцировать покоящиеся и активированные клетки. Кроме того, НСТ-тест отражает итоговую реакцию одного из ключевых ферментных каскадов, ответственных за эффекторный потенциал фагоцитов, нарушение способности к восстановлению НСТ совпадает с патологией кислородзависимых механизмов бактерицидности, в связи с этим стимулированный НСТ-тест рассматривают как цитохимический критерий готовности к завешенному фагоцитозу.

Показатель спонтанного НСТ-теста у коров с послеродовым гнойно-катаральным эндометритом был снижен 1,47-1,56 раза по сравнению с клинически здоровыми животными. Кроме того, в стимулированном НСТ-тесте ответ был низким, то есть резерв функциональной активности периферических нейтрофилов был нарушен. Результаты изучения иммунного статуса коров с острыми эндометритами позволяют сделать заключение о значительных изменениях в состоянии иммунной системы. Между животными контрольной и опытной группы в исходных иммунологических показателях достоверных различий не выявлено.

Таблица 2
Результаты изучения иммунного статуса животных с послеродовыми гнойно-катаральными эндометритами (исходные данные)
Показатель	Группа сравнения n=12	Контрольная группа n=6	Опытная группа n=6
Лейкоциты,·109/л	6,82±0,34	9,81±0,82*	9,47±1,24*
Лимфоциты,·10 9/л	3,82±0,28	4,43±0,44	4,12±0,56
ЦИК, у.е.	48,6±4,2	115,2±14,9*	112,2±12,8*
НСТ-тест спонтанный, %	19,85±1,88	13,52±1,98*	12,70±2,54*
НСТ-тест индуцированный, %	34,67±2,63	12,51±2,78*	11,24±2,56*
Лизосомально-катионный тест, у.е.	2,82±0,02	1,22±0,02*	1,22±0,02*
С-реактивный белок	6,37±0,4	58,62±3,46**	64,24±3,10**
* - разность с группой сравнения достоверна, Р<0,05; ** - разность с группой сравнения достоверна, Р<0,01

Курс лечения коров с острым послеродовым эндометритом составлял 8-9 дней. После окончания курса проводили повторное гинекологическое исследование. При сохранении клинических признаков заболевания внутриматочное введение противомикробных препаратов продолжали.

При изучении иммунологических показателей через 14 дней после начала лечения установлена тенденция к их нормализации в обеих группах животных, однако уровень лейкоцитов, концентрация в сыворотке иммунных комплексов и С-реактивного белка в группе контрольных животных к этому сроку оставались достоверно выше (таблица 3).

Таблица 3
Результаты изучения иммунного статуса животных с послеродовым гнойно-катаральным эндометритом после лечения
Показатель	Контрольная группа n=6	Опытная группа n=6
Лейкоциты,·109/л	8,47±0,86*	5,81±0,43
Лимфоциты,·109/л	2,68±0,44	2,42±0,43
ЦИК, у.е.	80,6±10,9*	51,0±8,8
НСТ-тест спонтанный, %	16,54±3,78	17,85±2,12
НСТ-тест индуцированный, %	22,54±2,06	24,74±4,48
Лизосомально-катионный тест, у.е.	2,24±0,03	2,56±0,03
С-реактивный белок	22,58±2,42*	14,2±2,12
* - разность с контролем достоверна, Р<0,05

Срок лечения коров опытной группы, которым дополнительно к базисной схеме применяли предложенное средство - противомикробную композицию на основе водорастворимого кремнийорганического производного глицерина, был короче на 5,82 дня по сравнению с контрольными животными. Эффективность лечения, под которой понималось выздоровление с полным восстановлением воспроизводительной способности, в опытной группе была выше на 9,1%.

Продолжительность лечения и его эффективность приведены в таблице 4. При изучении динамики клинических показателей установлено, что к 11-12-му дню лечения у коров опытной группы прекращалось выделение экссудата, при трансректальном исследовании выявлялось, что матка находится в краниальной части тазовой полости, хорошо сокращается при пальпации, имеет упруго-эластичную консистенцию. В то же время, у коров контрольной группы динамика указанных клинических признаков была замедлена. В 40,9% случаев контрольным животным назначались дополнительные введения противомикробного средства.

Таблица 4
Лечебная эффективность средства на основе водорастворимого кремнийорганического производного глицерина при послеродовом эндометрите у коров
Показатель	Контрольная группа n=22	Опытная группа n=22
Срок лечения, дней	17,67±2,3	11,85±1,8*
Эффективность лечения, %	86,36	95,45
* - разность с контролем достоверна, Р<0,05

После выздоровления опытных животных и восстановления у них половой цикличности, проводили осеменение с использованием глубоко замороженной спермы цервикальным способом с ректальной фиксацией шейки матки.

Количественные показатели репродуктивной функции коров приведены в таблице 5.

Таблица 5
Показатели воспроизводительной функции коров
Показатель	Контрольная группа n=19	Опытная группа n=21
Восстановление полового цикла после родов, дней	56,64±2,2	49,85±2,8*
Период от родов до оплодотворения, дней	102,5±7,3	80,5±3,1*
Оплодотворяемость от первого осеменения, %	40,90	47,62
* - разность с контролем достоверна, Р<0,05

Как видно из представленных результатов исследований, применение предложенного способа лечения с использованием средства на основе водорастворимого кремнийорганического производного глицерина при послеродовом эндометрите у коров положительно отражается на показателях репродуктивной функции, при этом достоверно сокращается главный показатель регулярности воспроизводства - период от родов до оплодотворения.

Во втором научно-производственном опыте в крестьянском хозяйстве «Успех» на молочном комплексе была изучена эффективность противомикробного средства на основе водорастворимого кремнийорганического производного глицерина в комплексном лечении коров с хроническим эндометритом. Общее количество животных, включенных в исследование, составило 36 голов. Схема лечения коров приведена в таблице 6.

Таблица 6
Схемы лечения коров при хроническом эндометрите
Препарат	Способ введения	Доза	Дни курса
Базисная терапия
Раствор синэстрола 2%	внутримышечно	2 мл	1, 2
Окситоцин	внутримышечно	40 ЕД	2, 3, 4, 5
Тетрамаг	внутримышечно	6 мл	1, 8
Контрольная группа (дополнительно)
Эндометрол	в полость матки	50 мл	2, 4, 6, 8, 10
Опытная группа (дополнительно)
Средство на основе водорастворимого кремнийорганического производного глицерина (водный раствор в соотношении 1:1)	в полость матки	50 мл	2, 4, 6, 8

В подготовительный период опыта были сформированы опытная и контрольная группы по 18 коров-аналогов с хроническим гнойно-катаральным эндометритом.

Результаты гинекологического исследования показывают, что заболевание у коров проявлялось периодическим, реже постоянным выделением экссудата из половых органов. По характеру экссудат был слизистый, мутный с примесью хлопьев и прожилок гноя, выделение его усиливалось во время лежания, а также после массажа матки через прямую кишку. Слизистая оболочка влагалища и влагалищной части шейки застойно гиперемирована, иногда с точечными кровоизлияниями. Шейка матки приоткрыта, в ее складках и на дне влагалища выявлялся экссудат. При ректальном исследовании рога матки, как правило, были опущены в брюшную полость, увеличены в объеме в 1,5-2,0 раза, сократительная функция была выражена слабо или отсутствовала, стенки утолщены. Срок от родов до начала лечения в среднем по всем животным составил 50,1 дня.

Результаты определения лечебной эффективности способа с использованием противомикробного средства на основе водорастворимого кремнийорганического производного глицерина при хроническом эндометрите у коров приведены в таблице 7.

Из данных таблицы видно, что срок лечения коров в опытной группе был короче на 7,1 дня по сравнению с контрольными животными. Эффективность лечения, оцениваемая нами по восстановлению репродуктивной функции, была выше в опытной группе на 5,54% по сравнению с контрольной.

Таблица 7
Лечебная эффективность средства на основе водорастворимого кремнийорганического производного глицерина при хроническом гнойно-катаральном эндометрите у коров
Показатель	Контрольная группа n=18	Опытная группа n=18
Срок лечения, дней	18,8±2,1	11,7±1,9*
Эффективность лечения, %	83,33	88,89
* - разность с контролем достоверна, Р<0,05

При анализе показателей воспроизводительной функции, представленных в таблице 8, отмечено, что оплодотворяемость после двух осеменений была выше в опытной группе, где она составила 76,47%, тогда как в контрольной группе - только 53,33%. Период от родов до оплодотворения в опытной группе был короче на 29,52 дня, чем в контрольной группе.

Таблица 8
Показатели воспроизводительной функции коров
Показатель	Контрольная группа n=15	Опытная группа n-16
Срок от начала лечения до восстановления половых циклов, дней	41,72±5,16	34,14±4,18
Оплодотворяемость от первого осеменения, %	26,67	31,25
Оплодотворяемость от второго осеменения, %	33,33	37,50
Индекс осеменения	3,24±0,56	2,25±0,48
Период от родов до оплодотворения, дней	129,65±13,89	104,44±7,20*
* - разность с контролем достоверна, Р<0,05

Таким образом, на основании проведенных производственных исследований сделано заключение, что применение предложенного способа с использованием противомикробного средства на основе водорастворимого кремнийорганического производного глицерина в комплексном лечении коров с острым и хроническим эндометритом является эффективным и может быть рекомендовано для широкого использования в ветеринарной медицине.