Поиск патентов
ПАТЕНТНЫЙ ПОИСК В РФ

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии

Классы МПК:C07D213/75 амино- или иминогруппы, ацилированные карбоновой или угольной кислотами или их серо- или азотсодержащими аналогами, например карбаматы
C07D333/38 атомы углерода, связанные тремя связями с гетероатомами (из которых одна может быть с галогеном), например с эфирными или нитрильными группами
C07C225/16 и содержащего шестичленные ароматические кольца
A61K31/095  соединения, содержащие серу, селен или теллур, например тиолы
A61K31/136  имеющие аминогруппу, непосредственно связанную с ароматическим кольцом, например фениламин
A61P31/04 антибактериальные средства
C07C327/56 с атомами азота тиокарбоксамидных групп, связанными с другим гетероатомом
A61K31/4402 замещенные только в положении 2, например фенирамин, бисакодил
A61K31/381  содержащие пятичленные кольца
A61K31/15  оксимы ( >C=N-O-); гидразины ( >N-N< ); гидразоны ( >N-N=)
Автор(ы):, , , , , , ,
Патентообладатель(и):Гинцбург Александр Леонидович (RU),
Зигангирова Наиля Ахатовна (RU),
Зорина Виктория Владимировна (RU),
Токарская Елизавета Александровна (RU),
Тартаковская Дина Игоревна (RU),
Краюшкин Михаил Михайлович (RU),
Яровенко Владимир Николаевич (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2008-09-24
публикация патента:

Изобретение относится к новым биологически активным соединениям формулы I, где значения заместителей R, R1 , R2 и R3 перечислены в формуле изобретения, и могут быть получены способом, включающим взаимодействие соответствующих хлорацетамидов с предварительно приготовленным раствором элементной серы с морфолином или пиперидином, пропускание полученного раствора монотиооксамидов через слой сорбента и последующее взаимодействие монотиооксамидов с гидразин-гидратом, реакцию полученного соединения с альдегидами в ДМФА при комнатной температуре с последующим осаждением метанолом, дающим хороший выход конечного продукта; полученные соединения обладают высокой эффективностью против патогенных бактерий, характеризуются избирательностью и могут быть использованы для ингибирования секреции III типа у патогенных бактерий. 3 н.п. ф-лы, 8 ил., 1 табл.

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

Рисунки к патенту РФ 2402531

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

Изобретение относится к новым гидразонам тиогидразидов оксаминовых кислот, которые могут быть использованы для подавления патогенных бактерий, в частности воздействовать на систему секреции 3 типа у патогенов.

Проблема антибиотикорезистентности является наиболее острой на данный момент, поскольку отмечено, что ко всем существующим классам антибактериальных препаратов у патогенных бактерий развивается устойчивость в той или иной степени (Сидоренко С.В. Механизмы антибиотикорезистентности / Антибактериальная терапия: Практическое руководство под ред. Страчунского Л.С., Белоусова Ю.Б., Козлова С.Н. - 2000. - М.: Фарммединфо. - 190 с.; Страчунский Л. С., Богданович Т.М. Состояние антибиотикорезистентности в России / Антибактериальная терапия:

Практическое руководство под ред. Страчунского Л.С., Белоусова Ю.Б., Козлова С.Н. - 2000. - М.: Фарммединфо. - 190 с.; Фурлетова Н.М., Карп В.П., Мирская М.А., Никитин А.П. Мониторинг спектра и чувствительности выделяемой микрофлоры в стационаре - МКО-10, 2002; Clatworthy A.E., Pierson E., Hung D.T. Targeting virulence: a new paradigm for antimicrobial therapy - Nature Chemical Biology - 2007. - V.3. - N9. - P.541-548).

Так, например, к группе биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 -лактамных антибиотиков на данный момент описано более 200 ферментов биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 -лактамаз, инактивирующих путем гидролиза одну из связей биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 -лактамного кольца. Согласно статистике такие ферменты встречаются у 60-80% штаммов стафилококков, 30-40% - Escherihia coli, 20% у возбудителей тяжелых нозокомиальных инфекций Enterobacter spp., в результате чего существенно снизилась эффективность цефалоспоринов III и, в последнее время, IV поколений.

Практически у всех грамотрицательных бактерий с течением времени развивается еще один механизм устойчивости к данной группе препаратов: снижение проницаемости внешних структур, в результате мутаций, приводящих к полной или частичной утрате поринов, белков, участвующих в осуществлении динамической связи между бактериями и окружающей средой, в том числе поддерживают структурную целостность клетки, регулируют транспорт питательных веществ и бактерицидных агентов).

Аналогичная ситуация складывается с чувствительностью патогенов к аминогликозидам. Описано более 50 ферментов, инактивирующих данную группу антибиотиков.

Кроме того, используемые в клинической практике антибиотики в большинстве своем эффективно работают против острых инфекций, но не эффективны к хронической стадии инфекционного процесса. Это объясняется тем, что острая и хроническая инфекции - две разные формы взаимодействия патогена и организма хозяина, при которых реализуются две различные стратегии, заложенные в геноме патогена.

В отличие от острой инфекции хроническая инфекция это более сложная система взаимодействия, эволюционно выработанная адаптация, направленная на длительное выживание.

В уровне техники известны соединения, воздействующие на вирулентные свойства патогенных бактерий. Эти соединения подавляют секреторные функции некоторых грамотрицательных бактерий, таких как Yersinia pseudotuberculosis, Salmonella enterica, Pseudomonas aeruginosa, патогенных штаммов E.coli, Chlamydia spp и не вызывают развитие устойчивости к препаратам на их основе. К таким соединениям можно отнести гидразоны, полученные на основе гидразидов бензойных и пиридинкарбоновых кислот (FEBS Letters, 581, (2007) 587-595; Infection and Immunity, 2005, p.3104-3114, Vol.73, No. 5; PNAS, 26, 2006 vol. 103, No.39, 14566-14571)

Однако недостатками этих соединений являются недостаточная растворимость в органических растворителях и значительная токсичность.

Задачей изобретения является создание соединений обладающих хорошей растворимостью в органических растворителях, не являющихся токсичными для нормальной микрофлоры и клеток хозяина, кроме того, к которым не будет развиваться резистентность.

Технический результат, достигаемый заявленной группы изобретений, заключается в получении биологически активных соединений с хорошим выходом, обладающих высокой эффективностью против патогенных бактерий, в том числе при лечении хронических болезней, вызванных патогенными бактериями, и характеризующихся избирательностью, т.е. воздействием только на патогенные бактерии. При этом полученные соединения нетоксичны для клеток человека и животных, они хорошо растворимы в органических растворителях, а также характеризуются специфической активностью в условиях биологических систем воздействия на патогенные бактерии и не вызывают развития резистентности патогенных бактерий.

Технический результат обеспечивается за счет того, что биологически активные соединения представляют собой замещенные производные гидразонов тиогидразидов оксаминовых кислот общей формулы (I):

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

где R, R1 представляю собой Н; незамещенные алкил С1-С5; пиридинил; фенил, замещенный СН 3, Hal, CF3; группу биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 где Х представляет собой S, замещенную алкилом С1-С5, СООН, COOR4;

или группу биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 ; R2, R3 представляют собой Н; незамещенный алкил С1-С5; 2-гидроксициклогексил; фенил, замещенный Hal, NO 2, ОН, OR4, a R4 представляет собой незамещенный алкил С1-С4 за исключением соединений

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , и биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

Способ получения заявленных соединений включает взаимодействие соответствующих хлорацетамидов с предварительно приготовленным раствором элементной серы с морфолином или пиперидином, пропускание полученного раствора монотиооксамидов через слой сорбента, последующее взаимодействие монотиооксамидов с гидразингидратом и реакцию полученного соединения с альдегидами в ДМФА при комнатной температуре с последующим осаждением метанолом.

Способ ингибирования секреции III типа у патогенных бактерий, заключающийся в воздействии на бактерии эффективным количеством соединения по п.1. (I).

Данная система секреции III типа выявлена у таксономически далеких микроорганизмов (патогенных бактерий) - возбудителей особо опасных инфекций, таких как Yersinia, Chlamydia, Brucella, Salmonella, Shigella, Hlicobacter и др. Эта система более консервативна и в гораздо меньшей степени подвержена мутациям, как одному из факторов развития антибиотикорезистентности. Следовательно, ингибиторы секреции III типа у патогенов будут оказывать направленное воздействие на механизмы, обуславливающие процесс хронизации инфекции. Кроме того, система III секреции присутствует только у патогенных бактерий, следовательно, ее ингибиторы не токсичны для нормальной микрофлоры человека и клеток хозяина, т.е. характеризуются избирательностью.

Способ получения заявленных соединений включает взаимодействие соответствующих хлорацетамидов с предварительно приготовленным раствором элементной серы с морфолином или пиперидином, пропускание полученного раствора монотиооксамидов через слой сорбента, последующее взаимодействие монотиооксамидов с гидразингидратом, и реакцию полученного соединения с с альдегидами в ДМФА при комнатной температуре с последующим осаждением метанолом по следующей схеме:

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

Конкретные примеры выполнения группы изобретений.

Пример 1

2-[N'-(2-Гидрокси-бензилиден)-гидразино]-N-пиридин-2-ил-2-тиоксоацетамид (4) (LHC-680).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

N-хлорацетил-2-аминопиридин (1).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

К раствору 9,4 г (0,1 моль) 2-аминопиридина в 100 мл ДМФА добавляют при охлаждении 8,75 мл (0,11 моль) хлорацетилхлорида, следя за тем, чтобы температура не превышала 20°С. После окончания прибавления раствор перемешивают при комнатной температуре еще 2 часа. Затем выливают реакционную смесь в 600 мл холодной воды и отфильтровывают осадок. Промывают его на фильтре водой и сушат на воздухе.

Выход: N-хлорацетил-2-аминопиридина (1) 11,9 г, (70%). Т. пл. 140-141°С. ЯМР 1H DMSO d6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д., J, Гц): 7,41 (м, 1Н, аром); 8,21 (м, 1Н, аром); 8,07 (м, 1Н, аром); 8,63 (м, 1Н, аром); 4,20 (с, 2Н, CH2 Cl); 10,57 (с, 1Н, NH). Найдено (%): С 49.20, Н 4.03, N 16.21. Вычислено (%): С 49.28, Н 4.14, N 16.42. Масс-спектр, m/z: 170.

N(S)-морфолино-N(O)-(пиридино)-тиоксамид (2).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

Готовят раствор 4,8 г (0,15 моль) элементной серы в 50 мл ДМФА и добавляют 5 мл (0,06 моль) морфолина. Полученную смесь перемешивают 20-30 минут и при охлаждении добавляют к ней раствор 8,5 г (0,05 моль) хлорацетамида (1) в минимальном количестве ДМФА, следя за тем, чтобы температура не превышала 15°С. Реакционную смесь перемешивают в течение 3-5 часов (контроль по ТСХ). После окончания реакции реакционную смесь пропускают через небольшой слой сорбента, в качестве которого может быть использован силикагель, промывают его 50 мл ДМФА, полученный раствор выливают в воду, экстрагируют этилацетатом, промывают органический слой водой и пропускают через небольшую колонку с силикагелем (элюент-этилацетат). Упаривают этилацетат на роторном испарителе.

Выход: N(S)-морфолино-N(O)-(пиридино)-тиоксамид (2) 8,5 г, (68%). Т. пл. 170-172°С. ЯМР 1H DMSO d6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д, J, Гц): 7,41 (м, 1Н, аром); 8,21 (м, 1Н, аром); 8,07 (м, 1Н, аром); 8,63 (м, 1Н, аром); 3,38 (м, 2Н, CH2 морф); 4,12 (м, 2Н, СН2 морф); 10,59 (с, 1Н, NH). Найдено (%): С 52.42, Н 5.10, N 16.55. Вычислено (%): С 52.57, Н 5.21, N 16.72. Масс-спектр, m/z: 251.

2-Гидразино-N-пиридин-2-ил-2-тиоксо-ацетамид (3).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

Растворяют 2,5 г (0,01 моль) монотиоксамида (2) в 15 мл ДМФА. При охлаждении и перемешивании добавляют 1 мл (0,02 моль) гидразин-гидрата. Раствор перемешивают при комнатной температуре еще 2 часа. Затем выливают в воду и подкисляют разбавленной соляной кислотой до рН 7. Отфильтровывают осадок и сушат его на воздухе.

Выход: 2-гидразино-N-пиридин-2-ил-2-тиоксо-ацетамида (3) 1,2 г, (60%). Т. пл. 164-165°С. ЯМР 1H DMSO d6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д., J, Гц): 7,41 (м, 1Н, аром); 8,21 (м, 1Н, аром); 8,07 (м, 1Н, аром); 8,63 (м, 1Н, аром); 10,59 (с, 1Н, NH). Найдено (%): С 42.76, Н 4.01, N 28.44. Вычислено (%): С 42.85, Н 4.11, N 28.55. Масс-спектр, m/z: 196.

2-[N'-(2-Гидрокси-бензилиден)-гидразино]-N-пиридин-2-ил-2-тиоксо-ацетамид (4) (LHC-680).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

К 196 мг (10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (3) в 1-2 мл ДМФА добавляют 140 мг (11 ммоль) салицилового альдегида в 1 мл ДМФА. Реакционную смесь оставляют на сутки при комнатной температуре, затем добавляют 3 мл метанола, выпавший осадок отфильтровывают и промывают метанолом.

Выход: 2-[N'-(2-гидрокси-бензилиден)-гидразино]-N-пиридин-2-ил-2-тиоксо-ацетамида (4) 150 мг, (50%). Т. пл. 204-205°С. ЯМР 1H DMSO d6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д., J, Гц): 7,02 (м, 4Н, аром); 7,41 (м, 1Н, аром); 8,21 (м, 1Н, аром); 8,07 (м, 1Н, аром); 8,63 (м, 1Н, аром); 10,59 (с, 1Н, NH); 11,92 (с, 1Н, NH т. амид); 12,76 (с, 1Н, ОН фен.). Найдено (%): С 55.79, Н 4.12, N 18.66. Вычислено (%): С 55.99, Н 4.03, N 18.65. Масс-спектр, m/z: 300.

Пример 2.

2[N'-(3,5-Дибромо-2-гидрокси-бензилиден)-гидразино]-N-пиридин-2-ил-2-тиоксо-ацетамид (5) (LHC-679).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

К 196 мг (10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (3) (см. пример 1) в 1-2 мл ДМФА добавляют 310 мг (11 ммоль) 3,5-дибром-2-гидроксибензальдегида в 1 мл ДМФА. Реакционную смесь оставляют на сутки при комнатной температуре, затем добавляют 3 мл метанола, выпавший осадок отфильтровывают и промывают метанолом.

Выход: 2-[N'-(3,5-дибромо-2-гидрокси-бензилиден)-гидразино]-N-пиридин-2-ил-2-тиоксо-ацетамида (5) 360 мг, (80 %). Т. пл. 321-322°С (с разл.). ЯМР 1H DMSOd6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д., J, Гц): 7,41 (м, 1Н, аром); 8,21 (м, 1Н, аром); 8,07 (м, 1Н, аром); 8,63 (м, 1Н, аром); 7.02 (с, 1Н аром); 7,3 (с, 1Н, аром); 8,65 (с, 1Н, СН гидразон); 11,29 (с, 1Н NH амид); 11,92 (с, 1Н, NH т. амид); 12,76 (с, 1Н, ОН фен.). Найдено (%): С 36.58, Н 2.01, N 12.34. Вычислено (%): С 36.70, Н 2.20, N 12.23. Масс-спектр, m/z: 458.

Пример 3.

2-[N'-(3,5-Дихлор-2-гидрокси-бензилиден)-гидразино]-N-пиридин-2-ил-2-тиоксо-ацетамид (6).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

К 196 мг (10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (3) в 1-2 мл ДМФА добавляют 209 мг (11 ммоль) 3,5-дихлор-2-гидроксибензальдегида в 1 мл ДМФА. Реакционную смесь оставляют на сутки при комнатной температуре, затем добавляют 3 мл метанола, выпавший осадок отфильтровывают и промывают метанолом.

Выход: 2-[N'-(3,5-дихлор-2-гидрокси-бензилиден)-гидразино]-N-пиридин-2-ил-2-тиоксо-ацетамида (6) 309 мг, (84%). Т. пл. 314-315°С (с разл.). ЯМР 1H DMSOd6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д, J, Гц): 7,41 (м, 1Н, аром); 8,20 (м, 1Н, аром); 8,06 (м, 1Н, аром); 8,64 (м, 1Н, аром); 7.01 (с, 1Н аром); 7,3 (с, 1Н, аром); 8,65 (с, 1Н, СН гидразон); 11,29 (с, 1Н, NH амид); 11,92 (с, 1Н, NH т.амид); 12,74 (с, 1Н, ОН фен.). Найдено (%): С 45.44, Н 2.62, N 15.06. Вычислено (%): С 45.54, Н 2.73, N 15.17. Масс-спектр, m/z: 369.

Пример 4.

2-[N'-(2-Гидрокси-3-этокси-бензилиден)-гидразино]-N-пиридин-2-ил-2-тиоксо-ацетамид (7) (LHC-681).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

К 196 мг (10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (3) в 1-2 мл ДМФА добавляют 182 мг (11 ммоль) 3-этокси-2-гидроксибензальдегида в 1 мл ДМФА. Реакционную смесь оставляют на сутки при комнатной температуре, затем добавляют 3 мл метанола, выпавший осадок отфильтровывают и промывают метанолом.

Выход: 2-[N'-(2-гидрокси-3-этокси-бензилиден)-гидразино]-N-пиридин-2-ил-2-тиоксо-ацетамида (7) 240 мг, (70%). Т. пл. 194-195°С. ЯМР 1H DMSO d6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д., J, Гц): 1.32 (м, 3Н, СН3); 2,81 (м, 2Н, CH2); 7,41 (м, 1Н, аром); 8,21 (м, 1Н, аром); 8,07 (м, 1Н, аром); 8,63 (м, 1Н, аром); 7.01 (м, 1Н аром); 7,10 (м, 1Н, аром); 7,02 (с, СН аром); 8,6 (с, 1Н, СН гидразон); 10,88 (с, 1Н, NH амид); 11,91 (с, 1Н, NH т. амид). 12,70 (с, 1Н, ОН фен.). Найдено (%): С 55.72, Н, 4.59, N 16.15. Вычислено (%): С 55.80, Н, 4.68, N 16.27. Масс-спектр, m/z: 344.

Пример 5.

2-[N'-(2-Гидрокси-бензилиден)-гидразино]-2-тиоксо-N-о-толил-ацетамид (8).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

N-хлорацетил-2-метиланилин (9).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

К раствору 10,7 г (0,1 моль) 2-метиланилина в 100 мл ДМФА добавляют при охлаждении 8,75 мл (0,11 моль) хлорацетилхлорида, следя за тем, чтобы температура не превышала 20°С. После окончания прибавления раствор перемешивают при комнатной температуре еще 2 часа. Затем реакционную смесь выливают в 600 мл холодной воды и отфильтровывают осадок. Промывают его на фильтре водой и сушат на воздухе.

Выход: N-хлорацетил-2-метиланилина (9) 15,5 г, (85%). Т. пл. 124-126°С. ЯМР 1H DMSO d6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д, J, Гц): 1,74 (с, 3Н, СН3); 7,41 (м, 1Н, аром); 7,21 (м, 1Н, аром); 7,07 (м, 1Н, аром); 7,63 (м, 1Н, аром); 4,20 (с, 2Н, CH2Cl); 10,57 (с, 1Н, NH). Найдено (%) 58.76, Н 5.37, N 7.54. Вычислено (%): С 58.87, Н 5.49, N 7.63. Масс-спектр, m/z: 183.

2-Гидразино-2-тиоксо-N-о-толил-ацетамид (10).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

Метод А. Готовят раствор 0,15 моль элементной серы в 50 мл ДМФА и добавляют 5 мл (0,06 моль) морфолина. Полученную смесь перемешивают 20-30 минут и добавляют к ней раствор 9,15 г (0,05 моль) хлорацетамида (9) в минимальном количестве ДМФА, при охлаждении, следя за тем, чтобы температура не превышала 15°С. Полученную смесь перемешивают 3-4 часа (контроль по ТСХ). После окончания реакции реакционную смесь пропускают через слой силикагеля. К полученному раствору добавляют 6 мл (0,12 моль) гидразин-гидрата и перемешивают при комнатной температуре 2 часа. Затем раствор выливают в воду и подкисляют разбавленной соляной кислотой до рН 7. Отфильтровывают осадок и сушат его на воздухе.

Выход; 2-гидразино-2-тиоксо-N-о-толил-ацетамида (10) 10,4 г (60%). Т. пл. 154-155°С. ЯМР 1H DMSO d6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д., J, Гц): 1,74 (с, 3Н, СН3); 7,41 (м, 1Н, аром); 7,21 (м, 1Н, аром); 7,07 (м, 1Н, аром); 7,63 (м, 1Н, аром); 10,59 (с, 1Н, NH). Найдено: С 51.54, Н 5.18, N 20.02. Вычислено: С 51.66, Н 5.30, N 20.08. Масс-спектр, m/z: 209.

Метод Б.

Готовят раствор 4,8 г (0,15 моль) элементной серы в 50 мл ДМФА и добавляют 5 мл (0,06 моль) пиперидина. Полученную смесь перемешивают 20-30 минут и, при охлаждении, добавляют к ней раствор 8,5 г (0,05 моль) хлорацетамида (9) в минимальном количестве ДМФА, следя за тем, чтобы температура не превышала 10°С. Полученную смесь перемешивают 3-5 часов (контроль по ТСХ). После окончания реакции реакционную смесь пропускают через небольшой слой силикагеля. К полученному раствору при охлаждении и перемешивании добавляют 5 мл (0,1 моль) гидразин-гидрата. Раствор перемешивают при комнатной температуре еще 2 часа. Затем выливают в воду и подкисляют разбавленной соляной кислотой до рН 6. Отфильтровывают осадок и сушат его на воздухе.

Выход: 2-гидразино-2-тиоксо-N-о-толил-ацетамида (10) 6,0 г, (62%). Т. пл. 154-155°С. ЯМР 1H DMSOd6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д., J, Гц): 1,74 (с, 3Н, СН3); 7,41 (м, 1Н, аром); 7,21 (м, 1Н, аром); 7,07 (м, 1Н, аром); 7,63 (м, 1Н, аром); 10,59 (с, 1Н, NH). Найдено: С 51.54, Н 5.18, N 20,19. Вычислено: С 51.66, Н 5.30, N 20.08. Масс-спектр, m/z: 209.

2-[N'-(2-Гидрокси-бензилиден)-гидразино]-2-тиоксо-N-о-толил-ацетамид (8).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

К 209 мг (10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (10) в 1-2 мл ДМФА добавляют 140 мг (11 ммоль) салицилового альдегида в 1 мл ДМФА. Реакционную смесь оставляют на сутки при комнатной температуре, затем добавляют 3 мл метанола. Выпавший осадок отфильтровывают и промывают метанолом.

Выход: 2-[N'-(2-гидрокси-бензилиден)-гидразино]-2-тиоксо-N-о-толил-ацетамида (8) 156 мг, (50%). Т. пл. 215-217°С. ЯМР 1H DMSO d6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д., J, Гц): 1,74 (с, 3Н, СН3); 7,02 (м, 4Н, аром); 7,41 (м, 1Н, аром); 7,21 (м, 1Н, аром); 7,07 (м, 1Н, аром); 7,63 (м, 1Н, аром); 10,59 (с, 1Н, NH); 11,92 (с, 1Н, NH т.амид); 12,76; (с, 1Н, ОН фен.). Найдено: С 61.23, Н 4.71, N 13.30. Вычислено: С 61.32, Н 4.82, N 13.41. Масс-спектр, m/z: 313.

Пример 6.

N-(4-Фтор-фенил)-2-[N'-(2-гидрокси-бензилиден)-гидразино]-2-тиоксо-ацетамид (11).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

N-хлорацетил-4-фторанилин (12).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

К раствору 11,1 г (0,1 моль) 4-фторанилина в 100 мл ДМФА добавляют при охлаждении 8,75 мл (0,11 моль) хлорацетилхлорида, следя за тем, чтобы температура не превышала 20°С. После окончания добавления хлорацетилхлорида раствор перемешивают при комнатной температуре еще 2 часа. Затем реакционную смесь выливают в 600 мл холодной воды и отфильтровывают осадок. Промывают его на фильтре водой и сушат на воздухе.

Выход: N-хлорацетил-4-фторанилина (12) 14,96 г (80%). Т. пл. 110-112°С. ЯМР 1Н DMSOd6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д., J, Гц): 7,21 (д, 2Н, аром); 7,07 (д, 2Н, аром); 4,20 (с, 2Н, CH2Cl). Найдено (%): С 51.11, Н 3.63, N 7.36. Вычислено (%): С 51.22, Н 3.76, N 7.47. Масс-спектр, m/z: 187.

N-(4-Фтор-фенил)-2-гидразино-2-тиоксо-ацетамид (13).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

Метод А

Готовят раствор 0,15 моль элементной серы в 50 мл ДМФА и добавляют 0,06 моль морфолина. Полученную смесь перемешивают 20-30 минут и добавляют к ней раствор 9,37 г (0,05 моль) хлорацетамида (12) в минимальном количестве ДМФА, при охлаждении, следя за тем, чтобы температура не превышала 15°С. Полученную смесь перемешивают 3-10 часов (контроль по ТСХ). После окончания реакции реакционную смесь пропускают через слой силикагеля. К полученному раствору добавляют 6 мл (0,12 моль) гидразин-гидрата и перемешивают при комнатной температуре 2 часа. Затем выливают в воду и подкисляют разбавленной соляной кислотой до рН 7. Отфильтровывают осадок и сушат его на воздухе.

Выход: N-(4-фтор-фенил)-2-гидразино-2-тиоксо-ацетамида (13) 6,4 г (60%). Т. пл. 154-155°С. ЯМР 1H DMSO d6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д., J, Гц): 7,21 (д, 2Н, аром); 7,07 (д, 2Н, аром); 10,59 (с, 1Н, NH). Найдено (%): С 51.54, Н 5.18, N 20,00. Вычислено (%): С 45.06, Н 3.78, N 19,71. Масс-спектр, m/z: 213.

Метод Б

Готовят раствор 4,8 г (0,15 моль) элементной серы в 50 мл ДМФА и добавляют 5 мл (0,06 моль) пиперидина. Полученную смесь перемешивают 20-30 минут и, при охлаждении, добавляют к ней раствор 9,37 г (0,05 моль) хлорацетамида (12) в минимальном количестве ДМФА, следя за тем, чтобы температура не превышала 10°С. Полученную смесь перемешивают 3-5 часов (контроль по ТСХ). После окончания реакции реакционную смесь пропускают через небольшой слой силикагеля. К полученному раствору при охлаждении и перемешивании добавляют 5 мл (0,1 моль) гидразин-гидрата. Раствор перемешивают при комнатной температуре еще 2 часа. Затем выливают в воду и подкисляют разбавленной соляной кислотой до рН 6. Далее отфильтровывают осадок и сушат его на воздухе.

Выход: N-(4-фтор-фенил)-2-гидразино-2-тиоксо-ацетамида (13) 6,4 г, (60%). Т. пл. 154-155°С. ЯМР 1H DMSOd6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д., J, Гц): 7,21 (д, 2Н, аром); 7,07 (д, 2Н, аром); 10,59 (с, 1Н, NH). Найдено (%): С 51.54, Н 5.18, N 20,00. Вычислено (%): С 45.06, Н 3.78, N 19,71. Масс-спектр, m/z: 213.

N-(4-Фтор-фенил)-2-[N'-(2-гидрокси-бензилиден)-гидразино]-2-тиоксо-ацетамид (11).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

К 213 мг (10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (13) в 0,5 мл ДМФА добавляют 11 ммоль салицилового альдегида в 1 мл метанола. Реакционную смесь оставляют на сутки при комнатной температуре. Затем к реакционной смеси добавляют 2 мл метанола и охлаждают ее до -5°С. Осадок отфильтровывают и промывают небольшим количеством ледяного метанола.

Выход: N-(4-фтор-фенил)-2-[N'-(2-гидрокси-бензилиден)-гидразино]-2-тиоксо-ацетамида (11) 158 мг, (50%). Т. пл. 215-217°С. ЯМР 1H DMSOd6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д., J, Гц): 1.32 (м, 3Н, СН3); 2,81 (м, 2Н, CH2); 7,21 (д, 2Н, аром); 7,07 (д, 2Н, аром); 7,21 (м, 1Н, аром); 7,07 (м, 1Н, аром); 7,63 (м, 1Н, аром); 10,59 (с, 1Н, NH); 11,92 (с, 1Н, NH т.амид). 12,76 (с, 1Н, ОН фен.). Найдено (%): С 56.05, Н 3.70, N 13.32. Вычислено (%): С 56.77, Н 3.81, N 13.24. Масс-спектр, m/z: 317.

Пример 7.

2-[N'-(2-Гидрокси-бензилиден)-гидразино]-2-тиоксо-N-(4-трифторметил-фенил)-ацетамид (12) (LHC-710).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

N-хлорацетил-2-трифторметиланилин(13).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

К раствору 16,1 г (0,1 моль) 2-трифторметиланилина в 100 мл ДМФА добавляют, при охлаждении, 8,75 мл (0,11 моль) хлорацетилхлорида, следя за тем, чтобы температура не превышала 20°С. После окончания прибавления раствор перемешивают при комнатной температуре еще 2 часа. Затем выливают реакционную смесь в 600 мл холодной воды и отфильтровывают осадок. Далее промывают его на фильтре водой и сушат на воздухе.

Выход: N-хлорацетил-2-трифторметиланилина (13) 20,1 г, (85%). Т. пл. 134-136°С. ЯМР 1H DMSOd6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д., J, Гц): 7,62 (м, 1Н, аром); 7,57 (м, 1Н, аром); 7,35 (м, 1Н, аром); 7,62 (м, 1Н, аром); 4,22 (с, 2Н, CH2 Cl); 10,55 (с, 1Н, NH). Найдено (%): С 45.40, Н 2.86, N 5.78. Вычислено (%): С 45.49, Н 2.97, N 5.89. Масс-спектр, m/z: 237.

2-Гидразино-2-тиоксо-N-(4-трифторметил-фенил)-ацетамид (14).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

Готовят раствор 0,15 моль элементной серы в 50 мл ДМФА и добавляют 5 мл (0,06 моль) морфолина. Полученную смесь перемешивают 20-30 минут и добавляют к ней раствор 11,85 г (0,05 моль) хлорацетамида (13) в минимальном количестве ДМФА, при охлаждении, следя за тем, чтобы температура не превышала 15°С. Полученную смесь перемешивают 3-4 часа (контроль по ТСХ). После окончания реакции, реакционную смесь пропускают через слой силикагеля. К полученному раствору добавляют 6 мл (0,12 моль) гидразин-гидрата и перемешивают при комнатной температуре 2 часа. Затем раствор выливают в воду и подкисляют разбавленной соляной кислотой до рН 7. Отфильтровывают осадок и сушат его на воздухе.

Выход: 2-гидразино-2-тиоксо-N-(4-трифторметил-фенил)-ацетамида (14) 7,89 г, (60%). Т. пл. 163-164°С. ЯМР 1H DMSOd6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д., J, Гц): 7,63 (м, 1Н, аром); 7,58 (м, 1Н, аром); 7,34 (м, 1Н, аром); 7,61 (м, 1Н, аром); 10,59 (с, 1Н, NH). Найдено: С 40.90, Н 3.15, N 15.83. Вычислено: С 41.06, Н 3.06, N 15.96. Масс-спектр, m/z: 263.

2-[N'-(2-Гидрокси-бензилиден)-гидразино]-2-тиоксо-N-(4-трифторметил-фенил)-ацетамид (12).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

К 263 мг (10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (14) в 1-2 мл ДМФА добавляют 140 мг (11 ммоль) салицилового альдегида в 1 мл ДМФА. Реакционную смесь оставляют на сутки при комнатной температуре, затем добавляют 3 мл метанола. Выпавший осадок отфильтровывают и промывают метанолом.

Выход: 2-[N'-(2-гидрокси-бензилиден)-гидразино]-2-тиоксо-N-(4-трифторметил-фенил)-ацетамида (12) 183 мг, (50%). Т. пл. 215-217°С. ЯМР 1H DMSOd6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д., J, Гц): 7,63 (м, 1Н, аром); 7,58 (м, 1Н, аром); 7,34 (м, 1Н, аром); 7,61 (м, 1Н, аром); 7,21 (м, 1Н, аром); 7,07 (м, 1Н, аром); 7,63 (м, 1Н, аром); 10,59 (с, 1Н, NH); 11,93 (с, 1Н, NH т. амид); 12,76 (с, 1Н, ОН фен.). Найдено: С 61.23, Н 4.71, N 13.50. Вычислено: С 52.31, Н 3.29, N 11.44. Масс-спектр, m/z: 367.

Пример 8.

5-Этил-2-[(2-гидрокси-бензилиден-гидразинооксотиоацетил)-амино]-тиофен-3-карбоновой кислоты этиловый эфир (15) (LHC-536).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

N-хлорацетил-3-карбэтокси-3-этил-тиофен (16).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

К раствору 19,9 г (0,1 моль) 2-амино-3-карбэтокси-5-этилтиофена (J. Heterocycl. Chem. Vol.36, (1999), p.333-345) в 100 мл ДМФА добавляют при охлаждении 8,75 мл (0,11 моль) хлорацетилхлорида, следя за тем, чтобы температура не превышала 20°С. После окончания прибавления раствор перемешивают при комнатной температуре еще 2 часа. Затем реакционную смесь выливают в 600 мл холодной воды и отфильтровывают осадок. Промывают его на фильтре водой и сушат на воздухе.

Выход: N-хлорацетил-3-карбэтокси-5-этил-тиофена (16) 23,4 г, (85%). Т. пл. 123-125°С (EtOH). Спектр ЯМР 1H (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д., J, Гц): 1,27 (м, 3Н, СН3); 1,30 (м, 3Н, СН3); 2,45 (м, 2Н, CH2); 4,43 (м, 2Н, CH2); 4,3 (с, 2Н, CH2Cl); 7,53 (с, 1Н, тиофен); 10,65 (с, 1Н, NH). Найдено (%): С 47.92, Н 5.11, N 5.07. Вычислено (%): С 47.81, Н 5.22, N 5.00. Масс-спектр, m/z: 275.

5-Этил-2-(гидразинооксотиоацетил-амино)-тиофен-3-карбоновой кислоты этиловый эфир (17).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

Готовят раствор 4,8 г (0,15 моль) элементной серы в 50 мл ДМФА и добавляют 5,1 мл (0,06 моль) морфолина. Полученную смесь перемешивают 20-30 минут и добавляют к ней, при охлаждении, раствор 13,75 г (0,05 моль) хлорацетамида (16) в минимальном количестве ДМФА, следя за тем, чтобы температура не превышала 15°С. Полученную смесь перемешивают 3-10 часов (контроль по ТСХ). После окончания реакции реакционную смесь пропускают через слой силикагеля. К полученному раствору добавляют 6 мл (0,12 моль) гидразин-гидрата и перемешивают его при комнатной температуре 2 часа. Затем раствор выливают в воду и подкисляют разбавленной соляной кислотой до рН 7. Отфильтровывают осадок и сушат его на воздухе.

Выход: 5-этил-2-(гидразинооксотиоацетил-амино)-тиофен-3-карбоновой кислоты этилового эфира (17) 8,6 г, (57%). Т. пл. 152-154°С. Спектр ЯМР 1H (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д., J, Гц): Спектр ЯМР 1H (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д., J, Гц): 1.2 (т, 3Н, СН3); 1.4 (т, 3Н, СН3); 2.8 (м, 3Н, СН3); 4.3 (м, 3Н, СН 3); 7.10 (с, 1Н, Н аром.); 12.40 (с, 1Н, NH). Найдено (%): С 43.80, Н 5.87, N 14.11. Вычислено (%): С 43.84, Н 5.02, N 13.94. Масс-спектр, m/z: 301.

5-Этил-2-[(2-гидрокси-бензилиден-гидразинооксотиоацетил)-амино]-тиофен-3-карбоновой кислоты этиловый эфир (15) (LHC-536).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

К 300 мг (10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (16) в 1-2 мл ДМФА добавляют 140 мг (11 ммоль) салицилового альдегида в 1 мл ДМФА. Реакционную смесь оставляют на сутки при комнатной температуре, затем добавляют 3 мл метанола. Выпавший осадок отфильтровывают и промывают метанолом.

Выход: 5-этил-2-[(2-гидрокси-бензилиден-гидразинооксотиоацетил)-амино]-тиофен-3-карбоновой кислоты этилового эфира (15) 364 мг, (90%). Т. пл. 189-190°С. Спектр ЯМР 1H DMSOd6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д., J, Гц): 1.2 (т, 3Н, СН3); 1.4 (т, 3Н, СН3); 2.8 (м, 3Н, СН3); 4.3 (м, 3Н, СН 3); 7.05 (м, 4Н, Н аром); 7.10 (с, 1Н, Н аром.); 7.35 (с, 1Н); 12.40 (с, 1Н, NH). Найдено (%): С 53.23, Н 4.81, N 10.25. Вычислено (%): С 53.32, Н 4.72, N 10.36.

Пример 9

5-Этил-2-[(2-гидрокси-бензилиден-гидразиноксотиоацетил)-амино]-тиофен-3-карбоновая кислота (18) (LHC-587).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

2-N-хлорацетил-3-карбокси-5-этилтиофен (19).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

К раствору 17,1 г (0,1 моль) 2-амино-3-карбокси-5-этилтиофена (полученного щелочным гидролизом 2-амино-3-карбэтокси-5-этилтиофена аналогично методике, приведенной в патенте US 4159377, опубл. 26.06.1979, патентообладатель MEAD JOHNSON & СО в 100 мл ДМФА добавляют при охлаждении 8,75 мл (0,11 моль) хлорацетилхлорида, следя за тем, чтобы температура не превышала 20°С. После окончания добавления хлорацетилхлорида полученный раствор перемешивают при комнатной температуре еще 2 часа. Затем выливают реакционную смесь в 600 мл холодной воды и отфильтровывают осадок. Промывают его на фильтре водой и сушат на воздухе.

Выход: 2-N-хлорацетпил-3-карбокси-5-этилтиофена (19) 19,7 г, (80%). Т. пл. 133-134°С (EtOH). Спектр ЯМР 1H DMSO d6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д., J, Гц): 1,27 (м, 3Н, СН3); 2,45 (м, 2Н, СН2); 4,3 (с, 2Н, CH2Cl); 7,53 (с, 1Н, тиофен); 10,65 (с, 1Н, NH), 14.10 (с, 1Hкарб.). Найдено (%): С 43.55, Н 4.16, N 5.54. Вычислено (%): С 43.64, Н 4.07, N 5.65. Масс-спектр, m/z: 247.

5-Этил-2-(гидразиноксотиоацетил-амино)-тиофен-3-карбоновая кислота (20).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

Готовят раствор 4,8 г (0,15 моль) элементной серы в 50 мл ДМФА и добавляют 5,1 мл (0,06 моль) морфолина. Полученную смесь перемешивают 20-30 минут и добавляют к ней раствор 12,35 г (0,05 моль) хлорацетамида (19) в минимальном количестве ДМФА, при охлаждении, следя за тем, чтобы температура не превышала 15°С. Полученную смесь перемешивают 3-10 часов (контроль по ТСХ). После окончания реакции реакционную смесь пропускают через слой силикагеля. К полученному раствору добавляют 6 мл (0,12 моль) гидразин-гидрата и перемешивают раствор при комнатной температуре 2 часа. Затем раствор выливают в воду и подкисляют разбавленной соляной кислотой до рН 7. Отфильтровывают осадок и сушат его на воздухе.

Выход: 5-этил-2-(гидразиноксотиоацетил-амино)-тиофен-3-карбоновой кислоты (20) 8,2 г, (60%). Т. пл. 180-182°С. Спектр ЯМР 1H DMSOd6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д, J, Гц): 1.2 (т, 3Н, СН3); 2.8 (м, 2Н, CH2); 7.10 (с, 1Н, Н аром.); 12.40 (с, 1Н, NH); 14.05 (с, 1Hкарб.). Найдено (%): С 39.46, Н 4.12, N 15.66. Вычислено (%): С 39.55, Н 4.06, N 15.37. Масс-спектр, m/z: 273.

5-Этил-2-[(2-гидрокси-бензилиден-гидразиноксотиоацетил)-амино]-тиофен-3-карбоновая кислота (18) (LHC-587).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

К 273 мг (10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (20) в 1-2 мл ДМФА добавляют 140 мг (11 ммоль) салицилового альдегида в 1 мл ДМФА. Реакционную смесь оставляют на сутки при комнатной температуре. Затем добавляют 3 мл метанола. Выпавший осадок отфильтровывают и промывают метанолом.

Выход: 5-этил-2-[(2-гидрокси-бензилиден-гидразиноксотиоацетил)-амино]-тиофен-3-карбоновой кислоты (18) 263 мг, (70%). Т. пл. 205-206°С. Спектр ЯМР 1H DMSOd6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д., J, Гц): 7.05 (м, 4Н, Н аром); 7.10 (с, 1Н, Н аром.); 7.35 (с, 1Н); 12.40 (с, 1Н, NH); 14.07 (с, 1Hкарб. уширен.). Найдено (%): С 50.83, Н 4.16, N 11.21. Вычислено (%): С 50.92, H 4.01, N 11.13.

Пример 10

N,N-Диэтил-2-[N'-(2-гидрокси-бензилиден)-гидразино]-2-тиоксо-ацетамид (21)

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

2-Хлор-N,N-диэтилацетамид (22)

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

К 7,3 г (0,1 моль) диэтиламина в 50 мл хлористого метилена добавляют 10 г (0,1 моль) триэтиламина. Затем при охлаждении добавляют 12 г (0,11 моль) хлорацетилхлорида. После окончания реакции (контроль по ТСХ) полученную смесь выливают в 300 мл холодной воды. Органический слой отделяют, водный слой экстрагируют хлористым метиленом 2×50 мл. Объединенные органические слои промывают разбавленной соляной кислотой, затем водой, сушат над сульфатом натрия и упаривают на роторном испарителе.

Выход: 2-хлор-N,N-диэтилацетамида (22) 10,4 г, (70%). (маслообразный продукт) ЯМР 1H DMSOd6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д., J, Гц); 2,41 (м, 4Н, СН2); 1,44 (т, 6Н, СН3); 4,20 (с, 2Н, CH2Cl). Найдено (%): С 48.08, Н 8.15, N 9,24. Вычислено (%): С 48.17, Н 8.08, N 9,36. Масс-спектр, m/z: 149.

N,N-Диэтил-2-гидразино-2-тиоксоацетамид (23).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

Готовят раствор 0,15 моль элементной серы в 50 мл ДМФА и добавляют 0,06 моль морфолина. Полученную смесь перемешивают 20-30 минут и добавляют к ней при охлаждении раствор 7,45 г (0,05 моль) хлорацетамида (22) в минимальном количестве ДМФА, следя за тем, чтобы температура не превышала 15°С. Полученную смесь перемешивают 3-5 часов (контроль по ТСХ). После окончания реакции реакционную смесь пропускают через слой силикагеля. К полученному раствору добавляют 6 мл (0,12 моль) гидразин-гидрата и перемешивают при комнатной температуре 2 часа. Затем раствор выливают в воду и подкисляют разбавленной соляной кислотой до рН 7. Отфильтровывают осадок и сушат его на воздухе.

Выход: N,N-диэтил-2-гидразино-2-тиоксоацетамида (23) 5,7 г, (50%). Т. пл. 45-46°С ЯМР 1H DMSOd6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д, J, Гц); 2,42 (м, 4Н, СН2); 1,47 (т, 6Н, СН3); 11,20 (с, 1Н, NH). Найдено (%): С 41.01, Н 7.39, N 24,02. Вычислено (%): С 41.12, Н 7.48, N 23,98. Масс-спектр, m/z: 175.

N,N-Диэтил-2-[N'-(2-гидрокси-бензилиден)-гидразино}-2-тиоксо-ацетамид (21).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

К 175 мг (10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (23) в 1-2 мл ДМФА добавляют 130 мг (11 ммоль) салицилового альдегида в 1 мл ДМФА. Реакционную смесь оставляют на сутки при комнатной температуре, затем добавляют 3 мл метанола. Выпавший осадок отфильтровывают и промывают метанолом.

Выход: N,N-диэтил-2-[N'-(2-гидрокси-бензилиден)-гидразино]-2-тиоксо-ацетамида (21) 139 мг, (50%). Т. пл. 154-155°С. ЯМР 1H DMSOd6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д., J, Гц); 7,02 (м, 4Н, аром); 2,42 (м, 4Н, СН 2); 1,47 (т, 6Н, СН3); 11,92 (с, 1H, NH т. амид); 12,76 (с, 1Н, ОН фен.). Найдено: С 55.77, Н 6.04, N 15.13. Вычислено: С 55.89, Н 6.13, N 15.04. Масс-спектр, m/z: 279.

Пример 11

2-[N'-(2-Гидрокси-циклогексилметилен)-гидразино]-2-тиоксо-N-о-толил-ацетамид (24).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

К 209 мг (10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (10) в 1-2 мл ДМФА добавляют 132 мг (11 ммоль) 2-гидроксициклогексанкарбальдегида (Journal of Organic Chemistry; 51; 13; 1986; 2596-2599) в 1 мл ДМФА. Реакционную смесь оставляют на сутки при комнатной температуре, затем добавляют 3 мл метанола. Выпавший осадок отфильтровывают и промывают метанолом.

Выход: 2-[N'-(2-гидрокси-циклогексилметилен)-гидразино]-2-тиоксо-N-о-толил-ацетамида (24) 159 мг, (50%). Т. пл. 111-113 ЯМР 1H DMSO d6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д., J, Гц); 1,74 (с, 3Н, СН3); 1,42 (м, 4Н, цг); 1,63 (м, 2Н, цг); 2,24 (м, 2Н, цг); 7,41 (м, 1Н, аром); 7,21 (м, 1Н, аром); 7,07 (м, 1Н, аром); 7,63 (м, 1Н, аром); 10,59 (с, 1Н, NH); 11,92 (с, 1Н, NH т. амид); 12,76 (с, 1Н, ОН фен.). Найдено: С 60.07, Н 6.50, N 13.24. Вычислено: С 60.16, Н 6.63, N 13.15. Масс-спектр, m/z: 319.

Пример 12

2-{N'-(2-Гидрокси-5-нитро-фенил)-этилиден]-гидразино}-2-тиоксо-]-N-о-толил-ацетамид (25)

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

К 209 мг (10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (10) в 1 мл ДМФА и 1 мл этанола добавляют 199 мг (11 ммоль) 1-(2-гидрокси-5-нитрофенил)этанона (Journal of the University of Bombay, Science: Physical Sciences, Mathematics, Biological Sciences and Medicine; 25/A; 1957; 8, 11). Реакционную смесь кипятят в течение 3-х часов. После охлаждения осадок отфильтровывают и промывают его холодным метанолом 2х5 мл. Затем высушивают его на воздухе.

Выход: 2-{N'-[1-(2-гидрокси-5-нитро-фенил)-этилиден]-гидразино}-2-тиксо-N-o-толил-ацетамида (25) 149 мг, (40%). Т. пл. 214-215 ЯМР 1H DMSO d6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д., J, Гц); 2,75 (с, 3Н, СН3) 1,74 (с, 3Н, СН3); 7,02 (м, 3Н, аром); 7,41 (м, 1Н, аром); 7,21 (м, 1Н, аром); 7,07 (м, 1Н, аром); 7,63 (м, 1Н, аром); 10,59 (с, 1Н, NH); 11,92 (с, 1Н, NH т. амид); 12,76 (с, 1Н, ОН фен.). Найдено: 54.70, Н 4.24, N 15.20. Вычислено: С 54.83, Н 4.33, N 15.04. Масс-спектр, m/z: 372.

Пример 13

N-(3-Циано-2-фенил-5,6,7,8-тетрагидро-бензо[4,5]тиено[2,3-b]пиридин-4-ил)-2-[N'-(3,5-дибром-2-гидрокси-бензилиден)-гидразино]-2-тиоксо-ацетамид (26)

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

4-Амино-2-фенил-5,6,7,8-тетрагидро[1]бензотиено[2,3-b]пиридин-3-карбонитрил (27)

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

Синтез соединения (27) проводят по методике, описанной в J. Heterocyclic. Chem. 44, 561, (2007). Смесь, состоящую из 1,78 г (10 ммоль) 2-амино-4,5,6,7-тетрагидро-1-бензотиофен-3-кабонитрила и 1,45 г (10 ммоль) 3-оксо-3-фенилпропанонитрила в 20 мл ДМФА и 1 мл пиперидина, кипятят в течение 3-х часов. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь выливают в холодную воду, фильтруют образовавшийся продукт и перекристаллизовывают из этанола.

Выход: 4-амино-2-фенил-5,6,7,8-тетрагидро[1]бензотиено[2,3-b]пиридин-3-карбонитрила (27) 2,22 г, (73%). Т.пл. 113-115°С; ЯМР 1H DMSO d6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д, J, Гц); 1,41-1,56 (м, 8Н, СН2); 7,54-7,68 (м, 5Н, СН). Найдено (%): С 70.67, Н 4.80, N 13.64. Вычислено (%): С 70.79, Н 4.95, N 13.76. Масс-спектр, m/z: 305.

2-Хлор-N-(3-циан-2-фенил-5,6,7,8-тетрагидро-бензо[4,5]тиено[2,3-b]пиридин-4-ил)-ацетамид (28).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

К 30,5 г (0,1 моль) амина (27) в 50 мл хлористого метилена добавляют 10 г (0,1 моль) триэтиламина. Затем, при охлаждении, добавляют 12 г (0,11 моль) хлорацетилхлорида. После окончания реакции (контроль по ТСХ) полученный раствор выливают в 300 мл холодной воды. Органический слой отделяют, водный слой экстрагируют хлористым метиленом 2×50 мл. Объединенные органические слои промывают разбавленной соляной кислотой, затем водой, сушат над сульфатом натрия и упаривают на роторном испарителе.

Выход: 2-хлор-N-(3-циан-2-фенил-5,6,7,8-тетрагидро-бензо[4,5]тиено[2,3-b]пиридин-4-ил)-ацетамида (28) 31,6 г, (83%). Т.пл. 146-148°С; ЯМР 1H DMSO d6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д., J, Гц); 1,41-1,58 (м, 8Н, СН2); 4,20 (с, 2Н, CH2Cl); 7,56-7,70 (м, 5Н, СН). Найдено (%): С 62.78, Н 4.10, N 11.12. Вычислено (%): С 62.90, Н 4.22, N 11.00. Масс-спектр, m/z: 381.

N-(3-Циано-2-фенил-5,6,7,8-тетрагидро-бензо[4,5]тиено[2,3-b]пиридин-4-ил)-2-гидразино-2-тиоксо-ацетамид (29).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

Готовят раствор 0,15 моль серы в 50 мл ДМФА и добавляют 0,06 моль морфолина. Полученную смесь перемешивают 20-30 минут и добавляют к ней раствор 19,1 г (0,05 моль) хлорацетамида (28) в минимальном количестве ДМФА при охлаждении, следя за тем, чтобы температура не превышала 15°С. Полученную смесь перемешивают 3-5 часов (контроль по ТСХ). Затем реакционную смесь пропускают через небольшой слой силикагеля и при охлаждении и перемешивании добавляют 0,1 моль гидразин-гидрата. Полученный раствор при комнатной температуре перемешивают 2 часа. Затем выливают в воду и подкисляют до рН 7. Отфильтровывают осадок и сушат его на воздухе.

Выход: N-(3-циано-2-фенил-5,6,7,8-тетрагидро-бензо[4,5]тиено[2,3-b]пиридин-4-ил)-2-гидразино-2-тиоксо-ацетамида (29) 14,3 г, (70%).

Т.пл. 140-142°С; ЯМР 1H DMSOd6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д, J, Гц); 1,40-1,56 (м, 8Н, СН2); 7,56-7,70 (м, 5Н, СН); 11,20 (с, 1Н, NH). Найдено (%): С 58.83, Н 4.13, N 17.27. Вычислено (%): С 58.95, Н 4.20, N 17.19. Масс-спектр, m/z: 407.

N-(3-Циано-2-фенил-5,6,7,8-тетрагидро-бензо[4,5]тиено[2,3-b]пиридин-4-ил)-2-[N'-(3,5-дибром-2-гидрокси-бензилиден)-гидразино]-2-тиоксо-ацетамид (26)

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

К раствору 407,5 мг (10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (30) в 1-2 мл ДМФА добавляют 308 мг (11 ммоль) 3,5-дибром-2-гидроксибензальдегида в 1 мл ДМФА. Реакционную смесь оставляют на сутки при комнатной температуре, затем добавляют 30 мл метанола. Выпавший осадок отфильтровывают и промывают метанолом.

Выход: N-(3-циано-2-фенил-5,6,7,8-тетрагидро-бензо[4,5]тиено[2,3-b]пиридин-4-ил)-2-[N'-(3,5-дибром-2-гидрокси-бензилиден)-гидразино]-2-тиоксо-ацетамида (26) 501 мг, (75%). Т пл. 178-180°С; ЯМР 1H DMSO d6 (биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , м.д., J, Гц); 1,40-1,56 (м, 8Н, СН2); 6,68 (с, 1Н, СН); 7,56-7,84 (м, 7Н, СН); 11,02 (с, 1Н, NH); 12,76 (с, 1Н, ОН фен.). Найдено (%): С 48.33, Н 2.78, N 10.54. Вычислено (%): С 48.45, Н 2.86, N 10.46. Масс-спектр, m/z: 669.

Биологические примеры.

Для определения биологической активности и токсичности производных гидразонов тиогидразидов оксаминовых кислот были использованы следующие методы:

1. Методы определения цитотоксического эффекта производных гидразонов тиогидразидов оксаминовых кислот.

А) Для эукариотической клетки использовали метод окрашивания клеток метиленовым синим (стандартная методика) с последующим спектрометрическим учетом результатов. Работу проводили в формате 96-луночных планшетов.

В суточном монослое клеток МсСоу В (гибридная линия синовиальных клеток человека и мышиных фибробластов) и HL (эпителиальные клетки легкого человека) заменяли среду культивирования на полную СК с циклогексимидом и вносили разные дозы исследуемых химических соединений. Клетки инкубировали в течение 24 и 48 часов в CO 2 инкубаторе при 37°С. Спустя 24/48 ч из лунок отбирали надосадок и отмывали клетки 0,1 моль/л раствором фосфатно-солевого буфера (ФСБ). Клетки фиксировали охлажденным метанолом (20 мкл) в течение 15 мин при 4°С.К фиксированным клеткам добавляли 40 мкл 0,5% метиленового синего и инкубировали 20 мин при комнатной температуре. После инкубации метиленовую синь отбирали из лунок и отмывали клетки ФСБ 4 раза. В лунки добавляли 100 мкл додецилсульфата натрия (SDS) в ФСБ и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре до полного лизиса клеток. Количество живых клеток определяли спектрометрически при длине волны 540 нм на флуориметре MuktiscanEX.

Б) Метод, направленный на определение метаболической активности клетки - МТТ-тест (Niks M., Otto M. Toward sanoptimized МТТ assay. // Immunol. - 1900. - V. 130, № 1. - р.149-151), основанный на восстановлении бесцветной соли тетразолия (3-[4,5-диметилтиазол-2-ил]-2,5-дифенилтетразолия бромид, МТТ) митохондриальными и цитоплазматическими дегидрогеназами живых метаболически активных клеток с образованием голубых кристаллов формазана, количество которого измеряется спектрометрически.

Метод проводили в формате 96-луночного культурального планшета. В суточном монослое клеток МсСоу В и HL заменяли среду культивирования на полную СК без циклогексемида и вносили разные дозы исследуемых химических соединений. Клетки инкубировали в течение 48 часов в СО2 инкубаторе при 37°С. За 4 часа до окончания эксперимента вносили 1:10 от объема культуральной среды 10х раствора МТТ (5 мг/мл). Инкубировали 4 часа при 37°С 5% CO2. Отбирали среду, отмывали однократно ФСБ. Добавляли в каждую лунку 100 мкл изопропанола (пропанола-2). Инкубировали при комнатной температуре 30 минут. Оценивали оптическую плотность при длине волны 540 нм на флуориметре Muktiscan EX. Субстратное поглощение оценивали при 405 нм.

В) Для оценки токсического эффекта производных гидразонов тиогидразидов оксаминовых кислот в условиях in vitro был использован кальцеиновый тест, который основывается на двойной окраске живых метаболически активных клеток и мертвых клеток с поврежденной цитоплазматической мембраной. В качестве первого красителя используется нефлюоресцирующий ацетоксиметилированный эфир кальцеина, который под действием внутриклеточный эстераз живой клетки переходит в флюоресцирующие анионы кальцеина, что обусловливает зеленое свечение живых клеток при флюоресцентной микроскопии. Вторым красителем является этидиум гомодимер, который проникает внутрь клетки только в условиях нарушения целостности ее мембраны и, связываясь с нуклеиновыми кислотами, окрашивает ядро клетки в оранжевый цвет.При просмотре препаратов с помощью люминесцентного микроскопа дифференцируют и определяют количество живых и мертвых клеток в исследуемых условиях.

Метод проводили в формате 24-луночного культурального планшета со стеклами. Анализ осуществлялся согласно протоколу, прилагаемому к коммерческому набору LIVE/DEAD Viability/Cytotoxicity Kit for mammalian cells (Invitrogen, США). Для этого в суточном монослое клеток HL заменяли среду культивирования на полную СК без циклогексимидм и вносили разные дозы исследуемых химических соединений. Клетки инкубировали в течение 48 часов в СО2 инкубаторе при 37°С. Затем отбирали СК, отмывали однократно ФСБ и, не высушивая стекла, вносили смесь реагентов: 20 мкл 2 mM этидиум гомодимера и 5 мкл 2 mM Calcein AM, растворенных в 10 мл стерильного ФСБ, в объеме 150 мкл/лунка. Инкубировали в течение 20 мин при 37°С. Затем стекла монтировали на предметное стекло при нанесении на него нескольких 15-20 мкл того же раствора. Учет результатов (определение соотношения живых и мертвых клеток) осуществляли методом флюоресцентной микроскопии.

2. Метод суспензионного заражения эукариотических клеток.

Для получения суспензии использовали суточный монослой клеток МсСоу В и HL, который обрабатывали 2,5 мл раствора трипсина и версена (соотношение 1:3, соответственно) для открепления клеток от поверхности флакона. Флакон помещали в термостат на 5 мин. Затем отбирали раствор трипсина и версена и добавляли 2,5 мл полной среды культивирования (СК). Открепившиеся клетки отмывали в указанном объеме СК путем центрифугирования при 1000 об/мин 10 мин. Убирали надосадок и ресуспендировали клетки в 2 мл СК.

Для получения монослоя из приготовленной клеточной суспензии производили подсчет клеток в камере Горяева из расчета 1,5×105 кл/мл. Заражение клеток штаммом Bu-434 Chlamydia trachomatis серовар L2 производили в соотношении бактерия: клетка 1:1 в необходимом объеме транспортной среды, что обеспечивает 80-90% инфицированных клеток. Готовую суспензию вносили в лунки 96- или 24-луночных планшетов в объеме 100 мкл или 1000 мкл, соответственно. Для осаждения клеток и стимуляции взаимодействия с ними хламидий планшеты центрифугировали при 3000 об/мин 1 час при температуре 25°С. После этого планшет помещали в СО 2 инкубатор на 48 ч при 37°С.

3. Определение влияния производных гидразонов тиогидразидов оксаминовых кислот на жизнеспособность хламидий.

Исследуемые химические соединения в разных концентрациях вносили в культуру клеток одновременно с патогеном для оценки возможного их влияния на взаимодействие хламидий с эукариотической клеткой: сразу после центрифугирования зараженной суспензии (ранняя стадия внутриклеточного цикла хламидий 0-2 ч), через 6-8 часов после начала эксперимента (средняя фаза), через 16 часов (поздняя стадия). Эффект оценивали методом прямой иммунофлюоресценции и путем высева материала, полученного из лизата клеток, инфицированных в присутствии ингибитора клеток.

Для данного метода были использованы клеточные линии МсСоу В и HL. Работу проводили в формате 96-луночных планшетов. В суточном монослое клеток заменяли СК на транспортную среду (ТС) и заражали С.trachomatis L2 для получения 80-90% инфицированных клеток (множественность инфекции 1:1). После центрифугирования при 3000 об/мин 30 мин при 25°С клетки инкубировали в течение 48 ч в CO2 инкубаторе при 37°С. Разные дозы исследуемого соединения добавляли в рабочую суспензию с учетом особенностей жизненного цикла хламидий, как было описано ранее. Спустя 48 ч из лунок отбирали надосадок и планшет помещали на 30 мин при -70°С, для того чтобы лизировать инфицированные клетки. В получившийся лизат добавляли 100 мкл транспортной среды и готовили разведения материала 1:10-1:1000. Заражали суточный монослой клеток с последующим центрифугированием при 3000 об/мин 30 мин при 25°С. После 48 ч инкубирования в ранее указанных условиях клетки фиксировали и окрашивали меченными ФИТЦ (флюоресце-инизотиоцианит) моноклональными антителами для последующего учета результатов методом иммунофлюоресцентной микроскопии.

4. Методы прямой иммунофлюоресценции.

Методы иммунофлюоресценции направлены на выявление объектов, содержащих некоторый антиген, и основаны на обработке препаратов соответствующими антителами, меченными флюорохромом, с последующей микроскопией в ультрафиолетовом луче.

В данной работе использован метод прямой иммунофлюоресценции (стандартная методика), позволяющий проводить полуколичественный учет развития хламидийной инфекции. Для этого использованы коммерческие наборы ЗАО "НИАРМЕДИК плюс" при НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи РАМН (ФС 42-359598 и регистрационное удостоверение Минздрава России 93/ 270/ 9) "Хламоноскрин" для определения моноклональных антител к родоспецифическому липополисахаридному антигену Chlamydia и "Хламоноскрин-2" для определения моноклональных антител к видоспецифическому белковому антигену C.trachomatis.

Работу проводили на клеточных линиях МсСоу В и HL, инфицированных С.trachomatis серовар L2 в формате 96-луночных планшетов или 24-луночных со стеклами. Для этого суточный монослой заражали для получения 80-90% инфицированных клеток и одновременно с внесением инфекции добавляли разные дозы исследуемых химических соединений. Планшет центрифугировали при 3000 об/мин 30 мин при 25°С и инкубировали клетки в течение 48 ч в СО2 инкубаторе при 37°С. Через 48 ч из лунок отбирали надосадок и фиксировали клетки. При работе с 96-луночными планшетами фиксацию осуществляли ледяным 72° этанолом с последующим помещением планшета на 30-40 мин на -20°С. При работе с 24-луночными планшетами стекла промывали в 0,1 моль/л растворе ФСБ и высушивали. После этого клетки фиксировали ацетоном в течение 15 мин при комнатной температуре. На фиксированные клетки наносили 30-50 мкл моноклональные, меченные ФИТЦ антитела к белковым антигенам всех серотипов C.trachomatis (ХлаМоноСкрин-2, ООО «НИАРМЕДИК ПЛЮС») и инкубировали в течение 30 мин во влажной камере при 37°С. После инкубации клетки промывались 2 раза раствором ФСБ. Препарат полностью высушивали. В формате 24-луночных планшетов, подготовленные таким образом стекла монтировали на предметное стекло при помощи монтирующей жидкости (забуференный глицерин). Готовые препараты исследовали в люминесцентном микроскопе.

5. Метод непрямой иммунофлюоресценции.

Метод непрямой иммунофлюоресценции (стандартная методика) с использованием коммерческих антител к эффекторному белку ТТС IncA C.trachomatis (поликлональная кроличья сыворотка, специфическая к IncA, «Innovagen», Швеция).

Пример 1

2-[(2-(3-Этокси-2-гидроксибензилиден)гидразино]-М-(4-фторфенил)-2-тиоксоацетамид (LHC 709)

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

Соединение характеризуется высокой степенью растворимости в ДМФ, не образует осадка в процессе хранения и при переведении в транспортную среду.

Анализ токсичности LHC 709 в условиях in vitro (при добавлении 50 мМ раствора в среду культивирования эукариотических клеток в дозах 12.5, 25, 50 и 75 мкМ и последующем инкубировании в течение 48 часов при 37°С), проведенный методами 1. А-В, выявил отсутствие токсического эффекта.

Способность данного соединения подавлять внутриклеточный жизненный цикл хламидии в условиях in vitro оценивалась при помощи методов 2-4. Наилучший эффект соединение LHC 709 проявляет в дозе 50 мкМ при добавлении в СК клеток HL одновременно с инфекционным материалом (штамм C.trachomatis L2) и последующем культивировании в течение 48 часов. Показано, что в данных условиях инфицированные клетки отсутствуют (см. Фиг.1, на которой показано влияние LHC 709 на внутриклеточное развитие хламидийной инфекции в условиях in vitro (48 ч)). Анализ активности данного соединения в дозе 25 мкМ в аналогичных условиях проведения эксперимента выявил выраженное сокращение размеров включений.

Пример 2

2-[2-(3-Этокси-2-гидроксибензилиден)гидразино]-2-тиоксо-N-[2-(трифторметил)фенил]ацетамид (LHC 711).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

Соединение характеризуется высокой степенью растворимости в ДМФ, не образует осадка в процессе хранения и при переведении в транспортную среду.

Токсичность LHC 711 для эукариотических клеток оценивалась методами 1. А-В при добавлении 50 мМ раствора данного соединения в СК клеток в дозах 12.5, 25, 50 и 75 мкМ и последующем инкубировании в течение 48 часов при 37°С. Установлено отсутствие токсичности соединения во всех указанных дозах.

Способность данного соединения подавлять внутриклеточный жизненный цикл хламидии в условиях in vitro оценивалась при помощи методов 2-4. Наибольший эффект выявлен в дозе 50 мкМ при добавлении в СК клеток HL одновременно с инфекционным материалом (штамм C.trachomatis L2) и последующем культивировании в течение 48 часов. В данных условиях эксперимента включения мелкие и единичные по сравнению с таковыми показателями в контроле (100%) (см. Фиг.2, на которой показано влияние LHC 711 на внутриклеточное развитие хламидийной инфекции в условиях in vitro (48 ч)). Анализ активности данного соединения в дозе 25 мкМ в аналогичных условиях выявил снижение размеров включений (средние и мелкие).

Пример 3

2-[2-(3,5-Дибром-2-гидроксибензилиден)гидразино]-2-тиоксо-N-[2-(трифторметил)фенил]ацетамид (LHC 712).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

Соединение характеризуется высокой степенью растворимости в ДМФ, не образует осадка в процессе хранения и при переведении в транспортную среду.

Анализ токсичности LHC 712 оценивался методами 1. А-В при добавлении 50 мМ раствора данного соединения в СК клеток в дозах 12.5, 25, 50 и 75 мкМ и последующем инкубировании с клетками линии HL в течение 48 часов при 37°С. Установлено отсутствие токсичности соединения в дозах 12.5-50 мкМ.

Способность данного соединения подавлять внутриклеточный жизненный цикл хламидии в условиях in vitro оценивалась при помощи методов 2-4. Наибольшая активность данного соединения выявлена в дозе 50 мкМ при добавлении в СК клеток HL одновременно с инфекционным материалом (штамм C.trachomatis L2) и последующем культивировании в течение 48 часов. Показано, что в данных условиях эксперимента включения мелкие и единичные по сравнению с таковыми показателями в контроле (100%) (см. Фиг.3, на которой показано влияние LHC 712 на внутриклеточное развитие хламидийной инфекции в условиях in vitro (48 ч)).

Пример 4

N-(4-Фтор-фенил)-2-[N'-(2-гидрокси-бензилиден)-гидразино]-2-тиоксо-ацетамид (LHC 725).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

Данное соединение характеризуется высокой степенью растворимости в ДМФ, не образует осадка в процессе хранения и при переведении в транспортную среду.

Анализ токсичности LHC 725 в условиях in vitro (при добавлении 50 мМ раствора в среду культивирования эукариотических клеток в дозах 12.5, 25, 50 и 75 мкМ и последующем инкубировании в течение 48 часов при 37°С), проведенный методами 1. А-В, выявил отсутствие токсического эффекта.

Способность данного соединения подавлять внутриклеточный жизненный цикл хламидии в условиях in vitro оценивалась при помощи методов 2-4. Показано, что наибольшее подавление внутриклеточной инфекции соединение LHC 725 проявляет в дозе 75 мкМ при добавлении в СК клеток HL одновременно с инфекционным материалом (штамм C.trachomatis L2) и последующем культивировании в течение 48 часов. Выявлено, что в данных условиях количество инфицированных клеток сокращается до 10% по сравнению с контролем, кроме того, LHC 725 влияет на размер включений (средние и мелкие) (см. Фиг.4, на которой показано влияние LHC 725 на внутриклеточное развитие хламидийной инфекции в условиях in vitro (48 ч)).

Пример 5

2-[2-(3,5-Дибром-2-гидроксибензилиден)гидразино]-N-(4-фторфенил)-2-тиоксоацетамид (LHC 726).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

Соединение характеризуется высокой степенью растворимости в ДМФ, не образует осадка в процессе хранения и при переведении в транспортную среду.

Анализ токсичности LHC 726 в условиях in vitro (при добавлении 50 мМ раствора в среду культивирования эукариотических клеток в дозах 12.5, 25, 50 и 75 мкМ и последующем инкубировании в течение 48 часов при 37°С), проведенный методами 1. А-В, выявил отсутствие токсического эффекта.

Способность данного соединения подавлять внутриклеточный жизненный цикл хламидии в условиях in vitro оценивалась при помощи методов 2-4. Наилучший эффект соединение LHC 726 проявляет в дозе 75 мкМ при добавлении в СК клеток HL одновременно с инфекционным материалом (штамм C.trachomatis L2) и последующем культивировании в течение 48 часов. Показано, что в данных условиях процент инфицированных клеток сокращается по сравнению с таковыми показателями в контроле в 5 раз (20% и 100%, соответственно) (см. Фиг.5, на которой показано влияние LHC 726 на внутриклеточное развитие хламидийной инфекции в условиях in vitro (48 ч)). Кроме того, в опытной группе уменьшаются размеры включений (средние).

Пример 6

2-[(2-(3-Этокси-2-гидроксибензилиден)гидразино]-2-тиоксо-N-[3-(трифторметил)фенил]ацетамид (LHC 771).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

Соединение характеризуется высокой степенью растворимости в ДМФ, не образует осадка в процессе хранения и при переведении в транспортную среду.

Анализ токсичности LHC 771 оценивался методами 1. А-В при добавлении 50 мМ раствора данного соединения в СК клеток в дозах 12.5, 25, 50 и 75 мкМ и последующем инкубировании с клетками линии HL в течение 48 часов при 37°С. Установлено отсутствие токсичности соединения во всех указанных дозах.

Ингибирующий эффект LHC 771 на развитие хламидийной инфекции в условиях in vitro оценивался при помощи методов 2-4. Наибольшая активность данного соединения выявлена в дозе 50 мкМ при добавлении в СК клеток HL одновременно с инфекционным материалом (штамм C.trachomatis L2) и последующем культивировании в течение 48 часов. Показано, что в данных условиях эксперимента включения мелкие, а количество инфицированных клеток составляет 10% по сравнению с таковыми показателями в контроле (100%) (см. Фиг.6, на которой показано влияние LHC 771 на внутриклеточное развитие хламидийной инфекции в условиях in vitro (48 ч)).

Пример 7

2-[(2-(3,5-Дибром-2-гидроксибензилиден)гидразино]-2-тиоксо-N-[3-(трифторметил)фенил]ацетамид (LHC 772).

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

Соединение характеризуется высокой степенью растворимости в ДМФ, не образует осадка в процессе хранения и при переведении в транспортную среду.

Токсичность LHC 772 для эукариотических клеток оценивалась методами 1. А-В при добавлении 50 мМ раствора данного соединения в СК клеток в дозах 12.5, 25, 50 и 75 мкМ и последующем инкубировании в течение 48 часов при 37°С. Установлено отсутствие токсичности соединения во всех указанных дозах.

Ингибирующая активность LHC 772 в условиях in vitro оценивалась при помощи методов 2-4. Наибольший эффект выявлен в дозе 50 мкМ при добавлении в СК клеток HL одновременно с инфекционным материалом (штамм C.trachomatis L2) и последующем культивировании в течение 48 часов. В данных условиях эксперимента отмечено наличие единичных инфицированных клеток с мелкими включениями (Фиг.7, на которой показано влияние LHC 772 на внутриклеточное развитие хламидийной инфекции в условиях in vitro (48 ч)).

В таблице 1 представлены результаты проведенных тестов, которые свидетельствуют о биологической активности замещенных производных гидразонов тиогидразидов оксаминовых кислот, а также о том, что эти соединения не токсичны для эукариотических клеток.

Пример 8

Исследование на специфическую активность некоторых замещенных производных гидразонов тиогидразидов оксаминовых кислот (LHC 709 и 711) ингибировать функции третьей транспортной системы (ТТС) проводилось по методу 5.

Для этого суточный монослой заражали для получения 80-90% инфицированных клеток, центрифугировали при 3000 об/мин 30 мин при 25°С и инкубировали клетки в течение 48 ч в СО 2 инкубаторе при 37°С. Через 8 ч после заражения (время транслокации эффекторного белка в мембрану включения) добавляли разные дозы исследуемых химических соединений. Через 24 ч из лунок отбирали надосадок, стекла промывали в 0,1 моль/л растворе ФСБ и высушивали. После этого клетки фиксировали ацетоном в течение 15 мин при комнатной температуре. На фиксированные клетки наносили 50 мкл сыворотки и инкубировали в течение 30 мин в CO2 инкубаторе при 37°С. Затем стекла промывали указанным раствором ФСБ и наносили антитела, меченные ФИТЦ. Инкубировали в течение 30 мин во влажной камере при 37°С. После инкубации стекла с клетками промывались 2 раза раствором ФСБ. Препарат полностью высушивали. Подготовленные таким образом стекла монтировали на предметное стекло при помощи монтирующей жидкости. Готовые препараты исследовали в люминесцентном микроскопе. Одновременно проводилась окраска моноклональными антителами к белку МОМР наружной мембраны клеточной стенки, что позволяло оценивать развитие хламидийной инфекции. В случае действия препарата на ТТС при данной окраске выявляются включения, соответствующие по своим размерам сроку инфекции. На Фиг.8. показано подавление транслокации эффекторного белка IncA ТТС C.trachomatis L2 специфическими ингибиторами.

Другой тест на специфичность соединений в отношении ТТС связан с тем, что транслоцируемый с помощью ТТС хламидийный белок IncA участвует в процессе слияния отдельных, развивающихся внутри клетки включений. При окраске инфицированных клеток антителами к белку МОМР в формате эксперимента: заражение - через 8 часов внесение химсоединения - инкубация до 24 часов с момента заражения, в контрольных клетках наблюдали крупные включения, по одному в каждой клетке, а в случае действия соединения на ТТС - несколько мелких, не слившихся включений в цитоплазме клетки.

Проведенные тесты свидетельствуют о том, что ряд биологически активных соединений, представляющих собой замещенные производные гидразонов тиогидразидов оксаминовых кислот общей формулы (I) может проявлять специфическую активность в отношении ТТС, подавляя процесс транслокации эффекторного белка IncA и препятствуя, тем самым, процессу гомотипичного слияния первичных включений, т.е. ингибировать систему секреции III типа у патогенных бактерий, не вызывая развития устойчивости к препаратам в результате селекции резистентных мутантов, а также оказывая направленное воздействие на механизмы, обуславливающие процесс хронизации инфекции.

Сказанное выше позволяет сделать вывод, что поставленная техническая задача решена.

Таблица 1
Результаты тестирования химических соединений
Название Концентрация, мкМ Токсичность (тест Calcein AM, кол-во живых клеток), в % Влияние на внутриклеточный цикл развития С.trachomatis
Множественность инфекции (48 ч), в % Размер включений
LHC 70912,5 98 5средние
биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 25 985 мелкие
биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 50 980 -
биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 75 биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 0 -
LHC 711 12,5 98биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 крупные
биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 25 9880 средние
биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 50 98единичные мелкие
биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 75 биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 0 биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531
LHC 71212,5 98 50средние/мелкие
биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 25 9810 мелкие
биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 50 70единичные мелкие
биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 75 -0 -
LHC 725 12,5 --K+ -K+
биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 25 95=K+ =K+
биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 50 80-8540 средние
биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 75 8010 средние
LHC 72612,5 - -K+-K +
биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 25 95=K+ =K+
биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 50 9520-30 средние
биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 75 7520 средние
К+ - положительный контроль (инфицированные клетки в отсутствие ингибитора)

Продолжение Таблицы 1
Название Концентрация, мкМ Токсичность (тест Calcein AM, кол-во живых клеток), в % Влияние на внутриклеточный цикл развития С.trachomatis
Множественность инфекции (48 ч), в % Размер включений
LHC 77112,5 - 70-K+
биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 25 9560 =K+
биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 50 9510 мелкие
биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 75 9510 мелкие
LHC 77212,5 - -K+-K +
биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 25 95=K+ =K+
биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 50 95единичные мелкие
биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 75 95единичные мелкие
К+ - положительный контроль (инфицированные клетки в отсутствие ингибитора)

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Замещенные производные гидразонов тиогидразидов оксаминовых кислот общей формулы:

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

где R-R1 представляют собой Н, незамещенные алкил С1-С5; пиридинил; фенил, замещенный СН3, Hal, CF3; группу биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 где Х представляет собой S, замещенную алкилом С1-С5, СООН, COOR4;

или группу

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

R2, R3 представляют собой Н, незамещенный алкил С1-С5, 2-гидроксициклогексил; фенил, замещенный Hal, NO2, ОН, OR4, a R4 представляет собой незамещенный алкил С1-С4 за исключением соединений

биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531 , и биологически активные вещества, подавляющие патогенные бактерии, патент № 2402531

2. Способ получения соединений по п.1, включающий взаимодействие соответствующих хлорацетамидов с предварительно приготовленным раствором элементной серы с морфолином или пиперидином, пропускание полученного раствора монотиооксамидов через слой сорбента, последующее взаимодействие монотиооксамидов с гидразингидратом, и реакцию полученного соединения с альдегидами в ДМФА при комнатной температуре с последующим осаждением метанолом.

3. Способ ингибирования секреции III типа у патогенных бактерий, заключающийся в воздействии на бактерии эффективным количеством соединения по п.1.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2402531

patent-2402531.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс C07D213/75 амино- или иминогруппы, ацилированные карбоновой или угольной кислотами или их серо- или азотсодержащими аналогами, например карбаматы

Патенты РФ в классе C07D213/75:
новый агонист бета рецептора тиреоидного гормона -  патент 2527948 (10.09.2014)
производные пиридина в качестве ингибиторов рецепторов фактора роста эндотелия сосудов 2 подтипа (vegfr-2) и протеинтирозинкиназы -  патент 2522444 (10.07.2014)
соединение, содержащие кольцо пиридина, и способ получения галогенированного производного пиколина и производного тетразолилоксима -  патент 2512344 (10.04.2014)
ингибиторы для передачи сигнала брассиностероидов -  патент 2489424 (10.08.2013)
соединения и способы модулирования киназ и показания к применению указанных соединений и способов -  патент 2487121 (10.07.2013)
химические соединения -  патент 2469034 (10.12.2012)
гетероциклические модуляторы транспортеров атф-связывающей кассеты -  патент 2463303 (10.10.2012)
новые соединения -  патент 2456273 (20.07.2012)
бифенильные производные и их применение при лечении гепатита с -  патент 2452729 (10.06.2012)
производные пиридина для лечения метаболических нарушений, связанных с устойчивостью к действию инсулина или гипергликемией -  патент 2448093 (20.04.2012)

Класс C07D333/38 атомы углерода, связанные тремя связями с гетероатомами (из которых одна может быть с галогеном), например с эфирными или нитрильными группами

Патенты РФ в классе C07D333/38:
хиральные диацилгидразиновые лиганды для модуляции экспрессии экзогенных генов с помощью экдизон-рецепторного комплекса -  патент 2490253 (20.08.2013)
4-(4-бромфенил)-4-оксо-2-{[3-(этоксикарбонил)-4,5-диметилтиен-2-ил]амино}-2-бутеновая кислота, обладающая противовоспалительной и анальгетической активностью -  патент 2485112 (20.06.2013)
способ получения гидрохлорида метилового эфира 4-метил-3-[2-(n-пропиламино)пропиониламино]тиофен-2-карбоновой кислоты -  патент 2477278 (10.03.2013)
способ получения 3-(2-хлорпропионил)амино-4-метил-2-метоксикарбонилтиофена -  патент 2471792 (10.01.2013)
соединения, моделирующие внутриклеточный кальций -  патент 2465272 (27.10.2012)
замещенные производные циклогексилметила -  патент 2451009 (20.05.2012)
фунгицидные производные n-6-членного конденсированного (гетеро)арилметилен-n-циклоалкилкарбоксамида -  патент 2440982 (27.01.2012)
новые полициклические соединения -  патент 2434006 (20.11.2011)
амиды 3-арил-3-гидрокси-2-аминопропионовой кислоты, амиды 3-гетероарил-3-гидрокси-2-аминопропионовой кислоты и родственные соединения, обладающие обезболивающим и/или иммуностимулирующим действием -  патент 2433999 (20.11.2011)
соединение сульфонамида или его соль -  патент 2425029 (27.07.2011)

Класс C07C225/16 и содержащего шестичленные ароматические кольца

Класс A61K31/095  соединения, содержащие серу, селен или теллур, например тиолы

Патенты РФ в классе A61K31/095:
способ профилактики и лечения язвенной болезни желудка, вызываемой приемом этанолсодержащих жидкостей -  патент 2527334 (27.08.2014)
способы и композиции для лечения гипертиреоза у кошачьих -  патент 2521315 (27.06.2014)
соединения, композиции и способы предупреждения метастазов раковых клеток -  патент 2519123 (10.06.2014)
лечебно-профилактический бальзам для глаз -  патент 2512801 (10.04.2014)
производное селеназола, имеющее лиганд, который активирует рецептор, активируемый пролифератором пероксисом ( ppar ), способ его получения и применение химических соединений -  патент 2510394 (27.03.2014)
лекарственное средство для профилактики и лечения гипоавитаминозов и нормализации обмена веществ у птиц -  патент 2506084 (10.02.2014)
средство для увеличения продолжительности жизни и способ его применения -  патент 2501552 (20.12.2013)
способы лечения неалкогольного стеатогепатита (nash) с применением цистеаминовых продуктов -  патент 2498795 (20.11.2013)
средство для улучшения репродуктивной функции -  патент 2489142 (10.08.2013)
средство для улучшения репродуктивной функции -  патент 2487705 (20.07.2013)

Класс A61K31/136  имеющие аминогруппу, непосредственно связанную с ароматическим кольцом, например фениламин

Патенты РФ в классе A61K31/136:
противоопухолевый агент, набор и способ лечения рака -  патент 2519199 (10.06.2014)
композиция для лечения инфекций бактериальной этиологии у животных -  патент 2514647 (27.04.2014)
глазные капли, обладающие противоинфекционным, противовоспалительным и противоаллергическим действием -  патент 2493823 (27.09.2013)
лекарственное средство для лечения туберкулеза -  патент 2487702 (20.07.2013)
производные 1-амино-алкилциклогексана для лечения заболеваний, опосредованных тучными клетками -  патент 2484813 (20.06.2013)
фармацевтическая композиция, обладающая гепатопротекторным, гиполипидемическим, иммуностимулирующим и нормализующим деятельность почек действием, и способ ее получения -  патент 2483712 (10.06.2013)
способ лечения больных с гнойничковыми заболеваниями кожи -  патент 2479308 (20.04.2013)
фармацевтическая композиция для лечения ожогов -  патент 2473349 (27.01.2013)
средство для лечения наркотической и алкогольной зависимостей и восстановления организма до физиологических норм, способ лечения -  патент 2470632 (27.12.2012)
производное амина, обладающее активностью антагониста npy y5 рецептора, и его применение -  патент 2460523 (10.09.2012)

Класс A61P31/04 антибактериальные средства

Патенты РФ в классе A61P31/04:
способ получения алкилбензилдиметиламмонийфторидов, обладающих противовирусным и антибактериальным действием -  патент 2529790 (27.09.2014)
вакцины на основе солюбилизированных и комбинированных капсулярных полисахаридов -  патент 2528066 (10.09.2014)
производные 5-гидроксиметилоксазолидин-2-она для лечения бактериальных кишечных заболеваний -  патент 2527769 (10.09.2014)
способ комплексного лечения некротического энтероколита у новорожденных и детей младшего грудного возраста -  патент 2527348 (27.08.2014)
композиции карбонатных соединений, препятствующих образованию биопленки, для использования при уходе за полостью рта -  патент 2526912 (27.08.2014)
способ получения комплексного антибактериального иммуномодулирующего препарата -  патент 2526184 (20.08.2014)
антибактериальные соединения -  патент 2525915 (20.08.2014)
производные 5-амино-2-(1-гидроксиэтил)тетрагидропирана -  патент 2525541 (20.08.2014)
композиции и способы лечения, включающие цефтаролин -  патент 2524665 (27.07.2014)
антимикробные/антибактериальные медицинские устройства, покрытые традиционными средствами китайской медицины -  патент 2524635 (27.07.2014)

Класс C07C327/56 с атомами азота тиокарбоксамидных групп, связанными с другим гетероатомом

Класс A61K31/4402 замещенные только в положении 2, например фенирамин, бисакодил

Патенты РФ в классе A61K31/4402:
ациламино-замещенные производные конденсированных циклопентанкарбоновых кислот и их применение в качестве фармацевтических средств -  патент 2529484 (27.09.2014)
новая антиретровирусная комбинация -  патент 2508105 (27.02.2014)
комбинированное средство для лечения гриппа и орви -  патент 2498797 (20.11.2013)
сульфонамидные соединения или их соли -  патент 2481329 (10.05.2013)
новые соединения -  патент 2480453 (27.04.2013)
терапевтический агент при нарушении мочевыделения -  патент 2452479 (10.06.2012)
соединения с медицинскими эффектами, обусловленными взаимодействием с рецептором глюкокортикоидов -  патент 2430086 (27.09.2011)
сульфонамидные производные как активаторы гликокиназы, применимые для лечения диабета типа 2 -  патент 2419624 (27.05.2011)
применение атазанавира для улучшения фармакокинетики лекарственных средств, метаболизируемых ugt1a1 -  патент 2403066 (10.11.2010)
твердая лекарственная форма, обладающая слабительной активностью, и способ ее получения (варианты) -  патент 2401106 (10.10.2010)

Класс A61K31/381  содержащие пятичленные кольца

Патенты РФ в классе A61K31/381:
новые лиганды g-квадруплексов на основе гетероаренантрацендионов, ингибирующие рост опухолевых клеток -  патент 2527459 (27.08.2014)
мультитаргетные ингибиторы опухолевого роста на основе линейных гетероаренантрацендионов -  патент 2527273 (27.08.2014)
производное бензола или тиофена и его применение в качестве ингибитора vap-1 -  патент 2526256 (20.08.2014)
комбинации ингибиторов фосфоинозитид 3-киназы и химиотерапевтических агентов и способы применения -  патент 2523890 (27.07.2014)
гидроксиметилциклогексиламины -  патент 2514192 (27.04.2014)
производные хиназолина, ингибирующие активность egfr -  патент 2505534 (27.01.2014)
(z)-2-[(3-карбамоил-4,5,6,7-тетрагидробензо[b]тиен-2-ил)амино]-4-(4-r-фенил)-4-оксобут-2-еновые кислоты, обладающие анальгетической активностью -  патент 2503671 (10.01.2014)
замещенные производные 4-аминоциклогексана -  патент 2503660 (10.01.2014)
сульфонамидные соединения и их применение -  патент 2502730 (27.12.2013)
4-триметиламмониобутираты в качестве ингибиторов срт2 -  патент 2502727 (27.12.2013)

Класс A61K31/15  оксимы ( >C=N-O-); гидразины ( >N-N< ); гидразоны ( >N-N=)

Патенты РФ в классе A61K31/15:
способ лечения больных хроническими формами туберкулеза легких -  патент 2519140 (10.06.2014)
ингибиторы деацетилазы и их применение -  патент 2515611 (20.05.2014)
способ определения дротаверина -  патент 2514002 (27.04.2014)
новые оксимовые производные 3,5-секо-4-нор-холестана, фармацевтические композиции, содержащие их, и способ их получения -  патент 2508289 (27.02.2014)
новая композиция для лечения побочных эффектов противораковой терапии -  патент 2485956 (27.06.2013)
селективный противотуберкулезный агент, представляющий собой 3-гидразоно-6-(3,5-диметилпиразол-1-ил)- 1,2,4,5-тетразин и способ его получения -  патент 2479311 (20.04.2013)
производное 3-(2,2,2-триметилгидразиний) пропионата - 5-бромникотинат 3-(2,2,2-триметилгидразиний) пропионат калия, обладающее эндотелиопротекторной активностью -  патент 2467745 (27.11.2012)
производное 3-(2,2,2-триметилгидразиний) пропионата - 5-гидрокисиникотинат 3-(2,2,2-триметилгидразиний) пропионат калия, обладающее эндотелиопротекторной активностью -  патент 2467744 (27.11.2012)
способ получения полимерного конъюгата гидразона изоникотиновой кислоты -  патент 2454226 (27.06.2012)
замещенные производные циклогексилметила -  патент 2451009 (20.05.2012)

Наверх