способ получения розмариновой кислоты

Классы МПК:C07C67/32 декарбоксилирование
C07C67/56 обработкой в системе твердое вещество - жидкость; хемосорбцией
C07C67/52 изменением физического состояния, например кристаллизацией
Автор(ы):,
Патентообладатель(и):Бубенчикова Валентина Николаевна (RU),
Кондратова Юлия Александровна (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2009-02-02
публикация патента:

Изобретение относится к фармации и химико-фармацевтической промышленности, а именно к способу получения биологически активных веществ из лекарственного растительного сырья, и касается получения розмариновой кислоты из травы шалфея мутовчатого. С целью увеличения выхода целевого продукта, а также расширения сырьевой базы источников розмариновой кислоты, в качестве сырья используется трава шалфея мутовчатого (Salvia verticillata L.). Способ получения розмариновой кислоты путем предварительного экстрагирования сырья 70% этиловым спиртом включает объединение полученных экстрактов, упаривание до сиропообразного остатка, высушивание сгущенного экстракта на силикагеле, нанесение на колонку с силикагелем, элюирование, объединение и упаривание до сухого остатка, очистку технической розмариновой кислоты на колонке, заполненной сефадексом LH-20 в воде, где в качестве сырья используют траву шалфея мутовчатого (Salvia verticillata L.), предварительно экстрагирование которой проводят дважды 70% спиртом этиловым на водяной бане при 60°С при соотношении сырье: экстрагент 1:10 в течение 1,5 часов, каждый раз отфильтровывают, спиртовые извлечения объединяют, упаривают под вакуумом на водяной бане до водного остатка, оставляют на 12-15 часов до выпадения хлорофилла, осадок хлорофилла отфильтровывают, водный остаток обрабатывают равными объемами этилацетата 6-8 раз, этилацетатную фракцию упаривают до смолообразного остатка, который растворяют при нагревании в спирте этиловом, быстро охлаждают и выливают при перемешивании в избыток диэтилового эфира, выпавший осадок отфильтровывают, эфирно-этанольную фракцию упаривают под вакуумом для удаления эфира до сиропообразного остатка, высушивают на силикагеле, сухой порошок вносят в хроматографическую колонку на слой силикагеля, элюируют, полученные фракции объединяют, упаривают до сухого остатка под вакуумом, получают сухой порошок технической розмариновой кислоты, который затем очищают на колонке. Выход целевого продукта составляет 4% в пересчете на количество лекарственного сырья, 80% в пересчете на сумму фенольных кислот.

Формула изобретения

Способ получения розмариновой кислоты путем предварительного экстрагирования сырья 70%-ным этиловым спиртом, включающий объединение полученных экстрактов, упаривание до сиропообразного остатка, высушивание сгущенного экстракта на силикагеле, нанесение на колонку с силикагелем, элюирование, объединение и упаривание до сухого остатка, очистку технической розмариновой кислоты на колонке заполненной сефадексом LH-20 в воде, отличающийся тем, что в качестве сырья используют траву шалфея мутовчатого (Salvia verticillata L.), предварительно экстрагирование которой проводят дважды 70%-ным спиртом этиловым на водяной бане при 60°С при соотношении сырье: экстрагент 1:10 в течение 1,5 ч, каждый раз отфильтровывают, спиртовые извлечения объединяют, упаривают под вакуумом на водяной бане до водного остатка, оставляют на 12-15 ч до выпадения хлорофилла, осадок хлорофилла отфильтровывают, водный остаток обрабатывают равными объемами этилацетата 6-8 раз, этилацетатную фракцию упаривают до смолообразного остатка, который растворяют при нагревании в спирте этиловом, быстро охлаждают и выливают при перемешивании в избыток диэтилового эфира, выпавший осадок отфильтровывают, эфирно-этанольную фракцию упаривают под вакуумом для удаления эфира до сиропообразного остатка, высушивают на силикагеле, сухой порошок вносят в хроматографическую колонку на слой силикагеля, элюируют, полученные фракции объединяют, упаривают до сухого остатка под вакуумом, получают сухой порошок технической розмариновой кислоты, который затем очищают на колонке.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к фармации и химико-фармацевтической промышленности, а именно к способу получения биологически активных веществ из лекарственного растительного сырья, и касается получения розмариновой кислоты из травы шалфея мутовчатого.

Известен способ получения общего количества фенольной кислоты из шалфея многокорневого Salvia miltiorrhiza [Пат. 2317973; опубл. 2008.02.27, Бюл. № 6. - 11 с.]. Растительное сырье, изрезанное или измельченное в порошок, экстрагируют горячей водой. Отвар фильтруют и подкисляют, помещают в полиамидную колонну (найлон-6) и промывают колонну водой до достижения нейтрального состояния. Элюируют колонну слабым щелочным водным раствором и собирают элюант. После окисления (10% HCl) полученного на стадии щелочного элюанта до рН 2,0, загружают на макропористую адсорбирующую смолу (приведены 3 вида смолы). Сначала промывают водой до нейтрального состояния, а затем элюируют низшим водным или безводным (этанолом) спиртом, собирают этот элюат. Концентрируют элюат под вакуумом до удаления этанола, пропускают через микропористую мембрану и высушивают сублимационной сушкой.

Выход целевого продукта (по 3-м примерам) 4,4-4,5% в пересчете на количество лекарственного растительного сырья. Содержание общего количества фенольной кислоты (суммы кислот) в целевом продукте составило 83,15-84,02%, а содержание сальвианоловой кислоты В 53,73-54,17%.

Наиболее близким к заявленному является способ получения розмариновой кислоты из травы мелиссы лекарственной Melissa officinalis L. [Авдеева Е.В. Лекарственные растения, содержащие фенилпропаноиды, как источник получения гепатопротекторных и иммуномодулирующих препаратов: дис. способ получения розмариновой кислоты, патент № 2402525 д-ра фарм. наук: 15.00.02: защищена 06.11.07 / Е.В.Авдеева. - Самара, 2007. - 288 с.].

В соответствии с этим способом измельченную воздушно-сухую траву мелиссы лекарственной экстрагируют 70% спиртом этиловым в соотношении 1:10 в три этапа: первое и второе настаивание в соотношении 1:4 проводят при комнатной температуре, в течение 24 часов, третью экстракцию в соотношении 1:2 - 45 минут при 60°С с обратным холодильником на водяной бане. Спиртовые экстракты объединяют, сгущают под вакуумом до сиропообразного остатка, высушивают на полиамиде в соотношении исходная навеска сырья - сорбент (5:1). Полиамид с нанесенным экстрактом вносят в хроматографическую колонку № 1 на слой полиамида, сформированный в воде и в 1,5 раза превышающий по массе полиамид с нанесенным экстрактом. В качестве элюанта используют воду, затем 5% спирт этиловый. Контроль за содержанием в фракциях целевого продукта осуществлялся с помощью ТСХ (система растворителей хлороформ - спирт метиловый - вода 26:14:3, пластинки «Sorbfil - ПТСХ-П-А-УФ», «Силуфол - УФ 254»), розмариновую кислоту обнаруживали при просмотре хроматограммы в УФ-свете при 365 нм в виде доминирующего ярко-голубого пятна с величиной Rfспособ получения розмариновой кислоты, патент № 2402525 0,5. Полученные фракции объединяли, упаривали под вакуумом до сиропообразного остатка, который высушивали на силикагеле, взятом в соотношении 1:7 по отношению к исходной навеске сырья. Сухой порошок вносят в хроматографическую колонку № 2 на слой силикагеля, вдвое превышающий по массе силикагель с нанесенными фракциями и сформированный в виде взвеси в хлороформе с высотой слоя 2 см. Элюируют смесью хлороформ - спирт метиловый в соотношении 95:5 с целью удаления основного количества гидрофобных соединений. Целевое вещество десорбируют смесью хлороформ - спирт метиловый в соотношении 88:12. Полученные фракции объединяют и упаривают до сухого остатка под вакуумом, получают сухой порошок технической розмариновой кислоты.

Очистку технической розмариновой кислоты от минорных примесей кофейной и хлорогеновой кислот проводят на колонке № 3, заполненной сефадексом LH-20 в воде. Для этого целевой продукт растворяют в теплой воде в соотношении 1:10-1:12 и полученный мутноватый раствор вносят в колонку и элюируют 3 раза равным количеством воды. Объединенный водный элюат, содержащий розмариновую кислоту, упаривают под вакуумом при 60°С с добавлением этанола для ускорения процесса до сухого остатка, получают целевой продукт розмариновую кислоту - стандарт с выходом 70%, от суммы фенольных кислот или 3% от массы лекарственного сырья.

Недостатками известного способа являются длительность и сложность выделения целевого продукта, невысокий выход целевого продукта.

Задачей изобретения является упрощение способа выделения целевого продукта, увеличение выхода целевого продукта, а также расширение сырьевой базы источников розмариновой кислоты.

Поставленная задача достигается тем, что в качестве сырья используется трава шалфея мутовчатого (Salvia verticillata L.).

Измельченное воздушно-сухое сырье экстрагируют дважды 70% спиртом этиловым на водяной бане при 60°С при соотношении сырье: экстрагент 1:10 в течение 1,5 часов, каждый раз отфильтровывают. Полученные спиртовые извлечения объединяют, упаривают под вакуумом на водяной бане до водного остатка и оставляют на 12-15 часов до выпадения хлорофилла. Выпавший осадок хлорофилла отфильтровывают. Водный остаток обрабатывают равными объемами этилацетата 6-8 раз. Этилацетатную фракцию упаривают до смолообразного остатка, который растворяют при нагревании в спирте этиловом, быстро охлаждают и выливают при перемешивании в избыток диэтилового эфира. Выпавший осадок отфильтровывают. Эфирно-этанольную фракцию упаривают под вакуумом при комнатной температуре для удаления эфира до сиропообразного остатка, который высушивают на силикагеле, взятом в соотношении 1:7 по отношению к исходной массе сырья. Сухой порошок вносят в хроматографическую колонку № 1 (колонка d=5 см, h=56 см) на слой силикагеля, вдвое превышающий по массе силикагель с нанесенными фракциями и сформированный в виде взвеси в хлороформе с высотой слоя 2 см. Элюируют смесью хлороформ - спирт этиловый в соотношении 90:10 с целью удаления основного количества гидрофобных соединений. Целевое вещество десорбируют смесью хлороформ - спирт этиловый в соотношении 80:20. Контроль за содержанием целевого продукта осуществлялся с помощью ТСХ: розмариновая кислота обнаруживается при просмотре хроматограммы в УФ-свете при 254 нм в виде доминирующего ярко-голубого пятна с величиной Rfспособ получения розмариновой кислоты, патент № 2402525 0,5-0,6 (система растворителей хлороформ - спирт метиловый - вода 26:14:3, пластинки «Sorbfil - ПТСХ-АФ-А-УФ»). Полученные фракции объединяют и упаривают до сухого остатка под вакуумом, получают сухой порошок технической розмариновой кислоты.

Очистку технической розмариновой кислоты от минорных примесей кофейной и хлорогеновой кислот проводят на колонке № 2, заполненной сефадексом LH-20 в воде. Для этого целевой продукт растворяют в теплой воде в соотношении 1:10-1:15 и полученный мутноватый раствор вносят в колонку и элюируют 3 раза равным количеством воды. Объединенный водный элюат, содержащий розмариновую кислоту, упаривают под вакуумом при 60°С до сухого остатка, получают целевой продукт розмариновую кислоту, представляющую собой светло-желтое аморфное вещество. Выход целевого продукта составляет 4% в пересчете на количество лекарственного сырья, 80% в пересчете на сумму фенольных кислот, находящихся в лекарственном сырье.

Осуществление заявленного способа поясняется следующим примером технологического процесса.

50 г измельченного воздушно-сухого сырья травы шалфея мутовчатого помещают в колбу, заливают 70% спиртом этиловым в соотношении сырье-экстрагент (1:10) и экстрагируют дважды на водяной бане при 60°С в течение 1,5 часов. Каждый раз экстракт отфильтровывают. Полученные спиртовые экстракты объединяют. Объединенный экстракт (в количестве 300 мл) упаривают под вакуумом на водяной бане (при 80-95°С и остаточном давлении 0,2-0,3 кгс/см2 ). Упаривание ведут до получения водного остатка (60-70 мл) и оставляют на 12-15 часов до выпадения хлорофилла. Выпавший осадок хлорофилла отфильтровывают. Фильтрат 60 мл обрабатывают равными объемами этилацетата 6-8 раз. Этилацетатную фракцию 300-400 мл упаривают до смолообразного остатка, который растворяют при нагревании в 30-40 мл спирта этилового, быстро охлаждают и выливают при перемешивании в избыток 50-60 мл диэтилового эфира. Выпавший осадок отфильтровывают. Эфирно-этанольную фракцию 70 мл упаривают под вакуумом при комнатной температуре для удаления эфира до сиропообразного остатка, который высушивают на силикагеле 350 г, взятом в соотношении 1:7 по отношению к исходной массе сырья. Сухой порошок вносят в хроматографическую колонку № 1 (колонка d=5 см, h=56 см) на слой силикагеля 700 г, вдвое превышающий по массе силикагель с нанесенными фракциями и сформированный в виде взвеси в хлороформе с высотой слоя 2 см. Элюируют смесью хлороформ - спирт этиловый в соотношении 90:10 с целью удаления основного количества гидрофобных соединений. Целевое вещество десорбируют смесью хлороформ - спирт этиловый в соотношении 80:20. Контроль за содержанием целевого продукта осуществлялся с помощью ТСХ: розмариновая кислота обнаруживается при просмотре хроматограммы в УФ-свете при 254 нм в виде доминирующего ярко-голубого пятна с величиной Rfспособ получения розмариновой кислоты, патент № 2402525 0,5-0,6 (система растворителей хлороформ - спирт метиловый - вода 26:14:3, пластинки «Sorbfil - ПТСХ-АФ-А-УФ»). Полученные фракции объединяют и упаривают до сухого остатка под вакуумом, получают сухой порошок технической розмариновой кислоты (до 3,5 г).

Очистку технической розмариновой кислоты от минорных примесей кофейной и хлорогеновой кислот проводят на колонке № 2, заполненной сефадексом LH-20 в воде. Для этого целевой продукт (3,5 г) растворяют в теплой воде в соотношении 1:10-1:15 (35-55 мл) и полученный мутноватый раствор вносят в колонку и элюируют 3 раза равным по 50 мл количеством воды. Объединенный водный элюат (170 мл), содержащий розмариновую кислоту, упаривают под вакуумом при 60°С до сухого остатка, получают целевой продукт розмариновую кислоту, представляющую собой светло-желтое аморфное вещество. Выход целевого продукта составляет 4% (около 2 г), в пересчете на количество лекарственного сырья (50 г), 80% в пересчете на сумму фенольных кислот.

Предлагаемая совокупность отличительных признаков (использование в качестве сырья траву шалфея мутовчатого, экстракция на кипящей водяной бане при 60°С в соотношении сырье-экстрагент (1:10) в течение 1,5 часов, кратность экстракции - 2 раза, упаривание, отстаивание водного остатка 12-15 часов, обработка фильтрата этилацетатом, растворение этилацетатной фракции в этаноле, с последующим осаждением эфиром, упаривание эфирно-этанольной фракции до сиропообразного остатка, использование двух хроматографических колонок ( № 1 - для получения целевого вещества, № 2 - для очистки технического целевого продукта) позволяет:

- упростить способ получения целевого продукта - розмариновой кислоты;

- увеличить выход целевого продукта (выход розмариновой кислоты из травы шалфея мутовчатого составляет 4% в пересчете на количество лекарственного сырья, 80% в пересчете на сумму кислот (что в 1,1 раз больше по сравнению с ближайшим аналогом) за счет повышения интенсивности процесса экстракции, извлечения розмариновой кислоты этилацетатом из водного остатка и с последующим извлечением эфиром из этанольный фракции;

- расширить сырьевую базу источников розмариновой кислоты (до настоящего времени шалфей мутовчатый не рассматривался в качестве сырья для получения розмариновой кислоты, т.е. мы предлагаем новый вид лекарственного растительного сырья для получения розмариновой кислоты)

Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2402525

patent-2402525.pdf

Класс C07C67/32 декарбоксилирование

Класс C07C67/56 обработкой в системе твердое вещество - жидкость; хемосорбцией

Класс C07C67/52 изменением физического состояния, например кристаллизацией

Наверх