способ 11 бета-гидроксилирования дельта4-3-кетостероидов
Классы МПК: | C12P33/16 воздействие в положении 17 C07J1/00 Нормальные стероиды, содержащие атомы углерода, водорода, галогена или кислорода, не замещенные в положении 17 бета атомом углерода, например эстран, андростан C12R1/645 грибы |
Автор(ы): | Андрюшина Валентина Александровна (RU), Войшвилло Наталия Евгеньевна (RU), Дружинина Анна Викторовна (RU), Стыценко Татьяна Семеновна (RU), Ядерец Вера Владимировна (RU), Скрябин Константин Георгиевич (RU), Бартошевич Юрий Эдуардович (RU), Новак Марина Иоганновна (RU), Домрачева Алла Георгиевна (RU) |
Патентообладатель(и): | Учреждение Российской академии наук Центр "Биоинженерия" РАН (RU) |
Приоритеты: |
подача заявки:
2008-11-10 публикация патента:
20.09.2010 |
Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу 11 -гидроксилирования 4-3-кетостероидов с помощью биомассы мицелия штамма Curvularia lunata ВКПМ F-988. Для трансформации используют отмытый от питательной среды мицелий штамма Curvularia lunata ВКПМ F-988, возраст которого не превышает 30 ч. Мицелий берут в количестве, при котором отношение биомассы к трансформируемому стероиду составляет 1.5-2.5:1. Трансформацию ведут в буферном растворе, а стероидный субстрат вносят в виде суспензии микрокристаллов, либо в виде водорастворимого комплекса с метил- -циклодекстрином, отношение стероида к которому составляет 1:1-0,6:1 (моль/моль). 11 -Гидроксипроизводные получают с выходом 50-80%. Предлагаемое изобретение позволяет повысить селективность процесса 11 -гидроксилирования, концентрацию трансформируемого стероидного субстрата до 20 г/л и сократить период реакции до 24-50 час. 1 з.п. ф-лы, 1 табл.
Формула изобретения
1. Способ 11 -гидроксилирования 4-3-кетостероидов с помощью гриба Curvularia lunata, отличающийся тем, что для проведения процесса используют биомассу мицелия штамма Curvularia lunata ВКПМ F-988, а трансформируемый стероид вносят в виде суспензии микрокристаллов либо предпочтительно в виде комплекса с метил- -циклодекстрином при соотношении метилциклодекстрин-стероид 1:1-0,6:1 (моль/моль).
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что возраст мицелия Curvularia lunata не превышает 30 ч, а отношение биомассы мицелия к трансформированному стероиду составляет 1,5-2,5:1.
Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к области биотехнологии, медицинской химии, микробиологии и может быть использовано в фармацевтической промышленности для получения биологически активных стероидных соединений, содержащих 11 -гидроксигруппу, которая отвечает за наличие в молекуле противовоспалительной активности.
11 -Гидроксилирование стероидов рассматривается как одна из наиболее значимых реакций в ряду стероидных биотрансформаций, т.к. служит для получения глюкокортикоидов противовоспалительного и антиаллергического действия, таких как гидрокортизон, преднизолон, а также фторированных кортикостероидов (триамцинолон, дексаметазон и др) в промышленном масштабе [1].
Максимальное количество способов 11 -гидроксилирования 4-3-стероидов являются способами получения гидрокортизона (С21О5Н30, кортизол, вещество «F» Кендалла, прегн-4-ен-11 ,17 ,21-триол-3,20-дион) - представителя важного класса лекарственных препаратов стероидной природы [2-25]. В качестве самостоятельного препарата/гидрокортизон используется для лечения артритов, бурсита, воспалительных и аллергических заболеваний кожи и др. Он также служит в качестве исходного субстрата в синтезе других кортикоидов - кортизона, преднизолона, преднизона, метилпреднизолона [2]. Еще 11 -гидроксилирование необходимо для получения дексаметазона по схеме через 16 -метилкортексолон.
Представляют также интерес как соединения с высокой физиологической активностью и другие 11 -гидроксипроизводные 4-3-кетостероидов [22-28]. 11 -Гидроксистероиды получают введением 11-гидроксильной группы в стероидную молекулу с помощью микроорганизмов - низших грибов. Однако в отличие от 11 -гидроксилирования, которое осуществляют более 300 видов микроорганизмов, способность к накоплению 11 -гидроксистероидов с удовлетворительным выходом, но в смеси с 11 -гидроксипродуктами, присуща ограниченному числу видов грибов - Absidia orchidis, Cunninghamella blakesleeana, C.elegans, Cochliobolus lunatus [2, 6, 13, 16, 20, 28]. И только штаммы Curvularia lunata (коллекций - АТСС, IFO, NRRL, BKM и др.) из 35 известных видов широко распространенного в природе плесневого гриба рода Curvularia проводят гидроксилирование 4-3-кетостероидов преимущественно в 11 -положение и служат биокатализатором для получения гидрокортизона [2-27]. Достоинством вида С.lunata является также способность к 11 -гидроксилированию как 21-гидроксистероидов, так и 21-метилсодержащих стероидов [2, 3, 27].
Несмотря на очень большое количество исследований, выполненных с различными штаммами грибов и, главным образом с С.lunata, процесс 11 -гидроксилирования по-прежнему остается наименее управляемым.
Установлено, что 11 -гидроксилирование с помощью С.lunata протекает только в аэрируемых условиях, как в процессе роста мицелия на питательной среде, так и в ее отсутствие, т.е. с помощью отмытой от среды и суспендированной в водном солевом растворе биомассы. Трансформацию в отсутствие питательной среды осуществляли с помощью свободного или иммобилизованного мицелия С.lunata [5-10,13]. Нерастворимые в воде стероидные субстраты вносили в реакционную среду в виде раствора в смешивающемся с водой органическом растворителе (этанол, метанол, диметилформамид и др.) или в виде мелкодисперсного порошка (МП) с размером частиц до 10-15 мкм [2]. Однако, в связи с токсичностью используемых растворителей для грибов-трансформаторов, нагрузка стероидов в реакционной среде не превышала 2 г/л.
Существуют способы использования стероидного субстрата - кортексолона и его ацетата с целью увеличения их растворимости в водной среде в виде комплекса с -циклодекстрином, однако растворимость в воде самого -циклодекстрина не позволяет поднять нагрузку стероида выше 4 г/л [10, 19, 20]. Проблема повышения растворимости и доступности стероидов для биокатализатора не решена как в работах с протопластами С.lunata, так и с иммобилизованным мицелием [5, 9, 13, 14].
Известно несколько способов введения 11 -гидроксигруппы с помощью растущей культуры С.lunata. Например, различные 17 -эфиры кортексолона и 17 -ацетоксипрогестерон применяли в виде МП в количестве 0,25-2 г/л и трансформировали в течение 12-48 ч [22]. 21-Ацетат кортексолона трансформировали в гидрокортизон в течение 24 ч растущими культурами С.lunata KА-91 и С.lunata CL-114 при нагрузке субстрата 1 г/л [19,20]. Известен пример 11 -гидроксилирования 21-ацетата кортексолона культурами Cunninghamella blakesleeana АТСС 8688а и Cunninghamella echinulata F-1307943, которые образовывали ацетат гидрокортизона в течение 24 ч при нагрузке ацетата кортексолона 0,15 г/л, растворенного в этаноле [21]. Предложен способ введения 11 -гидроксигруппы в ацетат норэтистерона при нагрузке 1,25 г/л, растворенного в диметилформамиде. Трансформация с помощью С.lunata АТСС 12017 протекала 24 ч [23].
В отличие от вышеприведенных способов трансформации стероидных субстратов при нагрузках не выше 2 г/л, процесс введения 11 -гидроксигруппы культурой С.lunata NRRL 2380 в 17-ацетат 6 -метилпрегнадиендиона осуществляли при нагрузке субстрата 10 г/л, который вносили в питательную среду в виде МП и трансформировали 8-11 дней [24].
Однако для промышленного применения более предпочтительны способы 11 -гидроксилирования, основанные на использовании биомассы С.lunata, суспендированной в буферном или физиологическом растворе. Таким способом получали 16,17-ацетонид гидрокортизона в ферментере с рабочим объемом 500 л. Субстрат - 16,17-ацетонид кортексолона в виде раствора в диметилформамиде вносили в суспензию мицелия, приготовленную на дистилированной воде. При нагрузке стероида 1 г/л трансформация заканчивалась за 6-10 ч [25]. С помощью мицелия С.lunata F/70, суспендированного в фосфатном буфере, получали 11 -гидрокси-производное 16 -метил-17 ,21-дигидрокси-прегн-4-ен-3-она (ключевое соединение в синтезе дексаметазона) при нагрузке субстрата 0,2 г/л [26].
Недостатками описываемых способов 11 -гидроксилирования являются либо низкое содержание трансформируемых субстратов, либо длительный период полной биоконверсии. К числу недостатков следует также отнести образование побочных гидроксистероидов, число которых может доходить до пяти и наличие которых усложняет выделение целевого продукта [2].
Известен способ, согласно которому трансформируемый субстрат использовали в виде МП, что позволило увеличить содержание кортексолона в среде до 10 г/л [7, 8]. Однако период трансформации при такой нагрузке субстрата, проводимой в фосфатном буфере с помощью свободного, а также иммобилизованного мицелия С.lunata ВКМ F-644, составил 168 ч. Конверсию кортексолона в гидрокортизон осуществляли с помощью мицелия в возрасте 48-60 ч, т.е. отмытым от питательной среды в стационарной фазе роста. Гидроксилирование проводили с таким количеством мицелия, чтобы отношение биомассы к стероиду составляло 1:1 (в расчете на сухую биомассу), при этом процесс заканчивался с образованием гидрокортизона и двух побочных гидроксистероидов.
Можно предположить, что количество используемого мицелия было недостаточным для быстрой конверсии 10 г/л кортексолона. В таком длительном процессе, проводимом культурой в условиях голода, неизбежно происходила ее возрастная деградация, следствием чего могли быть снижение селективности и стероидгидроксилирующей активности биокатализатора и деструкция продуктов трансформации. Имел значение также возраст мицелия, служившего биокатализатором. Из литературы известно, что наиболее высокая гидроксилазная активность наблюдается у мицелия в логарифмической фазе роста [2, 8, 12]. При старении культуры в реакционной среде могут появляться побочные продукты трансформации стероидной молекулы и продукты лизиса мицелия, которые отрицательно влияют на выход целевого продукта и усложняют его выделение. Кроме того, поскольку не растворимые в воде стероиды адсорбируются на мицелии, при высоком содержании в среде кристаллы кортексолона могут служить препятствием для достаточного доступа кислорода к биокатализатору. Эту гипотезу подтверждают данные работы с С.lunata CL-114, согласно которым выход гидрокортизона возрастал при дробной подаче субстрата [20], а также результаты 11 -гидроксилирования кортексолона в виде водорастворимого комплекса с -циклодекстрином, выход гидрокортизона из которого был выше, чем из кортексолона в виде МП [10, 20].
Целью заявляемого изобретения является разработка эффективного способа 11 -гидроксилирования 4-3-кетостероидов с помощью нового штамма Curvularia lunata ВКПМ F-988 с маркером резистентности к антибиотику генецитину "G-418".
Для способа характерны высокая скорость и селективность процесса гидроксилирования в сочетании с полной конверсией стероидного субстрата при его высокой нагрузке. При нагрузке трансформируемого субстрата до 20 г/л трансформация протекает без деструкции стероидов за период не более 50 ч.
Сущность способа заключается в том, что для 11 -гидроксилирования используют мицелий С.lunata ВКПМ F-988, отмытый от питательной среды в возрасте не более 30 ч, причем мицелий для реакции берут в таком количестве, чтобы отношение плотности биомассы гриба (по сухому весу) к весу трансформируемого стероида составляло 1,5-2,5:1.
Трансформируемые стероиды вносят в реакционную среду или в виде микрокристаллов - МП, либо в виде растворимого в водной среде комплекса с химически модифицированным -циклодекстрином, например с метил- -циклодекстрином (МЦД). Известно, что химически модифицированные циклодекстрины повышают эффективность бактериальных процессов 1,2-дегидрирования стероидов и отщепления боковой цепи стеринов [29]. Однако для трансформаций, катализируемых грибами, механизм которых отличается от бактериального, химически модифицированные циклодекстрины не применялись.
Трансформация стероидов в виде комплекса с МЦД с помощью С.lunata ВКПМ F-988 протекала в 2 раза быстрее по сравнению с микрокристаллическим субстратом. Кроме того, в этом случае облегчалось выделение чистого гидроксипроизводного, так как субстрат и продукты реакции не накапливались на мицелии (таблица), тогда как при трансформации субстрата в виде МП на мицелии содержалась почти половина общего количества стероидов, которые экстрагировались вместе с внутриклеточной субстанцией.
Данное изобретение иллюстрируют следующие примеры, выход 11 -гидроксисоединений (Y) в которых рассчитан по формуле: Y=100×P/(S×(Qp/Qs), где P - вес выделенного кристаллического продукта, S - количество взятого в реакцию субстрата, Qp - молекулярный вес продукта, Qs - молекулярный вес субстрата.
Таблица | |||||
Трансформация кортексолона с помощью мицелия С.lunata ВКПМ F-988 | |||||
Нагрузка кортексолона, г/л | Отношение стероид/метилцикло-декстрин, моль/моль | Время трансфер -мации, ч | Общее содержание продуктов трансформации, % | Выход кристаллического гидрокортизона, % | |
В водной фазе | В мицелии | ||||
10.0 | - | 46 | 48.8 | 42.6 | 43.2 |
10.0 | 1/5 | 22 | 91.5 | следы | 58.0 |
15.0 | 1/5 | 24 | 96 | следы | 56.4 |
20.0 | 1/5 | 48 | 98 | следы | 55.0 |
20.0 | 1/3 | 50 | 76.6 | 10.5 | 52.0 |
Пример 1. Трансформация кортексолона при нагрузке 10 г/л.
Суспензию спор штамм Curvularia lunata ВКПМ F-988, выращенного при 28°С в течение 120-140 ч на скошенном агаре следующего состава (г/л): глюкоза - 4,0, дрожжевой экстракт - 4,0, солодовый экстракт - 10, агар-агар - 25,0, вода дистиллированная, рН-6,8, переносят в жидкую среду в конические колбы объемом 750 мл со средой следующего состава (г/л): сахароза - 60,0, дрожжевой автолизат - 5,5, NaNO 3 - 3,5, NH4H2PO4 - 6,5, K2HPO4 - 2,0, KCl - 0,5, MgSO4 - 1,0, рН 6.0-6.1, и выращивают мицелий в аэробных условиях при скорости перемешивания 220-250 об/мин и температуре 28°С до конца стадии логарифмического роста. Полученный посевной материал переносят в свежую среду того же состава и проводят выращивание в аналогичных условиях. Через 24 часа роста полученный мицелий отфильтровывают, промывают дистиллированной водой, отделяют от воды, взвешивают и переносят в количестве, соответствующем по весу 10-11 г сухой биомассы, в 0,75 л 0,07 М фосфатного буфера, рН - 6.0-6.1, содержащего 7,5 г микронизированного стероидного субстрата с содержанием 95% основного вещества - кортексолона (7,12 г в 100%-ном исчислении). Полученную суспензию распределяют в 12 качалочных колб и проводят трансформацию в течение 46 ч (до исчезновения исходного субстрата) в аэробных условиях, при скорости перемешивания 220-250 об/мин и температуре 28°С.
Мицелий отделяют от водной фазы и дважды экстрагируют этилацетатом. Водную фазу трижды экстрагируют этилацетатом, полученные экстракты упаривают, сухие остатки взвешивают и определяют в них содержание стероидных продуктов с помощью ВЭЖХ, после чего взвешенные остатки объединяют. Получают 6,75 г технического продукта, который обрабатывают при перемешивании 30 мл гексана. Гексан отделяют и остаток растворяют в 60 мл смеси CHCl3:МеОН (7,5:1). К этому раствору по каплям при перемешивании прибавляют 400 мл воды. Полученный осадок отфильтровывают, промывают небольшим количеством СНСl3, сушат при 60°С. Получают 3,2 г кристаллического гидрокортизона с т.пл. 211-214°С, идентичного стандартному образцу (ИК, ПМР-спектры). Выход 43,2%. Из хлороформного маточника выделяют 2,2 г (31%) смеси 14 -гидрокси- и 11 , 14 -дигидроксикортексолона (ТСХ и ВЭЖХ-анализ).
Пример 2. Трансформация кортексолона при нагрузке 10 г/л в виде комплекса с МЦД.
Влажный мицелий в количестве, соответствующем по весу 12-13 г сухой биомассы, полученный по примеру 1, вносят в 1,0 л фосфатного буфера, содержащего 10 г кортексолона (9,5 г в 100%-ном исчислении) и метил- -циклодекстрин (МЦД) в отношении стероид/МЦД 1:1 (моль/моль). Инкубируют на качалке 22 ч в условиях примера 1 ч. Мицелий отделяют от водной фазы, экстрагируют этилацетатом и определяют с помощью ТСХ отсутствие стероидных продуктов в полученном экстракте. Водную фазу трижды экстрагируют этилацетатом. После упаривания экстракта получают 8,93 г технического продукта, который обрабатывают аналогично примеру 1 и получают 5,76 г (58%) кристаллического гидрокортизона с т.пл. 210-214°С. Из хлороформной фракции получают 2,1 г (21%) 14 -гидрокси-кортексолона, идентичного по ТСХ и ВЭЖХ стандартному образцу.
Пример 3.
Аналогично примеру 2 проводили трансформацию 3,75 г кортексолона (3,56 г в 100%-ном исчислении) при нагрузке 15 г/л, а также выделяли и очищали продукт трансформации. Отношение биомассы (в пересчете на вес сухого мицелия)/стероид составляло 2:1, отношение стероид/МЦД - 1/1 (моль/моль). Продолжительность трансформации 24 ч. Получено 3,72 г технического продукта. Выделено 2,01 г (56,4% теор.) кристаллич. гидрокортизона и 0,85 г (23% теор.) кристаллич. 14 -гидрокси-кортексолона.
Пример 4.
Проводили трансформацию кортексолона с МЦД при нагрузке 20 г/л.
а) Аналогично примеру 2 проводили трансформацию, выделяли и очищали продукт трансформации. Количество загруженного на трансформацию субстрата составляло 7 г (6,65 в 100%-ном исчислении). Отношение биомасса/стероид составляло 2,5:1. Продолжительность полной конверсии кортексолона - 48 ч. Получено 6,0 г технического продукта. Выделено 3,82 г (55% теор.) кристаллич. гидрокортизона и 1,5 г (21,5% теор.) кристаллич. 14 -гидроксикортексолона.
б) Аналогично пункту (а) проводили трансформацию 5 г кортексолона (4,75 г в 100%-ном исчислении), выделение и очистку продукта реакции. Использовали соотношение МЦД/стероид 0,6/1 (моль/моль). Продолжительность трансформации 50 ч. Получено 4.0 г технического продукта. Выделено 2,6 г (52% теор.) кристаллич. гидрокортизона и 0,95 г (19% теор.) 14 -гидроксикортексолона.
Пример 5. Трансформация 21-ацетата кортексолона при нагрузке 10 г/л.
Аналогично примеру 2 трансформировали 5 г 21-ацетата кортексолона (4,5 г в 100%-ном исчислении) в течение 48 ч. Выделение проводили согласно примеру 2. Получено 3,36 г технического продукта. Выделено 2,15 г (51%) теор.) кристаллич. гидрокортизона и 0,84 г 14 -гидрокси-кортексолона (21% теор.).
Пример 6. Получение 16 -метилгидрокортизона из 21-ацетата 16 -метил кортексолона.
Трансформацию 3 г 21-ацетата 16 -метил-прегн-4-ен-17 ,21-диол-3,20-диона в виде комплекса с МЦД (при соотношении стероид/МЦД 1/4) проводили при нагрузке стероида 10 г/л в течение 40 ч, используя отношение биомассы к стероиду 2,5:1. Мицелий, не содержащий продукта трансформации, отделяли от водной фазы. Водную фазу экстрагировали этилацетатом. Экстракт упаривали. К остатку добавляли равное по объему количество хлороформа, выпавший осадок отфильтровывали и сушили при 65°С. Получено 1,32 г технического 11 -гидроксипродукта (выход 50%). После кристаллизации продукт был идентичен образцу 16 -метил-гидрокортизона [26].
Пример 7. Получение 11 -гидрокситестостерона из тестостерона.
Трансформацию 4 г химически чистого тестостерона проводили в условиях примера 2 в течение 24 ч при нагрузке 5 г/л. Мицелий и водную фазу экстрагировали отдельно. Экстракты, содержащие по данным ТСХ примерно одинаковое количество продуктов реакции, объединяли, упаривали и получали 3,8 г технического продукта, который растворяли в 30 мл метанола. К метанольному раствору прибавляли 5 мл воды. Полученную смесь охлаждали до 5-7°С в течение 3 ч. Отделяли кристаллический осадок. Промывали его охлажденным метанолом, сушили и получали 2,53 г (выход 60%) 11 -гидрокситестостерона с т.пл. 232-235°С. Лит.235-236.5°С [30].1Н ПМР (CDCl3, ) 1,01 (3Н, с, Н-18), 1,42 (3Н, с, Н-19), 3,58 (1H, кв, 3J=8,8 Гц, Н-17), 4,36 (1Н, м, J=9,4 Гц Н-11), 5,65 (1Н, с, Н-4).
Пример 8. Получение 11 ,17 -дигидроксипрогестерона.
Трансформацию 2,4 г химически чистого 17 -гидроксипрогестерона проводили в условиях примера 2 в течение 24 ч при нагрузке 5 г/л. Мицелий и водную фазу экстрагировали отдельно. После упаривания экстракта водной фазы (ТСХ показала отсутствие стероидов на мицелии) получили 2,2 г технического продукта, который промыли 1-1,2 мл ацетона. Получено 2,0 г (80%) кристаллического 11 ,17, -дигидроксипрогестерона, т.пл. 223-225°С. Лит.226-228°С. [31]. 1Н ПМР (CDC13, ): 1,0 (3Н, с, Н-18), 1,4 (3Н, с, Н-19), 2,27 (3Н, с, Н-21), 2,72 (1H уш.с, 17-ОН), 4,45(1Н, м, Н-11 ), 5,66 (1H, с, Н-4).
Пример 9. Получение 11 -гидроксипроизводного 20-гидрокси-метилпрегна-1,4-диен-3-она (ГМПД).
Аналогично примеру 2 трансформировали 1,0 г ГМПД в течение 24 ч при нагрузке 4 г/л. Водную фазу экстрагировали этилацетатом (на мицелии стероиды отсутствовали). После упаривания экстракта получено 0,95 г смеси гидроксипроизводных ГМПД, которую делили препаративно на SiO2. Стероиды элюировали смесью CHCl3/ацетон 7:2. Выделено 0,45 г (43%) 11 ,20-дигидроксиметилпрегна-1,4-диен-3-она (1Н ПМР (CDCl3, ): 0,86 (3Н, с, Н-18), 1,35 (3Н, с, Н-19), 4,15 (1Н, кв, Н-11), 5.8 (1H, с, Н-4), 6,03 (1H, д, Н-2), 7,24 (1H, д, Н-1) и 0,26 г (25%) 7 ,20 -дигидроксиметилпрегна-1,2-диен-3-она. 1Н ПМР (CDCl3, ): 1,02 (3Н с, Н-18), 1,24 (3Н, с, Н-19), 4,2 (1H, т, J=15,5 гц, Н-7), 6.1 (1H, д, Н-4), 6.2 (1Н, д, Н-2), 7.05 (1H, м, Н-1).
Пример 10. Получение 11 -гидроксипроизводного прогестерона.
Аналогично примеру 2 трансформировали 1,0 г прогестерона в течение 25 ч при нагрузке 2 г/л. Водную фазу экстрагировали этилацетатом (на мицелии стероиды отсутствовали). После упаривания экстракта получено 0,8 г кристаллического осадка, состоящего из смеси 2 гидроксипроизводных прогестерона в отношении 1:1, идентифицированных как 11 -гидроксипрогестерон (1Н ПМР (CDCl3 , ): 0,99 (3Н, с, Н-18), 1,43 (3Н, с, Н-19), 2,1 (3Н, с, Н-21), 3.16 (1Н, м, Н-17), 4,29 (1Н, м, Н-11 ), 5.66 (1Н, с, Н-4) и 6 -гидроксипрогестерон (1Н ПМР (CDCl3 , ): 0,73 (3Н, с, Н-18), 1,19 (3Н, с, Н-19), 2,1 (3Н, с, Н-21), 3,16 (1Н, м, Н-17), 4.39 (1Н, м, Н-6 ), 5,79 (1H, с, Н-4).
Источники информации
1. Машковский М.Д. / Лекарственные средства. М.: ООО «Новая Волна». 2002.
2. Sedlaczek L. / Crit. Rev. Biotechnol. V.7. N.3. P.187-236. 1988.
3. Mahato S.B., Garai S. / Steroids. V.62. P.332-345. 1997.
4. Dulaney E.L., Stapley E.O. / Appl. Microbiol. V.7. P.276-284. 1959.
5. Sonomoto K., Hog M.M., Tanaka A., Fukui S. / Appl. Environ. Microbiol. V.45. P.436-443. 1983.
6. Ангелова Б.А., Суходольская Г.В., Кощеенко К.A. / Микробиология. T.54. C.704-709. 1985.
7. Суходольская Г.В., Ангелова Б.А., Кощеенко К.A. и др. / Патент РФ № 1411336 А1. Бюл. № 27. 23.07.88.
8. Суходольская Г.В., Ангелова Б.А., Кощеенко К.Д., Скрябин Г.К. / Прикладная биохим. микробиол. Т.27. С.436-443. 1991.
9. Chen K.С., Wey Н.С. / Enzyme Microbiol. Technol. V.12. P.616-621. 1990.
10. Чинчолкар С.Б., Суходольская Г.В., Баклашова Т.Г., Кощеенко К.А. / Прикл. Биохим. Микробиол. Т.62. С.685-693. 1992.
11. Sedlaczek L., Milczarek K., Wilmanska D. et al. / Poland Patent 161090. 1993.
12. Santhanam H.K., Shreve G.S. / Biotechnol. Prog. V.10. P.187-192. 1994.
13. Wang J., Chen С., Li В., Zhang J., Yu Y. / Enz. Microbiol. Technol. V.22. P.368-373. 1998.
14. Paraszkiewicz K., Dlugonski J. / J.Biotechnol. V.65. P.217-224. 1998.
15. LuW.Y., Du L.X., WangM., Wen j.P., Sun В., Guo Y.W. Biochem. Eng. J. V.32. P.233-238. 2006.
16. Ohlson S., Flygare S., Larsson P.O., Mosbach K. / Eur. J.Microbiol. Biotechnol. 1980. V.10. P.1-9.
17. Manosroi J., Christi Y., Manosroi A. / Appl. Biochem. Microbiol. V.42. P.547-551. 2006.
18. Manosroi J., Saowakhon S., Manosroi A. / Enzyme Microbiol. Tecnol. V.41. P.322-325. 2007.
19. Lu W., Du L, Wang M, Jia X., Wen Y., Huong y., Guo Y., Cong W.,. Bao H., Yang J., Sun B. / Appl. Biochem. Biotecnol. V.142. N.1. 2007.
20. Lu W., Du L., Wang M., Guo Y., Sun В., Wen J., Jia X. / Food and Bioprod. Proc. V.85. P.63-72. 2007.
21. Spassov G., Pramatarova V., Wandrey С // Appl. Microbiol. Biotecnol. V.46. P.481-488. 1996.
22. Голланд. патент 6605514 / Chem.Abstr. V.69. P.77624P. 1968. № 6. C.56-58. 1990.
23. Chosson P., Vidal H., Aumelas A., Couderc F. / Microbiol. Lett. V.83. P.17-22. 1991.
24. Perlman B.A., White M.Y., Gilbert G. / US Pat 6828120. 2004.
25. Rolland G.J., Mantica L., Ciceri R. / Italian Pat. 513843. 1971.
26. Умнова Э.Ф., Рыжкова B.M., Воробьева Л.И. / Хим.-Фарм. Журн. Т.24. С.56-57. 1990.
27. Турута A.M., Камерницкий А.В., Коробов А.А и др. / Хим.-Фарм. Журн. Т.24. С.52-55. 1990.
28. Vitas М., Rozman D., Komel R., Kelly S.L. // J. Biotechnol. V.42. P.145-150. 1995.
29. Донова M.B., Довбня Д.В., Калиниченко A.H. и др. // Патент РФ 2077590.
30. Sebek O.K., Michaelis R.M. // Nature. V.179. P.210. 1957.
31. Shull G.M., Kita D.A. // J.Am.Chem. Soc. V.77. P.763. 1955.
Класс C12P33/16 воздействие в положении 17
способ получения андроста-4,9(11)-диен-3,17-диона из фитостерина - патент 2512076 (10.04.2014) | |
способ получения 17-оксостероидов - патент 2082762 (27.06.1997) |
Класс C07J1/00 Нормальные стероиды, содержащие атомы углерода, водорода, галогена или кислорода, не замещенные в положении 17 бета атомом углерода, например эстран, андростан