вакцина ассоциированная против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий

Формула изобретения

Вакцина ассоциированная против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий, содержащая суспензии клеток чистых культур возбудителей псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa и энтерококковой инфекции Enterococcus faecalis, полученных путем отбора пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды, выделения чистых культур возбудителей, их раздельного выращивания в мясо-пептонном бульоне с глюкозой до концентрации микробных клеток 4-5 млрд в 1 см³, формалин и гидроокись алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя
псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa,
выделенной из пораженных органов
павших нутрий из местного эпизоотического
очага, в питательной среде с титром
4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3	38,0-41,5
суспензия клеток чистой культуры возбудителя
энтерококковой инфекции Enterococcus faecalis,
выделенной из пораженных органов
павших нутрий из местного эпизоотического
очага в питательной среде с титром
4-5 млрд микробных клеток в 1 см3	38,0-41,5
глюкоза	2,0-1,0
формалин	2,0-1,5
гидроокись алюминия	остальное

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к вакцинам, и может быть использовано в учреждениях, занимающихся конструированием биологических препаратов, а также на предприятиях биологической промышленности.

Известна ассоциированная вакцина против диареи телят, содержащая бактериальные клетки эшерихий, штаммы: 0138 К88, 09К99, 200; сальмонелл, штаммы: ГИСК № 195, ГИСК № 196, ГИСК № 197; протеи, штаммы: ГИСК № 198, ГИСК № 199; клебсиелл, штаммы: ГИСК № 201, ГИСК № 202 (патент на изобретение РФ № 2035916 от 17.06.93, МКИ А61K 39/125, 39/135). Данная вакцина предназначена для профилактики инфекционных заболеваний у телят, вызываемых эшерихиями, сальмонеллами, протеями и клебсиеллами, для нутрий не применяется.

Известна вакцина против стрептококкоза и пастереллеза нутрий (патент РФ на изобретение № 2099084 от 30.09.94, МКИ А61K 39/125, 39/135). Данная вакцина содержит в качестве антигена суспензию штамма Streptococcus zooepidemicus ВГНКИ № К-ДЕП с титром 2,5-3,0 млрд микробных клеток в 1 мл в культуральной среде, суспензию клеток штаммов Pasteurella multosida ВГНКИ № 6011, Pasteurella multosida ВГНКИ № 2394 и Pasteurella multocida ВГНКИ № 1015 в равных соотношениях общим содержанием 2,5-3,0 млрд микробных клеток в 1 мл питательной среды глюкозу, формалин, гидроокись алюминия и сапонин. Данная вакцина применяется для профилактики стрептококкоза и пастереллеза нутрий. Сырье получают путем культивирования штаммов возбудителей стрептококкоза и пастереллеза нутрий в питательной среде с низкой активностью. Использование сапонина в вакцине может вызывать у привитых животных различные поствакцинальные осложнения (воспалительные процессы, абсцессы на месте введения, хромоту и др.)

Техническим решением задачи изобретения является устранение перечисленных недостатков, в частности, повышение специфичности, эффективности вакцины против псевдомоноза и энтерококковой инфекции у нутрий путем введения новых чистых культур возбудителей, компонентов, исключая отрицательного и побочного влияния.

Решение задачи достигается тем, что вакцина ассоциированная против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий, содержащая суспензию клеток чистых культур возбудителей псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa и энтерококковой инфекции Enterococcus fecalis, полученных путем отбора пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды, выделения чистых культур возбудителей, их раздельного выращивания в мясо-пептонном бульоне с глюкозой до концентрации микробных клеток 4-5 млрд в 1 см³, формалина и гидроокиси алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя псевдомоноза
Pseudomonas aeruginosa, выделенного из местного
эпизоотического очага, в питательной среде
с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3	38,0-41,5
суспензия клеток чистой культуры возбудителя
энтерококковой инфекции Enterococcus fecalis,
выделенного из местного эпизоотического очага,
в питательной среде с титром 4-5 млрд
микробных клеток в 1 см3	38,0-41,5
глюкоза	2,0-1,0
формалин	2,0-1,5
гидроокись алюминия	остальное

Новизна заявляемого технического решения обусловлена тем, что в отличие от известных вакцин для получения сырья проводят отбор пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовление суспензии, посев на дифференциально-диагностические среды, выделение чистых культур возбудителей псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa и Enterococcus fecalis, выращивание чистых культур возбудителей проводят раздельно на мясо-пептонном бульоне, что позволяет повысить специфичность и иммуногенность вакцины.

Раздельное культивирование чистых культур возбудителей и добавление в питательную среду глюкозы до 0,2%-ной концентрации позволяет получать концентрацию микробных клеток не менее 4-5 млрд в 1 мл в течение 12-14 часов инкубирования. Инактивирование баксырья формалином в 0,4-0,5%-ной конечной концентрации при температуре 37°С в течение 72-96 часов позволяет подавить патогенность возбудителей и сохранить их иммуногенные свойства в течение 12 месяцев. Смешивание инактивированных антигенов псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa и Enterococcus fecalis в равных соотношениях, внесение гидроокиси алюминия и тщательное перемешивание не вызывает у привитых нутрий поствакцинальных осложнений, позволяет обеспечить формирование напряженного иммунитета через 12-15 суток после однократного введения продолжительностью не менее 9 месяцев (срок наблюдения). Использование чистых культур возбудителей Pseudomonas aeruginosa и Enterococcus fecalis, выделенных из местного эпизоотического очага от больных и павших нутрий, позволяет значительно повысить специфичность вакцины, после однократной вакцинации обеспечивает защиту животных сразу от двух опасных инфекционных болезней псевдомоноза и энтерококковой инфекции.

По данным патентной и научно-технической литературы не обнаружена аналогичная совокупность признаков, компонентов, что позволяет судить об изобретательском уровне заявленного технического решения.

Что касается критерия «промышленная применимость», то компоненты, входящие в состав вакцины, известны и широко применяются в ветеринарной практике при изготовлении инактивированных вакцин: ассоциированная вакцина против сальмонеллеза, пастереллеза и энтерококковой инфекции поросят ТУ 10.09-62-90 утверждена 01.08.90 г., инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины утверждена Главным управлением ветеринарии 16.07.90 г.; вакцина против энтерококковой инфекции телят, ягнят и поросят ТУ 10.09-91-90 утверждена 15.12.90 г., представлены все необходимые сведения о микроорганизмах рода Enterococcus. Однако для нутрий эти вакцины не применяются.

Методы выделения и характеристика микроорганизмов рода Pseudomonas описаны в «Практикуме по ветеринарной микробиологии и иммунологии», авторы Костенко Т.С., Родионова В.Б., Скородумов Д.И., М.: «Колос», 2001, стр.259-261; в справочнике «Микробиологическая диагностика бактериальных болезней животных», авторы Скородумов Д.И., Субботин В.В., Сидоров М.А., Костенко Т.С. М.: «ИзограФъ», 2005, стр.522-525.

Методы выделения и характеристика стрептококков и энтерококков представлены в «Методических указаниях по лабораторной диагностике стрептококкоза животных», утвержденных 25.09.1990 г. Главным управлением ветеринарии с государственной инспекцией при Государственной комиссии СМ СССР по продовольствию и закупкам, а также в справочнике «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» под редакцией профессора Сидорова М.А., М.: Колос, 1995, стр.90-95.

Предложенная вакцина ассоциированная против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий проста в исполнении, доступна и является промышленно применимой.

Вакцина ассоциированная против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий содержит инактивированные формалином чистые культуры возбудителей Pseudomonas aeruginosa и энтерококковой инфекции нутрий Enterococcus fecalis, адсорбированные на гидрате окиси алюминия. По внешнему виду вакцина представляет собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым осадком, который при встряхивании легко разбивается в гомогенную взвесь. Срок хранения в сухом, темном месте при температуре от 2 до 10°С 1 год. Вакцина предназначена для профилактики опасных инфекционных заболеваний нутрий против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий. Она вызывает образование специфического иммунитета против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий. Вакцина безвредна и ареактогенна. Иммунитет у нутрий, привитых вакциной против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий, формируется через 12-15 суток после вакцинации и сохраняется не менее 9 месяцев. Вакцину применяют в благополучных, неблагополучных и угрожаемых по псевдомонозу и энтерококковой инфекции нутрий хозяйствах. В благополучных и угрожаемых по псевдомонозу и энтерококковой инфекции нутрий хозяйствах вакцину вводят однократно, внутримышечно в область бедра, молодняку с 45-дневного возраста по 1,0 см³, а взрослым животным по 1,5 см³ . В неблагополучных хозяйствах вакцину вводят внутримышечно в область бедра с 2-месячного возраста двукратно с интервалом 7-10 дней: первая вакцинация в дозе 1,0 см³, вторая - в дозе 1,5 см³. Продукты убоя вакцинированных нутрий используют без ограничений независимо от сроков вакцинации.

К факторам, обуславливающим получение вакцины заданного свойства, относятся последовательность изготовления и процентное соотношение между компонентами, входящими в препарат.

Приведено пять примеров, содержащих компоненты в различных соотношениях на 100 мл вакцины.

Пример 1.

Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa и энтерококковой инфекции Enterococcus fecalis, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 75,0 с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 0,5, инактивируют внесением формалина 1,0, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя
псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa,
выделенного из местного эпизоотического очага
в питательной среде с титром
4-5 млрд микробных клеток в 1 см3	37,5
суспензия клеток чистой культуры возбудителя
энтерококковой инфекции Enterococcus fecalis,
выделенного из местного эпизоотического очага
в питательной среде с титром
4-5 млрд микробных клеток в 1 см3	37,5
глюкоза	0,5
формалин	1,0
гидроокись алюминия	остальное

При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий обладает слабой иммуногенной активностью.

Пример 2.

Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa и энтерококковой инфекции Enterococcus fecalis, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 78,0 с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 1,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя
псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa,
выделенного из местного эпизоотического очага
в питательной среде с титром
4-5 млрд микробных клеток в 1 см3	39,0
суспензия клеток чистой культуры возбудителя
энтерококковой инфекции Enterococcus fecalis,
выделенного из местного эпизоотического очага
в питательной среде с титром
4-5 млрд микробных клеток в 1 см3	39,0
глюкоза	1,0
формалин	1,0
гидроокись алюминия	остальное

При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий обладает иммуногенной активностью.

Пример 3.

Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa и энтерококковой инфекции Enterococcus fecalis, выделенные из местного эпизоотического очага, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 80,0 с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 1,7, инактивируют внесением формалина 1,3, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя
псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa,
выделенного из местного эпизоотического очага
в питательной среде с титром 4-5 млрд
микробных клеток в 1 см3	40,0
суспензия клеток чистой культуры возбудителя
энтерококковой инфекции Enterococcus fecalis,
выделенного из местного эпизоотического очага

в питательной среде с титром 4-5 млрд

микробных клеток в 1 см3	40,0
глюкоза	1,7
формалин	1,3
гидроокись алюминия	остальное

При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий обладает незначительной иммуногенной эффективностью.

Пример 4.

Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa и энтерококковой инфекции Enterococcus fecalis, выделенные из местного эпизоотического очага, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 83,0 с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 1,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя
псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa,
выделенного из местного эпизоотического очага
в питательной среде с титром 4-5 млрд
микробных клеток в 1 см3	41,5
суспензия клеток чистой культуры возбудителя
энтерококковой инфекции Enterococcus fecalis,
выделенного из местного эпизоотического очага
в питательной среде с титром 4-5 млрд
микробных клеток в 1 см3	41,5
глюкоза	1,0
формалин	1,5
гидроокись алюминия	остальное

При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий обладает иммуногенной активностью, формирует после вакцинации выраженный напряженный иммунитет, не вызывает поствакцинальных осложнений, стабильна при хранении в течение 12 месяцев (таблица).

Пример 5.

Берут возбудитель псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa, возбудитель энтерококковой инфекции нутрий Enterococcus fecalis, выделенные из местного эпизоотического очага, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 85,0 с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 2,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя
псевдомоноза Pseudomonas aemginosa,
выделенного из местного эпизоотического очага
в питательной среде с титром 4-5 млрд
микробных клеток в 1 см3	42,5
суспензия клеток чистой культуры возбудителя
энтероокковой инфекции Enterococcus fecalis,
выделенного из местного эпизоотического очага
в питательной среде с титром 4-5 млрд
микробных клеток в 1 см3	42,5
глюкоза	2,0
формалин	1,5
гидроокись алюминия	остальное

При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий обладает слабой иммуногенной активностью, формирует напряженный иммунитет, у отдельных животных на месте введение препарата вызывает слабое раздражение.

Таблица
Сравнительная оценка эффективности вакцины
Вакцина	Доза вакцины в см3	Метод введения	Иммунобиологические свойства
Кол-во нутрий в опыте (гол)	Наличие поствакцинальных осложнений	Длительность иммунитета (мес)	Защита в %
По прототипу	двукратно 1-я доза 1,0 см3 2-я доза 2,0 см 3	Внутримышечно	1500	Угнетение, хромота, отказ от корма в течение 2-3 суток	60-70
По предлагаемому способу	1,0 см3	Внутримышечно	1500	нет	9	90-100

Из данных таблицы видно, что предлагаемая вакцина ассоциированная против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий имеет значительные преимущества в сравнении с вакциной по прототипу.