композиция, содержащая растительный или рыбий жир, и соединения, содержащие неокисляющиеся структурные элементы жирных кислот

Формула изобретения

1. Применение препарата, содержащего сочетание:

1) растительного масла и/или рыбьего жира, за исключением подсолнечного масла; и

2) одного или нескольких соединений, содержащих не подвергающиеся -окислению структурные элементы жирных кислот, представленные

(a) общей формулой R"-COO-(CH₂)_2n+1 -X-R', где Х представляет собой атом серы, атом селена, атом кислорода, группу СН₂, группу SO или группу SO ₂; n представляет собой число от 0 до 11; и R' представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, где главная цепь указанного R' содержит от 13 до 23 атомов углерода и необязательно одну или несколько гетерогрупп, выбранных из группы, содержащей атом кислорода, атом серы, атом селена, атом кислорода, группу CH₂, группу SO и группу SO₂; и R" представляет собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 4 атомов углерода; при условии, что по меньшей мере один Х представляет собой не СН₂, и/или

(b) общей формулой (I)



где R1, R2 и R3 представляют собой

i) атом водорода; или

ii) группу формулы CO-R, в которой R представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, и главная цепь указанного R содержит от 1 до 25 атомов углерода; или

iii) группу формулы CO-(CH₂)_2n+1-X-R', где Х представляет собой атом серы, атом селена, атом кислорода, группу СН₂, группу SO или группу SO₂; n представляет собой число от 0 до 11; и R' представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, где главная цепь указанного R' содержит от 13 до 23 атомов углерода и необязательно одну или несколько гетерогрупп выбранных из группы, содержащей атом кислорода, атом серы, атом селена, атом кислорода, группу СН₂ , группу SO и группу SO₂;

iv) структурный элемент, выбранный из группы, содержащей -PO₃CH ₂CHNH₃COOH (фосфатидилсерин), PO₃ CH₂CH₂NH₃ (фосфатидилэтаноламин), PO₃CH₂CH₂N(СН₃) ₃ (фосфатидилхолин), PO₃CH₂CHOHCH ₂OH (фосфатидилглицерин) и РО₃(СНОН)₆ (фосфатидилинозитол);

где R1, R2, и R3 выбраны независимо из i), ii), iii) или iv), но по меньшей мере один из R1, R2, или R3 определяется как iii); при условии, что по меньшей мере один Х представляет собой не СН₂, и/или

(с) общей формулой (II)



где А1, А2 и A3 выбраны независимо и представляют собой атом кислорода, атом серы или группу N-R4, в которой R4 представляет собой атом водорода или линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, содержащую от 1 до 5 атомов углерода;

где R1, R2 и R3 представляют собой

i) атом водорода или линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, содержащую от 1 до 23 атомов углерода; или

ii) группу формулы CO-R, в которой R представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, и главная цепь указанного R содержит от 1 до 25 атомов углерода; или

iii) группу формулы CO-(CH2)_2n+1-X-R', где Х представляет собой атом серы, атом селена, атом кислорода, группу СН₂ , группу SO или группу SO₂; n представляет собой число от 0 до 11; и R' представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, где главная цепь указанного R' содержит от 13 до 23 атомов углерода и необязательно одну или несколько гетерогрупп, выбранных из группы, содержащей атом кислорода, атом серы, атом селена, атом кислорода, группу СН₂, группу SO и группу SO₂;

iv) структурный элемент, выбранный из группы, содержащей - PO₃CH₂CHNH₃ COOH (фосфатидилсерин), PO₃CH₂CH₂ NH₃ (фосфатидилэтаноламин), PO₃CH₂ CH₂N(СН₃)₃ (фосфатидилхолин), РО₃СН₂СНОНСН₂ОН (фосфатидилглицерин) и РО₃(СНОН)₆ (фосфатидилинозитол);

где R1, R2, и R3 выбраны независимо из i), ii), iii) или iv), но по меньшей мере один из R1, R2, или R3 определяется как iii); при условии, что по меньшей мере один Х представляет собой не СН₂, и/или

соли, пролекарства или комплекса соединений по пп.(а)-(с) для получения фармацевтической или пищевой композиций для профилактики и/или лечения резистентности к инсулину, ожирения, диабета, жировой инфильтрации печени, гиперхолестеринемии, дислипидемии, атеросклероза, коронарной болезни сердца, тромбоза, стеноза, вторичного стеноза, инфаркта миокарда, инсульта, повышенного кровяного давления, эндотелиальной дисфункции, состояния повышенной свертываемости крови, синдрома поликистоза яичников, метаболического синдрома, злокачественной опухоли, воспалительного нарушения и пролиферативного нарушения кожи.

2. Применение по п.1, где указанная профилактика и/или лечение злокачественной опухоли включает в себя ингибирование: первичных и вторичных новообразований, роста опухолей, инвазии первичной опухоли в соединительную ткань и формирования вторичных опухолей.

3. Применение по п.1, где воспалительное нарушение выбрано из группы, содержащей иммуноопосредованные нарушения, такие как ревматоидный артрит, системный васкулит, системная красная волчанка, системная склеродермия, дерматомиозит, полимиозит, различные аутоиммунные эндокринные нарушения (например, тиреоидит и адреналит), различные иммуноопосредованные неврологические нарушения (например, рассеянный склероз и миастению), различные сердечно-сосудистые нарушения (например, миокардит, застойную сердечную недостаточность, артериосклероз и стабильную и нестабильную стенокардию и гранулематоз Вегенера), воспалительные заболевания кишечника и болезнь Крона, неспецифический колит, панкреатит, нефрит, холестаз/фиброз печени, и острое и хроническое отторжение трансплантата после трансплантации органа, и заболевания, которые обладают воспалительным компонентом, такие как, например, болезнь Альцгеймера или нарушенная/способная к улучшению когнитивная функция.

4. Применение по п.1, где указанное пролиферативное нарушение кожи выбрано из группы, содержащей псориаз, атопический дерматит, неспецифический дерматит, первично ирритантный контактный дерматит, аллергический контактный дерматит, ламеллярный ихтиоз, эпидермолитический гиперкератоз, предзлокачественный индуцированный действием солнца кератоз и себорею.

5. Применение корма для животных, содержащего общепринятые компоненты корма и сочетание:

1) растительного масла и/или рыбьего жира, за исключением подсолнечного масла, и

2) одного или нескольких соединений, содержащих не подвергающиеся -окислению структурные элементы жирных кислот, представленные

(a) общей формулой R"-COO-(CH₂)_2n+1 -X-R', где Х представляет собой атом серы, атом селена, атом кислорода, группу CH₂, группу SO или группу SO ₂; n представляет собой число от 0 до 11; и R' представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, где главная цепь указанного R' содержит от 13 до 23 атомов углерода и необязательно одну или несколько гетерогрупп, выбранных из группы, содержащей атом кислорода, атом серы, атом селена, атом кислорода, группу CH₂, группу SO и группу SO₂; и R" представляет собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 4 атомов углерода; при условии, что по меньшей мере один Х представляет собой не CH₂, и/или

(b) общей формулой (I)



где R1, R2 и R3 представляют собой

i) атом водорода; или

ii) группу формулы CO-R, в которой R представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, и главная цепь указанного R содержит от 1 до 25 атомов углерода; или

iii) группу формулы CO-(CH₂)_2n+1-X-R', где Х представляет собой атом серы, атом селена, атом кислорода, группу СН₂, группу SO или группу SO₂; n представляет собой число от 0 до 11; и R' представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, где главная цепь указанного R' содержит от 13 до 23 атомов углерода и необязательно одну или несколько гетерогрупп выбранных из группы, содержащей атом кислорода, атом серы, атом селена, атом кислорода, группу СН₂ , группу SO и группу SO₂;

iv) структурный элемент, выбранный из группы, содержащей - PO₃CH ₂CHNH₃COOH (фосфатидилсерин), PO₃ CH₂CH₂NH₃ (фосфатидилэтаноламин), PO₃CH₂CH₂N(СН₃) ₃ (фосфатидилхолин), PO₃CH₂CHOHCH ₂OH (фосфатидилглицерин) и РО₃(СНОН)₆ (фосфатидилинозитол);

где R1, R2, и R3 выбраны независимо из i), ii), iii) или iv), но по меньшей мере один из R1, R2, или R3 определяется как iii); при условии, что по меньшей мере один Х представляет собой не СН₂, и/или

(с) общей формулой (II)



где А1, А2 и A3 выбраны независимо и представляют собой атом кислорода, атом серы или группу N-R4, в которой R4 представляет собой атом водорода или линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, содержащую от 1 до 5 атомов углерода;

где R1, R2 и R3 представляют собой

i) атом водорода или линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, содержащую от 1 до 23 атомов углерода; или

ii) группу формулы CO-R, в которой R представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, и главная цепь указанного R содержит от 1 до 25 атомов углерода; или

iii) группу формулы CO-(CH₂)_2n+1-X-R', где Х представляет собой атом серы, атом селена, атом кислорода, группу СН₂ , группу SO или группу SO₂; n представляет собой число от 0 до 11; и R' представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, где главная цепь указанного R' содержит от 13 до 23 атомов углерода и необязательно одну или несколько гетерогрупп, выбранных из группы, содержащей атом кислорода, атом серы, атом селена, атом кислорода, группу СН₂, группу SO и группу SO₂;

iv) структурный элемент, выбранный из группы, содержащей - PO₃CH₂CHNH₃ COOH (фосфатидилсерин), PO₃CH₂CH₂ NH₃ (фосфатидилэтаноламин), PO₃CH₂ CH₂N(СН₃)₃ (фосфатидилхолин), PO₃CH₂CHOHCH₂OH (фосфатидилглицерин) и РО₃(СНОН)₆ (фосфатидилнозитол);

где R1, R2, и R3 выбраны независимо из i), ii), iii) или iv), но по меньшей мере один из R1, R2, или R3 определяется как iii); при условии, что по меньшей мере один Х представляет собой не СН₂, и/или

соли, пролекарства или комплекса соединений по пп.(а)-(с) для улучшения общего состава липидов в организме животного.

6. Применение по п.5, где улучшение общего состава липидов включает в себя снижение общего уровня липидов в организме.

7. Применение по п.5, где улучшение общего состава липидов включает в себя снижение общего уровня насыщенных жирных кислот в организме.

8. Применение по п.5, где улучшение общего состава липидов включает в себя увеличение общего уровня п-3 жирных кислот в организме.

9. Применение по п.1, где растительный или рыбий жир содержит полиненасыщенные жирные кислоты.

10. Применение по п.9, где растительное масло выбрано из группы, содержащей соевое масло или оливковое масло.

11. Применение по п.1, где указанную композицию или корм для животных вводят или дают с пищей животному.

12. Применение по п.11, где указанное животное представляет собой человека.

13. Применение по п.11, где указанное животное представляет собой сельскохозяйственное животное, такое как куриные, млекопитающие, относящиеся к крупному рогатому скоту, овцам, козам или свиньям.

14. Применение по п.11, где указанное животное представляет собой домашнее животное или комнатное животное, такое как собака или кошка.

15. Применение по п.11, где указанное животное представляет собой рыбу или моллюсков, таких как лосось, треска, тиляпия, двустворчатые моллюски, устрицы, омар или крабы.

16. Применение по п.1, где суточная доза соединений, содержащих не подвергающиеся -окислению структурные элементы жирных кислот составляет приблизительно 1-200 мг/кг, предпочтительно 5-50 мг/кг, для употребления человеком, и приблизительно 1-2000 мг/кг, предпочтительно 5-500 мг/кг, для потребления животными.

17. Применение по п.1, где суточная доза масла составляет приблизительно 1-300 мг/кг, предпочтительно 10-150 мг/кг, для употребления человеком и от 1 мг/кг вплоть до общих суточных затрат жиров для потребления животными.

18. Применение по п.5, где корм для животных может представлять собой пищевую композицию, ветеринарную композицию, и/или функциональный пищевой продукт.

19. Применение по п.1, где соединение(я), содержащее не подвергающийся -окислению структурный элемент жирной кислоты, представляет собой не подвергающуюся -окислению жирную кислоту.

20. Применение по п.19, где соединение(я), содержащее не подвергающийся -окислению структурный элемент жирной кислоты, представляет собой тетрадецилтиоуксусную. кислоту (ТТА), тетрадецилселеноуксусную кислоту и/или 3-тиа-15-гептадецин.

21. Применение по п.1, где Х представляет собой атом серы или атом селена.

22. Применение по п.1, где соединение(я), содержащее не подвергающийся -окислению структурный элемент жирной кислоты, представляет собой фосфолипид, где указанный фосфолипид выбран из группы, содержащей фосфатидилсерин, фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилинозитол, фосфатидилглицерин и/или дифосфатидилглицерин.

23. Применение по п.1, где соединение, содержащее не подвергающийся -окислению структурный элемент жирной кислоты, представляет собой производное фосфатидилхолина 1,2-дитетрадецилтиоацетоил-sn-глицеро-3-фосфохолин.

24. Применение по п.1, где соединение, содержащее не подвергающийся -окислению структурный элемент жирной кислоты, представляет собой производное фосфатидилэтаноламина 1,2-дитетрадецилтиоацетоил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин.

25. Применение по п.1, где соединение(я), содержащее не подвергающийся -окислению структурный элемент жирной кислоты, представляет собой моно-, ди- или триацилглицерид.

26. Применение по п.25, где соединение(я), содержащее не подвергающийся -окислению структурный элемент жирной кислоты, представляет собой триацилглицерид, содержащий тетрадецилтиоуксусную кислоту (ТТА).

27. Композиция для профилактики и/или лечения резистентности к инсулину, ожирения, диабета, жировой инфильтрации печени, гиперхолестеринемии, дислипидемии, атеросклероза, коронарной болезни сердца, тромбоза, стеноза, вторичного стеноза, инфаркта миокарда, инсульта, повышенного кровяного давления, эндотелиальной дисфункции, состояния повышенной свертываемости крови, синдрома поликистоза яичников, метаболического синдрома, злокачественной опухоли, воспалительного нарушения и пролиферативного нарушения кожи, характеризующаяся тем, что указанная композиция содержит сочетание:

1) растительного масла и/или рыбьего жира, за исключением подсолнечного масла, и

2) одного или нескольких соединений, содержащих не подвергающиеся -окислению структурные элементы жирных кислот, представленные

(а) общей формулой R"-COO-(CH₂)_2n+1 -X-R', где Х представляет собой атом серы, атом селена, атом кислорода, группу CH₂, группу SO или группу SO ₂; n представляет собой число от 0 до 11; и R' представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, где главная цепь указанного R' содержит от 13 до 23 атомов углерода и необязательно одну или несколько гетерогрупп, выбранных из группы, содержащей атом кислорода, атом серы, атом селена, атом кислорода, группу СН₂, группу SO и группу SO₂; и R" представляет собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 4 атомов углерода; при условии, что по меньшей мере один Х представляет собой не СН₂, и/или

(b) общей формулой (I)



где R1, R2 и R3 представляют собой

i) атом водорода; или

ii) группу формулы CO-R, в которой R представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, и главная цепь указанного R содержит от 1 до 25 атомов углерода; или

iii) группу формулы CO-(CH₂)_2n+1-X-R', где Х представляет собой атом серы, атом селена, атом кислорода, группу CH₂, группу SO или группу SO₂; n представляет собой число от 0 до 11; и R' представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, где главная цепь указанного R' содержит от 13 до 23 атомов углерода и необязательно одну или несколько гетерогрупп выбранных из группы, содержащей атом кислорода, атом серы, атом селена, атом кислорода, группу СН₂ , группу SO и группу SO₂;

iv) структурный элемент, выбранный из группы, содержащей - PO₃CH ₂CHNH₃COOH (фосфатидилсерин), PO₃ CH₂CH₂NH₃ (фосфатидилэтаноламин), PO₃CH₂CH₂N(СН₃) ₃(фосфатидилхолин), РО₃СН₂СНОНСН ₂ОН (фосфатидилглицерин) и РО₃(СНОН)₆ (фосфатидилинозитол);

где R1, R2, и R3 выбраны независимо из i), ii), iii) или iv), но по меньшей мере один из R1, R2, или R3 определяется как iii); при условии, что по меньшей мере один Х представляет собой не CH₂, и/или (с) общей формулой (II)



где A1, A2 и A3 выбраны независимо и представляют собой атом кислорода, атом серы или группу N-R4, в которой R4 представляет собой атом водорода или линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, содержащую от 1 до 5 атомов углерода;

где R1, R2 и R3 представляют собой

i) атом водорода или линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, содержащую от 1 до 23 атомов углерода; или

ii) группу формулы CO-R, в которой R представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, и главная цепь указанного R содержит от 1 до 25 атомов углерода; или

iii) группу формулы CO-(CH₂)_2n+1-X-R', где Х представляет собой атом серы, атом селена, атом кислорода, группу CH₂ , группу SO или группу SO₂; n представляет собой число от 0 до 11; и R' представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, где главная цепь указанного R' содержит от 13 до 23 атомов углерода и необязательно одну или несколько гетерогрупп, выбранных из группы, содержащей атом кислорода, атом серы, атом селена, атом кислорода, группу CH₂, группу SO и группу SO₂;

iv) структурный элемент, выбранный из группы, содержащей - PO₃CH₂CHNH₃ COOH (фосфатидилсерин), PO₃CH₂CH₂ NH₃ (фосфатидилэтаноламин), PO₃CH₂ CH₂N(СН₃)₃ (фосфатидилхолин), PO₃CH₂CHOHCH₂OH (фосфатидилглицерин) и РО₃(СНОН)₆ (фосфатидилинозитол);

где R1, R2, и R3 выбраны независимо из i), ii), iii) или iv), но по меньшей мере один из R1, R2, или R3 определяется как iii); при условии, что по меньшей мере один Х представляет собой не СН₂, и/или

соли, пролекарства или комплекса соединений по пп.(а)-(с).

28. Композиция по п.27, в которой указанный растительный или рыбий жир содержит полиненасыщенные жирные кислоты.

29. Композиция по п.27, в которой растительное масло выбрано из группы, содержащей соевое масло и оливковое масло.

30. Композиция по п.27, в которой композиция представляет собой корм для животного, дополнительно содержащий общепринятые компоненты корма.

31. Композиция по п.30, где корм для животных представляет собой корм для рыбы.

32. Композиция по п.31, где корм для рыбы представляет собой корм для лосося.

33. Композиция по п.21, где общепринятые компоненты корма содержат рыбную муку и/или рыбий жир.

34. Композиция по п.27, дополнительно содержащая ферментированный белковый материал сои.

35. Композиция по п.27, где соединение(я), содержащее не подвергающийся -окислению структурный элемент жирной кислоты, представляет собой не подвергающуюся -окислению жирную кислоту.

36. Композиция по п.35, где соединение(я), содержащее не подвергающийся -окислению структурный элемент жирной кислоты, представляет собой тетрадецилтиоуксусную кислоту (ТТА), тетрадецилселеноуксусную кислоту и/или 3-тиа-15-гептадецин.

37. Композиция по п.27, где Х представляет собой атом серы или атом селена.

38. Композиция по п.27, где соединение(я), содержащее не подвергающийся -окислению структурный элемент жирной кислоты представляет собой фосфолипид, где указанный фосфолипид выбран из группы, содержащей фосфатидилсерин, фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилинозитол, фосфатидилглицерин и/или дифосфатидилглицерин.

39. Композиция по п.27, где соединение, содержащее не подвергающийся -окислению структурный элемент жирной кислоты представляет собой производное фосфатидилхолина 1,2-дитетрадецилтиоацетоил-sn-глицеро-3-фосфохолин.

40. Композиция по п.27, где соединение, содержащее не подвергающийся -окислению структурный элемент жирной кислоты, представляет собой производное фосфатидилэтаноламина 1,2-дитетрадецилтиоацетоил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин.

41. Композиция по п.27, где соединение(я), содержащее не подвергающийся -окислению структурный элемент жирной кислоты, представляет(ют) собой моно-, ди- или триацилглицериды.

42. Композиция по п.41, где соединение(я), содержащее не подвергающийся -окислению структурный элемент жирной кислоты, представляет собой триацилглицерид, содержащий тетрадецилтиоуксусную кислоту (ТТА).

43. Способ получения продукта животного происхождения с улучшенной композицией жирных кислот, включающий кормление животного, предназначенного для получения продукта, кормом для животных, содержащим общепринятые компоненты корма и сочетание:

1) растительного масла и/или рыбьего жира, за исключением подсолнечного масла, и

2) одного или нескольких соединений, содержащих не подвергающиеся -окислению структурные элементы жирных кислот, отображаемых

(a) общей формулой R"-COO-(CH₂)_2n+1 -X-R', где Х представляет собой атом серы, атом селена, атом кислорода, группу СН₂, группу SO или группу SO ₂; n представляет собой число от 0 до 11; и R' представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, где главная цепь указанного R' содержит от 13 до 23 атомов углерода и необязательно одну или несколько гетерогрупп, выбранных из группы, содержащей атом кислорода, атом серы, атом селена, атом кислорода, группу CH₂, группу SO и группу SO₂; и R" представляет собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 4 атомов углерода; при условии, что по меньшей мере один Х представляет собой не СН₂, и/или

(b) общей формулой (I)



где R1, R2 и R3 представляют собой

i) атом водорода; или

ii) группу формулы CO-R, в которой R представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, и главная цепь указанного R содержит от 1 до 25 атомов углерода; или

iii) группу формулы CO-(CH₂)_2n+1-X-R', где Х представляет собой атом серы, атом селена, атом кислорода, группу СН₂, группу SO или группу SO₂; n представляет собой число от 0 до 11; и R' представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, где главная цепь указанного R' содержит от 13 до 23 атомов углерода и необязательно одну или несколько гетерогрупп выбранных из группы, содержащей атом кислорода, атом серы, атом селена, атом кислорода, группу СН₂ , группу SO и группу SO₂;

iv) структурный элемент, выбранный из группы, содержащей - PO₃CH ₂CHHN₃COOH (фосфатидилсерин), PO₃ CH₂CH₂NH₃ (фосфатидилэтаноламин), PO₃CH₂CH₂N(СН₃) ₃ (фосфатидилхолин), PO₃CH₂CHOHCH ₂OH (фосфатидилглицерин) и РО₃(СНОН)₆ (фосфатидилинозитол);

где R1, R2, и R3 выбраны независимо из i), ii), iii) или iv), но по меньшей мере один из R1, R2, или R3 определяется как iii); при условии, что по меньшей мере один Х представляет собой не СН₂, и/или (с) общей формулой (II)



где A1, A2 и A3 выбраны независимо и представляют собой атом кислорода, атом серы или группу N-R4, в которой R4 представляет собой атом водорода или линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, содержащую от 1 до 5 атомов углерода;

где R1, R2 и R3 представляют собой

i) атом водорода или линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, содержащую от 1 до 23 атомов углерода; или ii) группу формулы CO-R, в которой R представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, и главная цепь указанного R содержит от 1 до 25 атомов углерода; или

iii) группу формулы CO-(CH ₂)_2n+1-X-R', где Х представляет собой атом серы, атом селена, атом кислорода, группу СН₂, группу SO или группу SO₂; n представляет собой число от 0 до 11; и R' представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, где главная цепь указанного R' содержит от 13 до 23 атомов углерода и необязательно одну или несколько гетерогрупп, выбранных из группы, содержащей атом кислорода, атом серы, атом селена, атом кислорода, группу CH₂, группу SO и группу SO₂;

iv) структурный элемент, выбранный из группы, содержащей - PO₃CH₂CHNH₃ COOH (фосфатидилсерин), PO₃CH₂CH₂ NH₃ (фосфатидилэтаноламин), PO₃CH₂ CH₂N(СН₃)₃ (фосфатидилхолин), PO₃CH₂CHOHCH₂OH (фосфатидилглицерин) и РО₃(СНОН)₆ (фосфатидилинозитол);

где R1, R2, и R3 выбраны независимо из i), ii), iii) или iv), но по меньшей мере один из R1, R2, или R3 определяется как iii); при условии, что по меньшей мере один Х представляет собой не CH₂, и/или

соли, пролекарства или комплекса соединений по пп.(а)-(с).

44. Способ по п.43, где корм для животных дополнительно содержит ферментированный белковый материал сои.

45. Способ по п.43, где продукт животного происхождения представляет собой мясной продукт.

46. Способ по п.43, где продукт животного происхождения представляет собой продукт на основе масла.

47. Способ по п.43, где продукт животного происхождения представляет собой продукт на основе кожи.

Описание изобретения к патенту

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Было показано, что при использовании сочетания соединений, содержащих не подвергающиеся -окислению структурные элементы жирных кислот, и растительного или рыбьего жира, достигаются неожиданные синергические эффекты. Настоящее изобретение относится к композиции, полученной комбинированием соединений, содержащих не подвергающиеся -окислению структурные элементы жирных кислот и растительный и/или рыбий жир. Указанная композиция может использоваться для изготовления фармацевтической или пищевой композиции для профилактики и/или лечения резистентности к инсулину, ожирения, диабета, жировой инфильтрации печени, гиперхолестеринемии, дислипидемии, атеросклероза, коронарной болезни сердца, тромбоза, стеноза, вторичного стеноза, инфаркта миокарда, инсульта, повышенного кровяного давления, эндотелиальной дисфункции, состояния повышенной свертываемости крови, синдрома поликистоза яичников, метаболического синдрома, злокачественной опухоли, воспалительных нарушений и пролиферативных нарушений кожи. Указанная композиция также может использоваться в качестве дополнительного компонента в корме для животных для повседневного кормления животных в целях влиять на состав тканей их организма в общем, и, конкретно, на состав жирных кислот.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В более ранних патентных заявках авторы изобретения описали лечебное применение не подвергающихся -окислению аналогов жирных кислот по настоящему изобретению для лечения и профилактики ожирения (NO 2000 5461), диабета (NO 2000 5462), первичного и вторичного стеноза (NO 2000 5463), злокачественной опухоли (NO 2002 5930), пролиферативных нарушений кожи (NO 2003 1080), воспалительных и аутоиммунных нарушений (NO 2003 2054).

Далее, неожиданно авторы настоящего изобретения показали, что применение сочетания соединений, содержащих не подвергающиеся -окислению структурные элементы жирных кислот, с растительным или рыбьим жиром оказывает синергические полезные биологические эффекты. Авторы изобретения показали, что сочетание не подвергающихся -окислению структурных элементов жирных кислот с растительным или рыбьим жиром приводит к снижению концентрации в плазме холестерина, триглицеридов и фосфолипидов и к повышению активности ацил-CoA-оксидазы жиров. Кроме того, авторы изобретения описывают, каким образом не подвергающиеся -окислению структурные элементы жирных кислот и растительный или рыбий жир могут быть непосредственно добавлены в корм для животных. Корм является легко перевариваемым, и для него были показаны неожиданные эффекты на состав жирных кислот у животных. На основе этих неожиданных открытий ожидается, что сочетание соединений, содержащих не подвергающиеся -окислению структурные элементы жирных кислот, и растительного или рыбьего жира будет обладать повышенным профилактическим и/или терапевтическим эффектом в отношении всех заболеваний, против которых эффективны соединения, содержащие не подвергающиеся -окислению структурные элементы жирных кислот, по сравнению с эффектом соединений, содержащих аналоги жирных кислот, отдельно.

Липиды являются более дешевыми источниками энергии, чем белки, и фермеры предпочитают, чтобы животные получали максимальное количество энергии из липидов в рационе (с повышенным окислением липидов) и минимальное количество из белков. Также, если корм содержит большое содержание жиров, то существует тенденция к более быстрому росту животного, что, как правило, является желательным качеством. Изобретение иллюстрируется здесь в отношении разведения рыб и в отношении рыб, особенно атлантического лосося.

Таким образом, для роста мышц может использоваться увеличение количества белков. Ранее было известно, что не подвергающиеся -окислению аналоги жирных кислот, такие как 3-тиа жирная кислота тетрадецилтиоуксусная кислота (TTA), могут приводить к повышению митохондриального и пероксисомального окисления жирных кислот в печени и мышцах у млекопитающих (Berge et al., 1989b, Aarsland et al, 1989, Asiedu et al., 1993, Skrede et al., 1993, Asiedu et al., 1995) и к снижению содержания жиров в организме у крыс (Spiegelman 1998, Madsen et al., 2002).

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к применению препарата, содержащего сочетание:

1) растительного жира и/или рыбьего жира; и

2) одного или нескольких соединений, содержащих не подвергающиеся -окислению структурные элементы жирных кислот, представленные

(a) общей формулой R"-COO-(CH₂) _2n+1-X-R', где X представляет собой атом серы, атом селена, атом кислорода, группу CH₂, группу SO или группу SO₂; n представляет собой число от 0 до 11; и R' представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, где главная цепь указанного R' содержит от 13 до 23 атомов углерода и необязательно одну или несколько гетерогрупп, выбранных из группы, содержащей атом кислорода, атом серы, атом селена, атом кислорода, группу CH₂, группу SO и группу SO ₂; и R" представляет собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 4 атомов углерода; и/или

(b) общей формулой (I),

где R1, R2 и R3 представляют собой

i) атом водорода; или

ii) группу формулы CO-R, в которой R представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, и главная цепь указанного R содержит от 1 до 25 атомов углерода; или

iii) группу формулы CO-(CH₂ )_2n+1-X-R', где X представляет собой атом серы, атом селена, атом кислорода, группу CH₂, группу SO или группу SO₂; n представляет собой число от 0 до 11; и R' представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, где главная цепь указанного R' содержит от 13 до 23 атомов углерода и необязательно одну или несколько гетерогрупп, выбранных из группы, содержащей атом кислорода, атом серы, атом селена, атом кислорода, группу СН₂, группу SO и группу SO ₂;

iv) структурный элемент, выбранный из группы, содержащей -PO₃CH₂CHNH₃ COOH (фосфатидилсерин), PO₃CH₂CH₂ NH₃ (фосфатидилэтаноламин), PO₃CH₂ CH₂N(СН₃)₃ (фосфатидилхолин), PO₃CH₂CHOHCH₂OH (фосфатидилглицерин) и РО₃(СНОН)₆ (фосфатидилинозитол); где R1, R2 и R3 выбраны независимо из i), ii), iii) или iv), но по меньшей мере один из R1, R2 или R3 определяется как iii); и/или

(с) общей формулой (II),

где A1, A2 и A3 выбраны независимо и представляют собой атом кислорода, атом серы или группу N-R4, в которой R4 представляет собой атом водорода или линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, содержащую от 1 до 5 атомов углерода;

где R1, R2 и R3 представляют собой

i) атом водорода или линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, содержащую от 1 до 23 атомов углерода; или

ii) группу формулы CO-R, в которой R представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, и главная цепь указанного R содержит от 1 до 25 атомов углерода; или

iii) группу формулы СО-(СН₂) _2n+1-X-R', где Х представляет собой атом серы, атом селена, атом кислорода, группу CH₂, группу SO или группу SO₂; n представляет собой число от 0 до 11; и R' представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, где главная цепь указанного R' содержит от 13 до 23 атомов углерода и необязательно одну или несколько гетерогрупп, выбранных из группы, содержащей атом кислорода, атом серы, атом селена, атом кислорода, группу СН₂, группу SO и группу SO ₂;

iv) структурный элемент, выбранный из группы, содержащей - PO₃CH₂CHNH₃ COOH (фосфатидилсерин), PO₃CH₂CH₂ NH₃ (фосфатидилэтаноламин), PO₃CH₂ CH₂N(СН₃)₃ (фосфатидилхолин), PO₃CH₂CHOHCH₂OH (фосфатидилглицерин) и РО₃(СНОН)₆ (фосфатидилинозитол);

где R1, R2 и R3 выбраны независимо из i), ii), iii) или iv), но по меньшей мере один из R1, R2 или R3 определяется как iii); и/или

соли, пролекарства или комплекса соединений по пп.(а)-(с).

В предпочтительном варианте осуществления соединения по этому изобретению по меньшей мере один из R1, R2 или R3 представляет собой алкил.

В предпочтительном варианте осуществления соединения по этому изобретению по меньшей мере один из R1, R2 или R3 представляет собой алкен.

В предпочтительном варианте осуществления соединения по этому изобретению по меньшей мере один из R1, R2 или R3 представляет собой алкин.

В предпочтительном варианте осуществления соединения по этому изобретению по меньшей мере один из R1, R2 или R3 представляет собой тетрадецилтиоуксусную кислоту.

В предпочтительном варианте осуществления соединения по этому изобретению по меньшей мере один из R1, R2 или R3 представляет собой тетрадецилселеноуксусную кислоту.

Предпочтительными вариантами осуществления соединений по этому изобретению являются не подвергающиеся -окислению жирные кислоты.

В предпочтительном варианте осуществления соединения по этому изобретению X представляет собой атом серы или атом селена.

Предпочтительными вариантами осуществления соединений по этому изобретению являются тетрадецилтиоуксусная кислота (TTA), тетрадецилселеноуксусная кислота и 3-тиа-15-гептадецин.

В предпочтительном варианте осуществления соединения по этому изобретению n представляет собой 0 или 1.

В предпочтительном варианте осуществления соединения по этому изобретению указанное соединение представляет собой фосфолипид, где указанный фосфолипид выбран из группы, содержащей фосфатидилсерин, фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилинозитол, фосфатидилглицерин, дифосфатидилглицерин.

В предпочтительном варианте осуществления соединения по этому изобретению указанное соединение представляет собой триацилглицерин.

В предпочтительном варианте осуществления соединения по этому изобретению указанное соединение представляет собой диацилглицерин.

В предпочтительном варианте осуществления соединения по этому изобретению указанное соединение представляет собой моноацилглицерин.

В предпочтительном варианте осуществления соединения по этому изобретению указанное соединение представляет собой производное фосфатидилхолина (PC) 1,2-дитетрадецилтиоацетоил-sn-глицеро-3-фосфохолин.

В предпочтительном варианте осуществления соединения по этому изобретению указанное соединение представляет собой производное фосфатидилэтаноламина (PE) 1,2-дитетрадецилтиоацетоил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин.

Предпочтительными вариантами осуществления соединений по этому изобретению являются моно-, ди- или триацилглицериды.

Предпочтительными вариантами осуществления соединений по этому изобретению являются триацилглицериды, содержащие тетрадецилтиоуксусную кислоту (TTA).

В предпочтительном варианте осуществления соединения формулы (II) каждый из A1 и A3 представляет собой атом кислорода, в то время как A2 представляет собой атом серы или группу N-R4, в которой R4 представляет собой атом водорода или линейную или разветвленную алкильную группу, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную, содержащую от 1 до 5 атомов углерода.

Соединения по этому изобретению являются аналогами природных соединений и по существу распознаются теми же системами, которые перерабатывают природные соединения, включая ферменты, которые осуществляют -окисление и в некоторых случаях -окисление природных длинноцепочечных жирных кислот. Аналоги отличаются от их природных эквивалентов тем, что они не могут полностью окисляться таким способом.

Соединения по этому изобретению могут представлять собой не подвергающиеся -окислению аналоги жирных кислот, как представлено формулой R"CCO-(CH₂)_2n+1-X-R'. Однако указанные соединения также могут представлять собой более сложные структуры, полученные из одного или нескольких из указанных не подвергающихся -окислению аналогов жирных кислот, как представлено общими формулами (I) или (II). Эти соединения представляет собой аналоги природных моно-, ди- и триацилглицеринов или фосфолипидов, включая фосфатидилсерин, фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилинозитол, фосфатидилглицерин и дифосфатидилглицерин. Указанные соединения также могут содержать замену в остове глицерина, как представлено в формуле (II). Указанного замещения кислорода(ов) достигают замещением кислорода(ов) группой, содержащей серу или азот. Это может блокировать гидролиз перед захватом в тонком кишечнике, таким образом, повышая биодоступность соединений.

Указанные выше комплексные структуры, полученные из одного или нескольких из указанных не подвергающихся -окислению структурных элементов жирных кислот, оказывают свой эффект вследствие того, что они содержат аналоги жирных кислот, которые не способны к полному -окислению. Указанные комплексные структуры могут оказывать эффект в качестве целых структур и в качестве образованных вследствие природной деградации продуктов, содержащих аналоги жирных кислот. Вследствие того, что соединения не способны к полному -окислению, они накапливаются и это запускает повышение -окисления природных жирных кислот. Множество эффектов соединений по этому изобретению являются следствием такого повышения -окисления.

В процессе -окисления ферментативно окисленная жирная кислота расщепляется между атомами углерода 2 и 3 (если считать от карбоксильного конца жирной кислоты), что приводит к удалению двух атомов углерода с каждой стороны участка окисления в виде уксусной кислоты. Эта стадия затем повторяется с только что укороченной на два атома углерода жирной кислотой, и снова повторяется до тех пор, пока жирная кислота не окислится полностью. -окисление является обычным путем, которым in vivo осуществляется катаболизм большинства жирных кислот. Блокирования -окисления соединениями по этому изобретению достигают встраиванием не подвергающейся окислению группы в положение X формулы по настоящему изобретению. Вследствие того, что механизм -окисления хорошо известен, X определяется как S, O, SO, SO₂, CH₂ или Se. Специалист в данной области может допустить, без изобретательского уровня, что эти соединения все будут блокировать -окисление аналогичным образом.

Кроме того, соединения могут содержать более одного блока, т.е. в дополнение к X, R' может необязательно содержать одну или несколько гетерогрупп, выбранных из группы, содержащей атом кислорода, атом серы, атом селена, атом кислорода, группу CH₂ , группу SO и группу SO₂. В качестве примера, для того, чтобы вызвать изменения в деградации жирной кислоты и, таким образом, получить модулированный эффект, в качестве X можно встроить два или три атома серы. Большое количество атомов серы в некоторой степени также приводит к изменению полярности и стабильности. С фармакологической точки зрения для избежания или предотвращения проблем, связанных с устойчивостью, как правило, более желательно иметь возможность получить набор соединений, чем только одно соединение.

В дополнение к структуре X, его положение также является предметом обсуждения. Расстояние от X до карбоксильного конца жирной кислоты определяется тем, какое количество групп CH₂ находится между X и карбоксильным концом жирной кислоты, которое определятся как (CH₂)_2n+1 , где n представляет собой число от 0 до 11. Таким образом, получается нечетное число групп CH₂, то есть положение X относительно карбоксильной группы такое, при котором X в итоге блокирует -окисление. Диапазон значений n выбран так, чтобы включать все варианты аналога жирных кислот, который обладает требуемым биологическим эффектом. Поскольку теоретически -окисление может действовать на молекулы неограниченной длины, n может представлять собой бесконечную величину, однако на практике это не так. Длина жирных кислот, которые в норме подвергаются -окислению, как правило, составляет от 14 до 24 атомов углерода, и такая длина, таким образом, является наиболее оптимальной для осуществления ферментативного -окисления. Таким образом, диапазоны n и R' приведены так, чтобы аналоги жирных кислот охватывали этот диапазон. (Аналогично для того, чтобы получить аналоги природных соединений параметр ii) формул (I) и (II) определяет R, как обладающий от 1 до 25 групп углерода, и параметр i) формулы (II) определяет алкильную группу, как содержащую от 1 до 23 атомов углерода). Общее количество атомов углерода в остове жирной кислоты предпочтительно составляет между 8 и 30, наиболее предпочтительно между 12 и 26. Этот диапазон размеров также является желательным для захвата аналогов жирных кислот по настоящему изобретению и их транспорта через клеточные мембраны.

Несмотря на то, что аналоги жирных кислот с нечетным положением блокатора -окисления X, удаленным от карбоксильного конца, блокируют окисление, величина их биологического эффекта может варьировать. Это происходит вследствие различия времени биологической деградации для различных соединений. Авторы изобретения провели эксперименты с целью показать эффект дальнейшего удаления X от карбоксильного конца жирной кислоты. В этих экспериментах активность (нмоль/мин/мг/белок) митохондриального -окисления аналогов жирных кислот в печени измеряли при наличии серы в 3, 5 и 7 положениях относительно карбоксильного конца. Активность составляла 0,81 для серы в 3 положении, 0,61 для серы в 5 положении, 0,58 для серы в 7 положении и 0,47 для пальмитиновой кислоты, не блокирующего -окисление контроля. Как ожидалось, это показывает, что -окисление действительно блокируется аналогами жирных кислот с различным положением блока, и что их эффект снижается при дальнейшем удалении положения блока от карбоксильного конца, вследствие того, что требуется больше времени для достижения блока при -окислении, так что к тому времени деградируется большее количество жирных кислот. Однако, поскольку отклонение является значительным при переходе от 3 к 5 положению, но небольшим при переходе от 5 к 7 положению, то обоснованно можно предположить, что при продвижении вдоль цепи это отклонение будет далее уменьшаться, и, таким образом, что к тому моменту, когда совсем не будет наблюдаться никакого эффекта (по сравнению с контролем), положение безусловно окажется значительно удаленным.

Таким образом, обоснованным является включение в качестве соединений по настоящему изобретению аналогов жирных кислот и других соединений, представленных общими формулами (I) и (II), (которые содержат указанный аналог(и) жирной кислоты), которые блокируют -окисление на различных расстояниях от карбоксильного конца аналогов, как соединений по настоящему изобретению, действительно блокирующих -окисление, даже если эффект может быть модулированным. Это модулирование в конечном итоге может различаться в истощающих условиях; в различных тканях, при истощающих дозировках, и при изменении аналога жирных кислот, так чтобы он не так легко распадался, как описано далее. Таким образом, обоснованным является включение в формулу всех расстояний блокатора -окисления от карбоксильного конца аналога жирной кислоты, которые являются биологически пригодными.

Несмотря на то, что аналоги жирных кислот, как описано, с блоком в положении X не могут подвергаться -окислению, они тем не менее могут подвергаться -окислению. Это значительно менее универсальный и более медленный биологический процесс, при котором происходит окисление жирных кислот не с карбоксильного конца, а предпочтительнее с метильной/гидрофобной концевой группы, здесь обозначаемой R'. При этом каскаде атом углерода с -конца жирной кислоты гидроксилируется членом семейства ферментов цитохрома P450. Затем эта гидроксилированная жирная кислота превращается алкогольдегидрогеназой в альдегид, и затем этот альдегид превращается альдегиддегидрогеназой в карбоксильную группу. В результате, конечным продуктом каскада является дикарбоновая жирная кислота, которая может далее деградироваться -окислением с -конца.

Полагают, что -окисление является главным путем деградации аналогов жирных кислот, как описано, с блоком в положении X. Таким образом, проводили эксперименты, где R' изменяли для блокирования -окисления введением тройной связи в метильный конец аналога жирной кислоты. Результатом этого оказался аналог жирной кислоты 3-тиа-15-гептадецин, для которого при тестировании были показаны следующие ожидаемые результаты: существенно увеличенное время деградации in vivo. Это является важным для применения аналогов жирных кислот в фармацевтическом препарате, поскольку это может усиливать эффекты подвергающихся -окислению аналогов жирных кислот дальнейшим снижением их распада.

С другой стороны, как в случае блокирования -окисления, общепринятой практикой является выявление других аналогов жирных кислот, которые будут блокировать -окисление точно таким же способом, на основе знаний о том, как происходит -окисление. Например, двойная связь будет обладать таким же эффектом, как и тройная связь, и, таким образом, в определение метильной/гидрофобной концевой группы молекулы, обозначаемой здесь R', включается, что она может быть насыщенной или ненасыщенной. Разветвление также может приводить к блокированию окисления, так что группа R' определяется как линейная или разветвленная.

В целях блокировать -окисление встраиванием заместителя в R', указанный R' может быть замещен в одном или нескольких положениях гетерогруппой, выбранной из группы, содержащей атом кислорода, атом серы, атом селена, атом кислорода, группу CH₂, SO и группу SO ₂. R' также может быть замещен одним или несколькими соединениями, выбранными из группы, содержащей фторид, хлорид, гидрокси, C₁-С₄алкокси, C₁-С ₄алкилтио, C₂-С₅ацилокси или C ₁-С₄алкил.

Таким образом, соединения в соответствии с настоящим изобретением представляют собой либо жирные кислоты, аналогичные природным жирным кислотам, которые не способны подвергаться -окислению, либо природные липиды, содержащие указанные аналоги жирных кислот. Было показано, что in vivo аналоги жирных кислот строго предпочтительно встраиваются в фосфолипиды. В некоторых случаях действительно является предпочтительным имитировать свойства и встраивать аналоги жирных кислот в природные липиды, такие как моно-, ди- и триглицериды и фосфолипиды. Это приводит к изменению всасывания соединений (при сравнении жирных кислот с жирными кислотами, встраиваемыми в более крупные липидные структуры) и может повышать биодоступность или стабильность.

Например, можно получать комплекс встраиванием жирной кислоты(кислот), которая не способна подвергаться -окислению, в триацилглицерин. Такие соединения охватываются формулами (I) и (II). При пероральном приеме такого триацилглицерина, например, в продукте корма для животных, он, вероятно, будет транспортироваться подобно любому триацилглицерину из тонкого кишечника в хиломикронах и из печени в липопротеинах крови для запасания в жировой ткани или использования в мышцах, сердце или печени, с гидролизом триацилглицерина до глицерина и 3 свободных жирных кислот. Свободные жирные кислоты на данном этапе окажутся исходным соединением по настоящему изобретению, и не будут более представлять собой комплекс.

Другие возможные глицерофосфолипидные производные жирных кислот по настоящему изобретению включают в себя, но не ограничиваются ими, фосфатидилхолины, фосфатидилэтаноламины, фосфатидилинозитолы, фосфатидилсерины и фосфатидилглицерины.

Другим способом этерификации жирных кислот, выявленным in vivo, который легко можно использовать для получения комплекса с соединением по настоящему изобретению, может являться получение спирта или полиспирта, соответствующего жирной кислоте, например, можно получить производное сфинголипида, такое как церамид или сфингомиелин, получением соответствующего аминоспирта. Подобно глицерофосфолипидным комплексам, такие комплексы могут быть в высокой степени нерастворимыми в воде и менее гидрофильными. Эти типы гидрофобных комплексов по настоящему изобретению будут легче проходить через биологические мембраны.

Другими возможными полярными комплексами по настоящему изобретению могут быть, но не ограничиваться ими, лизофосфолипиды, фосфатидиновая кислота, алкоксисоединения, глицероуглеводы, ганглиозиды и цереброзиды.

Несмотря на то, что могут существовать большие структурные различия между различными соединениями, содержащими не подвергающиеся -окислению структурные элементы жирных кислот по настоящему изобретению, можно ожидать, что биологические функции всех таких соединений являются очень сходными вследствие того, что все они блокируют -окисление сходным образом. Такая неспособность аналогов жирных кислот к -окислению (и в некоторых случаях, к -окислению) приводит к накоплению аналогов в митохондриях, которые запускают -окисление in vivo природных жирных кислот, которое, в свою очередь, приводит к множеству биологических эффектов соединений, содержащих аналоги жирных кислот по настоящему изобретению. (Berge RK et al. (2002) Curr Opin Lipidol 13(3):295-304).

Каскад -окисления жирных кислот представляет собой главный путь метаболизма жиров. Начальная и скорость-лимитирующая реакция осуществляются ацил-CoA-оксидазой в пероксисомах печени. Ацил-CoA-оксидаза катализирует дегидрогенизацию ацил-CoA-тиоэфиров до соответствующего транс-2-еноил-CoA. Аналог жирной кислоты формулы (I); тетрадецилтиоуксусную кислоту (TTA), авторы изобретения ранее использовали для анализа различных биологических эффектов жирных кислот. Для настоящего изобретения анализировали ее действие на ацил-CoA-оксидазу, а также эффект различных растительных жиров и рыбьего жира, отдельно или в сочетании. Было показано, что TTA отдельно вызывает значительное повышение ферментативной активности по сравнению с отрицательным контролем. Растительный и рыбий жиры демонстрировали очень небольшое повышение активности ацил-CoA-оксидазы по сравнению с отрицательным контролем. При совместном введении подсолнечное масло не повышало активность TTA. Поэтому можно ожидать, что активность ацил-CoA-оксидазы при введении TTA с жирами будет оставаться такой же, что и без добавления жиров. Было показано, что рыбий жир и оливковое масло вызывают незначительное усиление повышения посредством TTA активности ацил-CoA-оксидазы. Соевое масло без TTA обладало незначительными эффектами на активность ацил-CoA-оксидазы, но в сочетании с TTA оно вызывало 60% повышение, по сравнению с эффектами TTA отдельно. Это усиление TTA в качестве активатора ацил-CoA-оксидазы соевым маслом оказалось совершенно неожиданным.

Для настоящего изобретения, также анализировали действие не подвергающихся -окислению структурных элементов жирных кислот на уровень фосфолипидов, а также эффект различных растительных масел и рыбьего жира, отдельно или в сочетании с TTA. Подсолнечное масло и рыбий жир снижали уровень фосфолипидов, и усиливали способность TTA снижать уровень фосфолипидов с увеличением способности в отношении снижения уровня фосфолипидов, по сравнению со способностью TTA или жиров отдельно. Соевое масло и оливковое масло, в действительности, повышали уровень фосфолипидов, однако, неожиданно эти масла значительно усиливали способность TTA снижать уровень фосфолипидов. Эффект соевого масла является особенно примечательным, самостоятельно оно повышало уровень фосфолипидов на 10% по сравнению с контролем, однако при введении совместно с TTA оно снижало уровень фосфолипидов дополнительно на 40% по сравнению с TTA отдельно.

Для настоящего изобретения также анализировали эффект не подвергающихся -окислению структурных элементов жирных кислот, а также эффект различных растительных масел и рыбьего жира, отдельно или в сочетании с TTA, на уровень холестерина в плазме. TTA снижала уровень холестерина в большей степени, чем любое из растительных масел или рыбий жир отдельно. Подсолнечное масло или рыбий жир без TTA в некоторой степени снижали уровень холестерина, совместно с TTA, уровень холестерина снижался в большей степени, чем TTA отдельно. Оливковое и соевое масло, в действительности, самостоятельно повышали уровень холестерина, однако, совершенно неожиданно, при добавлении к TTA эти масла повышали способность TTA снижать уровень холестерина. Этот эффект в отношении усиления TTA, был наибольшим у соевого масла, которое снижало уровень холестерина на 60% по сравнению TTA отдельно.

Было показано, что TTA снижает уровень триглицерина в плазме вследствие увеличения количества митохондрий и стимуляции митохондриального -окисления обычных насыщенных и ненасыщенных жирных кислот до кетоновых тел (Froyland L et al. (1997) J Lipid Res 38:1851-1858). Для настоящего изобретения было выявлено, что такой эффект дополнительно неожиданно усиливается добавлением растительного или рыбьего жира. Оливковое, подсолнечное масло и рыбий жир самостоятельно снижали уровень триацилглицерина, подсолнечное масло и рыбий жир снижали даже в большей степени, чем TTA отдельно, и дополнительно усиливали эффект TTA в отношении снижения уровня холестерина в большей степени, чем наблюдалось как для масел, так и для TTA по отдельности. Для соевого масла были показаны наиболее яркие результаты; самостоятельно оно, в действительности, повышало уровень холестерина на 15% по сравнению с контролем, однако совершенно неожиданно оно усиливало эффект TTA в отношении снижения уровня холестерина на 130%.

Для настоящего изобретения анализировали эффект кормления атлантического лосося кормом, содержащим не подвергающиеся -окислению аналоги жирных кислот, масло, обычные компоненты корма и необязательно ферментированный белковый материал сои. В примере 2.1, корм для рыб состоял из покрытых обычных кормовых гранул с рыбьим жиром, включающих TTA. Такой корм затем использовали в примере 2.2 в качестве питания для атлантического лосося, и наличие TTA оказывало благоприятные эффекты на полученный таким образом корм для рыб по сравнению с эквивалентным кормом без TTA (примеры 2.3 и 2.4).

Обычные используемые кормовые гранулы содержат главным образом рыбную кормовую муку, немного пшеницы и витаминные и минеральные добавки. Масло, используемое для покрытия гранул, также было морского происхождения, из мойвы, и содержало различные количества смешанной с ним TTA. В таблице 1 описаны состав и химическая композиция рационов. Источник белка (рыбная мука) или углеводов (пшеница) сам по себе не очень важен, важной частью является то, что корм представляет собой обычный корм, хорошо подходящий для анализируемых видов (в этом примере атлантический лосось), для которого при добавлении TTA были показаны благоприятные эффекты.

Несмотря на то, что источник белка сам по себе не является важным, в находящейся на рассмотрении заявке ( № 20043093) было показано, что TTA, введенная совместно с белком обладает дополнительным полезным эффектом по сравнению с эффектом TTA отдельно. Выбор источника жиров для рациона может являться более важным, поскольку было показано здесь, что TTA оказывает неожиданные эффекты совместно с маслами, особенно морского происхождения. Таким образом, тот факт, что этот обычный корм является кормом с высоким содержанием жиров и белков и с низким содержанием углеводов, вероятно, усиливает полезные эффекты TTA по сравнению с эффектами TTA, вводимой отдельно, или совместно с питанием с большим количеством углеводов.

В примере 2.4 определяли эффекты конкретного белкового материала, ферментированного белкового материала сои. Ферментированный белковый материал сои получают в результате ферментации бобов сои. Он содержит модифицированные и немодифицированные белки сои и изофлавоны, а также другие составляющие сои. В предпочтительном варианте осуществления по этому изобретению используется ферментированный белковый материал сои Gendaxin®.

В таблице 2 описан состав жирных кислот рационов. В составе жирных кислот рационов существовали совсем незначительные различия (все содержали приблизительно 100% рыбий жир), процентное содержание n-3 жирных кислот (FA) было практически одинаковым. Рацион, в который была добавлена TTA, при этом приводил к значительным изменениям процентного содержания в составе n-3 жирных кислот фосфолипидов (PL), триацилглицеринов (TAG) и свободных жирных кислот (FFA) в жабрах, сердце и в печени атлантического лосося. Введение TTA в течение 8 недель также приводило к снижению процентного содержания насыщенных FA практически во всех липидных фракциях. Процентное содержание n-3 FA, особенно DHA, повышалось в жабрах и сердце, как можно видеть в примере 2.3.

Атлантический лосось, которого кормили рационом, содержащим TTA, рос медленнее, чем рыбы, которых кормили контрольным рационом. Уровень липидов в организме рыб, которых кормили рационом с добавлением TTA, был значительно более низким, чем уровень у рыб, которых кормили контрольным рационом.

Существуют благоприятные эффекты на здоровье самих рыб, которых кормили кормом по этому изобретению. У старых рыб может развиваться склероз артерий и приводить к проблемам со здоровьем, как и у человека, и снижение липидов оказывает благоприятный эффект в этом отношении.

В общем, полагают, что постные сорта мяса, полученные способом по настоящему изобретению, являются полезными у большинства видов животных, которых разводят для потребления. Таким образом, эффект снижения общего уровня липидов сам по себе является преимущественным. Кроме того, конкретные изменения в составе жирных кислот являются особенно положительными. Общепризнанным является то, что употребление меньшего количества насыщенных жирных кислот полезно для здоровья, и повышенное потребление n-3 связано с пользой для здоровья всего организма, от снижения вероятности заболеваний сердца до противовоспалительных эффектов и даже для повышения интеллекта у детей.

Другие животные продукты, полученные из животных, которых кормили кормом по настоящему изобретению, также могут обладать полезными эффектами. В качестве примера рыбий жир, полученный таким образом, будет обладать преимущественным пищевым составом по сравнению с маслом из рыбы, которую кормили коммерческим рационом. Другие продукты, такие как шкура рыбы, также могут обладать положительными эффектами, наблюдаемыми при улучшении состава тканей всего организма.

Уровень жирных кислот в крови в норме определяется относительными скоростями расщепления жиров и этерификации в жировой ткани и потреблением жирных кислот в мышцах. В мышцах жирные кислоты ингибируют потребление глюкозы и окисление. Повышенный уровень жирных кислот и триацилглицерина в крови и мышцах, таким образом, коррелирует с ожирением и резистентностью к инсулину, а также со снижением способности метаболизировать глюкозу (Olefsky JM (2000) J Clin Invest 106:467-472; Guerre-Millo M et al. (2000) J Biol Chem 275:16638-16642). Стимуляцией окисления жирных кислот и снижением концентрации жирных кислот в плазме не подвергающимися -окислению структурными элементами жирных кислот и растительным и/или рыбьим жиром можно, таким образом предотвращать и лечить резистентность к инсулину и вызванные ей заболеваний (Shulman GI (2000) J Clin Invest 106(2):171-176). Было выявлено, что TTA полностью предотвращает вызванную рационом с высоким содержанием жиров резистентность к инсулину и ожирение, и снижает ожирение, гипергликемию и чувствительность к инсулину у крыс с ожирением (Madsen M et al. (2002) J Lipid Res 43 (5): 742-50). Вследствие неожиданных синергических результатов, обнаруженных авторами изобретения при использовании как TTA, так и растительного и рыбьего жира, без подтверждения какой-либо объясняющей полученные результаты конкретной теорией, авторы настоящего изобретения в настоящее время ожидают, что такое сочетание окажется даже более эффективным при лечении этих состояний. Авторы настоящего изобретения также ожидают, что эффект TTA будет усиливаться рыбьим и растительным жиром, и также необязательно маслом, при лечении сходных заболеваний и нарушений, включая повышенное кровяное давление, повышенный уровень липидов и холестерина, эндотелиальную дисфункцию, состояние повышенной свертываемости крови, синдром поликистоза яичников и метаболический синдром.

Семейство рецепторов, активируемых пролифератором пероксисом (PPAR) являются плейотропными регуляторами клеточных функций, таких как клеточная пролиферация, дифференцировка и гомеостаз липидов (Ye JM et al. (2001) Diabetes 50:411-417). Семейство PPAR содержит три подтипа; PPAR , PPAR и PPAR . TTA является сильным лигандом для PPAR (Forman BM, Chen J, Evans RM (1997) Proc Natl Acad Sci 94:4312-4317; Gottlicher M et al. (1993) Biochem Pharmacol 46:2177-2184; Berge RK et al. (1999) Biochem J 343(1):191-197), а также активирует PPAR и PPAR (Raspe E et al. (1999) J Lipid Res 40:2099-2110). В качестве активатора PPAR TTA стимулирует катаболизм жирных кислот повышением их потребления клетками. Снижение уровня триглицеридов в плазме посредством TTA вызывает переключение метаболизма клеток печени в направлении регулируемого PPAR катаболизма жирных кислот в митохондриях. (Graf HJ et al. (2003) J Biol Chem 278(33):30525-33). Несмотря на то, что эффект TTA на уровень триацилглицеринов в плазме определяется активацией PPAR , что показано устранением этого эффекта у мышей с нокаутом PPAR , рыбий жир не вызывает снижения триацилглицерина в плазме даже у мышей с нокаутом (Dallongeville J et al. (2001) J Biol Chem 276:4634-4639).

Дополнение рациона n-3 полиненасыщенными жирными кислотами, подобными кислотам, находящимся в рыбьем жире, стимулирует активность ацил-CoA-оксидазы пероксисом печени и, таким образом, окисление жирных кислот в печени и в меньшей степени в скелетных мышцах (Ukropec J et al. (2003) Lipids 38(10):1023-9). Было показано, что рацион с увеличенным содержанием рыбьего жира повышает как активность, так и уровень мРНК ферментов окисления жирных кислот пероксисом и митохондрий печени (Hong DD et al. (2003) Biochim Biophys Acta: Mol Cell Biol Lipids 1635 (1):29-36). Рыбий жир вызывал повышение относительного содержания пероксисомальной ацил-CoA-оксидазы в печени, но не в мышцах крыс, и авторы предположили, что это происходит вследствие того, что n-3 жирные кислоты защищают от индуцируемой жирами резистентности к инсулину, выступая в качестве лигандов PPAR , индуцируя пролиферацию пероксисом в печени (не внутримышечную). Экспрессия гена PPAR не менялась (Neschen S et al. (2002) Am J Physiol Endocrinol Metab 282:E395-E401).

Как можно видеть в указанных выше абзацах, биохимические детали того, каким именно образом TTA и рыбий жир влияют на метаболизм жиров, подробно не известны. Еще менее известно, каким образом растительные масла влияют на метаболизм жиров, как описано по настоящему изобретению (Rustan AC, Christiansen EN, Drevon CA (1992) Biochem J 283(2):333-339. Эффекты могут быть или могут не быть опосредованы одним путем как TTA, так и масла могут, например, действовать в качестве лигандов PPAR или действовать независимо от PPAR . Если они действуют одинаковыми путями, то нельзя ожидать усиления TTA маслами, вследствие того, что TTA представляет собой сильный активатор PPAR , который, как можно ожидать, будет полностью обеспечивать активацию PPAR . Даже при сложении эффектов, эффект TTA и растительного или рыбьего жира при сочетании двух компонентов окажется неожиданным. Получение синергичного эффекта выше аддитивного эффекта, как особенно можно видеть для TTA и соевого масла во всех испытаниях по настоящему изобретению, но и в меньшей степени для TTA и рыбьего жира или подсолнечного масла в отношении снижения уровня триацилглицерина, и для оливкового и подсолнечного масла в отношении снижения уровня холестерина, оказалось еще более неожиданным. Подвергаемые -окислению аналоги жирных кислот обладают множеством эффектов, и авторы настоящего изобретения не знают, каким образом все они возникают, но исходя из неожиданных результатов по настоящему изобретению авторы ожидают, что все они будут усиливаться растительным или рыбьим жиром, без подтверждения какой-либо конкретной теорией.

Лиганды PPAR нарушают пролиферацию различных клеточных линий злокачественных опухолей. В частности, было выявлено, что TTA снижает пролиферацию множества клеточных линий злокачественных опухолей (Berge K et al. (2001) Carcinogenesis 22:1747-1755; Abdi-Dezfuli F et al. (1997) Breast Cancer Res Treat 45:229-239; Tronstad KJ et al. (2001) Biochem Pharmacol 61:639-649; Tronstad KJ et al. (2001) Lipids 36:305-313). Это снижение связано со снижением уровня триацилглицеринов (Tronstad KJ et al. (2001) Biochem Pharmacol 61:639-649) и опосредуется как PPAR-зависимыми, так и PPAR-независимыми путями (Berge K et al. (2001) Carcinogenesis 22:1747-1755). Поскольку масла повышают способность TTA снижать уровень триацилглицеринов и являются лигандом PPAR, то, таким образом, очень вероятно, что они также будут повышать антипролиферативные эффекты TTA, обеспечивая такое повышение способности TTA к профилактике и лечению злокачественных опухолей. TTA может использоваться для профилактики и/или лечения злокачественной опухоли, включая ингибирование: первичных и вторичных новообразований, роста опухолей, инвазии первичной опухоли в соединительную ткань и образования вторичных опухолей (NO 2002 5930).

Как правило, агонисты PPAR и полиненасыщенные жирные кислоты модулируют воспалительный ответ. TTA модулирует воспалительный ответ подавлением высвобождения воспалительного цитокина интерлейкина-2 и подавлением стимулированной PHA пролиферации периферических мононуклеарных клеток (Aukrust P et al. (2003) Eur J Clin Invest 33(5):426-33). Модулирование цитокина посредством TTA может быть опосредовано PPAR или изменением уровня простагландинов, или модификацией опосредуемой липидами передачи сигнала, последняя из них также является возможным механизмом действия полиненасыщенных жирных кислот, таких, какие находятся в растительном и рыбьем жире. Теперь, когда авторы изобретения обнаружили неожиданные результаты в отношении настоящего изобретения, они, таким образом, ожидают, что растительное масло и/или рыбий жир, в сочетании с не подвергающимися -окислению структурными элементами жирных кислот будут усиливать эффект аналогов жирных кислот на воспалительные нарушения, включая иммуноопосредованные нарушения, такие как ревматоидный артрит, системный васкулит, системная красная волчанка, системная склеродермия, дерматомиозит, полимиозит, различные аутоиммунные эндокринные нарушения (например, тиреоидит и адреналит), различные иммуноопосредованные неврологические нарушения (например, рассеянный склероз и миастения), различные сердечно-сосудистые нарушения (например, миокардит, застойная сердечная недостаточность, артериосклероз и стабильная и нестабильная стенокардия, и гранулематоз Вегенера), воспалительные заболевания кишечника, болезнь Крона, неспецифический колит, панкреатит, нефрит, холестаз/фиброз печени, и острое и хронической отторжение трансплантата после трансплантации органа, а также пролиферативные нарушения кожи, такие как псориаз, атопический дерматит, неспецифический дерматит, первично ирритантный контактный дерматит, аллергический контактный дерматит, ламеллярный ихтиоз, эпидермолитический гиперкератоз, предзлокачественный индуцированный действием солнца кератоз и себорея, и заболевания, которые обладают воспалительным компонентом, такие как, болезнь Альцгеймера или нарушенная/способная к улучшению когнитивная функция.

ОПИСАНИЕ РИСУНКОВ

На Фигуре 1 показано, что повышение активности ацил-CoA жиров TTA усиливается соевым маслом, оливковым маслом и рыбьим жиром.

На фигуре 2 показано, что эффект TTA в отношении снижения уровня фосфолипидов усиливается подсолнечным маслом, соевым маслом и рыбьим жиром.

На фигуре 3 показано, что эффект TTA в отношении снижения уровня холестерина усиливается оливковым маслом, подсолнечным маслом, соевым маслом и рыбьим жиром.

На фигуре 4 показано, что эффекты TTA в отношении снижения уровня триацилглицеринов усиливаются оливковым маслом, подсолнечным маслом, соевым маслом и рыбьим жиром.

ОПРЕДЕЛЕНИЯ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ЗАЯВКЕ

Животные

В этом контексте термин "животные" включает в себя млекопитающих, таких как человек и фермерские (сельскохозяйственные) животные, особенно животных экономического значения, таких как куриные, млекопитающие, относящиеся к крупному рогатому скоту, овцам, козам и свиньям, особенно животных, посредством которых получают пригодные для потребления человеком продукты, такие как мясо, яйца и молоко. Далее, подразумевается, что термин включает в себя рыбу и моллюсков, таких как лосось, треска, тиляпия, двустворчатые моллюски, устрицы, омар или крабы. Также термин включает в себя домашних животных, таких как собаки и кошки.

Корм для животных

Термин "корм для животных" относится к пище для животных (как определено выше). Корм для животных, как правило, содержит соответствующие количества жиров, белков, углеводов, витаминов и минералов, необходимых для жизнеобеспечения определенного реципиента-животного, и может содержать дополнительные компоненты для улучшения вкуса, консистенции, цвета, запаха, стабильности, срока хранения и т.д., или антибиотики или другие компоненты, добавляемые для пользы для здоровья животного. Корм для животных предпочтительно, но не обязательно представляет собой сухое вещество, наиболее предпочтительно, гранулированное вещество. Также подразумевается, что термин "корм для животных" включает в себя пищевые композиции, ветеринарные композиции, и/или функциональные пищевые продукты для потребления животными.

Мясо

Термин "мясо" относится к сырому мясу из любого животного, как определено выше. Таким образом, все виды содержащего белок сырого мяса из млекопитающих, птиц, рабы и моллюсков, рассматриваются как мясо. Термин "мясной продукт" относится к любому продукту из мяса, как определено выше.

Растительные жиры и/или рыбий жир

Они включают в себя все виды масла растительного или морского происхождения, включая, но не ограничиваясь ими, жирные или нелетучие масла, а также эфирные или летучие масла, и любое их сочетание. Они не обязательно должны находиться в жидкой форме. Подсолнечное масло, которое использовалось для настоящего изобретения, в действительности представляет собой масло из семян подсолнечника, а не из самого цветка.

Рыбий жир

Этот термин включает в себя все виды масла морского происхождения.

Пищевая композиция

Подразумевается, что этот термин включает в себя любое потребляемое внутрь вещество, включая, но не ограничиваясь ими, пищевые добавки, функциональные пищевые продукты, растительные добавки и т.д. для употребления человеком и животными. Термин также включает в себя пищевые продукты для употребления человеком и корм для животного, где композиция по настоящему изобретению представляет собой дополнительный компонент, а не основной ингредиент. Это особенно относится к корму для животных, где любой корм может быть дополнен композицией по настоящему изобретению, для достижения ее биологических эффектов.

Лечение

В отношении фармацевтических аспектов применения этого изобретения, термин "лечение" относится к снижению тяжести заболевания.

Профилактика

Термин "профилактика" относится к предотвращению данного заболевания, т.е. соединение по настоящему изобретению вводят перед развитием состояния. Это означает, что соединения по настоящему изобретению могут использоваться в качестве профилактических средств или в качестве ингредиентов в пищевой композиции в целях предотвращения риска или развития данного заболевания.

Пищевая композиция

Подразумевается, что этот термин включает в себя употребляемый внутрь материал, включая, но не ограничиваясь ими, пищевые добавки, функциональные пищевые продукты, растительные добавки и т.д. для употребления человеком или животными. Термин также включает в себя пищевые продукты для употребления человеком и корм для животных, где композиция по настоящему изобретению является дополнительным компонентом, и не является основным ингредиентом. Это особенно относится к корму для животных, где любой корм может быть дополнен композицией по настоящему изобретению, для достижения ее биологических эффектов.

ВВЕДЕНИЕ СОЕДИНЕНИЙ ПО НАСТОЯЩЕМУ ИЗОБРЕТЕНИЮ

В качестве фармацевтического лекарственного средства соединения по настоящему изобретению могут быть введены непосредственно животному любым пригодным способом, включая парентеральное, интраназальное, пероральное введение, или посредством всасывания через кожу. Она может быть введена местно или системно. Конкретный способ введения каждого средства зависит, например, от анамнеза рецепиента-человека или животного.

Примеры парентерального введения включают в себя подкожное, внутримышечное, внутривенное, интраартериальное и внутрибрюшинное введение.

В качестве общего положения, общее фармацевтически эффективное количество каждого из не подвергающихся -окислению структурных элементов жирных кислот, вводимого парентерально в дозе предпочтительно находится в диапазоне от приблизительно 1 мг/кг/сутки до 200 мг/кг/сутки на массу тела пациента для человека, хотя, как описано выше, можно проводить его значительное терапевтическое разделение. Доза от 5-50 мг/кг/сутки является наиболее предпочтительной. Доза масла 1-300 мг/кг/сутки является предпочтительной, и доза 10-150 мг/кг/сутки является наиболее предпочтительной.

При постоянном введении, все соединения по настоящему изобретению, как правило, вводят в виде 1-4 инъекций в сутки или длительными подкожными инфузиями, например, с использованием мини-дозатора. Также может использоваться раствор из мешка для внутривенного введения. Основным фактором при выборе соответствующей дозы является конечный результат, определяемый по снижению общей массы тела или соотношения жира и мышечной массы, или по другим критериям измеряемого контроля, или по профилактике ожирения или профилактике связанных с ожирением состояний, как определяется соответствующим образом квалифицированным специалистом.

В случае парентерального введения, в одном варианте осуществления соединения по настоящему изобретению изготовлены смешиванием каждого из них с соответствующей степенью чистоты в единичной дозированной инъецируемой форме (раствор, суспензия или эмульсия) c фармацевтически приемлемым носителем, т.е. с носителем, который является нетоксичным для реципиентов в используемых дозах и концентрациях и совместимым с другими ингредиентами состава.

Как правило, составы получают объединением соединений по настоящему изобретению с жидкими носителями или мелкоизмельченными твердыми носителями или и с теми, и с другими в равномерную и однородную смесь. Затем, если необходимо, продукту придают форму желательного препарата. Предпочтительно носитель представляет собой носитель для парентерального введения, более предпочтительно, раствор, который является изотоничным крови реципиента. Примеры таких носителей включают в себя воду, физиологический раствор, раствор Рингера и раствор декстрозы. Неводные носители, такие как жирные масла и этилолеат, а также липосомы, также являются пригодными здесь.

Если целесообразно, носитель может содержать небольшие количества дополнительных компонентов, таких как вещества, которые увеличивают изотоничность и химическую стабильность. Такие вещества не являются токсичными для реципиента в используемых дозах и концентрациях и включают в себя буферы, такие как фосфатный, цитратный, сукцинатный, ацетатный буфер и другие буферы на основе органических кислот или их солей; антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота; иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутаминовая кислота, аспарагиновая кислота или аргинин; моносахариды, дисахариды и другие углеводороды, включая целлюлозу или ее производные, глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как ЭДТА; спирты на основе сахаров, такие как маннит или сорбит; противоионы, такие как натрий; и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие как полисорбаты, полоксамеры или PEG.

В случае пероральных фармакологических композиций, могут использоваться такие носители, например, как вода, желатин, камеди, лактоза, крахмалы, стеарат магния, тальк, масла, полиалкенгликоль, вазелиновое масло и т.п. Такой фармацевтический препарат может быть в виде единичной дозированной формы и может дополнительно содержать другие терапевтически полезные вещества или общепринятые фармацевтические адъюванты, такие как консерванты, стабилизаторы, эмульгаторы, буферы и т.п. Фармацевтические препараты могут быть в виде общепринятых жидких форм, таких как таблетки, капсулы, драже, ампулы и т.п., в виде общепринятых дозированных форм, таких как ампулы, и в виде суппозиториев и т.п.

Кроме того, соединения по настоящему изобретению, т.е. соединения, содержащие аналог не подвергающейся -окислению жирной кислоты и растительный или рыбий жир могут использоваться в пищевых препаратах, как определено выше, в случае которых дозировка не подвергающихся -окислению аналогов жирных кислот представляет собой дозировку, как для описанных лекарственных средств или ниже, в то время как количество растительного и/или рыбьего жира предпочтительно является пригодным для изготовления пищевых и кормовых материалов. Как часть пищевой композиции и, особенно, корма для животных, растительный и/или рыбий жир могут представлять собой значительную часть корма, и, таким образом, обладать пищевой ценностью, а также усиливать эффекты не подвергающиеся -окислению аналоги жирных кислот. Жир по настоящему изобретению может включать в себя вплоть до всех жиров питательной композиции. В корме для животных количество не подвергающегося -окислению аналога жирной кислоты может быть вплоть до 10 раз выше, чем в продуктах для употребления человеком, то есть вплоть до 2 г/кг/сутки на массу тела животного. Такой корм для животных может использоваться для повседневного кормления животных. Композиция корма для животных также может содержать ферментированный белковый материал сои. Ферментированный белковый материал сои особенно пригоден в качестве функционального белка в пищевых продуктах, в частности, при использовании в качестве заместителя природной плазмы в кормах для животных и кормах для домашних животных. Композиция корма для животных также может содержать дополнительные ингредиенты, такие как жиры, сахара, соль, вкусовые добавки, минералы и т.д. Кроме того, продукту можно придавать форму кусков, сходных с природными кусками мяса по внешнему виду и консистенции. Продукт по этому изобретению обладает дополнительными преимуществами в том, что его легко изготавливать с содержанием необходимых пищевых добавок, он легко переваривается животными и обладает привлекательным вкусом для животных.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Получение не подвергающихся -окислению структурных элементов жирных кислот по настоящему изобретением подробно описано более ранних патентных заявках Норвегии № 20005461, 20005462, 20005463 и 20024114 заявителя. В этих документах также описаны исследования токсичности TTA. Препарат моно-, ди- и триглицеридов и содержащих азот липидов в соответствии по этому изобретению подробно описан в патентной заявке США № 10/484350. Препарат фосфолипидов, включающий серин, этаноламин, холин, глицерин и инозитол по этому изобретению подробно описан в более ранней патентной заявке Норвегии № 20045562 заявителя.

Пример 1. Биологические эффекты композиции по этому изобретению у крыс

1.1 Экспериментальная модель

Химические реактивы

Химические реактивы получали из общепринятых коммерческих источников, и они были химически чистыми. Рыбий жир получали из Hordafor, а растительные масла получали из Mills. В качестве контроля (отрицательного) использовали карбоксиметилцеллюлозу (CMC).

Экспериментальные животные

Самцов крыс Вистар с массой от 250 до 358 г приобретали в AnLab Ltd. (Прага, Чешская Республика) и содержали в клетках из проволоки при температуре 22±1°C и в комнате с контролируемым освещением (свет от 7 до полудня до 7 после полудня). В приеме пищи и воды не было ограничений. В каждой клетке держали три крысы. Увеличение массы и потребление корма определяли каждые сутки.

Экспериментальные рационы

Крыс кормили стандартным рационом Chow ST1 (Velaz, Прага, Чешская Республика).

Введение

Перед началом эксперимента самцам крыс Вистар давали возможность приспособиться к новым окружающим условиям. Затем им проводили введение каждые сутки в течение 10 суток посредством кормления через зонд. В качестве носителя и отрицательного контроля использовали CMC. В каждой группе по введению было по 4 крысы. В группах, в которых вводили TTA, вводили 150 мг/кг массы тела/сутки TTA, растворенной в CMC или маслах. В группах, в которых вводили жиры (подсолнечный, соевый, оливковый или рыбий), вводили 3 мл (приблизительно 2,5 г)/кг массы тела/сутки. В качестве носителя и отрицательного контроля использовали CMC. На следующие сутки после последнего введения крыс умерщвляли.

Умерщвление и извлечение тканей

Крысам проводили анестезию смесью 1:1 Hypnorm^TM (фентанил цитрат 0,315 мг/мл и флуанизон 10 мг/мл, Janssen Animal Health) и Dormicum® (мидазолам 5 мг/мл, F. Hoffmann-La Roche), вводимой подкожно. Проводили забор крови непосредственно из сердца с использованием промытого гепарином шприца. Печень сразу удаляли, взвешивали и разделяли на две части, которые сразу охлаждали на льду или замораживали в жидком азоте, соответственно. Плазму и ткани хранили при -80°C до проведения анализа. Протокол был одобрен Управлением Норвегии по биологическим экспериментам на живых животных.

Получение субклеточных печеночных фракций

Печени крыс гомогенизировали по отдельности в ледяном растворе сахарозы (0,25 моль/л сахарозы в 10 ммоль/л буфера HEPES pH 7,4 и 1 ммоль/л ЭДТА) с использованием гомогенизатора Potter-Elvehjem. Субклеточное фракционирование печени проводили, как описано ранее (Berge RK et al. (1984) Eur J Biochem 141:637-44). Процедуру проводили при 0-4°C, и фракции хранили при -80°C. Белок оценивали набором для анализа белков BioRad с использованием бычьего сывороточного альбумина в качестве стандарта.

1.2 Биологические эффекты композиции по этому изобретению у крыс

Ферментный анализ ацил-CoA-оксидазы жиров

Активность ацил-CoA-оксидазы жиров измеряли в пероксисомной фракции печени как описано ранее (Small GM, Burdett K, Connock MJ (1985) Biochem J 227: 205-10). Результаты представляли в качестве активности ацил-CoA оксидазы жиров относительно общего белка, вычитали исходную активность (активность контроля), и данные, которые представлены на фигуре 1 нормировали по отношению к активности TTA.

Анализ липидов

Липиды плазмы и печени определяли ферментативно на системе Technicon Axon (Miles, Территаун, NY) с использованием набора для триглицеридов из Bayer, для общего холестерина (Bayer, Территаун, NY), и набора PAP 150 для фосфолипидов, содержащих холин, из bioMerieux. Результаты представлены относительно общего белка. Результаты были представлены относительно общего белка, и данные, которые представлены на фигурах 2-4, нормировали по отношению к активности положительного контроля (без добавления TTA или масел; т.е. "нормальному" уровню).

Пример 2

Биологические эффекты композиции по этому изобретению у атлантического лосося

2.1 Экспериментальная модель, включающая получение корма для рыб

Экспериментальный рацион на основе рыбной муки был предоставлен EWOS и содержал 0,01% Y₂O ₃ в качестве инертного маркера для определения перевариваемости (3-мм гранулы). В таблице 1 представлены составы и химические композиции трех видов рационов. Все три вида рационов были получены из одной кормовой смеси. Различные рационы были получены покрытием обычных кормовых гранул различными маслами и смесями. Рационы включали в себя либо рыбий жир (жир мойвы) (контроль), рыбий жир с добавлением 0,5% TTA (0,5% TTA) или рыбий жир с добавлением 1,5% TTA (1,5% TTA).

Таблица 1 Состав и химическая композиция рационов Рационы: рыбий жир (контроль), рыбий жир с добавлением 0,5% TTA (0,5% TTA), рыбий жир с добавлением 1,5% TTA (1,5% TTA).
	Контроль	0,5% ТТА	1,5% ТТА
Состав (% от общего)
Рыбная мука	67,8	67,8	67,8
Жир мойвыа	21,3	21	20,7
ТТА		0,1	0,3
Пшеница	10,4	10,4	10,4
Astaxb -Cantaxc	0,06	0,06	0,06
Минеральная/Витаминная добавка	0,49	0,49	0,49
Оксид иттрия	0,01	0,01	0,01
Химическая композиция
Сухая масса (%)	97,1	96,1	93,8
Белок (%)	51,9	51,4	49,7
Жиры (%)	26,9	26,7	26,7
Зола (%)	10,8	10,4	10
Энергия (МДж/кг)	23,8	23,7	23,2
a Жир мойвы, Norsildmel, Норвегия. b Asta, BASF, lucanthin red. с Canta, lucanthin pink.

Состав жирных кислот в рационах отчетливо отражает, что использовался рыбий жир (жир мойвы) (таблица 2). Жир мойвы содержал относительно высокий уровень мононенасыщенных FA и также был обогащен n-3 FA с длинной цепью, 20:5 n-3 (EPA) и 22:6 n-3 (DHA). Корм, однако, содержал значительное количество рыбной муки, которая содержала n-3 FA, обеспечивая более высокий уровень этих FA в рационе, чем в добавленном масле.

В дополнение к приведенным выше рационам, были изготовлены идентичные рационы, с 0,5% Gendaxin и 0% или 0,9% TTA (исходя из общей сухой массы корма).

Таблица 2 Состав жирных кислот рационов
	Контроль	0,5% TTA	1,5% TTA
Жирные кислоты
12:0	0,1	0,1	0,1
14:0	6,7	6,6	6,6
15:0	0,3	0,3	0,3
16:0	11,8	11,6	11,5
16:1 n-7	7,1	7	6,9
16:1 n-9	0,4	0,3	0,3
16:2 n-7	0,4	0,4	0,4
17:0	0,1	0,1	0,1
18:0	1,4	1,3	1,3
18:1 n-6	0,4	0,4	0,4
18:1 n-7	3,1	3	3
18:1 n-9	11,5	11,6	11,3
18:2 n-6	2,7	2,7	2,6
18:3 n-6	0,1	0,1	0,1
18:3 n-3	0,7	0,7	0,7
18:4n-3	2,1	2,1	2,1
TTA		0,5	1,5
20:0	0,1	0,1	0,1
20:1 n-9	0,5	0,5	0,5
20:1 n-11	17,9	17,9	17,7
20:2 n-6	0,2	0,2	0,2
20:3 n-3	nd	nd	nd
20:4 n-3	0,4	0,4	0,4
20:4 n-6	0,3	0,3	0,3
20:5 n-3	5,9	5,9	5,8
22:0	0,2	nd	nd
22:1 n-9	1,9	1,9	1,8
22:1 n-11	14,1	14	14
22:2 n-6	0,1	0,2	0,2
22:5 n-3	0,5	0,4	0,5
22:6 n-3	6,4	6,2	6,2
Насыщенных	20,7	20,1	20
n-3	15,9	15,7	14,1
n-6	3,5	3,5	3,4
Контроль: рыбий жир, 0,5% TTA: рыбий жир с добавлением 0,5% TTA, 1,5% TTA: рыбий жир с добавлением 1,5% TTA. Количество каждой жирной кислоты представлено в качестве процентного содержания от общих жирных кислот.

2.2: Выращивание атлантического лосося на корме, содержащем TTA

Рыба, условия и схема эксперимента

Испытание проводили в научно-исследовательской станции AKVAFORSK, Sunndalsora, Норвегия. Атлантический лосось (Salmon salar) со средней исходной массой приблизительно 86 г помещали в 15 цилиндрических конических емкостей (диаметр 0,85 м), по 40 в емкость. Емкости наполняли морской водой с постоянной температурой 12°C. Рыбам давали возможность приспособиться к температуре и кормили коммерческим кормом в течение двух недель перед началом испытания. Испытание по выращиванию состояло из периода времени 8 недель.

Рационы представляли собой рационы, как описано выше в таблице 2, которые содержали либо рыбий жир (жир мойвы) (контроль), либо рыбий жир с добавлением 0,5% TTA (0,5% TTA), либо рыбий жир с добавлением 1,5% TTA (1,5% TTA). Три рациона случайным образом распределяли на три емкости. Корм распределяли с помощью электрической системы подачи (Akvaprodukter AS, Sunndalsora). Емкости были разработаны таким образом, чтобы избыток корма собирался из отходящей воды в коробки из проволочного каркаса. Избыток корма собирали, и это позволяло вычислить массу потребленного корма.

Рацион, включающий в себя Gendaxin, использовали в отдельном эксперименте, но схема эксперимента была аналогичной описанной выше схеме.

Исходный и конечный забор образцов

Рыб не кормили в течение 2 суток перед исходным забором образов. Шести рыбам из каждой емкости проводили анестезию с помощью MS-222 в начале и в конце эксперимента и определяли среднюю массу и среднюю длину. Эти шесть рыб умерщвляли ударом по голове и вскрывали брюшную полость. Образцы печени, сердца, жабр и почек сразу замораживали в жидком азоте и хранили при -80°C. Эти образцы затем использовали для анализа состава жирных кислот. Дополнительным пяти рыбам из каждой емкости проводили анестезию и умерщвляли. Этих рыб использовали для определения состава всего тела.

Перед конечным забором образцов кормление рыб не прекращали. Из пяти рыб из каждой емкости выделяли образцы экскрементов в соответствии со способом, описанным Austreng (Aquaculture, 1978 13:265-272). Перед анализом образцы экскрементов из каждой емкости объединяли. Образцы хранили при -20°C.

Вторую жаберную дугу удаляли из рыбы, которой провели анестезию, и промывали ледяным буфером SEI (150 мМ сахарозы, 10 нМ ЭДТА, 50 мМ имидазола, pH 7,3) и сразу замораживали в жидком азоте. Ткани жабр хранили при -80°C. Печени гомогенизировали в ледяной среде с сахарозой.

Прирост

Средняя масса рыб в группах со всеми рационами приблизительно утроилась в процессе испытания, от исходного значения 86 г до конечного значения приблизительно 250 г. SGR снижалась при повышении доз TTA в рационе, от SGR 1,8 в контрольной группе до SGR 1,7 в группе c 0,5% TTA и SGR 1,5 в группе с 1,5% TTA (Таблица 3). Между группами по рациону не было значимых различий в коэффициентах упитанности (таблица 3).

Таблица 3 Эффект включения в рацион TTA и масла на потребление корма и прирост у атлантического лосося
	Контроль	0,5% TTA	1,5% TTA
Исходная масса	85±2	88±1	86±2
Конечная масса	278±7	267±3	233±1
CF	1,2±0,02	1,1±0,02	1,2±0,02
TGR	2,60±0,44 с	2,5±0,05 b	2,0±0,06 a
SGR	1,8±0,02 с	1,7±0,03 b	1,5±0,05 а
Общее FER	1,2±0,05	1,2±0,04	1,1±0,12
Значения представляют собой средние значения ± SEM (n=3) CF (%): Коэффициент упитанности, SGR: Удельная скорость роста, TGC: Температурный коэффициент роста, FER: Соотношение эффективности корма (увеличение количества жидкости/прием сухого корма). abc Различия между средними значениями в данном ряду являются достоверными (p 0,05), как показано разными надстрочными буквами.

Потребление корма и перевариваемость пищевой добавки

В этом испытании были выявлены только небольшие различия в перевариваемости (таблица 4). Перевариваемость FA во всех группах по рационам была высокая, более чем 96% для суммы всех FA для рыб, которых кормили контрольным рационом и рационом с 0,5% TTA, и более 90% для рыб, которых кормили рационом с 1,5% TTA. Перевариваемость для насыщенных FA была, как правило, ниже, чем перевариваемость для других FA.

Таблица 4 Перевариваемость пищевой добавки у атлантического лосося
	Контроль	0,5%TTA	1,5%TTA
Энергия	89,5±0,08	89,0±0,58	87,1±1,22
Белки	87,7±0,15	87,9±0,31	87,5±0,44
Жиры	97,3±0,58	96,5±1,27	94,9±2,12
Насыщенных	93,2±1,54b	81,4±1,95а	81,5±2,18а
Мононенасыщенных	87,8±5,66	90,4±5,56	95,4±1,87
Полиненасыщенных	90,9±7,77	94,0±4,45	92,5±5,08
TTA		98,6±0,45	97,0±1,59
Для содержания белков, жиров и энергии и отдельных жирных кислот в рационе атлантического лосося, содержащем Контроль: рыбий жир, 0,5% TTA: рыбий жир с добавлением 0,5% TTA, 1,5%TTA: рыбий жир с добавлением 1,5% TTA Данные представляют собой средние значения ± SEM Значения в одном ряду с различными надстрочными знаками являются достоверно различающимися; nd= не определяется.

2.3 Биологические эффекты композиции по этому изобретению

Химические реактивы

Уксусная кислота, хлороформ, петролейный эфир и метанол были получены из Merck (Дармштадт, Германия). Бензол был получен из Rathburn Chemicals Ltd. (Walkerburn, Шотландия) и 2',7'-дихлорфлуоресцеин из Sigma Chemical Co. (St.Louis, MO, USA). Метанольный раствор HCl и 2,2-диметоксипропан приобретали в Supelco Inc. (Bellfonte, PA, USA). Покрытые стеклом планшеты на основе силикагеля K6 получали в Whatman International Ltd. (Мейдстон, Великобритания).

Химический анализ

В образцах рыбы, полученных в начале и в конце эксперимента, анализировали сухой остаток, жиры, белки, золу и энергетическую ценность. Во всех рационах и образцах экскрементов анализировали сухой остаток (высушиванием при 105°C до постоянной массы), жиры (экстракцией этилацетатом, как описано в NS 9402, 1994), белки (с помощью Kjeltec Autoanalyser-N*6.25), крахмал, золу (нагреванием до 550°C до постоянной массы), энергию и оксид иттрия (с использованием ICP-AES после мокрого озоления образцов). Энергетическую ценность рационов, фекалий и образцов целых рыб определяли с помощью адиабатической калориметрии в бомбе, с использованием калориметрической бомбы Parr 1271.

Экстракция липидов и анализ жирных кислот

Общие липиды экстрагировали из гомогенизированных жабр, печени и сердца с использованием способа, описанного Folch (J Biol Chem 1957 226:497-509). Фазы хлороформ-метанол из жабр сушили в атмосфере азота и растворяли в гексане. Фосфолипиды (PL), триацилглицерин (TAG) и свободные жирные кислоты (FFA) разделяли тонкослойной хроматографией (TLC) с использованием смеси петролейного эфира, диэтилового эфира и уксусной кислоты (113:20:2 по объему) в качестве подвижной фазы. Липиды визуализировали распылением на плашки TLC 0,2% (мас./об.) 2'7'-дихлорфлуоресцеина в метаноле, и их идентифицировали сравнением с известными стандартами при УФ-свете.

Пятна, соответствующие PL, FFA и TAG, счищали в стеклянные пробирки и затем проводили транс-метилирование в течение ночи 2,2-диметоксипропаном, метанольной-HCL и бензолом при комнатной температуре, как описано Mason и Waller (Anal Chem 1964 36:583). Метиловые эфиры разделяли, в основном, на неполярной колонке со сплавленными капиллярами газовой хроматографий, как описано Rosjo (Fish Physiol Biochem 1994 13:119-132). Метиловые эфиры FA разделяли на газовом хроматографе (Perkin-Elmer Auto system GC, оборудованный инжектором, программируемым инжектором с разделением/без разделения) с колонкой CP wax 52 (с длиной 25 м, внутренним диаметром 0,25 мм и толщиной пленки 0,2 мкм), детектором ионизации пламени и системой данных 1022. Газ-носитель представлял собой He, и температура инжектора и детектора составляла 280°C. Температуру печи повышали от 50°C до 180°C со скоростью 10°C мин^-1, и затем повышали до 240°C со скоростью 0,7°C мин^-1. Относительное количество каждой представленной жирной кислоты определяли измерением площади пика, соответствующего этой кислоте.

Вычисления

Коэффициент видимой перевариваемости (ADC) вычисляли, как описано Austreng (Aquaculture, 1978 13:265-272). Коффициент упитанности (CF), гепатосоматический индекс (HSI), удельный фактор роста (SGR) и коэффициент роста на единицу теплоты (TGC) вычисляли следующим образом, на основе индивидуальных показателей массы и длины:

SGR=(e^{(ln W1-ln W0)/сутки)} -1)·100

TGC=(W₁ ^1/3-W₀ ^1/3)·1000/(сутки·°C),

где W₀ представляет собой исходную массу, W₁ представляет собой конечную массу и t представляет собой температуру в течение суток.

CF=100·W·(длина по Смиту)^-3

HSI=100·масса печени·W ^-1

Статистический анализ

Для всех данных проводили однофакторный дисперсионный анализ (ANOVA) и различия ранжировали по критерию множественных сравнений Дункана. Уровень значимости был установлен при значении 5%.

Состав тела и печени

Рыбы, которых кормили рационом с 1,5% TTA, обладали более низким уровнем липидов в теле (9,6%), чем рыбы, которых кормили контрольным рационом (10,6%) (таблица 5). Не было выявлено статистически значимых различий в общем содержании липидов между рыбами, которых кормили контрольным рационом и рыбами, которых кормили рационом с TTA (таблица 6). Гепатосоматический индекс был значительно выше у рыб, которых кормили рационом с 1,5% TTA (1,2%), чем у рыб, которых кормили контрольным рационом (1,1%) (таблица 6).

Таблица 5 Химический состав скелета в % от полной массы
	Исходное значение	Контроль	0,5% TTA	1,5% TTA
Неочищенные липиды (%)	8,3	10,6±0,01 b	11,0±0,42 b	9,6±0,09 a
Неочищенный белок (%)	16,8	18,1±0,06	17,8±0,19	18,0±0,22
Сухой остаток (%)	27,6	31,1±0,12 b	31,0±0,15 b	29,9±0,10 a
Зола (%)	2,3	2,0±0,05	2,0±0,02	2,0±0,06
Энергия (МДж/кг)	7,1	8,5±0,03b	8,5±0,10b	8,0±0,05a
Контроль: рыбий жир, 0,5% TTA: рыбий жир с добавлением 0,5% TTA, 1,5% TTA: рыбий жир с добавлением 1,5% TTA. ab Различия между средними значениями в данном ряду являются достоверными (p<0,05), как указано различными надстрочными буквами.

Таблица 6 Эффект включения в рацион TTA и масел на гепатосоматический индекс (HSI) и содержание липидов в печени
	Контроль	0,5% TTA	1,5%TTA
HIS	1,1±0,01 а	1,1±0,02 а	1,2±0,03 b
Содержание липидов в печени (%)	4,9±0,27	5,1±0,12	5,7±0,69
Результаты представляют собой средние значения ± SEM (n=3). Значения в одном ряду с различными надстрочными буквами являются достоверно различными.

Состав жирных кислот печени, жабр и сердца

Состав жирных кислот PL, TAG и FFA в жабрах, печени и сердце представлен в таблицах 7, 8 и 9. TTA входила в состав фракции PL в жабрах (0,8%) и сердце (0,7%) атлантического лосося, которого кормили рационом с 1,5% TTA. TTA также входила в состав фракций TG и FFA в жабрах (таблица 7). Следовые количества TTA и ее продуктов, полученных под действием ⁹ десатуразы, входили в состав липидов печени, в то время как не было выделено продуктов ⁹ десатуразы из липидов сердца и жабр.

Процентное содержание n-3 FA в печени, жабрах и сердце также зависело от рациона, который давали рыбам. Процентное содержание EPA+DHA было значительно выше у рыб, которых кормили рационом с 1,5% TTA, чем у контрольных рыб, во всех липидных фракциях жабр и сердца. В печени, с другой стороны, TTA приводила только к умеренному повышению процентного содержания DHA и небольшому снижению процентного содержания EPA. Процентное содержание пальмитиновой кислоты (16:0) и суммы всех насыщенных FA было значительно ниже во фракции PL жабр, сердца и печени рыб, которых кормили рационом с 1,5% TTA, чем у рыб, которых кормили контрольным рационом (таблицы 7, 8, 9). Сумма всех мононенасыщенных FA была значительно ниже во фракциях TG и FFA жабр у рыб, которых кормили рационом 1,5% TTA, чем у рыб, которых кормили контрольным рационом (таблица 8). Напротив, процентное содержание суммы мононенасыщенных FA во фракциях PL и TAG печени было выше у рыб, которых кормили более высокими дозами TTA (Таблица 9).

Таблица 7

Состав жирных кислот жабр

FO: рыбий жир, 0,5% TTA: рыбий жир с добавлением 0,5% TTA, 1,5% TTA: рыбий жир с добавлением 1,5% TTA. Количество каждой жирной кислоты представлено в качестве процентного количества от общих жирных кислот (FA). Данные представляют собой средние значения ± SEM. Значения в одном ряду с различными надстрочными буквами являются достоверно различными, p<0,05, n=3; nd=не определяется. Включает в себя nd. FA и некоторые FA с процентным содержанием менее 1.

Таблица 8

Состав жирных кислот сердца

FO: рыбий жир, 0,5% TTA: рыбий жир с добавлением 0,5% TTA, 1,5% TTA: рыбий жир с добавлением 1,5% TTA. Количество каждой жирной кислоты представлено в качестве процентного количества от общих жирных кислот (FA). Данные представляют собой средние значения ± SEM. Значения в одном ряду с различными надстрочными буквами являются достоверно различными, p<0,05, n=3; nd=не определяется. Включает в себя nd. FA и некоторые FA с процентным содержанием менее 1.

Таблица 9

Состав жирных кислот печени

FO: рыбий жир, 0,5% TTA: рыбий жир с добавлением 0,5% TTA, 1,5% TTA: рыбий жир с добавлением 1,5% TTA. Количество каждой жирной кислоты представлено в качестве процентного количества от общих жирных кислот (FA). Данные представляют собой средние значения ± SEM. Значения в одном ряду с различными надстрочными буквами являются достоверно различными, p<0,05, n=3; nd=не определяется. Включает в себя nd. FA и некоторые FA с процентным содержанием менее 1.

2.4 Биологические эффекты композиции по этому изобретению, включающей ферментированный белковый материал сои

Химические реактивы

Gendaxin получали из Aximed, Берген, Норвегия. Одна капсула Gendaxin® содержит 35 мг изофлавонов, помимо этого, 10 мг генистеина и 15 мг дайдзеина.

Анализ липидов

Липиды плазмы определяли ферментативно с помощью системы Technicon Axon (Miles, Tarrytown, NY) с использованием набора для триглицеридов из Bayer, набора для общего холестерина (Bayer, Территаун, NY), и набора PAP 150 для содержащих холин фосфолипидов из bioMerieux. Результаты представлены в ммоль/л, и данные представлены ниже в таблице 10.

Таблица 10 Общий холестерин, триглицериды и фосфолипиды в плазме
	Холестерин	Триглицериды es	Фосфолипиды
Контроль	10,02	2,95	11,98
0,25 % Gendaxin	9,14	2,71	11,19
0,5 % Gendaxin + 0,9 % TTA	9,10	2,12	10,66

Из представленных выше данных ясно, что добавление Gendaxin в корм рыбы оказывает положительный эффект на состав жирных кислот в плазме лосося. Уровень холестерина, триглицеридов и фосфолипидов при добавлении 0,25% Gendaxin в корм рыб снижался по сравнению с контролем. Дальнейшее добавление Gendaxin и TTA дополнительно улучшало состав жирных кислот в плазме.

Анализ ферментов

Активность ацил-CoA-оксидазы жиров определяли в пероксисомальной фракции печени, как описано ранее (Small GM, Burdett K, Connock MJ (1985) Biochem J 227: 205-10). Результаты представлены в качестве активности ацил-CoA-оксидазы жиров относительно общего белка, и представлены ниже в таблице 11.

Таблица 11 -окисление в печени
	Бета-окисление
Контроль	0,940
0,5 % Gendaxin + 0,9% TTA	1,501

Из представленных выше данных очевидно, что добавление в корм для рыб Gendaxin и TTA оказывает положительный эффект на -окисление, поскольку -окисление значительно повысилось.

Пример 3

В соответствии с экспериментальной моделью, представленной в примере 1, авторы настоящего изобретения провели эксперимент по кормлению на самцах крыс Вистар (см. таблица 12) со следующими компонентами корма:

30% жиров

20% белков

5% волокон

10% сахарозы

3,5% минеральной смеси AIN93G

1,0% витаминной смеси AIN-93

Остальное: Крахмал

Компонент жиров представляет собой 30% свиного жира, или 2,5-5% свиного жира замещено на рыбий жир или 0,15 свиного жира замещено на TTA. Белковый материал представляет собой 20% белок молока (казеин), или половина его замещена белком рыбы или "Биопротеином".

Таблица 12
Введение	Ch, ммоль/л	Tg, ммоль/л	HDL Ch, ммоль/л	FFA, ммоль/л	PL, ммоль/л	HDL Ch/Ch соотнош-ние
FPH, 10%	2,03	1,16	1,63	0,34	1,48	0,80
Рыбий жир, 2,5%	1,77	1,27	1,42	0,40	1,47	0,80
Рыбий жир, 5%	1,79	1,13	1,44	0,40	1,41	0,81
Рыбий жир 2,5% + FPH 10%	1,26	0,93	1,00	0,35	1,07	0,79
Рыбий жир 5% + FPH 10%	1,21	0,92	0,97	0,37	0,98	0,80
FPH 10%+TTA 0,15%	1,27	0,65	1,07	0,28	1,18	0,83
Рыбий жир 2,5% + TTA 0,15%	1,21	0,43	1,00	0,25	1,01	0,83
Рыбий жир 5% + TTA 0,15%	1,26	0,61	1,02	0,23	1,14	0,81
Рыбий жир 2,5% + FPH 10% + TTA 0,15%	0,98	0,46	0,81	0,31	1,00	0,83
Рыбий жир 5% + FPH 10% + TTA 0,15%	1,02	0,72	0,84	0,32	1,00	0,84
TTA 0,15%	1,56	0,39	1,31	0,28	1,17	0,84
Биопротеин высокий 20%	1,23	0,80	0,95	0,41	1,00	0,77
Биопротеин низкий 20%	1,28	0,61	1,04	0,34	1,01	0,81
Контроль (Казеин 20%)	1,90	1,04	1,52	0,38	1,41	0,80

	Масса крысы, г	Печень, г	WAT epi, г	WAT ret, г	Соотношение печень/ bw	Соотношение WAT epi/bw	Соотношение WAT ret/bw
FPH, 10%	460,83	10,04	7,99	9,90	2,17	1,69	2,12
Рыбий жир, 2,5%	427,83	9,44	7,00	8,67	2,21	1,63	2,01
Рыбий жир, 5%	445,17	9,87	7,59	9,79	2,21	1,70	2,20
Рыбий жир 2,5% + FPH 10%	438,83	10,01	6,33	8,80	2,28	1,42	2,02
Рыбий жир 5% + FPH 10%	432,50	10,18	7,31	8,86	2,35	1,67	2,05
FPH 10%+TTA 0,15%	436,17	15,55	6,80	8,25	3,56	1,54	1,88
Рыбий жир 2,5% + TTA 0,15%	405,00	13,25	4,59	7,09	3,26	1,13	1,75
Рыбий жир 5% + TTA 0,15%	442,83	14,80	5,48	7,95	3,34	1,22	1,77
Рыбий жир 2,5% + FPH 10% + TTA 0,15%	438,50	15,66	6,03	8,20	3,57	1,36	1,85
Рыбий жир 5% + FPH 10% + TTA 0,15%	449,67	16,29	7,18	9,19	3,62	1,58	2,02
TTA 0,15%	404,00	13,13	4,25	6,28	3,26	1,05	1,55
Биопротеин высокий 20%	413,33	9,00	5,02	6,99	2,18	1,21	1,69
Биопротеин низкий 20%	420,67	8,97	4,63	6,65	2,13	1,09	1,58
Контроль (Казеин 20%)	417,36	8,91	5,94	8,46	2,13	1,42	2,03