Поиск патентов
ПАТЕНТНЫЙ ПОИСК В РФ

способ химической обработки ксеноперикарда

Классы МПК:A61L27/36 содержащие ингредиенты неопределенного строения или их реакционные продукты
A61F2/24 сердечные клапаны
Автор(ы):, , , , ,
Патентообладатель(и):Государственное учреждение Научный центр сердечно-сосудистой хирургии им. А.Н. Бакулева Российской академии медицинских наук (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2008-04-07
публикация патента:

Изобретение относится к медицине, а именно к сердечно-сосудистой хирургии. Предложен способ химической обработки ксеноперикарда, включающий химическую стабилизацию ксеноперикарда 0,625% раствором глутарового альдегида и последующую обработку 1% раствором додецилсульфата натрия, при этом химически стабилизированный ксеноперикард дополнительно обрабатывают 0,05÷0,25% водным раствором хитозана или металлсодержащего хитозана со степенью деацетилирования 50÷98% и с молекулярной массой 4÷140·103 при рН 3÷5, по окончании обработки ксеноперикард фиксируют в 70% водном растворе этанола, затем модифицированный ксеноперикард выдерживают в 0,10÷0,50% водном растворе N-сульфосукцината хитозана с молекулярной массой 10÷166·103 или 3,6-O-дисульфата хитозана с молекулярной массой 7÷180·103 при рН 4÷8 в течение 20÷60 мин при температуре 20÷30°С с последующей фиксацией в абсолютном этаноле. Изобретение обеспечивает увеличение долговечности и биосовместимости биопротезов. 3 ил., 7 табл.

Рисунки к патенту РФ 2384348

способ химической обработки ксеноперикарда, патент № 2384348 способ химической обработки ксеноперикарда, патент № 2384348 способ химической обработки ксеноперикарда, патент № 2384348

Изобретение относится к медицине, а именно к сердечно-сосудистой хирургии.

Известен способ обработки биологических протезов из ксеноперикарда (Патент РФ, № 2120212, 20.10.1998), включающий обработку биоткани (ксеноперикард теленка) в растворе 0,625% глутарового альдегида и поверхностно-активного вещества (ПАВ) в режиме интенсивного встряхивания при многократной смене рабочего раствора. В качестве ПАВ используют, например, 1% раствор додецилсульфата натрия.

Недостатком данного способа является недолговечность биологических протезов из ксеноперикарда, а именно кальцификация к 6-8 году после имплантации. Кроме того, в результате химической обработки ксеноперикарда глутаровым альдегидом и додецилсульфатом снижаются гидрофильность и, соответственно, биосовместимость ксеноперикарда и возрастает его цитотоксичность за счет содержания в нем остаточных альдегидных групп, провоцирующих отложение кальцификатов.

Техническим результатом предлагаемого способа химической обработки ксеноперикарда является увеличение долговечности и биосовместимости биопротезов, изготовленных из такого ксеноперикарда, за счет повышения их гидрофильности, понижения цитотоксичности и склонности к кальцификации.Технический результат достигается за счет нейтрализации остаточных альдегидных групп ксеноперикарда благодаря образованию альдиминных связей с аминогруппами хитозана и формированию на поверхности ксеноперикарда гидрофильного бислойного покрытия из противоположно заряженных производных хитозана.

Способ осуществляется следующим образом. Ксеноперикард стабилизируют 0,625% раствором глутарового альдегида с последующей обработкой 1% раствором додецилсульфата натрия. Полученный химически стабилизированный ксеноперикард дополнительно обрабатывают 0,05÷0,25% водным раствором хитозана или металлсодержащего хитозана со степенью деацетилирования (СД) 50÷98% и молекулярной массой (ММ) 4÷140·10 3 при рН 3÷5 в течение 20÷60 мин при 20÷30°С. По окончании обработки ксеноперикард фиксируют в 70% водном растворе этанола и затем ксеноперикард с фиксированным первичным хитозановым покрытием выдерживают в 0,10÷0,50% водном растворе N-сульфосукцината хитозана с ММ 10÷166·103 или 3,6-О-дисульфата хитозана с ММ 7÷180·103 при рН 4÷8 в течение 20÷60 мин при 20÷30°С с последующей фиксацией полученного покрытия в абсолютном этаноле. Модифицированный ксеноперикард хранят в стерильном физиологическом растворе при 6-8°С.

В результате обработки ксеноперикарда, стабилизированного глутаровым альдегидом, водным раствором хитозана или металлсодержащего хитозана, происходит связывание последнего с биологической тканью с образованием альдиминных связей за счет взаимодействия аминогрупп полимера с остаточными альдегидными группами стабилизированного глутаровым альдегидом ксеноперикарда. Выбранный для этого интервал рН 3-5 растворов хитозана обеспечивает, во-первых, протонирование необходимого количества аминогрупп хитозана для полного его растворения и, во-вторых, делает возможным их связывание с остаточными альдегидными группами ксеноперикарда. Для формирования прочного гидрофильного покрытия модифицированный хитозаном ксеноперикард дополнительно обрабатывают противоположно заряженными производными хитозана, например N-сульфосукцинатхитозаном (ССХ) и 3,6-О-дисульфатхитозаном (OCX) с образованием полиэлектролитного комплекса (ПЭК). Выбранный при этом интервал рН 4-8 растворов сульфатов хитозана обеспечивает эффективное электростатическое взаимодействие как карбоксильных, так и сульфатных групп используемых производных с аминогруппами хитозана, покрывающего первым слоем ксеноперикард. По окончании обработки ксеноперикард выдерживают в абсолютном этаноле для перевода образовавшегося покрытия в нерастворимую в воде форму, что позволяет длительно хранить модифицированный ксеноперикард в стерильном физиологическом растворе при температуре 6-8°С.

В таблице 1 приведены используемые в предлагаемом способе химической обработки ксеноперикарда производные хитозана с наиболее существенными характеристиками, такими как: степень деацетилирования (СД), молекулярная масса (ММ) и содержание серы.

Таблица 1
Физико-химические характеристики хитозана и его производных
№ п/пНаименование соединенияШифр СД, % ММ, 10-3 г/моль Сера, %
1Хитозан Хит-198 140-
2 -//-Хит-2 76 60-
3 -//-Хит-3 50 4-
4 Cu-хитозанХит-Cu 85 100-
5 Ag-хитозанХит-Ag 98 20-
6 N-сульфосукцинат хитозана ССХ-1- 1666,5
7 -//-ССХ-2 - 108,5
8 -//-ССХ-3 - 1284,0
9 -//-ССХ-4 - 705,5
10 -//-ССХ-5 - 377,0
11 3,6-О-дисульфат хитозана ОСХ-1- 18014,3
12 -//-ОСХ-2 - 2115,0
13 -//-ОСХ-3 - 9715,3
14 -//-ОСХ-4 - 4015,7
15 -//-ОСХ-5 - 714,8

Ниже приведены конкретные примеры осуществления предлагаемого способа.

Пример 1

Ксеноперикард теленка подвергают стабилизации 0,625% раствором глутарового альдегида с последующей обработкой 1% раствором додецилсульфата натрия и изготавливают из него биопротезы в виде пластин.

Ксеноперикард в виде пластин площадью 30 см2 и толщиной 0,4-0,5 мм несколько раз тщательно промывают стерильным физиологическим раствором с 6-кратной сменой раствора из расчета 500 мл на 100 г биоткани, отмытый ксеноперикард помещают в 50 мл (10 г/50 мл) 0,05% водного раствора Хит-1 с ММ 140·103 г/моль и рН 3, интенсивно перемешивают на шейкере в течение 30 мин при 20°С. По окончании обработки ксеноперикард погружают в 70% водный раствор этанола и затем ксеноперикард с фиксированным первичным хитозановым покрытием помещают в 50 мл 0,10% водного раствора ССХ-3 с MM 128·10 3 г/моль и рН 8, интенсивно перемешивают на шейкере в течениие 30 мин при 20°С. По окончании обработки двойной полимерный слой на поверхности ксеноперикарда фиксируют абсолютным этанолом, после чего модифицированный ксеноперикард помещают в стерильный физиологический раствор и хранят при температуре 6-8°С. Достижение технического результата подтверждается биомедицинскими доклиническими исследованиями, результаты которых в сравнении со способом-прототипом приведены в таблицах 2-5.

Пример 2

Ксеноперикард теленка подвергают стабилизации 0,625% раствором глутарового альдегида с последующей обработкой 1% раствором додецилсульфата натрия и изготавливают из него биопротезы в виде пластин.

Ксеноперикард в виде пластин площадью 30 см2 и толщиной 0,4-0,5 мм несколько раз тщательно промывают стерильным физиологическим раствором с 6-кратной сменой раствора из расчета 500 мл на 100 г биоткани, отмытый ксеноперикард помещают в 50 мл (10 г/50 мл) 0,25% водного раствора Хит-Cu с ММ 100·103 г/моль с рН 4 в течение 60 мин при 30°С. По окончании обработки ксеноперикард погружают в 70% водный раствор этанола и затем ксеноперикард с фиксированным первичным хитозановым покрытием помещают в 50 мл 0,25% водного раствора ССХ-5 с ММ 37·103 г/моль и рН 5 в течение 60 мин при 30°С. По окончании обработки двойной полимерный слой на поверхности ксеноперикарда фиксируют абсолютным этанолом, после чего модифицированный ксеноперикард помещают в стерильный физиологический раствор и хранят при температуре 6-8°С. Достижение технического результата подтверждается биомедицинскими доклиническими исследованиями, результаты которых в сравнении со способом-прототипом приведены в таблицах 2-5.

Пример 3

Ксеноперикард теленка подвергают стабилизации 0,625% раствором глутарового альдегида с последующей обработкой 1% раствором додецилсульфата натрия и изготавливают из него биопротезы в виде пластин.

Ксеноперикард в виде пластин площадью 30 см2 и толщиной 0,4-0,5 мм несколько раз тщательно промывают стерильным физиологическим раствором с 6-кратной сменой раствора из расчета 500 мл на 100 г биоткани, отмытый ксеноперикард помещают в 50 мл (10 г/50 мл) 0,25% водного раствора Хит-3 с ММ 4·103 г/моль и рН 5 в течение 20 мин при 25°С. По окончании обработки ксеноперикард погружают в 70% водный раствор этанола и затем ксеноперикард с фиксированным первичным хитозановым покрытием помещают в 50 мл 0,30% водного раствора ОСХ-2 с ММ 21·103 г/моль и рН 7 в течение 60 мин при 25°С. По окончании обработки двойной полимерный слой на поверхности ксеноперикарда фиксируют абсолютным этанолом, после чего модифицированный ксеноперикард помещают в стерильный физиологический раствор и хранят при температуре 6-8°С. Достижение технического результата подтверждается биомедицинскими доклиническими исследованиями, результаты которых приведены в таблицах 2-5, где представлены преимущества предлагаемого способа в сравнении со способом-прототипом.

Таблица 2
Токсикологические исследования. Цитотоксичность на суспензионной кратковременной культуре подвижных клеток
Допустимое значение: количество выживших клеток, % ПрототипПример 1Пример 2 Пример 3
70-12050±5% 106±4% 95±6%101±4%

Таблица 3
Исследование кальциноза in vivo на крысах
Способ химической стабилизации биотканей Количество образцов Содержание Са, мг/г сухой ткани
Прототип53 8,22±0,42
Предлагаемый способПример 1 41 0,51±0,1
Пример 238 0,22±0,03
Пример 3 440,35±0,07

Таблица 4
Микробиологические исследования. Формирование биопленки S. Epidermidis
Способ химической стабилизации биотканей Результат испытаний
Прототип100%
Предлагаемый способ Пример 1способ химической обработки ксеноперикарда, патент № 2384348 1%
Пример 2способ химической обработки ксеноперикарда, патент № 2384348 1%
Пример 3способ химической обработки ксеноперикарда, патент № 2384348 1%

Таблица 5
Упругопрочностные свойства химически стабилизированного ксеноперикарда
Способ химической стабилизации биотканей способ химической обработки ксеноперикарда, патент № 2384348 пч, МПа Предел прочности (по двум направлениям) Е, МПа Модуль упругости (по двум направлениям) способ химической обработки ксеноперикарда, патент № 2384348 max, % Максимальная деформация до нарушения сплошности (по двум направлениям)
Прототип15,08±0,71 71,40±1,34 41,43±1,62
7,32±0,43 37,21±1,10 41,30±1,43
Предлагае-

мый способ
Пример 112,33±0,77 68,51±2,15 36,98±1,57
7,21±0,57 38,08±1,89 38,12±1,19
Пример 213,77±0,18 74,77±0,88 42,01±1,53
6,98±0,57 35,99±1,65 38,08±1,28
Пример 314,43±0,11 69,76±1,84 37,16±1,44
7,45±0,26 37,38±1,47 43,07±1,87

Представленные данные свидетельствуют о том, что модификация ксеноперикарда Хит-1 и затем ССХ-3, как описано в примере 1, либо Хит-Cu и затем ССХ-5, как описано в примере 2, либо Хит-3 и затем ОСХ-2, как описано в примере 3, значительно снижает цитотоксичность биологических протезов, изготовленных из модифицированного ксеноперикарда.

Представленные данные свидетельствуют о том, что модификация ксеноперикарда Хит-1 и затем ССХ-3, как описано в примере 1, либо Хит-Cu и затем ССХ-5, как описано в примере 2, либо Хит-3 и затем OCX-2, как описано в примере 3, позволяет существенно уменьшить кальцификацию биологических протезов, изготовленных из модифицированного ксеноперикарда, на модели подкожной имплантации крысам.

Представленные данные свидетельствуют о том, что модификация ксеноперикарда Хит-1 и затем ССХ-3, как описано в примере 1, либо Хит-Cu и затем ССХ-5, как описано в примере 2, либо Хит-3 и затем ОСХ-2, как описано в примере 3, придает биологическим протезам, изготовленным из модифицированного ксеноперикарда, антимикробные свойства.

Представленные данные свидетельствуют о том, что модификация ксеноперикарда Хит-1 и затем ССХ-3, как описано в примере 1, либо Хит-Cu и затем ССХ-5, как описано в примере 2, либо Хит-3 и затем OCX-2, как описано в примере 3, не снижает механической прочности ксеноперикарда.

Остальные конкретные примеры, раскрывающие сущность предлагаемого изобретения, приведены в таблице 6.

В примерах, описанных в таблице 6, количество покрывного вещества (иммобилизованного ПЭК) на поверхности ксеноперикарда определяли по цветной реакции с фенол-серной кислотой спектрофотометрически при длине волны 492 нм.

Толщину образующейся пленки на ксеноперикарде определяли на основании количества покрывного вещества (m), определяемого по содержанию серы рентгенофлуоресцентным методом, по формуле:

h=m/r·S,

где: h - толщина пленки (см); m - масса пленки (г); r - плотность полимера (г/см3); S - площадь образца (см2 ).

При использовании ОСХ-4 для получения покрытия содержание серы на поверхности ксеноперикарда составляло 0,25%. На основании этих данных расчет толщины (h) пленки, образующейся по примеру 9 (табл.6), представляет:

способ химической обработки ксеноперикарда, патент № 2384348

Краевой угол смачивания, а также скорость сорбции капли воды ксеноперикардом (табл.7), отражающие степень гидрофильности поверхности ксеноперикарда, оценивали с помощью стандартизованной методики регистрации динамики изменения формы адсорбированной капли и фиксации ее геометрии в течение некоторого промежутка времени с помощью цифровой камеры установки Фемтоскан Радиан (ЦПТ, Россия).

Содержание остаточных альдегидных групп после обработки ксеноперикарда хитозаном определяли по цветной реакции с 2,4-динитрофенилгидразином спектрофотометрически при длинах волн 460 нм и 525 нм. Проведенные измерения показали практически полное отсутствие свободных альдегидных групп после обработки ксеноперикарда растворами хитозана.

Таблица 6
Конкретные примеры химической обработки ксеноперикарда хитозаном и его сульфопроизводными
№ п/п Образец (шифр) Первичная обработка Образец (шифр) Вторичная обработка Количество покрывного вещества, мг/г, и/или мкг/см Краевой угол смачивания, градусы Индекс токсичности, %
рНС, % t, минТ, °С рН С, %t, мин Т, °С
1 Хит-13 0,0530 20ССХ-3 80,10 3020 3/3950 106±2
2Хит-Cu 40,25 6030 ССХ-55 0,2560 308/90 1385±6
3 Хит-35 0,2520 25OCX-2 70,30 6025 6/8225 101±4
4Хит-2 40,15 4025 ССХ-27 0,3040 254/63 35100±3
5 Хит-25 0,1540 25OCX-2 70,30 2025 5/7435 99±5
6Хит-1 40,20 6030 OCX-14 0,4050 306/80 3595±4
7 Хит-Ag5 0,2550 25CCX-4 60,20 5025 4/5550 90±5
8Хит-3 50,10 3020 OCX-36 0,2060 2012/150 2099±5
9 Хит-Cu4 0,0520 20OCX-4 50,10 3020 15/13110 83±7
10Хит-Ag 30,25 5025 OCX-57 0,5040 258/107 4092±3

На фиг.1 показана зависимость контактного угла смачивания подложки ксеноперикарда для капли воды от времени с однослойным (образцы 01А и 03А) и двухслойным (образцы 02А и 04А) покрытиями. Обозначения:

1. conta - без покрытия (прототип);

2. 01А - однослойное покрытие Хит-3;

3. 02А - двухслойное покрытие Хит-3 + ССХ-1;

4. 03А - однослойное покрытие Хит-Cu;

5. 04А - двухслойное покрытие Хит-Cu + ССХ-5.

Представленные на фиг.1 данные свидетельствуют об увеличении гидрофильности поверхности ксеноперикарда в результате первичной обработки (01А и 03А), которая дополнительно повышается после вторичной обработки сульфопроизводным хитозана (ССХ-1 и ССХ-5). При этом, как видно из таблицы 7, скорость впитывания капли для образцов, покрытых OCX, с высоким содержанием сульфатных групп заметно выше (примеры 6-8), чем для образцов, покрытых ССХ, в качестве контроля взяты образцы пластин, полученные по способу, указанному в прототипе.

Таблица 7
Начальный угол смачивания и скорость впитывания воды в некоторые образцы модифицированного ксеноперикарда
Образцы из табл.6 Начальный контактный угол, градус Сорбционный поток впитывания в образец через область контакта, г/(см2×с)
Прототип70 3×10-5
Пример 150 2×10-5
Пример 435 4×10-5
Пример 535 4×10-5
Пример 1035 8×10-5
Прототип 80 2×10-5
Пример 750 7×10-5
Пример 640 19×10-5
Пример 820 17×10-5
Пример 910 40×10-5

Для характеристики степени молекулярной дисперсности исследуемых растворов использовали метод динамического светорассеяния. Измерения размеров частиц этих растворов показали, что водные растворы сульфатированных производных хитозана содержат, в основном, частицы двух типов с радиусом R1(0)=3,5±1 нм и R2(0)=123,6±8 нм для ССХ и R1(0)=5,5±1 нм и R2(0)=175,4±7,4 нм для OCX. Между тем, слабокислые водные растворы хитозана содержат небольшое количество надмолекулярных частиц, размеры которых в некоторых случаях превосходят предел исключения применяемых для стерилизации мембран (0,22 мкм). Очевидно, это связано с различной формой агрегированных макромолекул в используемых растворителях. При обработке ксеноперикарда согласно предлагаемому способу первоначально растворами хитозана (см. п/п 1-5, табл.1), фиксацией в 70% водном растворе этанола, а затем растворами ССХ или OCX с последующим осаждением абсолютным этанолом, очевидно, могут образовываться более крупные комплексные надмолекулярные частицы. На фиг.2 и 3 представлены результаты исследования методом электронной сканирующей микроскопии морфологии поверхности химически стабилизированного ксеноперикарда до обработки растворами производных хитозана (фиг.2) и ксеноперикарда, модифицированного хитозаном (п/п 1-5, табл.1) и 3,6-О-дисульфатом хитозана (фиг.3). Таким образом, изобретение в представленной совокупности признаков очевидным образом обеспечивает достижение технического результата, а именно снижает степень кальцификации и цитотоксичности биопротезов, придает им антимикробные свойства, что, безусловно, увеличивает их долговечность и снижает риск повторных операций.

Перспективы клинического применения биологических протезов из ксеноперикарда, обработанного по предлагаемому способу путем его предимплантационной модификации производными хитозана, предполагают создание нового поколения биологических протезов, отличающихся высокой биологической совместимостью, резистентностью к развитию инфекции, кальцификации и, как следствие, большей безопасностью и эффективностью функционирования в организме.

Разрабатываемые новые биологические протезы из ксеноперикарда, отличающиеся высокой биологической совместимостью, смогут найти широкое применение в кардиохирургических клиниках Российской Федерации и за рубежом.

Внедрение предлагаемого способа обработки ксеноперикарда производными хитозана в производство биопротезов будет иметь позитивный социально-экономический эффект при использовании этого вида протезов в клинической практике за счет сокращения числа повторных дорогостоящих кардиохирургических вмешательств по замене биологических протезов клапанов сердца.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ химической обработки ксеноперикарда, включающий химическую стабилизацию ксеноперикарда 0,625%-ным раствором глутарового альдегида и последующую обработку 1%-ным раствором додецилсульфата натрия, отличающийся тем что химически стабилизированный ксеноперикард дополнительно обрабатывают 0,05÷0,25%-ным водным раствором хитозана или металлсодержащего хитозана со степенью деацетилирования 50÷98% и с молекулярной массой 4÷140·103 при рН 3÷5, по окончании обработки ксеноперикард фиксируют в 70%-ном водном растворе этанола, затем модифицированный ксеноперикард выдерживают в 0,10÷0,50%-ном водном растворе N-сульфосукцината хитозана с молекулярной массой 10÷166·103 или 3,6-О-дисульфата хитозана с молекулярной массой 7÷180·10 3 при рН 4÷8 в течение 20÷60 мин при температуре 20÷30°С с последующей фиксацией в абсолютном этаноле.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2384348

patent-2384348.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс A61L27/36 содержащие ингредиенты неопределенного строения или их реакционные продукты

Патенты РФ в классе A61L27/36:
способ изготовления дермального матрикса -  патент 2524619 (27.07.2014)
бесклеточная органическая ткань, подготовленная для восстановления жизнеспособности и способы ее получения -  патент 2523388 (20.07.2014)
биологический перикардиальный протез клапана сердца с хитозановым покрытием и способ его получения -  патент 2519219 (10.06.2014)
способ изготовления биотрансплантатов твердой мозговой оболочки для эндоскопических вмешательств в реконструктивной хирургии -  патент 2506955 (20.02.2014)
способ повышения биосовместимости трансплантатов клапанов сердца и сосудов -  патент 2499611 (27.11.2013)
биоинженерный коллагеновый конструкт, модифицированный кишечный коллагеновый слой, переработанный тканевый матрикс и способ восстановления или замещения поврежденной ткани -  патент 2481114 (10.05.2013)
стерильный аутологичный, аллогенный или ксеногенный имплантат и способ его изготовления -  патент 2478403 (10.04.2013)
способ обработки биологической ткани животного или человеческого происхождения, как, например, свиного или бычьего перикарда или сердечных клапанов трупа человека, и соответствующим образом обработанная биологическая ткань -  патент 2456023 (20.07.2012)
способ приготовления бесклеточной органической ткани для реимплантации живых клеток и бесклеточная органическая ткань, полученная таким способом -  патент 2430745 (10.10.2011)
бесклеточный трансплантат -  патент 2404820 (27.11.2010)

Класс A61F2/24 сердечные клапаны

Патенты РФ в классе A61F2/24:
автоматическое создание ориентиров для замены сердечного клапана -  патент 2526567 (27.08.2014)
протез клапана сердца -  патент 2525731 (20.08.2014)
биологический перикардиальный протез клапана сердца с хитозановым покрытием и способ его получения -  патент 2519219 (10.06.2014)
способ изготовления каркасов искусственных клапанов сердца из технически чистого титана -  патент 2514765 (10.05.2014)
интракардиальное устройство для восстановления функциональной упругости кардиоструктур, инструмент для удерживания интракардиального устройства, а также способ имплантирования интракардиального устройства в сердце -  патент 2514117 (27.04.2014)
гибкий протез атриовентрикулярного клапана сердца -  патент 2508918 (10.03.2014)
способ повышения биосовместимости трансплантатов клапанов сердца и сосудов -  патент 2499611 (27.11.2013)
устройство упрочнения внутристеночного аортального клапана и упрочненный биологический аортальный клапан -  патент 2495647 (20.10.2013)
устройство и способ для уменьшения размера клапана сердца -  патент 2491035 (27.08.2013)
клапаносодержащий протез корня аорты -  патент 2479288 (20.04.2013)

Наверх