ПАТЕНТНЫЙ ПОИСК В РФ
НОВЫЕ ПАТЕНТЫ, ЗАЯВКИ НА ПАТЕНТ
БИБЛИОТЕКА ПАТЕНТОВ НА ИЗОБРЕТЕНИЯ

способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты)

Классы МПК:C07K5/06 дипептиды
C07D233/64 с замещенными углеводородными радикалами, связанными с атомами углерода кольца, например гистидин
C07D209/20 замещенными дополнительно атомами азота, например триптофан
A61K38/05 дипептиды
A61K31/4172  имидазолалканкарбоновые кислоты, например гистидин
A61K31/405  индолалканкарбоновые кислоты; их производные, например триптофан, индометацин
A61P29/00 Анальгетики нецентрального действия, жаропонижающие или противовоспалительные средства, например противоревматические средства; нестероидные противовоспалительные средства (НПВС)
A61P17/00 Лекарственные средства для лечения дерматологических заболеваний
A61P37/08 противоаллергические средства
A61P11/00 Лекарственные средства для лечения дыхательной системы
Автор(ы):, , ,
Патентообладатель(и):Общество с ограниченной ответственностью "ФАРМИНТЕРПРАЙСЕЗ" (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2008-02-13
публикация патента:

Настоящее изобретение относится к новым способам получения (вариантам) N-ацильным производным аминокислот общей формулы (I) или их солей, с использованием ангидридов глутаровой или янтарной кислот. Преимущества заявленных способов заключаются в простоте их проведения, упрощении выделения целевого продукта и высокий выход конечных продуктов. 2 н.п. ф-лы, 27 табл.

способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284

где n равно 2 или 3; и

R представляет

способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284

Настоящее изобретение относится к области биоорганической химии и касается новых способов синтеза N-ацильных производных аминокислот и их фармацевтически приемлемых солей, используемых в качестве противоаллергических, противовоспалительных и гиполипидемических средств.

Предшествующий уровень техники

Как известно, в настоящее время аллергические заболевания и нарушения липидного обмена весьма распространены вследствие плохой экологической обстановки, изменения структуры питания и образа жизни населения. Поэтому проблема создания лекарственных средств для борьбы с этими патологиями, а также с воспалительными процессами, как правило, сопровождающими аллергию, продолжает оставаться актуальной.

В этом отношении особый интерес представляют соединения, включающие остатки веществ природного происхождения, так как для них можно прогнозировать более низкую токсичность и частоту побочных эффектов.

В публикации международной заявки WO 99/01103 описано противоаллергическое и гиполипидемическое действие N-ацильных производных биогенных аминов, например, способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -глутамилгистамина, и его ближайшего аналога глутарилгистамина, которые наиболее близки по структуре и действию к заявляемым соединениям. В статье Кржечковская В.В., Желтухина Г.А., Небольсин В.Е. и др. Изучение антианафилактической активности и механизмов действия способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -L-глутамилгистамина. // Патогенез, 2003, Т.1, № 2, c. 60-64, показано, что способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -глутамилгистамин обладает выраженной антианафилактической активностью при использовании различных видов животных и способов введения. Полученные результаты свидетельствуют о том, что в тучных клетках животных под действием способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -глутамилгистамина достоверно снижается содержание гистамина и его антиген-стимулированная секреция. В тесте по исследованию влияния глутарилгистамина на выраженность антиген-индуцированного бронхоспазма было показано снижение величины бронхоспазма более чем на 50% по сравнению с контролем. Данный эффект проявлялся как при пероральном, так и интратрахеальном способе его введения в низкой дозе - 50 мкг/кг. Глутарилгистамин обладает способностью снижать проявления пассивной кожной анафилаксии от 34 до 42% и, таким образом, превосходит по эффективности супрастин, но уступает кларитину. В WO 99/01103 показано, что при введении животным глутарилгистамина в дозах 50 и 500 мкг/кг было продемонстрировано достоверное снижение интенсивности гиперчувствительности замедленного типа. Кроме того, глутарилгистамин в дозах 50 и 500 мкг/кг обладал также некоторой антихолестеринмимической активностью, снижая содержание общего холестерина по сравнению с животными с атерогенной нагрузкой на 5-7%.

Недостатком глутарилгистамина является его сравнительно высокая стоимость и малая доступность исходного сырья для его получения - гистамина. Кроме того, указанное вещество недостаточно эффективно в вышеперечисленных тестах.

С целью расширения арсенала технических средств и создания более эффективного и доступного противоаллергического, противовоспалительного и гиполипидемического средства, авторами изобретения были выявлены некоторые специфические N-ацильные производные аминокислот общей формулы (I), раскрытой в публикации международной заявки WO 99/01103, но конкретно в ней не описанные, не полученные и не охарактеризованные.

Так, под общую формулу (I) вышеуказанной международной заявки подпадают соединения настоящего изобретения Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -сукцинил-L-триптофан (II), Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -глутарил-L-триптофан (III), Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -глутарил-L-гистидин (IV) и Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -сукцинил-L-гистидин (V). Однако в указанной публикации не приведены ни конкретные структурные формулы данных соединений, ни какие-либо физико-химические характеристики, а также не описаны способы их получения. В публикации международной заявки WO 03/072124 приведены формулы Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -глутарил-L-триптофана (II), Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -глутарил-L-гистидина (IV) и Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -сукцинил-L-гистидина (V), но не описан способ их синтеза и не приведены их физико-химические константы.

Одно из соединений глутарилгистидин упоминается только в виде метилового эфира по С-концу His [Glt-His(OMe)] в патенте США 3963691, в качестве промежуточного соединения в синтезе пептида Glt-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-poly-Lys.

Соединение сукцинилгистидин упоминается в публикации международной заявки WO 93/04690. В этой публикации указано, что добавление свободного имидазола или сукцинилгистидина ускоряет взаимодействие карнозина с дигидроксиацетоном. Методики синтеза сукцинилгистидина и его физико-химические константы не приведены.

Структурная формула сукцинилтриптофана упоминается в заявке США 2005079515. В указанной публикации ни методики синтеза сукцинилтриптофана, ни его физико-химические константы не приведены.

Получение Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -глутарил-L-гистамина описано в публикации международной заявки WO 99/01103 и представляет собой N-ацилирование биогенного амина глутаровым ангидридом в среде безводного N,N-диметилформамида. Кроме того, в публикации Гершкович А.А., Киберев В.К. // Химический синтез пептидов. / Киев: Наукова думка, 1992, 360, описан способ ацилирования аминокислот в водно-органической, сильно щелочной среде.

В Sorm F., Pravda Z., Proteins and amino acids. X. Synthesis of two peptide analogs. // Chemicke Listy pro Vedu a Prumysl., 1951, V.45, p.423-425, описан способ синтеза сукцинилтирозина этилового эфира в смеси воды и этилацетата при соотношении (1:1) исходя из хлоргидрата этилового эфира тирозина и глутарового ангидрида в присутствии NaHCO3 для поддержания слабощелочного pH.

Однако ацилирование ангидридами дикарбоновых кислот свободного гистидина в литературе не описано.

Целью настоящего изобретения являются новые способы синтеза эффективных N-ацильных производных аминокислот, обладающих противоаллергическим, противовоспалительным и гиполипидемическим действием в низких дозах и не проявляющих побочных эффектов.

Авторами изобретения разработан простой и препаративный способ синтеза соединений общей формулы (I), заключающийся в том, что ангидрид глутаровой или янтарной кислоты в виде твердого вещества прибавляют к водному раствору аминокислоты в отсутствие неорганического и органического основания с получением целевого продукта с достаточно высоким выходом 55-60%.

Авторами изобретения также разработан еще один способ синтеза соединений общей формулы (I), в том числе N-ацильных производных гистидина, включающий проведение реакции в двухфазной системе, состоящей из водного раствора гистидина и раствора ангидрида в подходящем органическом растворителе при использовании избытка ацилирующего агента.

Краткое описание изобретения

Настоящее изобретение также относится к способу получения N-ацильных производных аминокислот общей формулы I

способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284

где n равно 2 или 3; и

R представляет

способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284

и их солей, включающему прибавление ангидрида глутаровой или янтарной кислоты в виде твердого вещества к водному раствору аминокислоты общей формулы:

способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284

или ее соли, где

R представляет

способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284

и необязательно, превращение целевого продукта в его соль.

Настоящее изобретение также относится к способу получения N-ацильных производных аминокислот общей формулы I

способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284

где n равно 2 или 3; и

R представляет

способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284

и их солей, включающему проведение реакции в двухфазной системе с ангидридом глутаровой или янтарной кислоты в несмешивающемся с водой органическом растворителе с водным раствором аминокислоты общей формулы:

способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284

или ее соли, где

R представляет

способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284

и, необязательно, превращение целевого продукта в его соль.

Детальное описание изобретения

Предпочтительные соединения общей формулы I представлены в таблице 1.

Таблица 1
Соединение № соединения Rn
Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -сукцинил-L-триптофан IIспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 (Ind)2
Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -глутарил-L-триптофан IIIInd 3
N способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -глутарил-L-гистидин IVспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 (Im)3
Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -сукцинил-L-гистидин VIm 2

Синтез соединений общей формулы I может быть осуществлен двумя способами. Первый способ заключается в постепенном добавлении к водному раствору аминокислоты общей формулы

способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284

или ее соли, где

R представляет

способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284

глутарового или янтарного ангидрида в виде твердого вещества, с последующим выделением целевого продукта ионообменной хроматографией, предпочтительно пропусканием реакционной смеси через колонку с катионитом и последующей кристаллизацией из водного раствора. Полученные кристаллы целевого продукта промывают подходящим растворителем, предпочтительно метанолом. Главное преимущество заявляемого способа состоит в отсутствии щелочи в водном растворе аминокислоты, что препятствует инактивации ангидрида дикарбоновой кислоты в результате гидролиза. Кроме того, остаток имидазола в составе молекулы аминокислоты может осуществлять кислотно-основный аутокатализ реакции ацилирования аминогруппы аминокислоты. Достаточно высокие выходы (55-60%) при использовании заявляемого способа достигаются, в частности, благодаря постепенному прибавлению ангидрида дикарбоновой кислоты, взятого в избытке, и интенсивному перемешиванию реакционной массы.

Соединения общей формулы I также могут быть получены альтернативным способом в двухфазной системе, включающим добавление ангидрида глутаровой или янтарной кислоты в несмешивающемся с водой органическом растворителе к водному раствору аминокислоты общей формулы:

способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284

или ее соли, где

R представляет

способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284

Данный способ позволяет использовать избыток ацилирующего агента, достичь полного ацилирования способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -аминогруппы аминокислоты и выхода целевого продукта около 70%. Для поддержания необходимого pH вместо неорганической щелочи используют органическое основание - пиридин, который не гидролизует ангидрид, и, кроме того, как известно, является катализатором ацилирования. Использование пиридина позволяет избежать загрязнения конечного продукта неорганическими солями, которые вместе с продуктом реакции остаются в водном слое. Использованные подходы позволяют упростить отделение целевого продукта от непрореагировавших ангидрида и соответствующей аминокислоты и выделять целевой продукт простой кристаллизацией.

Предпочтительными несмешивающимися с водой органическими растворителями являются бутанол, этилацетат, хлороформ.

Предпочтительными растворителями, используемыми для кристаллизации целевого продукта, являются водноспиртовые смеси, в частности вода-этанол.

Соединения общей формулы I могут быть также получены в виде фармацевтически приемлемых солей с гидроксидом натрия, гидроксидом калия, карбонатом магния, гидроксидом лития, карбонатом кальция рутинными способами, широко описанными в литературе.

Соединения общей формулы I обладают противоаллергической, противовоспалительной и гиполипидемической активностью и могут быть использованы для лечения аллергических, анафилактических, в том числе сопровождающихся воспалением заболеваний, а также нарушениями липидного обмена.

В частности, соединения настоящего изобретения могут быть использованы для лечения следующих аллергических заболеваний: бронхиальной астмы, аллергического ринита, поллинозов, сезонного ринита, круглогодичного ринита, атопического дерматита, псориаза, крапивницы, аллергических (в том числе анафилактических) реакций на укусы насекомых и лекарственные препараты, холодовой аллергии, аллергического конъюктивита, хронических обструктивных заболеваний легких, а именно хронического обструктивного бронхита, эмфиземы, облитерирующего бронхита, муковисцидоза, а также заболеваний, связанных с нарушениями липидного обмена, таких как атеросклероз, ожирение, ишемическая болезнь сердца и головного мозга, инфаркт миокарда, инсульт.

Соединения настоящего изобретения вводятся в эффективном количестве, которое обеспечивает желаемый терапевтический результат.

Для лечения аллергических заболеваний, включающих бронхиальную астму, аллергический ринит, поллинозы, сезонный ринит, круглогодичный ринит, атопический дерматит, псориаз, крапивницу, аллергические (в том числе анафилактические) реакции на укусы насекомых и лекарственные препараты, холодовую аллергию, аллергический конъюктивит, хронические обструктивные заболевания легких, а именно хронический обструктивный бронхит, эмфизему, облитерирующий бронхит, муковисцидоз, а также заболеваний, связанных с нарушениями липидного обмена, таких как атеросклероз, ожирение, ишемическая болезнь сердца и головного мозга, инфаркт миокарда, инсульта соединения общей формулы I могут быть введены перорально, местно, парентерально, интраназально, ингаляционно и ректально в виде стандартных лекарственных форм, содержащих нетоксичные фармацевтически приемлемые носители. Используемый в настоящем описании термин «парентеральное введение» означает подкожные, внутривенные, внутримышечные или внутригрудные инъекции или вливания.

Соединения настоящего изобретения могут быть введены пациенту в дозах, составляющих от 0,01 до 10 мг/кг веса тела в день, предпочтительно в дозах от 0,05 до 5 мг/кг один или более раз в день.

При этом следует отметить, что конкретная доза для каждого конкретного пациента будет зависеть от многих факторов, включая активность данного используемого соединения, возраст, вес тела, пол, общее состояние здоровья и режим питания пациента, время и способ введения лекарственного средства, скорость его выведения из организма, конкретно используемую комбинацию лекарственных средств, а также тяжесть заболевания у данного индивида, подвергаемого лечению.

Детальное описание соединений настоящего изобретения, их получения и исследования фармакологической активности представлено в нижеследующих примерах, предназначенных для иллюстрации предпочтительных вариантов изобретения и не ограничивающими его объем.

Примеры синтеза N-ацильных производных аминокислот общей формулы (I)

Индивидуальность полученных соединений проверялась методом ТСХ на пластинках "Kieselgel 60 F254" "Merck" (Германия) в системах: метанол (1), хлороформ-метанол-аммиак (4:3:1) (2).

Хроматограммы проявляли хлортолидиновым реактивом, нингидрином, йодом по свечению в УФ-свете.

Углы оптического вращения измеряли на поляриметре "Perkin Elmer 341" (Швеция).

1Н-ЯМР регистрировали на приборе "AMX-400 Bruker" (Германия).

Температуру плавления определяли на приборе "Boetius" (Германия).

Аналитическую ВЭЖХ поводили на приборе "System Gold" ("Beckman", США): скорость элюции 0,25 мл/мин, детекция при 214 нм в условиях: колонка Ultrasphere ODS "Beckman", 2×250 мм, 5 мкм, элюция 0,1%-ной TFA, скорость элюирования 0,25 мл/мин (1); скорость элюции 1 мл/мин, детекция при 220 нм, колонка Luna-5 "Phenomenex", C18, 250×4,6 мм, элюция 25% ацетонитрила в 0,05 М фосфатном буфере (pH 3,0) (2).

Пример 1

Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -Глутарил-L-гистидин (IV)

Методика А

К раствору 103,4 г (0,67 моль) гистидина в 400 мл воды добавляют 83,7 г (0,73 моль) глутарового ангидрида. Суспензию перемешивают 1 час, образующийся раствор упаривают до объема 150 мл, оставляют в холодильнике на 16 часов. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают 150 мл метанола и сушат. Очистку проводят ионообменной хроматографией на смоле Пьюролайт в Н+ форме, элюируя водой. Фракции, содержащие целевой продукт, объединяют, упаривают до начала выпадения осадка и оставляют на 16 часов при +4°C. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают 200 мл метанола и сушат до постоянного веса. Выход 98,8 г (55%). Rf 0,55 (1), 0,37 (2). Тпл = 222-224°С. [способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 ]Dспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 20+15, 95° (C 0,53, вода). [М+Н]+ 270,1. 1H-ЯМР спектр (D2O), способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 , м.д.: 1,60-1,80 (м, 2Н, способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -CH2-Glt), 2,10-2,25 (м, 4Н, способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 ,способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -CH2-Glt), 2,90-3,25 (м, 2Н, способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -CH2-His), 4,40-4,50 (м, 1Н, способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -CH-His), 7,15 (с, 1Н, CH-4-Im), 8,50 (с, 1Н, CH-2-Im). Найдено, %: C 49,18; H 5,91; N 15,42. C11H15 N3O5. Вычислено, %: C 49,07; H 5,62; N 15,61.

Методика Б

К суспензии 0,3 г (1,93 ммоль) гистидина в 5 мл воды при интенсивном перемешивании добавляют 0,44 г (3,86 ммоль) глутарового ангидрида, растворенного в 2,5 мл этилацетата. Перемешивают 2 часа, пиридином доводят рН до 7 и перемешивают еще 1 час. Этилацетатный и водный слой разделяют. Водный слой дважды промывают эфиром, эфирный слой отбрасывают. Воду удаляют в вакууме, остаток растворяют в минимальном количестве воды и добавляют этанол до начала выпадения белого осадка, оставляют при +4°C на 20 ч. Осадок отделяют фильтрованием, сушат в вакууме. Выход 0,36 г (70%). Rf 0,56 (1), 0,35 (2). Тпл = 219-221°С. [способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 ]Dспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 20 = +15,71° (C 0,56, вода). [М+Н] + 270,1. 1H-ЯМР спектр (D2O), способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 , м.д.: 1,40-1,55 (м, 2Н, способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -CH2-Glt), 1,90-2,0 (м, 4H, способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 , способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -CH2-Glt), 2,7-3,0 (м, 2H, способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -CH2-His), 4,20-4,30 (м, 1H, способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -CH-His), 6,95 (c, 1H, 4-CH-Im), 8,30 (c, 1H, 2-CH-Im). ВЭЖХ в условиях: (1) - индивидуальный пик, время удерживания 14,55 мин. Найдено, %: C 49,07; H 5,65; N 15,65. C11 H15N3O5. Вычислено, %: C 49,07; H 5,62; N 15,61.

Пример 2

Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -Сукцинил-L-гистидин (V)

Синтез проводили в соответствии с методикой А, приведенной для соединения IV.

Выход 0,08 г (57%).

Rf 0,44 (1), 0,25 (2).

Тпл = 179-181°С.

[способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 ]Dспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 20 = +30,71° (C 0,56, вода).

[М]+ 255,2.

1H-ЯМР спектр (D2O), способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 , м.д.: 2,15-2,30 (м, 4Н, (CH2)2-Suc), 2,75-2,95 (м, 2H, способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -CH2-His), 4,25 (уш.с, 1H, способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -CH-His), 6,95 (c, 1H, 4-CH-Jm), 8,25 (c, 1H, 2-CH-Jm).

Найдено %: C 47,09; H 5,04; N 16,40. C10 H13N3O5. Вычислено %: C 47,06; H 5,13; N 16,46.

Синтез проводили в соответствии с методикой Б, приведенной для соединения IV.

Выход 0,101 г (67%).

Rf 0,45 (1), 0,27 (2).

Тпл = 178-180°С.

[способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 ]Dспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 20 = +30,8° (C 0,57, вода).

ВЭЖХ в условиях (1) - индивидуальный пик, время удерживания 7,54 мин.

Найдено %: C 47,15; H 5,2; N 16,50. C 10H13N3O5. Вычислено %: C 47,06; H 5,13; N 16,46.

Пример 3

Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -Глутарилтриптофан (III)

К суспензии 1,0 г (4,9 ммоль) триптофана в 7 мл воды прибавляют по каплям раствор 1 N NaOH (4,9 ммоль). К полученному раствору добавляют раствор 0,56 г (4,9 мммоль) глутарового ангидрида в 3 мл этилацетата. Реакционную смесь перемешивают в течение 3 часов при комнатной температуре в атмосфере аргона в темноте, оставляют на 16 часов при +4°. Растворитель из реакционной смеси удаляют в вакууме. Полученный маслообразный остаток растворяют в 30 мл воды при перемешивании, охлаждают до 0°, добавляют раствор 1 N HCl до pH 4. Продукт экстрагируют этилацетатом (3×25 мл). Объединенный этилацетатный экстракт охлаждают до 0°, промывают водой (4×25 мл) до pH 7, раствором 5% HCl (5 мл), водой (4×25 мл) до pH 7, сушат над безводным Na2 SO4 в течение 1 часа. Осадок Na2SO 4 отфильтровывают, промывают этилацетатом, растворитель удаляют в вакууме. Получают сероватый твердый остаток, который сушат в вакууме.

Выход 1,0 г (70%).

Rf 0,54 (1).

Тпл = 150-152°С.

[способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 ]Dспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 20 = +8,20° (C 0,5, метанол).

1H-ЯМР спектр (CD3OD), способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 , м.д.: 1,75-1,84 (м, 2Н, способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -CH2-Glt), 2,15-2,30 (м, 4Н, способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 ,способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -CH2-Glt), 3,30-3,40 (м, 2Н, способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -CH2-Trp), 3,80-3,90 (м, 1Н, способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -CH-Trp), 6,97 (т, J=7 Гц, 1H, CH-6-Ind), 7,06 (т, J=7 Гц, 1Н, CH-7-Ind), 7,15 (д, J=7 Гц, 1H, CH-2-Ind), 7,33 (д, J=7 Гц, 1H, CH-5-Ind), 7,55 (д, J=7 Гц, 1Н, CH-8-Ind).

ВЭЖХ в условиях: (2) - индивидуальный пик, время удерживания 6,77 мин.

Найдено, %: С 60,07; H 5,65; N 8,75. C16H18N2O5 Вычислено, %: С 60,37; H 5,7; N 8,8.

Пример 4

Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -Сукцинил-L-триптофан (II)

Синтез проводили в соответствии с методикой, приведенной для соединения III.

Выход 100,5 мг (67%).

Rf 0,63 (1).

[способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 ]Dспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 20 = +21,05° (C 0,6, вода).

1H-ЯМР спектр (DMSO-d6), способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 , м.д.: 2,33-2,41 (м, 4Н, способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 ,способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -CH2-Suc), 2,93-3,01 (м, 1Н, способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -CH2-Trp), 3,10-3,16 (м, 1Н, способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -CH2-Trp), 4,39-4,47 (м, 1Н, способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -CH-Trp), 6,93-7,06 (м, 2H, CH-6,7-Ind), 7,11 (д, J 2,2 Гц, 1H, CH-2-Ind), 7,30-7,32 (м, 1H, CH-5-Ind), 7,44-7,47 (м, 1Н, CH-8-Ind). [М]+ 304,3.

ВЭЖХ в условиях: (2) - индивидуальный пик, время удерживания 6,35 мин.

Найдено, %: С 59,07; H 5,65; N 9,35. C15 H16N2O5 Вычислено, %: С 59,21; H 5,3; N 9,21.

Пример 5

Мононатриевая соль Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -глутарил-L-гистидина (IV)

К раствору 1,0 г (3,7 ммоль) Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -глутарил-L-гистидина в 15 мл воды при перемешивании и охлаждении до +5°С прибавляют раствор 0,15 г (3,7 ммоль) NaOH в 20 мл воды. Раствор перемешивают 30 мин, растворитель удаляют в вакууме. К маслообразному остатку порциями добавляют бензол, растворитель удаляют в вакууме. Твердый остаток сушат над гранулированной щелочью.

Выход 1,07 г (99,7%).

Тпл = 208-210°С.

[способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 ]Dспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 20 = +16,27° (C 0,58, вода).

Найдено, %: C 45,25; H 5,51; N 14,52. C11H15 N3O5Na. Вычислено, %: C 45,21; H 5,17; N 14,38.

Пример 6

Мононатриевая соль Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -сукцинил-L-гистидина (V)

Синтез проводили в соответствии с методикой, приведенной для мононатриевой соли Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -глутарил-L-гистидина (IV) (пример 5).

Выход 1,06 г (97,0%).

[способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 ]Dспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 20 = +40,21° (C 0,48, вода).

Найдено, %: C 43,25; H 4,51; N 15,52. C10H13 N3O5Na. Вычислено, %: C 43,17; H 4,71; N 15,10.

Пример 7

Мононатриевая соль Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -сукцинил-L-триптофана (II)

Синтез проводили в соответствии с методикой, приведенной для мононатриевой соли Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -глутарил-L-гистидина (IV) (пример 5).

Выход 0,21 г (98,0%).

Тпл = 147-150°С.

[способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 ]Dспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 20 = +22,02° (C 0,39, вода).

Найдено, %: C 55,25; H 4,51; N 8,32. C15H16 N2O5Na. Вычислено, %: C 55,05; H 4,93; N 8,56.

ВЭЖХ в условиях: (2) - индивидуальный пик, время удерживания 6,56 мин.

Пример 8

Мононатриевая соль Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -глутарил-L-триптофана (III)

Синтез проводили в соответствии с методикой, приведенной для мононатриевой соли Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -глутарил-L-гистидина (IV) (пример 5).

Выход 0,11 г (99,0%).

Тпл = 128-130°С.

[способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 ]Dспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 20 = +22,06° (C 0,34, метанол).

Найдено, %: C 56,15; H 5,21; N 8,22. C16H18 N2O5Na. Вычислено, %: C 56,30; H 5,32; N 8,21.

ВЭЖХ в условиях: (2) - индивидуальный пик, время удерживания 6,96 мин.

Пример 9

Динатриевая соль Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -глутарил-L-гистидина (IV)

К раствору 1,0 г (3,7 ммоль) Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -глутарил-L-гистидина в 15 мл воды при перемешивании и охлаждении до +5°С прибавляют раствор 0,3 г (7,44 ммоль) NaOH в 15 мл воды. Раствор перемешивают 30 мин, растворитель удаляют в вакууме. К маслообразному остатку порциями добавляют бензол, растворитель удаляют в вакууме. Твердый остаток сушат над гранулированной щелочью.

Выход 1,15 г (99,0%).

[способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 ]Dспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 20 = +11,92° (C 0,57, вода).

Найдено, %: C 41,25; H 4,51; N 13,52. C11H15 N3O5Na2. Вычислено, %: C 41,91; H 4,80; N 13,3.

Пример 10

Динатриевая соль Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -сукцинил-L-гистидина (V)

Синтез проводили в соответствии с методикой, приведенной для динатриевой соли Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -глутарил-L-гистидина (IV) (пример 9).

Выход 1,16 г (99,0%).

Тпл = 124-128°С.

[способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 ]Dспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 20 = +20,06° (C 0,67, вода).

Найдено, %: C 39,55; H 4,31; N 13,52. C10H13 N3O5Na2. Вычислено, %: C 39,88; H 4,35; N 13,95.

Пример 11

Динатриевая соль Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -сукцинил-L-триптофана (II)

Синтез проводили в соответствии с методикой, приведенной для динатриевой соли Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -глутарил-L-гистидина (IV) (пример 9).

Выход 0,56 г (97,7%).

Найдено, %: C 51,35; H 4,31; N 8,22. C15H16N2O 5Na2. Вычислено, %: C 51,43; H 4,60; N 8,0.

Пример 12

Динатриевая соль Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -глутарил-L-триптофана (III)

Синтез проводили в соответствии с методикой, приведенной для динатриевой соли Nспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -глутарил-L-гистидина (IV) (пример 9).

Выход 0,56 г (98,5%).

Найдено, %: C 52,55; H 4,71; N 7,52. C16H18N2O 5Na2. Вычислено, %: C 52,75; H 4,98; N 7,69.

Тесты на биологическую активность

Пример 13

Влияние соединений общей формулы I на аллергические реакции немедленного типа (тест индуцированной овальбумином (ОА) дегрануляции базофилов крови иммунизированной морской свинки in vitro)

Выделение лейкоцитов из крови морской свинки осуществляли по методу Фримеля (Иммунологические методы./Под ред. Г.Фримеля/ - М.: Медицина, 1987, стр.222 в нашей модификации).

Для постановки теста использовали морских свинок обоего пола массой 600-800 г. Животных иммунизировали однократно смесью овальбумина 10 мкг и 100 мг гидроокиси алюминия на животное по Andersson (Anderson P., Antigen-induced bronchial anaphulaxis in actively sensitized geinea-pigs. // Allergy, 1980, Vol. 35, p. 63-71).

Под эфирным наркозом из сердца морской свинки отбирали 15 мл крови. Для выделения базофилов в составе лейкоцитарной взвеси использовали двойное осаждение клеток - посредством ЭДТА и с помощью цитратсодержащей осаждающей жидкости.

Кровь смешивали с 5% раствором ЭДТА·Na2 2H 2O ("Sigma") в соотношении 9:1 и через 30 мин мягко центрифугировали (12 мин при 80 g). Надосадочную жидкость собирали и центрифугировали 15 мин при 500 g.

К оставшимся клеткам крови добавляли цитратсодержащую осаждающую жидкость (3) в пропорции 3:10 (термостатируется при 37°С в течение 30 мин). Обогащенную лейкоцитами надосадочную фракцию центрифугировали 7 мин при 100 g. К осадку лейкоцитов добавляли 0,85% раствор NaCl, и концентрацию клеток доводили до 30×10 3/мкл.

Постановка теста дегрануляции базофилов in vitro [Справочник по клиническим лабораторным методам исследования./Под ред. Е.А.Кост/ - М.: Медицина, 1975, стр. 130].

Для постановки теста в центрифужную пробирку (используется по 3 пробирки на каждую пробу) помещали 300 мкл клеточной взвеси, затем добавляли 300 мкл солевого раствора исследуемого соединения (или солевого раствора в контроле спонтанной и максимальной дегрануляции) и преинкубировали при 37°С в течение 15 мин, затем добавляли по 300 мкл 1% солевого раствора ОА в каждую пробирку (в контроль спонтанной дегрануляции добавляли солевой раствор в таком же количестве) и еще раз преинкубировали при 37°С в течение 10 мин. Рабочая концентрация лейкоцитов составляет при этом 104/мкл. Из каждой пробирки отбирали пробы (100 мкл) в отдельные пробирки для оценки полной дегрануляции базофилов, а к оставшимся клеткам добавляли охлажденный солевой раствор (по 5 мл в каждую пробирку) для остановки реакции дегрануляции, затем центрифугировали 7 мин при 100 g, а из осадка готовили препараты для микроскопирования. Фиксацию и окраску препаратов проводили по методу Seder et al. (Seder R.A. et al., Mouse splenic and bone marrow cell populations that express high - affinity Fcспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 receptors and produce interleukin-4 are highly enriched in basophils. // Proc. Natl. Acad. USA, 1991, V.88, p.2835-2839).

Для выявления специфической зернистости базофилов использовали краситель 0,5% альциановый синий (рН 1,0), ядра докрашивали сафранином (0,1% раствор в 1% уксусной кислоте). Препараты использовали для оценки суммарного торможения дегрануляции

Торможение суммарной дегрануляции (ТГ) (%) рассчитывали по формуле

способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 , где

mах - % дегранулированных базофилов при максимальной дегрануляции (ОА),

спонт. - % дегранулированных базофилов при спонтанной дегрануляции (контроль),

экспер. - % дегранулированных базофилов после воздействия исследуемого соединения.

Оценка полной дегрануляции базофилов

Отобранные после постановки теста дегрануляции базофилов пробы (по 100 мкл) помещали в пробирки с красителем (0,5% альциановый синий, рН 1,0) в соотношении 1:1. Окрашивание производили при комнатной температуре не менее 50 мин. Подсчет количества окрашенных базофилов проводили с использованием камеры Фукса-Розенталя. Торможение полной дегрануляции (ТПД) базофилов рассчитывали по формуле:

ТПД(%) = 1-[(М ср (к)- М ср (эксп.)]/[М ср (к) - М ср (ОА)] × 100, где

М ср (к) - среднее (по 3-м пробам) количество базофилов в тесте спонтанной дегрануляции;

М ср (ОА) - среднее (по 3-м пробам) количество базофилов в тесте максимальной антиген-индуцированной дегрануляции;

М ср (эксп) - среднее (по 3-м пробам) количество базофилов в тесте дегрануляции после инкубации с исследуемым соединением.

Таблица 2

Торможение ОА-индуцированной дегрануляции базофилов крови иммунизированных морских свинок in vitro под воздействием соединений общей формулы I
№ опыта п/п ГруппыТорможение полной дегрануляции (ТПД), (%) Количество полностью дегранулированных базофилов, (%)
1. Контроль 1 (спонтанная дегрануляция) 1000
2. Овальбумин 1%

(max дегрануляция)
035,2±0,8
3. Соединение IV

(10-3 М)
99,2±11,2 2,6±2,6*
4.Соединение IV

(10-4 М)
99,5±12,0 2,9±1,6*
5.Соединение IV

(10-5 М)
113,5±2,7 0
6. Соединение IV

(10-6 М)
90,0±1,83,9±0,6
7. Соединение IV

(10-7 М)
76,7±1,59,1±0,8
8. Глутарилгистамин

(10-3 М)
9,3±5,531,6±6,33
9. Глутарилгистамин

(10-4 М)
24,1±1,125,3±3,38
10. Глутарилгистамин

(10-5 М)
029,8±6,73
11. Контроль 2100 0
12.Овальбумин 1%

(max дегрануляция)
038,9±8,43
13. Соединение V

(10-3 М)
10,6±7,635,3±7,29
14. Соединение V

(10-4 М)
18,9±11,8 31,2±6,8
15.Соединение V

(10-5 М)
44,0±11,27 24,6±10,38
16.Гидрокортизон

(10-3 М)
71,0±1,610,0±0,7
17. Гидрокортизон

(10-4 М)
48,0±0,817,3±0,9
18. Гидрокортизон

(10-5 М)
40,0±0,620,0±1,3
(* - Р < 0,001)

Данные таблицы 2 показывают, что по сравнению с глутарилгистамином соединение (IV) оказывает выраженное антианафилактическое действие, проявляющееся практически 100% торможением дегрануляции в тесте полной ОА-индуцированной дегрануляции базофилов крови активно иммунизированных морских свинок (реакция анафилаксии in vitro в безкальциевой среде). Значительный антианафилактический эффект соединения IV проявляется и в уменьшении количества дегранулированных клеток, особенно выраженном в концентрации 10-5 М (отсутствие дегранулированных клеток).

Пример 14

Изучение влияния соединений общей формулы I на системную анафилаксию in vivo

Использовали модель бронхоспазма у ненаркотизированных активно сенсибилизированных морских свинок с аэрозольным воздействием овальбумина в качестве антигена (Ковалева В.Л. "Методические указания по изучению бронхолитических, муколитических и противовоспалительных средств".//Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, Москва, 2000, с. 242-250).

Морских свинок сенсибилизировали овальбумином по методу Andersson (Anderson P., Antigen-induced bronchial anaphulaxis in actively sensitized geinea-pigs.//Allergy, 1980, Vol.35, p. 63-71) и через 1-2 месяца после сенсибилизации индуцировали бронхоспазм аэрозольным введением разрешающей дозы овальбумина (3 мг/кг в 1 мл физраствора).

В опытных группах морским свинкам в течение трех дней внутрижелудочно с помощью зонда вводили исследуемые соединения в дозах 10 мкг/кг, 50 мкг/кг и 150 мкг/кг. В другой серии экспериментов исследуемые соединения в дозе 50 мкг/кг (в 1 мл физраствора) вводили ингаляционно (с помощью небулайзера) также в течение трех дней 1 раз в сутки. Контрольной группе вводили физраствор. Через 1 час после последнего введения веществ ингалировали с помощью небулайзера овальбумин и оценивали длительность (в секундах) и интенсивность бронхоспастической реакции животных.

Таблица 3

Торможение системной анафилактической реакции морских свинок при ингаляционном введении соединения IV в дозе 50 мкг/кг
ГруппыДлительность острой фазы, сек Длительность подострой фазы, сек
Контроль 1

(физраствор)
180±6650±34
Соединение IV

50 мкг/кг
0400±25

Таблица 4

Торможение системной анафилактической реакции морских свинок при внутрижелудочном введении соединения IV в дозах 10 и 150 мкг/кг (М±m)
ГруппыДлительность острой фазы, сек Общее время реакции, сек
Контроль 2

(физраствор)
296,7±104,6 628,3±80,6
Соединение IV

10 мкг/кг
68,0±54,7* 428,0±75,0
Соединение IV

150 мкг/кг
72,0±42,1* 337,0±78,5*
* - Р < 0,001

Результаты экспериментов, представленные в таблицах 3 и 4, показывают, что соединение IV при внутрижелудочном введении в дозах 10 и 150 мкг/кг и ингаляционном введении в дозе 50 мкг/кг проявило антианафилактическую активность. Ингаляционное введение вещества в дозе 50 мкг/кг блокировало развитие острой фазы бронхоконстрикторной реакции, которая, вызывая удушье, является причиной гибели животных. При внутрижелудочном введении соединения IV в дозах 10 мкг/кг и 150 мкг/кг был, выявлен значительный протективный эффект в отношении антиген-индуцированного бронхоспазма.

Таким образом, соединение IV проявляет значительный протективный эффект в отношении системной анафилактической реакции in vivo.

Пример 15

Противоаллергическое действие соединений общей формулы I на модели аллергического ринита у морских свинок

Использована модель аллергического ринита у морских свинок.

Морских свинок иммунизировали по определенной схеме в течение 1,5-2-х месяцев (Hutson P.A., Church M.K. et al., 1988): вначале животных иммунизировали внутрибрюшинным введением овальбумина в дозе 10 мг/кг с 7-дневным интервалом (дважды), затем свинкам ингалировали с помощью небулайзерной техники (Pari) раствор овальбумина в возрастающей концентрации, начиная с 0,1% до 1% с интервалом в 4 дня между ингаляциями. Последнюю дозу овальбумина вводили в назальные ходы с помощью микропипетки. Через 24 часа после последнего введения овальбумина производили забор назального смыва (через систему специальных трубочек) и изменения в слизистой носа оценивали с помощью комплекса методов: гистологических и цитологических. Исследуемые соединения (0,1% раствор) вводили ежедневно в виде ингаляций с помощью небулайзерной техники в течение 6 дней, на 6-й день введения вызывали провокацию антигеном (ОА). Назальный смыв получали через сутки после провокации.

Таблица 5

Влияние соединения IV на цитоз (абсолютное количество клеток в 1 мкл) в назальном смыве
Группа Интактный контроль Модель + провокация (ринит) Соединение IV

(0,1% р-р)
N6 77
Цитоз 18,0±2,10 67,2±6,47** 43,7±6,65 ° *
* - отличие от интактного контроля; ° - отличие от модели

(° - Р<0,05; * - Р<0,01; ** - Р<0,001)

Таблица 6

Влияние соединения IV на показатели цитограммы (%) назального смыва морских свинок
Группа

Субпопуляция
Интактный контроль

n=6
Модель

(ринит)

n=7
Соединение IV

(0,1% р-р)

n=7
Макрофаги21,8±1,64 12,7*±1,57 14,6*±1,27
Лимфоциты 4,7±0,88 6,1±1,425,7±1,54
Нейтрофилы 0,3±0,21 3,3*±0,80 7,8**°±1,35
Эозинофилы7,0±2,45 47,9***±5,37 6,9°°°±1,32
Эпителиоциты 66,2±3,09 27,1***±5,01 63,6°°°±3,02
* - отличие от интактного контроля; ° - отличие от модели (ринит)

(° - Р<0,05; **, °° - Р<0,01; ***, °°° - Р<0,001)

Таблица 7

Влияние соединения IV на абсолютное количество клеточных субпопуляций назального смыва морских свинок (в 1 мкл)
Группа

Субпопуляция
Интактный контроль

n=6
Модель

(ринит)

n=7
Соединение IV

(0,1% р-р)

n=7
Макрофаги6,2±1,29 7,9±1,88 6,1±0,75
Лимфоциты0,9±0,24 4,1*±1,16 3,2*±52
Нейтрофилы 0,03±0,021 2,1±0,67 3,1±1,02
Эозинофилы1,2±0,46 26,5***±4,47 3,2°°±0,97
Эпителиоциты 11,8±1,4 11,3±2,10 26,3**°°±4,31
Примечание: * - отличие от интактного контроля; ° - отличие от модели

(* - P<0,05; **,°° - Р<0,01; *** -Р<0,001)

Из данных таблиц 5-7 следует, что в условиях моделирования аллергического ринита соединение IV значительно подавляет эозинофильное воспаление. Это подтверждается снижением до нормы абсолютного и относительного количества эозинофилов, а также существенным снижением цитоза в назальном смыве.

Пример 16

Противоаллергическая активность соединений общей формулы I на модели аллергического воспаления легких у морских свинок

Использована модель аллергического воспаления легких у морских свинок.

Иммунизация животных аналогична той, которая описана в примере 14.

Через 24 часа после последнего введения овальбумина производили забор бронхоальвеолярного смыва (через канюлю, вставленную в трахею), и изменения в слизистой бронхов оценивали с помощью комплекса методов: гистологических и цитологических.

Исследуемые соединения (0,1% р-р) вводили ежедневно в виде ингаляций с помощью небулайзерной техники в течение 6 дней, на 6-й день введения вызывали провокацию антигеном (ОА).

Таблица 8

Влияние соединения IV на цитоз (абсолютное количество клеток в 1 мкл) в бронхоальвеолярном смыве
Группа Интактный контроль Модель + провокац. (ринит)Соединение IV

(0,1% р-р)
N6 57
Цитоз 726,8±82,4 1849,4±287,3* 1331,3±277,4
* Р<0,01 - отличие от интактного контроля

Таблица 9

Влияние соединения IV на абсолютное количество клеточных субпопуляций бронхоальвеолярного смыва морских свинок (в 1 мкл)
Группа

Субпопуляция
Интактный контроль МодельСоединение IV

(0,1% р-р)
Макрофаги502,6±60,31

(n=6)
680,3±105,0

(n=5)
640,1±57,98

(n=6)
Лимфоциты101,4±24,3

(n=6)
328,3**±49,18

(n=5)
233,0*±45,77

(n=7)
Нейтрофилы0

(n=6)
56,8±17,08

(n=5)
16,9°±4,22

(n=7)
Эозинофилы37,0±9,04

(n=5)
773,0**±171,7

(n=5)
487,4**±98,70

(n=6)
Эпителиоциты16,9±6,09

(n=6)
0

(n=5)
2,48*±1,84

(n=7)
* - отличие от интактного контроля; °- отличие от модели

(*,° - Р<0,05; ** - Р<0,01)

Из данных таблиц 8 и 9 следует, что соединение IV в условиях модели аллергического воспаления легких существенно ингибирует воспалительный процесс, что проявляется уменьшением цитоза, снижением содержания ключевой клетки аллергического воспаления - эозинофилов, резким снижением нейтрофилов, а также уменьшением числа лимфоцитов.

Пример 17

Изучение противовоспалительного действия соединений общей формулы I на модели воспаления легких у крыс, индуцированного сефадексом

Модель сефадекс-индуцированного (6-дневного) воспаления легких у крыс

В опытах были использованы крысы-самцы породы Вистар с массой тела 270-300 г.

Воспаление в легких индуцировали однократным ингаляционным введением сефадекса А-25 (гидрофильного порошка с размерами частиц от 20 до 80 мкм) в дозе 5 мг/кг с помощью дозирующего устройства, являющегося лабораторным аналогом ингалятора "Циклохалера" (НИИ пульмонологии РФ).

Методика ингаляционного введения сефадекса и фармакологических веществ

Крысам с помощью оригинального дозирующего устройства для ингаляционного введения сухих порошков под эфирным наркозом вводили сефадекс А-25 в дозе 5 мг на 1 кг массы тела. Крысы Вистар после введения сефадекса А-25 быстро выходили из наркоза и внешне каких-либо особенностей в поведении, характере дыхания у них не отмечалось. Вещества в виде сухого порошка вводили ингаляционно в дозе 500 мкг/кг через 1 час после введения сефадекса, затем в течение 5 дней подряд ежедневно 1 раз в день в одни и те же утренние часы. Контроль представлен 2 группами: группой интактных животных и группой крыс, которым ингаляционно однократно ввели сефадекс.

Результаты терапевтического действия фармакологических веществ на развитие воспалительного процесса в легких оценивали через 6 суток после аэрозольного воздействия сефадекса с помощью морфологических и морфометрических показателей (объемная плотность эмфиземы и альвеолита).

Методы, использованные в работе

Гистологические

Проводили гистологическое исследование легких, окрашенных гематоксилином и эозином.

Морфометрические

Готовили гистологические срезы легких толщиной 4-5 мкм, в которых подсчитывали число нейтрофилов межальвеолярных перегородок, а также оценивали объемную плотность альвеолита и эмфиземы с помощью сетки Автандилова (Автандилов Г.Г. Введение в количественную патологическую морфологию. // - М.: Медицина, 1980, с. 203). Также проводили морфометрическое исследование лимфоидной ткани легких. С этой целью макропрепараты легких фиксировали по методу Веinenstock et al. (Bienenstock J., Johnson N., Perey D.Y.E., Bronchial lymphoid tissue 1. Morphologic characteristics // Lab. Invest., 1973, v.28, p. 693-698). Легкие с трахеей извлекали из грудной полости, и макропрепарат помещали в 2% водный раствор уксусной кислоты. Через 18-24 часа трахею, главный и долевые бронхи рассекали; методом точечного счета под лупой (×7) проводили морфометрическую оценку объемной плотности лимфоидной ткани, ассоциированной с бронхами. Методом точечного счета определяли объемную плотность альвеолита и эмфиземы.

Цитологические

Бронхоальвеолярный смыв у крыс и морских свинок получали под гексеналовым наркозом путем двукратного промывания легких через трахею 10 мл физиологического раствора. Жизнеспособность клеток определяли в тесте с трипановым синим. В жидкости бронхоальвеолярного смыва (БАС) с помощью камеры Горяева определяли абсолютное число клеток в 1 мл (цитоз). В мазках из осадка жидкости БАС, полученного с помощью центрифугирования при 200 g в течение 10 минут и затем окрашенных по Романовскому-Гимзе, подсчитывали эндопульмональную цитограмму (в процентах) [Авцын А.П., Лукомский Г.И., Романова Л.К. и соавт. Эндопульмональная цитограмма. // Сов. мед., 1982, № 7, с. 8-14].

Результаты исследований обработаны методами вариационной статистики с использованием t-критерия Стьюдента.

Таблица 10

Показатели цитоза бронхоальвеолярного смыва крыс Вистар после аэрозольного воздействия сефадекса А-25 и лечения фармакологическими aгентами (М±m)

Цитоз

Абсолютное количество клеток в 1 мкл БАЛ
КритерийИнтактный

n=5
Сефадекс

(модель)

n=6
Соединение IV

n=6
Цитоз160,4±20,65 259,2*±32,42 178,6*±20,4
Р способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 0,05 0,05
Примечание: * - отличие от интактного контроля

Таблица 11

Показатели клеточного состава бронхоальвеолярного смыва крыс Вистар после аэрозольного воздействия сефадекса А-25 и лечения исследуемого соединения (М±m)

Цитоз

Абсолютное количество клеток различных субпопуляций в 1 мкл БАЛ
СубпопуляцияИнтактный

контроль
Модель

(сефадекс)
Соединение IV
N4 56
Макрофаги 124,8±16,35 226,1*±30,83 152,4±18,5
Лимфоциты15,5±4,27 28,2±6,01 22,0*±3,5
Нейтрофилы 0 20,4*±6,38 5,1*±0,6
Примечание: * - отличие от интактного контроля (P<0,05)

Гистологическое исследование легких

Соединение IV вызвало отчетливое противовоспалительное действие: распространенность альвеолита была достоверно ниже по сравнению с модельной группой животных; эмфизема практически не выявлялась; не отмечена инфильтрация нейтрофилами межальвеолярных перегородок. По уровню цитоза и количеству нейтрофилов в БАЛ воспалительный процесс также значительно менее выражен, чем у животных, получавших сефадекс в течение 5 дней.

Таким образом, весь комплекс использованных экспериментальных моделей свидетельствует о значительной противоаллергической, антианафилактической и противовоспалительной активности соединений общей формулы I, проявляемой как в тестах in vitro, так и при моделировании аллергической и воспалительной патологии in vivo.

Пример 18

Исследование гиполипидемического действия соединений общей формулы (I) модели гиперхолестеринемии крыс

Исследование проводили на крысах-самцах Вистар массой 200±20 г. Гиперлипидемию вызывали пероральным введением холестериновой нагрузки - масляной суспензии холестерина:

оливковое масло (Acorsa, Испания) - 5 мл/кг веса животных,

холестерин (Sigma, USA) - 1 г/кг веса,

холат натрия (Sigma, USA) - 100 мг/кг веса.

В качестве препарата сравнения использовали препарат из группы статинов - «мевакор» (ловастатин) фирмы Merck Sharp & Dohn в дозе 40 мг/кг. Холестериновую суспензию вводили утром ежедневно в течение 10 дней. Исследуемые соединения (в дозе 500 мкг/кг) и препарат сравнения (в дозе 40 мг/кг) вводили животным вместе с холестериновой суспензией в течение 10 дней. Все животные получали стандартный брикетированный корм.

Животные были разбиты на следующие группы:

«Контроль» - интактные животные (n=6),

«Холестерин» - крысы, получавшие per os холестериновую нагрузку (n=10),

«Ловастатин» - крысы, получавшие per os холестериновую нагрузку и ловастатин (n=10),

«соединение IV» - крысы, получавшие per os холестериновую нагрузку и исследуемое соединение IV (n=10).

Образца крови брали на 5, 8, 10 день эксперимента.

Статистическую обработку гиполипидемического действия исследуемых веществ проводили по отношению к группе «холестерин» (таблица 13).

Таблица 12

Cодержание холестерина и триглицеридов в сыворотке крови и печени крыс, получавших в течение 10 дней per os оливковое масло, холестерин и соединение IV одновременно с холестериновой нагрузкой
способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 Контроль

(n=6)
Холестерин

(n=10)
Ловастатин

(n=10)
соединение IV

(n=9)
Общий холестеринспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
Сыворотка (мг/100 мл) 67,2±6,1120,0±8,4 100,5±6,7* 96,6±5,7**
ЛПВП

(мг/100 мл)
41,6±1,3 54,3±1,7 50,6±1,350,5±1,3*
ЛПНП+ЛПОНП (мг/100 мл)25,6±0,8 65,7±1,2 49,9±0,9*** 46,1±0,9***
Печень

(мг/г ткани)
2,29±0,13 3,6±0,42,41±0,17*** 2,78±0,28***
Триглицериды способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
Сыворотка (мг/100 мл) 85,7±9,299,2±8,7 93,6±7,5 95,1±7,9
Печень

(мг/г ткани)
3,89±0,14 6,83±0,39 6,25±0,13 5,53±0,19***
* - р<0,1

** - р<0,05

*** - р<0,01

Введение соединения IV в дозе 500 мкг/кг приводило к достоверному снижению общего холестерина сыворотки на 19,5%, печени на 22,7%, холестерина ЛНП на 29,8%, триглицеридов печени на 19%. Соединение глутарилгистамин, снижая содержание общего холестерина лишь на 9%, оказывал влияние только на ЛПНП и ЛПОНП (липопротеинов низкой и очень низкой плотности), что показано в публикации международной заявки WO 99/01103, и, очевидно, менее эффективен, чем соединение IV, в аналогичном биологическом эксперименте.

Ниже приведены результаты исследований других заявленных соединений.

Экспериментальные группы включали:

1) «Холестерин» - получавшие в течение 10 дней per os масляную суспензию холестерина,

2) «соединение IV» - крысы, получавшие per os масляную суспензию холестерина и исследуемое соединение IV,

3) «соединение IV - 1Na» - крысы, получавшие per os масляную суспензию холестерина и исследуемую мононатриевую соль соединения IV,

4) «соединение IV - 2Na» - крысы, получавшие per os масляную суспензию холестерина и исследуемую динатриевую соль соединения IV,

5) «соединение V - 1Na» - крысы, получавшие per os масляную суспензию холестерина и исследуемую мононатриевую соль соединения V,

6) «соединение III - 1Na» - крысы, получавшие per os масляную суспензию холестерина и исследуемую мононатриевую соль соединения III,

7) «соединение II - 1Na» - крысы, получавшие per os масляную суспензию холестерина и исследуемую мононатриевую соль соединения II,

8) "Sim" - крысы, получавшие per os маслянную суспензию холестерина и симвастатина,

9) контроль - интактные крысы до начала эксперимента.

На 10-й день опыта образцы крови брали после декапитации животных. Перед декапитацией животные голодали 12 часов.

В сыворотке крови измеряли содержание общего холестерина, триглицеридов, холестерина липопротеидов высокой плотности (ЛПВП). Холестерин липопротеидов низкой и очень низкой плотности рассчитывали по разности общего холестерина и холестерина ЛВП.

Содержание общего холестерина и триглицеридов в сыворотке крови определяли ферментативным методом.

Определение содержания холестерина в липопротеинах высокой плотности (способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -ЛП) проводили методом осаждения ЛНП и ЛОНП фосфорно-вольфрамовой кислотой и ионами магния.

Статистическая обработка

Данные в таблицах представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. Достоверность различий между группами «холестерин» и «препаратспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 » оценивали по двухвыборочному t-тесту Стьюдента. Вероятность ошибки (р) указана в графах таблицы.

Данные о влиянии исследуемых соединений на содержание холестерина и триглицеридов в сыворотке крови крыс, получавших холестериновую нагрузку, представлены в таблицах 13-20.

Таблица 13

Экспериментальная гиперхолестеринемия
Показатели липидного обмена крыс (мг/100 мл)
способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 до начала эксперимента (n=50) 10 дней холестериновой нагрузки (n=20)
Общий холестерин способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
Сыворотка59,9 ± 1,4135,7 ± 10,9
ЛПВП38,2 ± 1,232,5 ± 1,1
ЛНП+ЛОНП 20,3 ± 1,3 103,2 ± 11,5
способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
Триглицериды способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
Сыворотка83,6 ± 4,6156,6 ± 11,4
ЛПВП19,0 ± 1,424,3 ± 1,8
ЛПНП+ЛПОНП 58,7 ± 6,2 132,6 ± 12,8

Десятидневное введение крысам масляной суспензии холестерина привело к достоверному увеличению содержания общего холестерина в сыворотке в 2,3 раза, триглицеридов в 1,9 раза. При развитии индуцированной гиперлипидемии холестерин ЛПВП снижался на 15%. Холестерин ЛПНП+ЛПОНП возрастал в 5 раз. Триглицериды ЛНП+ЛОНП возрастали в 2,3 раза.

Таблица 14

Cодержание холестерина и триглицеридов (мг/100 мл) в сыворотке крови крыс на 5-й день эксперимента
Показатели Группы
«Холестерин» (n=20) «соединение IV»

(n=20)
«соединение IV-1Na»

(n=20)
«соединение IV-2Na»

(n=19)
«Sim»

(n=10)
Общий холестерин сыворотки 92,3 ± 3,5 84,2 ± 3,9 72,0 ± 3,0

р = 0,0001
80,6 ± 2,8

р = 0,013
73,6 ± 7,3

р = 0,04
ЛПВП34,3 ± 1,335,8 ± 1,233,1 ± 1,435,0 ± 1,327,8 ± 2,7
ЛПНП+ЛПОНП 58,0 ± 4,1 48,5 ± 4,5 38,8 ± 2,9

р = 0,0006
44,3 ± 2,7

р = 0,02
43,0 ± 8,3
способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
Триглицериды сыворотки 110,8 ± 7,1 120,6 ± 8,9 106,6 ± 6,2 88,3 ± 4,8

р = 0,013
108,9 ± 6,9

Таблица 15

Cодержание холестерина и триглицеридов (мг/100 мл) в сыворотке крови крыс на 8-й день эксперимента
Показатели Группы
«Холестерин»

(n=20)
«соединение IV»

(n=20)
«соединение IV-1Na»

(n=20)
«соединение IV-2Na»

(n=19)
«Sim»

(n = 10)
Общий холестерин сыворотки 127,2 ± 10,6 103,3 ±8,1

р = 0,08
99,1 ± 6,0

р = 0,03
90,2 ± 5,1

р = 0,004
100,1 ± 12,8
ЛПВП30,2 ± 1,035,9 ± 1,2

р = 0,0007
37,1 ± 1,4

р = 0,0003
35,9 ± 1,8

р = 0,01
33,2 ± 1,8
ЛПНП+ЛПОНП97,0 ± 11,367,3 ± 8,7

р = 0,04
61,9 ± 6,6

р = 0,01
54,3 ± 5,8

р = 0,002
66,9 ± 13,4

р = 0,1
способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
Триглицериды способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
Сыворотка150,6 ± 13,6154,2 ± 11,4146,4 ± 11,2125,8 ± 9,4119,9 ± 10,5

р = 0,085

Таблица 16

Cодержание холестерина и триглицеридов (мг/100 мл) в сыворотке крови крыс на 10-й день эксперимента
Показатели Группы
«Холестерин»

(n=20)
«соединение IV»

(n=20)
«соединение IV-1Na»

(n=20)
«соединение IV-2Na»

(n=19)
«Sim»

(n=10)
Общий холестерин сыворотки 135,7 ± 10,9 95,2 ± 5,4

р = 0,003
97,4 ± 7,1

р = 0,006
97,9 ± 3,9

р = 0,003
93,9 ± 10,2

р = 0,01
ЛПВП32,5 ± 1,136,5 ± 0,9

р = 0,093
37,7 ± 1,0

р = 0,02
40,0 ± 1,9

р = 0,002
32,7 ± 1,2
ЛПНП+ЛПОНП103,2 ± 11,558,7 ± 5,3

р = 0,002
59,7 ± 7,2

р = 0,003
57,3 ± 4,3

р = 0,002
61,2 ± 9,7

р = 0,01
способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
Триглицериды сыворотки 156,6 ± 11,4 143,3 ± 8,9 132,5 ± 8,4

р = 0,096
127,3 ± 6,2

р = 0,03
142,0 ± 5,4

Таблица 17

Развитие гиперхолестеринемии у подопытных животных в группе «Холестерин»
способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 Показатели липидного обмена крыс (мг/100 мл)*
способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 до начала эксперимента

(n=30)
5 дней холестериновой нагрузки

(n=12)
8 дней холестериновой нагрузки

(n=12)
10 дней холестериновой нагрузки

(n=12)
Общий холестерин способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
Сыворотка89,1 ± 1,8112,9 ± 9,2

р = 0,025
153,0 ± 14,7 144,6 ± 12,8
ЛПВП66,7 ± 1,147,5 ± 3,7

р < 0,02
50,3 ± 5,1 46,7 ± 2,9
ЛПНП+ЛПОНП22,5 ± 1,765,4 ± 10,6

р < 0,001
100,9 ± 17,3 97,9 ± 14,0
способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
Триглицериды способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
Сыворотка74,8 ± 4,194,5 ± 9,2129,7 ± 17,9115,8 ± 18,9
ЛПВП43,1 ± 1,935,0 ± 3,1

р < 0,05
46,0 ± 4,6 35,5 ± 3,1
ЛПНП+ЛПОНП31,7 ± 3,759,5 ± 7,6

р < 0,05
76,0 ± 14,7 80,3 ± 16,2

Десятидневное введение крысам масляной суспензии холестерина привело к достоверному увеличению содержания общего холестерина в сыворотке в 1,7 раза, триглицеридов в 1,6 раза (таблица 17). Холестерин ЛПВП снижался на 28% с исходных 66,7 до 48 мг/100 мл при развитии индуцированной гиперлипидемии. Холестерин ЛПНП+ЛПОНП возрастал в 4,4 раза с 22,5 до 99 мг/100 мл.

Таблица 18

Cодержание холестерина и триглицеридов (мг/100 мл) в сыворотке крови крыс, на 5-й день эксперимента
Показатели Группы
«Холестерин»

(n=12)
«соединение IV-1Na»

(n=12)
«соединение V-1Na»

(n=12)
«соединение III-1Na»

(n=12)
«соединение II-1Na»

(n=12)
Общий холестерин сыворотки112,9 ± 9,294,4 ± 3,4

р = 0,079
96,9 ± 4,5 89,0 ± 5,0

р = 0,035
109,7 ± 9,4
ЛПВП47,5 ± 3,760,7 ± 3,1

р = 0,012
55,1 ± 2,8

р = 0,11
49,0 ± 2,1 49,5 ± 3,8
ЛПНП+ЛПОНП65,4 ± 10,633,7 ± 4,5

р = 0,015
41,7 ± 6,5

р = 0,073
40,0 ± 5,4

р = 0,048
60,2 ± 10,6
способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
Триглицериды способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
Сыворотка94,5 ± 9,283,2 ± 6,363,3 ± 5,4

р = 0,009
87,4 ± 9,4 80,9 ± 5,5
ЛПВП35,0 ± 3,139,4 ± 3,530,9 ± 1,830,0 ± 2,232,6 ± 2,5
ЛПНП+ЛПОНП 59,5 ± 7,6 43,7 ± 4,6

р = 0,09
32,4 ± 4,4

р = 0,007
57,4 ± 9,1 48,2 ± 4,9

Таблица 19

Cодержание холестерина и триглицеридов (мг/100 мл) в сыворотке крови крыс, на 8-й день эксперимента
Показатели Группы
«Холестерин»

(n=12)
«соединение IV-1Na»

(n=12)
«соединение V-1Na»

(n=12)
«соединение III-1Na»

(n=12)
«соединение II-1Na»

(n=12)
Общий холестерин способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
Сыворотка153,0 ± 14,7120,8 ± 4,3

р = 0,07
124,8 ± 5,8

р = 0,11
108,8 ± 8,2

р = 0,03
140,8 ± 13,6
ЛПВП50,3 ± 5,154,9 ± 2,454,2 ± 3,448,4 ± 2,752,9 ± 4,1
ЛПНП+ЛПОНП 100,9 ± 17,3 65,0 ± 6,0

р = 0,09
70,6 ± 6,8

р = 0,14
60,4 ± 8,3

р = 0,06
87,9 ± 14,5
способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
Триглицериды способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
Сыворотка129,7 ± 17,9116,3 ± 10,595,4 ± 5,7

р = 0,12
124,4 ± 8,9 111,6 ± 17,2
ЛПВП46,0 ± 4,645,8 ± 2,342,2 ± 2,145,2 ± 3,244,5 ± 2,5
ЛПНП+ЛПОНП 76,0 ± 14,7 70,5 ± 9,0 53,2 ± 4,6 79,2 ± 7,7 73,9 ± 15,4

Таблица 20

Cодержание холестерина и триглицеридов (мг/100 мл) в сыворотке крови крыс, на 10-й день эксперимента
Показатели Группы
«Холестерин»

(n=12)
«соединение IV-1Na»

(n=12)
«соединение V-1Na»

(n=12)
«соединение III-1Na»

(n=12)
«соединение II-1Na»

(n=11)
Общий холестерин способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
сыворотки144,6 ± 12,8122,1 ± 9,8

р = 0,18
123,3 ± 7,3

р = 0,18
102,3 ± 6,9

р = 0,014
134,4 ± 12,5
ЛПВП46,7 ± 2,953,4 ± 2,2

р = 0,09
52,9 ± 3,8 48,8 ± 2,4 54,7 ± 2,2

р = 0,046
ЛПНП+ЛПОНП97,9 ± 14,068,7 ± 10,1

р = 0,11
70,5 ± 8,9

р = 0,12
53,5 ± 7,3

р = 0,02
79,7 ± 12,6
способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
Триглицериды сыворотки 115,8 ± 18,9 109,3 ± 5,1 81,9 ± 4,4

р = 0,11
109,3 ± 10,5 108,5 ± 11,3
ЛПВП35,5 ± 3,136,2 ± 2,631,5 ± 1,834,3 ± 2,338,9 ± 2,4
ЛПНП+ЛПОНП 80,3 ± 16,2 73,1 ± 5,2 50,4 ± 4,8

р = 0,1
75,0 ± 8,569,6 ± 11,1

Введение животным моно-натриевой соли соединения III достоверно снижало общий холестерин (ХС) сыворотки на 29% и холестерин фракций ЛПОНП+ЛПНП - на 40%, но не изменяло уровень ХС антиатерогенных ЛПВП и общих триглицеридов сыворотки.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что моно- и ди-натриевые соли превосходили соединение IV по динамике действия на общий холестерин сыворотки и холестерин ЛПНП + ЛПОНП и другие показатели липидного обмена. В то время как к 10-му дню опыта достоверное и сравнимое снижение упомянутых показателей происходило под действием всех упомянутых выше соединений и препарата сравнения "Зокор" (симвастатин), соли соединения IV начинали действовать на более ранних сроках эксперимента (на 5 и 8 день). Обе натриевые соли соединения IV повышали ЛПВП уже к 5 дню эксперимента, в то время как соединение IV повышало этот показатель лишь к 8 дню. Препарат сравнения симвастатин не оказывал влияния на холестерин ЛПВП. Кроме того, динатриевая соль соединения IV снижала уровень общих триглицеридов сыворотки на 5 и 10 дни эксперимента.

Отличительным свойством мононатриевой соли соединения V явилась способность снижать уровень общих триглицеридов сыворотки, в то время как снижение уровня общего холестерина, ХС ЛПОНП и повышение содержания ЛПВП было ниже, чем у мононатриевой соли соединения III и мононатриевой соли соединения IV.

Таким образом, соли соединений II, III, IV и V обладают повышенной гиполипидемической активностью, по сравнению с активностью соединений, описанных в публикации международной заявки WO 99/01103, и соединений, предложенных в настоящем изобретении, включающей способность снижать уровень триглицеридов, холестерин сыворотки, в том числе в ЛПНП и повышать холестерин ЛВП.

Пример 19

Исследование гиполипидемического действия соединений общей формулы (I) на модели «эндогенной» гиперхолестеринемии морских свинок

Исследование проводили на морских свинках самцах (порода Агути), исходной массой 304±25 г. Продолжительность эксперимента 31 день. Контрольная группа, 6 свинок - интактные животные. Изучаемые соединения вводили с первого дня эксперимента (с первого дня введения жировой нагрузки).

Животные экспериментальных групп ежедневно на протяжении 31 дня получали per os исследуемое соединение и жировую нагрузку. Исследуемое соединение в указанных ниже дозах вводили в виде водного раствора (0,5 мл на животное); жировую нагрузку - смесь свиной жир/предварительно прогретое кукурузное масло, 4:1 по объему, из расчета 5 мл/кг веса через 0,5 часа после введения исследуемого вещества.

Экспериментальные группы:

1) «контроль» - интактные животные,

2) «жир» - животные, получавшие только жировую нагрузку,

3) «соединение IV» - животные, получавшие жировую нагрузку + соединение IV в дозе 500 мкг/кг веса,

4) «соединение V» - животные, получавшие жировую нагрузку + соединение V в дозе 500 мкг/кг.

Данные о содержании холестерина и триглицеридов в сыворотке крови морских свинок, получавших жировую нагрузку и исследуемые соединения, представлены в таблицах 22-25.

Таблица 21

Содержание общего холестерина в сыворотке крови морских свинок, получавших жировую нагрузку и исследуемые соединения
способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 Общий холестерин сыворотки
28 дн31 дн
Контроль способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 37,4±3,3
Жир 71,7±14,5

n=9
74,4±11,4
Соединение IV55,5±6,3

n=10
49,2±3,9

P=0,064
Соединение V52,9±6,5

n=9
46,3±4,1

P=0,043

Статистическая обработка проводилась с помощью однофакторного дисперсионного анализа.

Таблица 22

Содержание общих триглицеридов в сыворотке крови морских свинок, получавших жировую нагрузку и исследуемые соединения
способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 Общие триглицериды сыворотки
28 дн31 дн
Контроль способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 60,1±2,4
Жир 89,7±14,0 123,1±35,6
Соединение IV66,8±6,7 69,0±13,4
Соединение V62,3±5,4 56,0±6,1

Таблица 23

Содержание общего холестерина на 31-й день во фракциях липопротеидов сыворотки крови морских свинок, получавших жировую нагрузку и исследуемые соединения
способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 Холестерин, ммоль/100 мл
способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 Общие ЛПОНП ЛПНП
Контроль 38,4±3,3 1,6±0,07 32,2±2,8
Жир74,4±11,4 4,1±1,2 67,6±10,2

Р=0,009
Соединение IV49,2±3,9 3,0±0,71 42,1±3,5

Р=0,040
Соединение V46,3±4,1 2,1±0,4 41,9±2,7

Р=0,038

Таблица 24

Содержание общих триглицеридов на 31-й день во фракциях липопротеидов сыворотки крови морских свинок, получавших жировую нагрузку и исследуемые соединения
способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 Триглицериды, мкг/100 мл
способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 Общие ЛПОНП ЛПНП
Контроль 60,1±2,36 38,16±2,86 16,13±0,97
Жир123,2±35,6 59,5±19,7 42,7±8,62

Р=0,015
Соединение IV69,0±13,4 33,2±12,3 29,6±2,4
Соединение V56,0±6,1

Р=0,1
22,5±4,4

Р=0,1
23,1±1,9

Р=0,053

Исследуемые соединения IV и V значительно снижали уровень общего холестерина только к 31 дню эксперимента на 33,9 и 37,8%, соответственно. При этом они достоверно снижали холестерин ЛПНП на 37,7 и 38%.

способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284

Фиг.1. Изменение общего холестерина сыворотки под влиянием жировой нагрузки и различных доз (50-1500 мкг/кг) соединения IV. Вертикальными тонкими линиями указано стандартное отклонение от среднего значения.

Преимуществом заявляемых соединений, в частности соединения IV, является широкий диапазон действующих доз, что обеспечивает широту его терапевтического действия. Так, например, соединение IV практически одинаково эффективно снижало содержание общего холестерина в течение 20 дней в интервале доз от 50 до 1500 мкг/кг, отличающихся в 30 раз.

Таким образом, заявляемые соединения, соответствующие общей формуле (I), обладают значительной гиполипидемической активностью, существенно улучшая показатели липидного обмена в сыворотке крови и в печени.

Пример 20

Сравнительное исследование гиполипидемического действия соединения IV и глутарилгистамина (ГГ, соединение III WO99/01103) на экспериментальной модели гиперхолестеринемии крыс линии Wistar

Материалы и методы исследования

Представленные данные получены после объединения результатов 3-х опытов.

Исследование проводили на 118 крысах-самцах линии Wistar массой 180-230 г. Гиперлипидемию вызывали пероральным введением (с помощью желудочного зонда) холестериновой нагрузки - масляной суспензии холестерина:

оливковое масло (рафинированное, предварительно прогретое 1 ч 80оС) - 5 мл/кг веса,

холестерин (Sigma, USA) - 1г/кг веса,

холат натрия (Sigma, USA) - 120 мг/кг веса.

Холестериновую суспензию вводили утром ежедневно в течение 14 дней. Животные получали исследуемые соединения (в дозе 500 мкг/кг веса) с первого дня опыта в утренние часы. Все препараты вводили животным за 30 мин до холестериновой нагрузки.

Экспериментальные группы:

«Холестерин» - крысы, получавшие в течение 14 дней per os масляную суспензию холестерина (n=37)

1. «IV» - крысы, получавшие per os масляную суспензию холестерина и Na соль исследуемого соединения IV (n=37),

2. «ГГ» - крысы, получавшие per os масляную суспензию холестерина и исследуемое соединение ГГ/(n=22).

Образцы крови (из хвоста) брали на анализ на 5, 8 и 10 дни эксперимента. На 14 день образцы крови получали после декапитации. Перед забором крови животные голодали 10 часов.

В сыворотке крови измеряли содержание общего холестерина, триглицеридов, общего холестерина липопротеидов высокой плотности (ЛВП). Холестерин липопротеидов низкой и очень низкой плотности рассчитывали по разности общего холестерина сыворотки и холестерина ЛВП.

Содержание общего холестерина и триглицеридов в сыворотке крови определяли ферментативными методами с помощью тест-наборов «CHOL L 250 S» ( № 10003268) и «TG L 250 S» ( № 10003267) производства фирмы «Lachema» (Чешская Республика). Измерение оптической плотности проводили на спектрофотометре «Shimadzu» при 500 нм, калибровку получали по прилагаемым к тест-наборам стандартным образцам.

Определение содержания холестерина в липопротеидах высокой плотности (способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 -ЛП) проводили с помощью тест наборов «HDL CHOL 250E» (10003202) и «CHOL L 250 S» ( № 10003267) фирмы «Lachema» (Чешская Республика) методом осаждения ЛНП и ЛОНП фосфорновольфрамовой кислотой и ионами магния.

Данные в таблицах 25-27 представлены как средние значение ± стандартная ошибка среднего. Достоверность различий между группами «холестерин» и «препаратспособы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 » оценивали по двухвыборочному t-тесту Стьюдента. Вероятность ошибки (р) указана в графах таблиц.

Результаты исследования

Экспериментальная гиперхолестеринемия

Исходный уровень общего холестерина и триглицеридов плазмы крови представлен в Таблице 25. Динамика изменения липидного обмена - в Таблице 26.

Таблица 25

Показатели липидного обмена крыс (n=24) до начала эксперимента
Исходные биохимические показатели, мг/100 мл (n=30)
Общий холестерин способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
Сыворотка 72,3 ± 1,8
ЛВП 36,1 ± 1,7
ЛНП+ЛОНП 36,2 ± 2,2
Холестериновый индекс атерогенности 1,07 ± 0,05
способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
Триглицериды способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
Сыворотка69,0 ± 5,7
ЛВП15,4 ± 1,3
ЛНП+ЛОНП53,6 ± 4,9
Триглицеридный индекс 3,58 ± 0,22

Влияние исследуемых соединений на развитие гиперхолестеринемии

Данные о влиянии исследуемых соединений на содержание холестерина и триглицеридов в сыворотке крови крыс, получавших холестериновую нагрузку, представлены в таблицах 26 и 27.

Таблица 26

Изменение параметров липидного обмена на протяжении опыта
способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 Общий холестерин ЛВП
исходно5 дней 8 дней 10 дней14 дней
«Холестерин» 36,1 ± 1,731,7 ± 1,627,3 ± 1,435,7 ± 1,529,9 ± 1,9
ГГ 26,4 ± 1,7

Рхол-гг = 0,03
23,5 ± 1,0

Рхол-гг = 0,06
32,2 ± 1,0

Рхол-гг = 0,04
25,4 ± 1,4

Рхол-гг = 0,06
IV 33,3 ± 1,6

Ргг-IV = 0,005
30,1 ± 1,4

Рхол-IV = 0,07

Р гг-IV = 0,0003
41,6 ± 2,1

Рхол-IV = 0,03

Р гг-IV = 0,0001
30,1 ± 1,6

Ргг-IV = 0,04
способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 Общий холестерин ЛНП
«Холестерин» 36,2 ± 2,2 79,3 ± 4,7 76,3 ± 4,1 81,2 ± 6,9 100,9* ± 9,5
ГГ64,9 ± 3,1

Рхол-гг = 0,01
70,5 ± 2,9 61,0 ± 3,6

Рхол-гг = 0,01
65,3 ± 6,5

Рхол-гг = 0,003
IV 69,2 ± 3,3

Рхол-IV = 0,08
66,9 ± 4,3

Рхол-IV = 0,12
65,8 ± 4,1

Рхол-IV = 0,06
69,2 ± 5,3

Рхол-IV = 0,005
способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 Холестериновый индекс атерогенности (общий холестерин ЛНП+ЛОНП/ЛВП)
«Холестерин» 1,07 ± 0,052,9 ± 0,33,3 ± 0,32,7 ± 0,44,2 ± 0,7
ГГ 2,8 ± 0,3 3,1 ± 0,1 1,9 ± 0,1

Рхол-гг = 0,06
2,7 ± 0,3

Рхол-гг= 0,04
IV 2,3 ± 0,2

Рхол-IV = 0,1
2,6 ± 0,3

Рхол-IV = 0,07

Р гг-IV = 0,02
1,6 ± 0,1

Рхол-IV = 0,008

Р гг-IV= 0,08
2,6 ± 0,3

Рхол-IV = 0,03

Таблица 27

Достоверные (р способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 0,05) отличия изменения параметров липидного обмена между группами IV и ГГ по двухвыборочному t-тесту Стьюдента
Отличия изменений параметров липидного обмена в группах
дни ГГ (n=22)IV способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
Холестерин ЛВП
5способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 + 22% способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
8способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 + 24% способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
10способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 + 26% способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
14способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 + 15,7% способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
Холестериновый индекс атерогенности (общий холестерин ЛНП+ЛОНП/ЛВП)
5 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
8способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 - 15% способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
10способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284 - 11% способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284
Обозначения: - 10% - достоверно ниже на 10%. За 100% принят уровень в группе «Холестерин».

Представленные в таблицах 25-27 данные с очевидностью свидетельствуют, что соединение IV повышает уровень холестерина антиатерогенных ЛВП на 10-14% по сравнению с контролем, тогда как под влиянием глутарилгистамина происходило достоверное понижение холестерина ЛВП.

В итоге снижение холестеринового индекса атерогенности глутарилгистамином было обусловлено снижением холестерина всех фракций плазмы, и ЛВП и ЛНП+ЛОНП.

Соединение IV выгодно отличается от глутарилгистамина значительным достоверным снижением холестеринового индекса атерогенности на 20-40% на протяжении эксперимента, именно за счет повышения фракции ЛВП.

Сравнение гиполипидемического действия глутарилгистамина с соответствующей активностью IV показало, что соединение IV по изобретению достоверно превосходило глутарилгистамин в повышении холестерина ЛВП и снижении индекса атерогенности (Таблица 27).

Пример 21

Исследования противовоспалительной активности соединений общей формулы I (1% гель) на модели каррагенинового отека in vivo

Материалы и методы

Тесты проводят на нелинейных белых мышах массой 30-32 г. Используют модель каррагенин-индуцированного отека по методу, описанному в Winter et al. In: De Rosa M., Giroud J.P., Willoughby D.A. Studies of the mediators of the acute inflammatory response induced in rats in different sites by carrageenan and turpentine. // J. Phamacol., 1971, V.104, p.15-29. В правую лапу мыши субплантарно вводят 1% раствор каррагенина (SERVA) в объеме 0,05 мл. Вещества в виде 1% геля наносят на лапу 2 раза: первый раз - сразу после введения каррагенина; второй раз - через 1,5 часа. Измерение объема правой и левой (интактной) лап проводят с помощью штангенциркуля через 3 ч после введения каррагенина. Воспалительную реакцию и эффект терапевтического воздействия оценивают по формуле

способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284

где

П - прирост отека,

О - величина объема лапы после введения флогогена,

И - величина объема лапы до введения флогогена.

Эффект терапевтического воздействия оценивают по степени угнетения воспалительной реакции по сравнению с контролем и рассчитывают по формуле

способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284

где

(о) - леченные животные,

(к) - нелеченые животные.

Таблица 28

Влияние соединений общей формулы I (1% гель) на развитие каррагенинового отека лапы мышей
Исследуемые веществаРазность объема лапПрирост объема (%)Торможение воспалительной реакции (%)
V0,104±0,009** 60,0 43,8
V-1Na 0,14±0,02** 79,0 26,2
IV-1Na 0,105±0,002** 47,6 33,0
II-1Na 0,1±0,009** 32,3 51,6
III-1Na0,15±0,01* 50,0 25,0
Вольтарен 0,08±0,006** 25,8 61,3
* - статистически значимо относительно модели * - Р<0,01

** - Р<0,01

Результаты экспериментов, представленные в таблице 28, демонстрируют выраженную противовоспалительную активность мононатриевой соли соединения II, сопоставимую с активностью препарата сравнения - вольтареном.

Cоединение V и его мононатриевая соль проявляют умеренную активность на данной модели каррагенинового отека лапы мышей, торможение отека составляет 43,8% и 26,2%, соответственно.

Таким образом, весь комплекс использованных экспериментальных моделей свидетельствует о значительной противоаллергической, антианафилактической и противовоспалительной активности соединений общей формулы I, проявляемой как в тестах in vitro, так и при моделировании аллергической и воспалительной патологии in vivo. Показано, что описываемые соединения, соответствующие общей формуле I, проявляют значительный протективный эффект в отношении системной анафилактической реакции in vivo, в условиях моделирования аллергического ринита, кроме того, эти соединения подавляют эозинофильное воспаление и оказывают отчетливое противовоспалительное действие.

Примеры лекарственных форм

Пример 22

А. Таблетированная форма

Таблетированную форму получают, используя приведенные ниже ингредиенты:

Соединение, соответствующее общей формуле (I) или его фармацевтически приемлемая соль 1-100 мг
Крахмал картофельный 20-50 мг
Магния стеарат 3 мг
Аэросил1 мг
Лактоза до 300 мг

Компоненты смешивают и прессуют для образования таблеток весом 300 мг каждая.

Б. Суппозитории

Пример состава суппозитория:

Соединение, соответствующее общей формуле (I) или его фармацевтически приемлемая соль 1-100 мг
Масло какао количество, необходимое для получения суппозитория

При необходимости возможно изготовление ректальных, вагинальных и уретральных суппозиториев с соответствующими наполнителями.

В. Мази

Пример состава мази:

Соединение, соответствующее общей формуле (I) или его фармацевтически приемлемая соль 0,01-0,1 г
Вазелин 10 г

Мази изготавливают по общеизвестной технологии.

Г. Гели

Пример состава геля:

Соединение, соответствующее общей формуле (I) или его фармацевтически приемлемая соль 1-100 мг
Карбопол 200 мг
Бензиловый спирт 20 мг
Этиловый спирт 300 мг
Водадо 10 г

Д. Сухой порошок для ингаляций

Пример состава порошка:

Соединение, соответствующее общей формуле (I) или его фармацевтически приемлемая соль 0,2 г
Лактоза до 1 г

Порошок помещают в специальное устройство (контейнер) или в желатиновую капсулу.

Е. Назальный спрей

Пример состава спрея:

Соединение, соответствующее общей формуле (I) или его фармацевтически приемлемая соль 1,5-150 мг
Очищенная вода до 15 мл

Е. Глазные капли

Пример состава капель:

Соединение, соответствующее общей формуле (I) или его фармацевтически приемлемая соль 0,5-50 мг
Консервант 10 мг
Очищенная вода до 5 мл

Е. Раствор для инъекций

Пример состава раствора для инъекций:

Соединение, соответствующее общей формуле (I) или его фармацевтически приемлемая соль 0,2-20 мг
Вода для инъекций 2 мл

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Способ получения N-ацильных производных аминокислот общей формулы (I)

способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284

где n равно 2 или 3; и

R представляет

способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284

или их фармацевтически приемлемых солей, включающий прибавление ангидрида глутаровой или янтарной кислоты в виде твердого вещества к водному раствору аминокислоты общей формулы

способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284

где R представляет

способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284

и, необязательно, превращение целевого продукта в его соль.

2. Способ получения N-ацильных производных аминокислот общей формулы I

способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284

где n равно 2 или 3; и

R представляет

способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284

или их солей, включающий проведение реакции в двухфазной системе ангидрида глутаровой или янтарной кислоты в несмешивающемся с водой органическом растворителе с водным раствором аминокислоты общей формулы

способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284

или ее соли,

где R представляет

способы получения n-ацильных производных аминокислот (варианты), патент № 2378284

и, необязательно, превращение целевого продукта в его соль.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2378284

patent-2378284.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс C07K5/06 дипептиды

Класс C07D233/64 с замещенными углеводородными радикалами, связанными с атомами углерода кольца, например гистидин

Патенты РФ в классе C07D233/64:
мостиковые шестичленные циклические соединения -  патент 2503663 (10.01.2014)
фенилимидазольные соединения -  патент 2497811 (10.11.2013)
производные 1,1,1-трифтор-2-гидрокси-3-фенилпропана -  патент 2481333 (10.05.2013)
антигипертензивные соединения двойного действия, способы их получения, фармацевтические композиции на их основе и промежуточные соединения -  патент 2476427 (27.02.2013)
4-имидазолины в качестве лигандов taar -  патент 2465269 (27.10.2012)
способ получения транс-урокановой кислоты -  патент 2445307 (20.03.2012)
соединения и композиции - модуляторы сигнального пути hedgehog -  патент 2423354 (10.07.2011)
фармацевтически приемлемые соли (s)-n-[4-(1-адамантил)бензоил]- -аминокислот и способ их получения -  патент 2417988 (10.05.2011)
фармацевтическая композиция, содержащая n-ацильные производные аминокислот, и их применение в качестве противоаллергических, антианафилактических и противовоспалительных средств -  патент 2406727 (20.12.2010)
производные арилсульфонилстильбена для лечения бессонницы и связанных с ней расстройств -  патент 2382766 (27.02.2010)

Класс C07D209/20 замещенными дополнительно атомами азота, например триптофан

Патенты РФ в классе C07D209/20:
замещенные циклогексилдиамины -  патент 2526251 (20.08.2014)
производное аминокислоты -  патент 2499790 (27.11.2013)
замещенные гетероарильные производные -  патент 2459806 (27.08.2012)
производное индола, проявляющее антигипертензивное действие, и способ его получения -  патент 2451670 (27.05.2012)
фармацевтическая композиция, содержащая n-ацильные производные аминокислот, и их применение в качестве противоаллергических, антианафилактических и противовоспалительных средств -  патент 2406727 (20.12.2010)
средства, обладающие анксиолитическими свойствами -  патент 2398761 (10.09.2010)
способ получения монатина -  патент 2351587 (10.04.2009)
противовирусное терапевтическое средство -  патент 2350600 (27.03.2009)
способ получения производного глутаминовой кислоты и производного пироглутаминовой кислоты и новое промежуточное соединение для получения этих производных -  патент 2342360 (27.12.2008)
n-ацильные производные аминокислот, их фармацевтически приемлевые соли, фармацевтическая композиция и применение в качестве гиполипидемических средств -  патент 2335495 (10.10.2008)

Класс A61K38/05 дипептиды

Патенты РФ в классе A61K38/05:
стабильные составы бортезомиба -  патент 2529800 (27.09.2014)
средства для профилактики и лечения заболеваний суставов и способы их применения -  патент 2521973 (10.07.2014)
лекарственный препарат в суппозиториях для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний, вызванных вирусом простого герпеса 1-го типа и цитомегаловирусом и способ лечения им детей -  патент 2521272 (27.06.2014)
способ и средство активации irf-3 для лечения и профилактики заболеваний, вызываемых (+) phk-содержащими вирусами -  патент 2518314 (10.06.2014)
средство пептидной структуры, обладающее противовоспалительным, антибактериальным, ранозаживляющим, регенеративным, анальгетическим, противоожоговым действием и лекарственные формы на его основе -  патент 2517213 (27.05.2014)
фармацевтическая композиция на основе лигандов паттерн-распознающих рецепторов, способ ее использования в качестве иммуностимулятора для лечения инфекций, вызванных бактериальными и вирусными патогенами, способ ее использования в качестве адъюванта в составе вакцин -  патент 2497541 (10.11.2013)
макроциклические ингибиторы вируса гепатита с -  патент 2486189 (27.06.2013)
дипептидные пролекарства и их применение -  патент 2486183 (27.06.2013)
кристаллический d-изоглутамил-d-триптофан и моноаммонийная соль d-изоглутамил-d-триптофана -  патент 2483077 (27.05.2013)
применение l-карнозина для приготовления нанопрепарата, обладающего антигипоксической и антиоксидантной активностью -  патент 2482867 (27.05.2013)

Класс A61K31/4172  имидазолалканкарбоновые кислоты, например гистидин

Патенты РФ в классе A61K31/4172:
производные 1-(1-адамантил)этиламина и их противовирусная активность -  патент 2461544 (20.09.2012)
состав хлорида натрия для восстановления или разбавления лекарственных препаратов -  патент 2432157 (27.10.2011)
лечебно-профилактическое средство для эмали зуба -  патент 2423119 (10.07.2011)
фармацевтическая композиция, содержащая n-ацильные производные аминокислот, и их применение в качестве противоаллергических, антианафилактических и противовоспалительных средств -  патент 2406727 (20.12.2010)
глазные капли -  патент 2404768 (27.11.2010)
применение производных глутаровой кислоты или их фармацевтически приемлемых солей в качестве противоаритмических средств -  патент 2373934 (27.11.2009)
способ защиты висцеральных органов при хирургическом лечении торакоабдоминальных аневризм аорты -  патент 2343856 (20.01.2009)
способ снижения активности кровяных пластинок при метаболическом синдроме -  патент 2337683 (10.11.2008)
n-ацильные производные аминокислот, их фармацевтически приемлевые соли, фармацевтическая композиция и применение в качестве гиполипидемических средств -  патент 2335495 (10.10.2008)
замещенные омега-азолилалкананилиды, способ их получения и применение в качестве антиагрегантов -  патент 2322440 (20.04.2008)

Класс A61K31/405  индолалканкарбоновые кислоты; их производные, например триптофан, индометацин

Патенты РФ в классе A61K31/405:
замещенные циклогексилдиамины -  патент 2526251 (20.08.2014)
производное аминокислоты -  патент 2499790 (27.11.2013)
комплекс, образованный полисахаридом и нвр -  патент 2498820 (20.11.2013)
лечебное средство с противоопухолевой активностью на основе акадезина -  патент 2494744 (10.10.2013)
способы увеличения абсорбции пептидов, пептидомиметиков и других субстратов гастроинтестинального транспортного белка -  патент 2494737 (10.10.2013)
лечение агонистом мелатонина -  патент 2488392 (27.07.2013)
композиция для подавления аппетита, улучшения тонуса и настроения с природной антидепрессантной активностью и с антиастеническим действием -  патент 2484840 (20.06.2013)
капсула и лекарственное средство для профилактики сердечно-сосудистых заболеваний -  патент 2477123 (10.03.2013)
пероральная система доставки лекарственных веществ в область кишечника -  патент 2467766 (27.11.2012)
способ синтеза сульфонилгалогенидов и сульфонамидов из солей сульфоновых кислот -  патент 2466983 (20.11.2012)

Класс A61P29/00 Анальгетики нецентрального действия, жаропонижающие или противовоспалительные средства, например противоревматические средства; нестероидные противовоспалительные средства (НПВС)

Патенты РФ в классе A61P29/00:
ациламино-замещенные производные конденсированных циклопентанкарбоновых кислот и их применение в качестве фармацевтических средств -  патент 2529484 (27.09.2014)
модулирующие jak киназу хиназолиновые производные и способы их применения -  патент 2529019 (27.09.2014)
способ повышения адаптационных возможностей предстательной железы крыс при действии низких сезонных температур -  патент 2528906 (20.09.2014)
новые бензолсульфонамидные соединения, способ их получения и применение в терапии и косметике -  патент 2528826 (20.09.2014)
новое производное пиразол-3-карбоксамида, обладающее антагонистической активностью в отношении рецептора 5-нт2в -  патент 2528406 (20.09.2014)
соединения и способы лечения боли и других заболеваний -  патент 2528333 (10.09.2014)
средство пептидной структуры, обладающее анальгетическим, противовоспалительным действием, и лекарственные формы на его основе -  патент 2528094 (10.09.2014)
2, 5-дизамещенные арилсульфонамидные антагонисты ссr3 -  патент 2527165 (27.08.2014)
1-(4-этилфенил)-2-[3-(4-этилфенил)-2-(1н)-хиноксалинилиден]-1-этанон, обладающий анальгетической активностью -  патент 2525397 (10.08.2014)
средство для лечения ревматоидного артрита -  патент 2524152 (27.07.2014)

Класс A61P17/00 Лекарственные средства для лечения дерматологических заболеваний

Патенты РФ в классе A61P17/00:
способ выбора лечения акне у женщин -  патент 2529789 (27.09.2014)
способ лечения трофических язв -  патент 2528973 (20.09.2014)
новое производное пиразол-3-карбоксамида, обладающее антагонистической активностью в отношении рецептора 5-нт2в -  патент 2528406 (20.09.2014)
ранозаживляющее средство на основе штамма trichoderma harzianum rifai -  патент 2528065 (10.09.2014)
новый агонист бета рецептора тиреоидного гормона -  патент 2527948 (10.09.2014)
композиция внутреннего применения для коррекции гормонального старения кожи -  патент 2527344 (27.08.2014)
лечение инфекции поверхности тела человека или животного -  патент 2527341 (27.08.2014)
мазь доктора рустамова -  патент 2527335 (27.08.2014)
концентрированная гидрогелевая микрокапсульная композиция и перевязочное средство из нее -  патент 2527331 (27.08.2014)
эмульсия "масло-в-воде" мометазона и пропиленгликоля -  патент 2526911 (27.08.2014)

Класс A61P37/08 противоаллергические средства

Патенты РФ в классе A61P37/08:
гипоаллергенная дерматологическая композиция -  патент 2526833 (27.08.2014)
профилактика и лечение аллергической диареи -  патент 2522240 (10.07.2014)
лечение дерматологических аллергических состояний -  патент 2521357 (27.06.2014)
низкомолекулярное полисульфатированное производное гиалуроновой кислоты и содержащее его лекарственное средство -  патент 2519781 (20.06.2014)
терапевтическое средство для лечения ринита -  патент 2502519 (27.12.2013)
способ предотвращения использования кортикостероидов -  патент 2500408 (10.12.2013)
производные нафталинкарбоксамида в качестве ингибиторов протеинкиназы и гистондеацетилазы, способы их получения и применение -  патент 2497809 (10.11.2013)
биологически активный комплекс, обладающий противоаллергическим действием -  патент 2493861 (27.09.2013)
соединения 2,4-пиримидиндиаминов и их применение -  патент 2493150 (20.09.2013)
2-s-бензилзамещенные пиримидины в качестве антагонистов crth2 -  патент 2491279 (27.08.2013)

Класс A61P11/00 Лекарственные средства для лечения дыхательной системы

Патенты РФ в классе A61P11/00:
лекарственное средство для лечения патологического синдрома и способ лечения острых и хронических заболеваний дыхательноый системы и синдрома кашля -  патент 2529783 (27.09.2014)
способ лечения внебольничной пневмонии у детей -  патент 2529782 (27.09.2014)
новое производное пиразол-3-карбоксамида, обладающее антагонистической активностью в отношении рецептора 5-нт2в -  патент 2528406 (20.09.2014)
6-замещенные изохинолины и изохинолиноны полезные в качестве ингибиторов rho-киназы -  патент 2528229 (10.09.2014)
фармацевтическая композиция и способ лечения острых и хронических заболевания дыхательной системы и синдрома кашля -  патент 2528093 (10.09.2014)
2, 5-дизамещенные арилсульфонамидные антагонисты ссr3 -  патент 2527165 (27.08.2014)
способ предоперационной коррекции дыхательных расстройств у больных колоректальным раком -  патент 2526828 (27.08.2014)
способ профилактики и лечения бронхиальной астмы, осложняющих ее респираторных вирусных инфекций и других воспалительных заболеваний дыхательных путей -  патент 2526146 (20.08.2014)
тозилатная соль производного 5-пиразолил-2-пиридона, полезная в лечении copd -  патент 2526038 (20.08.2014)
способ профилактики массовых желудочно-кишечных и респираторных болезней молочных поросят -  патент 2524664 (27.07.2014)


Наверх