препарат для лечения мастита у коров в период лактации

Формула изобретения

Препарат для лечения мастита у коров в период лактации, содержащий в качестве антибиотика линкомицина гидрохлорид, в качестве эмульгаторов - моноглицерид мягкий и моноглицерид дистиллированный и масляную основу, отличающийся тем, что он дополнительно содержит диоксидин, а в качестве масляной основы - вазелиновое масло при следующем соотношении компонентов, %:

Линкомицина гидрохлорид	2,0-4,0
Диоксидин	0,5-1,0
Моноглицерид мягкий	3,0
Моноглицерид дистиллированный	3,0
Вазелиновое масло	до 100

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к препаратам для лечения мастита у коров в период лактации.

Мастит - воспаление молочной железы, которое возникает в ответ на воздействие неблагоприятных механических, физических, химических и биологических факторов.

Основными факторами, способствующими возникновению и развитию мастита, являются техническое несовершенство доильных установок, нарушение технологии и правил машинного доения коров. В начале возникает раздражение, которое при многократном повторении переходит в асептическое воспаление - скрытый мастит. Снижается общая и локальная (вымени) резистентность, создаются условия для проникновения и размножения различной условно-патогенной и патогенной микрофлоры, обусловливающей воспаление различных форм от субклинической, протекающей самостоятельно на протяжении одной, двух лактаций и приводящую долю к атрофии, или трансформируясь в клинически выраженный (серозный, катаральный) мастит и т.д.

Заболевания молочной железы коров имеют широкое распространение и наносят животноводству большой экономический ущерб, исчисляющийся сотнями миллионов рублей. Он слагается из недополучения молока, преждевременной выбраковки коров, высокой заболеваемости молодняка. Все это нарушает ритмично-поточное производство молока, снижает производственную и экономическую эффективность молочного скотоводства, что негативно сказывается на обеспечении молочными продуктами население страны. Поэтому разработка новых высокоэффективных средств, методов лечения и профилактики мастита у коров имеет актуальное значение.

В настоящее время отечественные и зарубежные производители выпускают препараты для лечения больных маститом коров, включающие антибиотики, сульфаниламидные, нитрофурановые и другие средства. Но не все они дают желаемый эффект, что прежде всего объясняется снижением чувствительности к данным средствам микрофлоры, вызывающей мастит. В связи с этим возникает необходимость создания новых комплексных препаратов широкого спектра действия.

В качестве аналога к предлагаемому препарату нами взят Мастисан А, рекомендованный для лечения мастита у животных, содержащий в своем составе калиевую или натриевую соль бензилпеницилина, стрептомицин, норсульфазол или сульфадимезин, суспензированный в растительном масле, при следующем соотношении компонентов, ЕД и г/мл:

Натриевая или калиевая соль бензилпеницилина - 20000 ЕД/мл

Сульфат стрептомицина - 20000 ЕД/мл

Норсульфазол или сульфадимезин - 0,004 г/мл

Масляная основа до 1 мл

Доза введения составляет 5-20 мл в сосковую цистерну вымени с интервалом 24 часа до полного излечения [Ветеринарные препараты России. Справочник. М., 2004. Ч.1. - С.469].

Известен препарат Мастисан Б, содержащий в своем составе:

Сульфат неомицина - 250 ЕД/мл

Сульфадимезин - 0,0035 г/мл

Метилурацил - 0,0035 г/мл

Масляная основа до 1 мл

[Антибиотики, сульфаниламиды и нитрофураны в ветеринарии: Справочник / В.Ф.Ковалев, И.Б.Виолин и др. - М.: Агропромиздат, 1988. - С.124].

Известен препарат Мастисан Е, содержащий в своем составе:

Эритромицин 11250 ЕД/мл

Сульфадимезин - 0,004 г/мл

Масляная основа до 1 мл

[Ветеринарные препараты России. Справочник. М., 2004. Ч.1. - С.469].

Известен препарат диеномаст. Диеномаст - комплексный препарат, содержащий гентамицина сульфат (2000 мкг/г), диоксидин (1000 мкг/г), воск пчелиный и масло вазелиновое [Ветеринарные препараты России. Справочник. М., 2004. Ч.1. - С.461].

Общим недостатком известных препаратов является низкая терапевтическая эффективность, так как при многократном применении антибиотикосодержащих препаратов отмечали формирование устойчивости (резистентности) к ним микроорганизмов. Большинство препаратов, выпускаемых в виде суспензий, при хранении расслаиваются, а растительные масла окисляются.

Прототипом изобретения является препарат для лечения мастита у коров в период лактации, состоящий из следующих компонентов (г в 100 мл): неомицина сульфат - 2, линкомицина гидрохлорид - 2, моноглицерид мягкий - 3, моноглицерид дистиллированный - 3, масло - до 100 [RU, 2180559, С1, 18.04.2002 г.].

Данный препарат недостаточно эффективен, т.к. комбинация антимикробных средств данного препарата обеспечивает лишь аддитивное действие.

Технический результат изобретения - повышение терапевтической эффективности.

Технический результат достигается за счет использования линкомицина гидрохлорида как антибиотика широкого спектра действия и диоксидина, эффективного при инфекциях, трудно поддающихся лечению другими антимикробными средствами, в виде стабильной суспензии в масляной основе, не действующей раздражающе на ткани вымени.

По сравнению с препаратом-прототипом существенными отличительными признаками предлагаемого изобретения являются признаки, характеризующие введение в состав препарата антибиотика широкого спектра действия - линкомицина гидрохлорида и химиотерапевтического средства - диоксидина, эффективного при недостаточной активности других антибиотиков. В качестве эмульгаторов в основу препарата введены моноглицерид мягкий и моноглицерид дистиллированный в эффективном количестве.

Препарат для лечения мастита у коров в период лактации состоит из следующих компонентов:

Линкомицина гидрохлорид - 2,0-4,0%

Диоксидин - 0,5-1,0%

Моноглицерид мягкий - 3,0%

Моноглицерид дистиллированный - 3,0%

Масло вазелиновое - до 100%.

Достижение технического результата от использования предлагаемого препарата объясняется тем, что входящий в состав лекарственного средства линкомицина гидрохлорид эффективен в отношении большинства грамположительных кокковидных (стафилококков, стрептококков, пневмококков) и некоторых грамположительных палочковидных микроорганизмов, микоплазм и бактерий, устойчивых к другим антибиотикам. Линкомицин подавляет синтез белка в микробной клетке путем взаимодействия с SOS - субъединицами рибосом. Он блокирует образование полисомальных функциональных комплексов и трансляцию связанных с транспортом РНК аминокислот [Навашин С.М., Фомина И.П. Рациональная антибиотикотерапия. М., «Медицина», 1982, с.146-149]. Входящий в препарат диоксидин относится к хиноксалиновому ряду - 1,4-ди-N-окись-2,3-ди(оксиметил), хиноксалин проявляет высокую антимикробную активность в отношении грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов. Наибольшему влиянию диоксидина подвержены грамотрицательные микроорганизмы [«Временное наставление по применению диоксидина в ветеринарии». Утв. Главным управлением ветеринарии 5 ноября 1991 г.].

Введенные в основу препарата моноглицериды используются в качестве эмульгаторов и стабилизаторов пищевых жиров, косметических кремов, фармацевтических мазей, пластификаторов [Химическая энциклопедия. М.: Изд. «Сов. Энциклопедия», 1989, т.1, с.584-585].

Заявляемый препарат применяют в период лактации для лечения всех форм мастита. Перед введением препарата секрет вымени выдаивают из пораженной доли и утилизируют, сосок дезинфицируют. Содержимое щприца тюбика или флакона перед применением нагревают до 37°С, тщательно встряхивают до получения равномерной суспензии, из флакона набирают в стерильный шприц 10 мл. Шприц или шприц-тюбик плотно прижимают к наружному отверстию соскового канала, препарат вводят в сосковую цистерну вымени осторожным нажатием на поршень шприца. После введения проводят легкий массаж соска пораженной доли вымени снизу вверх. В зависимости от тяжести воспалительного процесса препарат вводят в дозе 10 мл один раз в сутки (лучше после вечернего доения) с интервалом 24 часа до полного излечивания пораженной доли вымени (2-4 раза).

Во время лечения и в течение 3 суток после последнего введения препарата молоко из пораженных долей вымени выдаивают в отдельную посуду, обезвреживают и утилизируют, а из остальных долей вымени скармливают животным после кипячения.

Для получения дисперсной среды 6,0% моноглицеридов растворяют при температуре 80°С в вазелиновом масле, добавленном до 100%. Смесь автоклавируют при температуре 120°С в течение 1,5-2 часов. В охлажденную до температуры 30-35°С основу вносят навеску порошков: линкомицина гидрохлорида 2-4% и диоксидина 0,5-1%, предварительно измельченных на шаровой мельнице, включают мешалку на 15-20 минут и фасуют.

По внешнему виду препарат представляет собой устойчивую маслянистую суспензию вязкой консистенции со специфическим запахом, светло -желтого цвета с зеленоватым оттенком. При температуре 35°С суспензия имеет жидкую консистенцию. Препарат полностью сохраняет исходные свойства (внешний вид, цвет, подлинность, массовая доля диоксидина, массовая доля линкомицина гидрохлорида, микробная чистота, механические включения) и не расслаивается в течение 12 месяцев хранения при температуре от 0 до 25°С.

Использование в пищу людям молока допускается через 72 часа после последнего введения при условии полного исчезновения клинических признаков мастита. Убой животных на мясо разрешается не ранее, чем через 7 суток после последнего введения препарата. Мясо животных, вынужденно убитых ранее этого срока, может быть использовано для производства мясокостной муки или в корм пушным животным.

Проверка эффективности препарата проведена на коровах, принадлежащих ЗАО «Должанское» Вейделеевского района Белгородской области, ЗАО «Манино» Калачаевского района Воронежской области, АОНН «Успенское» и СПК «Здоровецкий» Ливенского района Орловской области. Сущность технического решения поясняется примерами.

Пример 1

С целью проверки эффективности прототипа изобретения была изучена антимикробная активность линкомицина, неомицина и их комбинации в отношении основных возбудителей мастита. Результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1
Антимикробная активность линкомицина, неомицина и их комбинации в отношении основных возбудителей мастита, мкг/мл
№ п/п	Культура микроба	Линкомицина гидрохлроид	Неомицина сульфат	Линкомицин: неомицин 1:1
1	Стафилококк золотистый-209 Р	12,5	12,5	12,5
2	Стрептококк агалактийный-586	12,5	25,0	12,5
3	Кишечная палочка 0138	100	12,5	25,0

Проведенное изучение антимикробной активности данного лекарственного препарата и отдельных его компонентов показало, что комбинация антимикробных средств данного препарата обеспечивает аддитивное действие, т.е. общий эффект равен сумме действия каждого компонента из них в отдельности.

Пример 2

Для выявления оптимального соотношения компонентов и эффективности препарата были составлены три рецептуры.

Рецептура № 1: диоксидин 1,0%; линкомицин 2,0%; моноглицерид дистиллированный 3,0%; моноглицерид мягкий 3,0%; масло вазелиновое - до 100%.

Рецептура 2: диоксидин 0,5%; линкомицин 4,0%; моноглицерид дистиллированный 3,0%; моноглицерид мягкий 3,0%; масло вазелиновое - до 100%.

Рецептура 3: диоксидин 0,75%; линкомицин 3,25%; моноглицерид дистиллированный 3,0%; моноглицерид мягкий 3,0%; масло вазелиновое - до 100%.

С целью определения эффективности предлагаемого препарата была подобрана 71 корова больная субклиническим маститом, разделенная по принципу аналогов на четыре группы. Животные первой, второй и третьей групп были подвергнуты терапии предлагаемым препаратом (различной рецептуры) в дозе 10 мл один раз в сутки в течение 2-4 дней, четвертой - диеномастом согласно наставлению по его применению. Через 7-10 дней животных обследовали клинически, а молоко с 2% раствором мастидина, пробой отстаивания, выборочно путем подсчета количества соматических клеток.

Таблица 2
Терапевтическая эффективность препарата при субклиническом мастите
Хозяйство	Подвергнуто лечению	Кратность введения препарата	Сроки выздоровления, дни	Выздоровело коров	Излечено долей
коров	долей	кол-во	%	кол-во	%
Рецептура 1	20	23	2,23±0,1	2,5±0,12	18	90,0	22	95,6
Рецептура 2	20	24	2,26±0,09	2,65±0,05	18	90,0	21	87,5
Рецептура 3	36	38	2,15±0,12	2,5±0,11	35	97,2	36	94,7
Диеномаст	35	39	2,48±0,12	2,75±0,09	31	88,5	34	87,1
Таблица 3
Терапевтическая эффективность препарата при катаральном мастите у коров
Хозяйство	Подвергнуто лечению	Кратность введения препарата	Сроки выздоровления, дни	Выздоровело коров	Излечено долей
коров	долей	кол-во	%	кол-во	%
Рецептура 1	20	24	3,28±0,05	3,60±0,09	17	85,0	22	91,7
Рецептура 2	20	23	3,31±0,09	3,62±0,11	18	90,0	20	86,9
Рецептура 3	25	28	3,22±0,07	3,55±0,09	23	92,0	26	92,8
Диеномаст	24	29	3,4±0,05	3,85±0,1	19	84,2	25	86,2

Таблица 4
Терапевтическая эффективность препарата при гнойно-катаральном мастите у коров
Хозяйство	Подвергнуто лечению	Кратность введения препарата	Сроки выздоровления, дни	Выздоровело коров	Излечено долей
коров	долей	кол-во	%	кол-во	%
Рецептура 1	10	13	4,3±0,12	4,9±0,11	8	80,0	11	84,6
Рецептура 2	10	12	4,49±0,12	4,87±0,11	8	80,0	9	75,0
Рецептура 3	22	26	4,2±0,11	4,7±0,11	19	86,3	23	88,5
Диеномаст	21	24	4,7±0,1	5,5±0,12	15	71,4	18	75,0
Таблица 5
Терапевтическая эффективность препарата коров при серозном мастите у коров
Хозяйство	Подвергнуто лечению	Кратность введения препарата	Сроки выздоровления, дни	Выздоровело коров	Излечено долей
коров	долей	кол-во	%	кол-во	%
Рецептура 1	10	14	2,9±0,11	3,61±0,009	8	80,0	11	78,6
Рецептура 2	10	16	3,1±0,11	3,69±0,01	8	80,0	13	81,3
Рецептура 3	21	27	2,88±0,08	3,65±0,09	18	85,7	22	81,5
Диеномаст	21	29	3,15±0,11	3,85±0,1	16	76,1	22	75,8

Как видно из представленных в таблицах 2-5 данных, более высоким терапевтическим действием обладает предлагаемый препарат (рецептура 1; 2; 3) в сравнении с диеномастом. Наиболее высоким терапевтическим действием обладает предлагаемый препарат рецептуры № 3, эффективность его при субклиническом мастите составила 97,2%, катаральном - 92,0%; гнойно-катаральном - 86,3%; серозном - 85,7%, что на 8,7; 7,0; 9,6; 14,9 и 9,6% выше, чем при лечении диеномастом.

Таким образом, высокий терапевтический эффект достигнут при применении следующей композиции препарата для лечения мастита у коров в перид лактации: диоксидин 0,75%; линкомицин 3,25%; моноглицерид дистиллированный 3,0%; моноглицерид мягкий 3,0%; масло вазелиновое - до 100%.

Пример 3.

Влияние препарата (диоксидин 0,75%; линкомицин 3,25%; моноглицерид дистиллированный 3,0%; моноглицерид мягкий 3,0%; масло вазелиновое - до 100%) для лечения мастита у коров на молочную железу и организм лактирующих коров изучили на трех клинически здоровых животных, находящихся на 3-4 месяце лактации, путем интрацистернального введения препарата, подогретого до 37°С, в дозе 10 мл в левую переднюю долю вымени, а правая передняя доля служила контролем. Через 3; 6; 12; 48 и 72 часа после введения препарата коров обследовали клинически, а также отбирали пробы молока из этих четвертей вымени для оценки реакции с 2% раствором мастидина, определения количества соматических клеток (СК) и постановки пробы отстаивания.

Результаты исследований приведены в таблицах 6 и 7.

Таблица 7
Влияние интрацистернального введения препарата для лечения мастита у коров в период лактации на показатели общего состояния организма
Сроки исследования, час	Показатели
Т°, С	Пульс	Кол-во дыхат. движений за 1 мин	Кол-во сокр. рубца за 5 мин
До введения	38,1±1,3	70,7±0,78	17,0±0,54	5,7±0,19
Через: 3	38,1±0,16	71,0±0,09	17,0±0,54	5,3±0,19
6	38,2±0,12	71,3±1,56	17,3±0,19	5,7±0,19
12	38,0±0,12	72,3±1,56	18,0±0,39	6,7±0,19
24	38,1±0,08	75,3±1,56	18,0±0,39	6,7±0,19
48	38,1±0,08	75,3±0,39	18,7±0,39	6,0±0,39
72	38,2±0,16	76,3±0,98	18,7±0,19	6,0±0,39

Установлено, что после интрацистернального введения препарата для лечения мастита у коров в период лактации в дозе 10 мл происходит увеличение числа соматических клеток (таблица 6) через 3 часа в 1,45 раза (с 316,6±17,1 до 459,8±13,9 тыс/мл), через 6 ч - в 2,57; через 12 ч - в 3,9; через 24 ч - в 4,98; через 48 ч - в 2,22 раза и к 72 ч - приближается к исходному уровню (368,9±30,4 тыс/мл). При этом реакция секрета вымени с 2% раствором мастидина в течение 48 часов была положительной, а проба отстаивания - отрицательной. После интрацистернального введения препарата не установлено заметных изменений со стороны общего состояния организма животных.

Таким образом, препарат для лечения мастита в период лактации обладает умеренным раздражающим действием на молочную железу коров, признаки которого исчезают через 72 часа после введения, и может быть рекомендован для интрацистернального введения с целью лечения мастита у коров.

Пример 4

Изучение антимикробного действия препарата для лечении мастита у коров в период лактации (диоксидин 0,75%; линкомицин 3,25%; моноглицерид дистиллированный 3,0%; моноглицерид мягкий 3,0%; масло вазелиновое - до 100%) и его компонентов провели методом серийных разведений в жидкой питательной среде. Для проведения опытов использовали патогенные культуры микробов, выделенные из секрета больных маститом коров, а также музейные штаммы.

Данные по определению антимикробной активности приведены в таблице 8.

Таблица 8
Антимикробная активность препарата для лечения мастита у коров и его компонентов в отношении основных возбудителей мастита, МПК, мкг/мл
№ п/п	Культура микроба	Линкомицин	Диоксидин	Препарат для лечения мастита у коров
1	Стафилококк золотистый-209 Р	12,5	25,0	6,3
2	Стафилококк золотистый-589	6,3	25,0	3,1
3	Стрептококк агалактийный-586	12,5	12,5	6,3
4	Стрептококк агалактийный-587	25,0	25,0	3,1
5	Стрептококк агалактийный-588	25,0	50,0	3,1
6	Стрептококк гр. D-640	100	50,0	25,0
7	Кишечная палочка 643	100	50,0	25,0

Как видно из представленных данных, комбинация диоксидина в соотношении 1:4 обладает широким спектром и высоким антимикробным действием в отношении основных возбудителей мастита в концентрации 3,1-25,0 мкг/мл, что превышает антимикробную активность диоксидина и линкомицина в отдельности в 2-16 раз.

При изучении антибактериального эффекта сочетания линкомицина и диоксидина в опытах in vitro нами было установлено, что минимальная подавляющая концентрация каждого из антибиотиков в присутствии другого снижается в значительной степени. Например, в присутствии линкомицина гидрохлорида в концентрации 2,51-5,12 мкг/мл минимально подавляющая концентрация (МПК) диоксидина в отношении стафилококка золотистого-209Р и стафилококка золотистого-586 снижается до 0,59-1,18 мкг/мл (в 21,2 раза). И наоборот, наличие в комбинации диоксидина в концентрации 1,18 мкг/мл снижает МПК линкомицина до 5,12 мкг/мл (в 2,44 раза).

При добавлении к диоксидину линкомицина гидрохлорида в концентрации 2,51-5,12 мкг/мл МПК первого в отношении стрептококка агалактийного (штаммы 586; 587; 588) снижается до 0,59-1,18 (в 21,0-84,7 раза). В то же время присутствие диоксидина в концентрации 0,59-1,18 мкг/мл в отношении данного микроорганизма снижает МПК линкомицина до 2,51-5,12 мкг/мл (в 2,44-9,9 раз).

В отношении кишечной палочки 643 и стрептококка группы D, в присутствии линкомицина в концентрации 4,9 мкг/мл, МПК диоксидина снижается до 10,6 мкг/мл (в 4,9 раза), а наличие диоксидина в концентрации 10,6 мкг/мл в отношении данных микроорганизмов снижает МПК линкомицина гидрохлорида до 4,9 мкг/мл (в 10,6 раза).

Обоснованность данной комбинации обусловлена тем, что в лекарственной форме одновременно сочетаются два антибактериальных компонента. Это обеспечивает синергидный эффект за счет того, что оба компонента действуют в одну фазу клеточного роста, но на разные метаболические пути.

Диоксидин проявляет высокую антимикробную активность в отношении грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов. Наибольшему влиянию диоксидина подвержены грамотрицательные микроорганизмы [Временное наставление по применению диоксидина в ветеринарии. Утв. Главным управлением ветеринарии 5 ноября 1991 г.]. В основе антибактериального действия диоксидина лежит избирательное подавление синтеза ДНК. Кроме этого, препарат снижает активность внеклеточной нуклеазы и плазмокоагулазы у микроорганизмов, что приводит к нарушению функции генетического аппарата микробной клетки и в результате подавляется синтез биологически активных макромолекул, являющихся факторами патогенности.

Линкомицин эффективен в отношении большинства грамположительных кокковидных (стафилококков, стрептококков, пневмококков) и некоторых грамположительных палочковидных микроорганизмов, микоплазм и бактерий, устойчивых к другим антибиотикам. Линкомицин подавляет синтез белка в микробной клетке путем взаимодействия с SOS - субъединицами рибосом. Он блокирует образование полисомальных функциональных комплексов и трансляцию связанных с транспортом РНК аминокислот [Навашин С.М., Фомина И.П. Рациональная антибиотикотерапия. М., «Медицина», 1982, с.146-149].

Пример 5.

В производственных условиях показано (таблица 9), что предложенный препарат в совокупности линкомицина гидрохлорида и диоксидина обеспечивает достижение нового сверхсуммарного эффекта по сравнению с одним из препаратов-аналогов (диеномастом).

Таблица 9
Эффективность терапии коров при различных формах мастита
	Подвергнуто лечению	Кратность введения препарата	Выздоровело	Излечено
коров	долей	коров	%	долей	%
Субклинический мастит
Диеномаст	76	92	2,6±0,1	69	90,8	81	88,0
Препарат для лечения мастита у коров в период лактации	79	90	2,28±0,11	74	93,7	85	94,4
Катаральный мастит
Диеномаст	66	79	3,48±0,13	54	81,8	65	82,2
Препарат для лечения мастита у коров в период лактации	66	76	3,30±0,07	61	92,4	69	90,8
Гнойно-катаральный мастит
Диеномаст	52	62	4,73±0,11	38	73,1	45	72,6
Препарат для лечения мастита у коров в период лактации	55	63	3,78±0,06	47	85,5	53	84,1
Серозный мастит
Диеномаст	47	67	3,5±0,19	36	76,6	51	76,1
Препарат для лечения мастита у коров в период лактации	48	69	3,0±0,13	40	83,3	57	82,6

Таким образом, препарат для лечения мастита у коров в период лактации обладает более высокой, по сравнению с прототипом, терапевтической эффективностью, обусловленной использованием линкомицина гидрохлорида как антибиотика широкого спектра действия и диоксидина, эффективного при инфекциях, трудно поддающихся лечению другими антимикробными средствами, в виде стабильной суспензии на масляной основе, не действующей раздражающе на ткани молочной железы.