искусственные белки с пониженной иммуногенностью

Формула изобретения

1. Искусственный слитый белок формулы:

A-L_n -X,

где А означает часть Fc молекулы антитела или целое антитело или его фрагменты sFv, Fab, Fab', F(ab') ₂, выбранные из группы, включающей:

моноклональное антитело 225 и производные,

моноклональное антитело 425 и производные,

моноклональное антитело KS 1/4 и производные,

моноклональное антитело 14.18 и производные,

анти-CD _x-антитело, где x это целое число 1-25;

Х означает цитокин, выбранный из группы, включающей IL-2, IL-12, ЕРО, G-CSF, GM-CSF, TNF , эндостатин и ангиостатин,

L означает линкерный пептид,

n=0 или 1,

полученный из родительского искусственного слитого белка и имеющий аминокислотную последовательность, которая отличается от последовательности указанного родительского искусственного слитого белка и проявляющий пониженную иммуногенность за счет снижения количества Т-клеточных эпитопов относительно количества эпиопов родительского слитого белка при экспозиции в иммунной системе данного вида, где указанные Т-клеточные эпитопы имеют пептидную последовательность, которая обладает способностью связываться со связывающимися группами молекулы МСН класса II, причем по меньшей мере А не имеет или имеет пониженное число Т-клеточных эпитопов, причем указанный иммуногенно модифицированный искусственный слитый белок получают с помощью способа, предусматривающего

(i) идентификацию одного или более потенциальных Т-клеточных эпитопов в пределах аминокислотной последовательности слитого белка, где указанная идентификация включает:

отбор сегментов белка, перекрывающихся на 1-5 аминокислотных остатков, где длина каждого из сегментов составляет 13 аминокислотных остатков;

последовательное вычисление константы связывания каждого сегмента со связывающей бороздкой молекулы МНС класса II с использованием оценивающей функции Бема, модифицированной тем, что дополнительно учитывается вклад энергии ван-дер-ваальсового отталкивания и липофильного взаимодействия попарно между всеми липофильными атомами выбранных сегментов белка и всеми липофильными атомами связывающей бороздки молекулы МНС класса II, необязательно, сравнение расчетных данных с экспериментальными данными о сродстве пептидов с МНС класса II;

выбор сегментов с наиболее высокими значениями энергии связывания или необязательно, выбор сегментов со значениями энергии связывания, превышающими значения экспериментальных данных:

(ii) изменение in silico от 1 до 9 аминокислотных остатков в пределах идентифицированных потенциальных последовательностей Т-клеточных эпитонов на аминокислотные остатки, устраняющие способность указанных эпитопов связываться с МНС класса II, с сохранением функции белка;

(iii) получение вариантов измененных последовательностей Т-клеточных эпитопов методом рекомбинантной ДНК;

(iv) испытание указанных вариантов на наличие пониженной иммуногенности при неизменной терапевтической активности и, при необходимости,

(v) повторение шагов (i)-(iv).

2. Слитый белок по п.1, в котором X является IL2.

3. Способ конструирования слитого белка по п.1, включающий:

(i) идентификацию одного или более потенциальных Т-клеточных эпитопов в пределах аминокислотной последовательности слитого белка, где указанная идентификация включает:

отбор сегментов белка, перекрывающихся на 1-5 аминокислотных остатков, где длина каждого из сегментов составляет 13 аминокислотных остатков;

последовательное вычисление константы связывания каждого сегмента со связывающей бороздкой молекулы МНС класса II с использованием оценивающей функции Бема, модифицированной тем, что дополнительно учитывается вклад энергии ван-дер-ваальсового отталкивания и липофильного взаимодействия попарно между всеми липофильными атомами выбранных сегментов белка и всеми липофильными атомами связывающей бороздки молекулы МНС класса II, необязательно, сравнение расчетных данных с экспериментальными данными о сродстве пептидов с МНС класса II;

выбор сегментов с наиболее высокими значениями энергии связывания или необязательно, выбор сегментов со значениями энергии связывания, превышающими значения экспериментальных данных:

(ii) изменение in silico от 1 до 9 аминокислотных остатков в пределах идентифицированных потенциальных последовательностей Т-клеточных эпитопов на аминокислотные остатки, устраняющие способность указанных эпитопов связываться с МНС класса II, с сохранением функции белка;

(iii) получение вариантов измененных последовательностей Т-клеточных эпитопов методом рекомбинантной ДНК;

(iv) испытание указанных вариантов на наличие пониженной иммуногенности при неизменной терапевтической активности и, при необходимости,

(v) повторение шагов (i)-(iv).

4. Применение слитого белка по п.1 для приготовления фармацевтической композиции для лечения опухоли.

Приоритет по пунктам:

19.02.2001 по пп.1, 2, 4;

05.04.2001 по п.3.

Описание изобретения к патенту

Текст описания приведен в факсимильном виде.