пептидные векторы

Формула изобретения

1. Соединение формулы (I)



где X выбран из группы, содержащей [5-(R)-этил-9,10-дифтор-1,4,5,13-тетрагидро-3H,15H-оксепино[3', 4':6', 7]индолизино[1,2-b]хинолин-3,15-дион]-5-O-;

камптотецин;

доксорубицин и

паклитаксел;

каждый В¹, В², В³ и В ⁴ означает независимо для каждого случая (Doc)_m , (Aepa)_n, -(C(O)-A1-A2-A3-A4-A5-C(O))_s - или (аминокислоту)_р, где аминокислота выбрана из группы, содержащей Gly, Val, Abu, Gaba, Sar, Lys;

каждый из A1 и А5 означает независимо для каждого случая CR¹ R²;

каждый из R¹ и R² означает независимо для каждого случая Н;

каждый из А2, A3 и А4 означает независимо для каждого случая CR⁶ R⁷, (CH₂)_t или отсутствует;

каждый из R⁶и R⁷ означает независимо для каждого случая Н;

m равно независимо для каждого случая 0, 1, 2, 3, 4, 5 или 6;

n равно незвисимо для каждого случая 0 или 1;

р равно незвисимо для каждого случая 0, 1 или 2;

s равно незвисимо для каждого случая 0 или 1;

t равно независимо для каждого случая 2 или 3;

Z означает пептид, выбранный из следующего списка:

-K-(Dtyr)-(Dtyr)-цикло[CY-(DTrp)-K-(Abu)-C]T-NH₂ ,

-(Dphe)-цикло[CY-(DTrp)-K-(Abu)-С]T-NH₂,

-(Dphe)-цикло[C-( Tyr)-(DTrp)-KVC]T-NH₂,

-QWAV-( Аlа)-HLL-NH₂,

-(Dphe)-QWAV-( Ala)-HLL-NH₂,

-QWAV-( Ala)-HL-(Nle)-NH₂,

-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Phe-Nle-NH₂; (SEQ ID NO:6)

-DPhe-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Leu-Nle-NH₂;

-Caeg-цикло(DCys-3Pal-DTrp-Lys-DCys)-Thr(Bzl)-Tyr-NH ₂,

(pGln)-HWSY-(Dlys[N -])-LRPG-NH₂,

при условии, что

когда X является доксорубицином, по меньшей мере одно из m и n не равно 0, и

когда Х является паклитакселом, В ¹ представляет собой (аминокислоту)_р, выбранную из списка Sar, Gly, Val, Gaba, и р равно 1 или 2,

или его фармацевтически приемлемая соль.

2. Соединение по п.1, которое имеет следующую структурную формулу:

; или

;

или его фармацевтически приемлемая соль.

3. Соединение по п.1, где Х означает соединение, которое имеет следующую структурную формулу:

;

или его фармацевтически приемлемая соль.

4. Соединение по п.1, где Х означает соединение, которое имеет следующую структурную формулу:

;

или его фармацевтически приемлемая соль.

5. Соединение по любому из пп.1-4, где Z означает аналог соматостатина в соответствии с формулой

-DPhe-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂;

-DPhe-цикло(Cys- Tyr-DTrp-Lys-Val-Cys)-Thr-NH₂;

-Lys-DTyr-DTyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂;

-Caeg-цикло(DCys-3Pal-DTrp-Lys-DCys)-Thr(Bzl)-Tyr-NH ₂;

или его фармацевтически приемлемая соль.

6. Соединение по любому из пп.1-4, где Z означает аналог LHRH в соответствии с формулой

Glp-His-Trp-Ser-Tyr-DLys[N -]-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂

или его фармацевтически приемлемая соль.

7. Соединение по любому из пп.1-4, где Z означает аналог бомбезина в соответствии с формулой

-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Leu-Leu-NH₂; (SEQ ID NO:4)

-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Phe-Nle-NH₂; (SEQ ID NO:6)

-DPhe-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Leu-Leu-NH₂;

-DPhe-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Leu-Nle-NH₂;

или его фармацевтически приемлемая соль.

8. Соединение по п.1, в котором по меньшей мере одно из m и n не равно 0, или его фармацевтически приемлемая соль.

9. Соединение по п.1, где указанное соединение содержит формулу в соответствии со следующим:

;
;
;
;
;
;
;
;
(SEQ ID NO: 4)
;
;
(SEQ ID NO: 4)
;
;
(SEQ ID NO: 14)
;
;
;
;
;
;
;
;
(SEQ ID NO: 6)
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;
;

;
;
;
;
;
(SEQ ID NO: 12)
;
;
(SEQ ID NO: 12)
;
(SEQ ID NO: 12)
;
(SEQ ID NO: 12)
;
(SEQ ID NO: 12)
;
(SEQ ID NO: 12)

;
;
;
;
;
;
;

или его фармацевтически приемлемая соль.

10. Соединение по п.8, где указанная формула содержит

;
;
;
;
;
(SEQ ID NO: 12)
;
(SEQ ID NO: 12) или

;

(SEQ ID NO: 12)

или его фармацевтически приемлемая соль.

11. Соединение по п.9, где указанное соединение содержит следующую формулу:

;

или его фармацевтически приемлемая соль.

12. Соединение по п.9, где указанное соединение содержит следующую формулу:

;

или его фармацевтически приемлемая соль.

13. Соединение по п.1, где указанное соединение содержит группу формулы:



-(Doc)₄-Аера-DРhe-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

-(Doc)₄-Aepa-Lys-DTyr-DTyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂



-Aepa-Lys-DTyr-DTyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

-Lys-DTyr-DTyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

-(Doc)₄-Lys-DTyr-DTyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

-(Doc)₆-Lys-DTyr-DTyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂



-Aepa-DPhe-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Val-Cys)-Thr-NH ₂

-DPhe-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Val-Cys)-Thr-NH ₂



-Aepa-(Doc)₂-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Leu-Leu-NH₂ (SEQ ID NO: 4)

-Aepa-(Doc) ₄-DPhe-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Leu-Leu-NH₂

-Aepa-(Doc) ₄-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Leu-Leu-NH₂ (SEQ ID NO:4)

-Aepa-(Doc) ₂-DPhe-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Leu-Leu-NH₂

-Aepa-(Doc) ₄-Gaba-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Leu-Leu-NH₂ (SEQ ID NO: 14)

-(Doc)₄-Aepa-Gaba-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Leu-Leu-NH₂ (SEQ ID NO: 12)





-DPhe-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

-Aepa-DPhe-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

-(Doc)₄-Aepa-DPhe-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

-(Doc)₄-DPhe-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

-(Doc)₆-DPhe-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂



-Lys-DTyr-DTyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

-Lys-Lys-Lys-DTyr-DTyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

-Aepa-Lys-DTyr-DTyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂



-DPhe-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂



-(Doc)₄-Lys-DТyr-DТyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

-(Doc)₂-Lys-DTyr-DTyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

-Doc-Lys-DTyr-DTyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂



-(Doc)₄-Lys-DTyr-DTyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

-Lys-DTyr-DTyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂



-(Doc)₄-Lys-DTyr-DTyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂



-(Doc)₄-Aepa-Gaba-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Leu-Nle-NH₂ (SEQ ID NO: 12)







-(Doc)₄-Аера-Caeg-цикло(DCys-3Pal-DTrp-Lys-DCys)-Thr(Bzl)Tyr-NH ₂



-(Doc)₄-Aepa-DPhe-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂





-Aepa-(Doc)₂-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Phe-Nle-NH₂ (SEQ ID NO: 6)



-(Doc)₄-Aepa-Gaba-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Leu-Nle-NH₂ (SEQ ID NO: 12)

-(Doc)₄-Aepa-DPhe-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂



-(Doc)₄-Aepa-Gaba-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Leu-Nle-NH₂ (SEQ ID NO: 12)

-(Doc)₄-Gaba-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Leu-Nle-NH₂ (SEQ ID NO: 12)











-Aepa-Lys-DTyr-DTyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

-DPhe-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

-Aepa-Lys-DTyr-DTyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

-(Doc)₄-Аера-Lys-DРhе-цикло(Cys-3ITyr-DTrp-Lys-Val-Cys)-Thr-NH ₂



-(Doc)₄-Аера-DРhе-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂



-Suc-(Doc)₃-Aepa-DPhe-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

14. Соединение по п.1, которое представляет собой соединение, выбранное из группы следующих соединений:







или его фармацевтически приемлемую соль.

15. Соединение по п.1, которое представляет собой соединение



или его фармацевтически приемлемую соль.

16. Соединение по п.1, которое представляет собой соединение



или его фармацевтически приемлемую соль.

17. Соединение по п.1, которое представляет собой соединение



или его фармацевтически приемлемую соль.

18. Фармацевтическая композиция для лечения патологических состояний, связанных с аберрантной или нежелательной пролиферацией, миграцией и/или физиологической активностью клеток, содержащая эффективное количество соединения по любому из пп.1-13 или его фармацевтически приемлемой соли и фармацевтически приемлемый носитель.

19. Фармацевтическая композиция по п.18, содержащая эффективное количество соединения по п.14 или его фармацевтически приемлемой соли и фармацевтически приемлемый носитель.

20. Фармацевтическая композиция по п.18, содержащая эффективное количество соединения по п.15 или его фармацевтически приемлемой соли и фармацевтически приемлемый носитель.

21. Фармацевтическая композиция по п.18, содержащая эффективное количество соединения по п.16 или его фармацевтически приемлемой соли и фармацевтически приемлемый носитель.

22. Фармацевтическая композиция по п.18, содержащая эффективное количество соединения по п.17 или его фармацевтически приемлемой соли и фармацевтически приемлемый носитель.

23. Применение соединения по любому из пп.1-13 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения заболевания у нуждающегося в этом субъекта, где указанное заболевание выбрано из группы, состоящей из фиброза, доброкачественной гиперплазии предстательной железы, атеросклероза, рестеноза, рака молочной железы, рака ободочной кишки, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, рака легкого, мелкоклеточного рака легкого, рака яичника, эпидермального рака и гемопоэтического рака.

24. Применение соединения по любому из пп.1-13 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения заболевания у нуждающегося в этом субъекта, где указанное заболевание выбрано из группы, состоящей из доброкачественной гиперплазии предстательной железы, рестеноза, рака молочной железы, рака ободочной кишки, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, рака легкого, мелкоклеточного рака легкого, рака яичника, эпидермального рака и гемопоэтического рака.

25. Применение соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения заболевания у нуждающегося в этом субъекта, где указанное заболевание характеризуется нежелательной пролиферацией клеток, которые экспрессируют один или несколько рецепторов соматостатинового типа.

26. Применение соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения заболевания у нуждающегося в этом субъекта, где указанное заболевание характеризуется нежелательной пролиферацией клеток, которые экспрессируют один или несколько рецепторов бомбезинового типа.

27. Применение соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения заболевания у нуждающегося в этом субъекта, где указанное заболевание характеризуется нежелательной пролиферацией клеток, которые экспрессируют один или несколько рецепторов типа LHRH.

28. Применение соединения по п.14 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения заболевания у нуждающегося в этом субъекта, где указанное заболевание выбрано из группы, состоящей из фиброза, доброкачественной гиперплазии предстательной железы, атеросклероза, рестеноза, рака молочной железы, рака ободочной кишки, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, рака легкого, мелкоклеточного рака легкого, рака яичника, эпидермального рака и гемопоэтического рака.

29. Применение соединения по п.14 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения заболевания у нуждающегося в этом субъекта, где указанное заболевание характеризуется нежелательной пролиферацией клеток, которые экспрессируют один или несколько рецепторов соматостатинового типа.

30. Применение соединения по п.14 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения заболевания у нуждающегося в этом субъекта, где указанное заболевание характеризуется нежелательной пролиферацией клеток, которые экспрессируют один или несколько рецепторов бомбезинового типа.

31. Применение соединения по п.14 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения заболевания у нуждающегося в этом субъекта, где указанное заболевание характеризуется нежелательной пролиферацией клеток, которые экспрессируют один или несколько рецепторов типа LHRH.

32. Применение соединения по п.15 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения заболевания у нуждающегося в этом субъекта, где указанное заболевание выбрано из группы, состоящей из фиброза, доброкачественной гиперплазии предстательной железы, атеросклероза, рестеноза, рака молочной железы, рака ободочной кишки, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, рака легкого, мелкоклеточного рака легкого, рака яичника, эпидермального рака и гемопоэтического рака.

33. Применение соединения по п.15 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения заболевания у нуждающегося в этом субъекта, где указанное заболевание характеризуется нежелательной пролиферацией клеток, которые экспрессируют один или несколько рецепторов соматостатинового типа.

34. Применение соединения по п.15 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения заболевания у нуждающегося в этом субъекта, где указанное заболевание характеризуется нежелательной пролиферацией клеток, которые экспрессируют один или несколько рецепторов бомбезинового типа.

35. Применение соединения по п.15 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения заболевания у нуждающегося в этом субъекта, где указанное заболевание характеризуется нежелательной пролиферацией клеток, которые экспрессируют один или несколько рецепторов типа LHRH.

36. Применение соединения по п.16 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения заболевания у нуждающегося в этом субъекта, где указанное заболевание выбрано из группы, состоящей из фиброза, доброкачественной гиперплазии предстательной железы, атеросклероза, рестеноза, рака молочной железы, рака ободочной кишки, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, рака легкого, мелкоклеточного рака легкого, рака яичника, эпидермального рака и гемопоэтического рака.

37. Применение соединения по п.16 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения заболевания у нуждающегося в этом субъекта, где указанное заболевание характеризуется нежелательной пролиферацией клеток, которые экспрессируют один или несколько рецепторов соматостатинового типа.

38. Применение соединения по п.16 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения заболевания у нуждающегося в этом субъекта, где указанное заболевание характеризуется нежелательной пролиферацией клеток, которые экспрессируют один или несколько рецепторов бомбезинового типа.

39. Применение соединения по п.16 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения заболевания у нуждающегося в этом субъекта, где указанное заболевание характеризуется нежелательной пролиферацией клеток, которые экспрессируют один или несколько рецепторов типа LHRH.

40. Применение соединения по п.17 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения заболевания у нуждающегося в этом субъекта, где указанное заболевание выбрано из группы, состоящей из фиброза, доброкачественной гиперплазии предстательной железы, атеросклероза, рестеноза, рака молочной железы, рака ободочной кишки, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, рака легкого, мелкоклеточного рака легкого, рака яичника, эпидермального рака и гемопоэтического рака.

41. Применение соединения по п.17 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения заболевания у нуждающегося в этом субъекта, где указанное заболевание характеризуется нежелательной пролиферацией клеток, которые экспрессируют один или несколько рецепторов соматостатинового типа.

42. Применение соединения по п.17 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения заболевания у нуждающегося в этом субъекта, где указанное заболевание характеризуется нежелательной пролиферацией клеток, которые экспрессируют один или несколько рецепторов бомбезинового типа.

43. Применение соединения по п.17 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения заболевания у нуждающегося в этом субъекта, где указанное заболевание характеризуется нежелательной пролиферацией клеток, которые экспрессируют один или несколько рецепторов типа LHRH.

Описание изобретения к патенту

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Данное изобретение относится к терапевтическим композициям и их применению в лечении патологических состояний. Более конкретно, данное изобретение обеспечивает соединения, композиции и способы для лечения патологических состояний, связанных с аберрантной или нежелательной клеточной пролиферацией, миграцией и/или физиологической активностью.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Большинство цитотоксических лекарственных средств проявляет нежелательные токсичные побочные действия вследствие отсутствия у них селективного действия в отношении тканей или клеток, требующих терапевтического действия. Испытывались различные подходы для достижения селективной доставки цитотоксических агентов к клеткам-мишеням.

С использованием лигандов биологических рецепторов в качестве носителей лекарственных средств для нацеливания этих лекарственных средств на представляющие интерес клетки можно уменьшить токсические побочные действия и в значительной степени улучшить эффективность доставки лекарственных средств. Например, в международной патентной публикации № WO 97/19954 описаны конъюгаты антрациклинового цитотоксического агента, такого как доксорубицин, с пептидным гормоном, таким как LHRH, бомбезин или соматостатин. Этот цитотоксический агент ковалентно присоединен к пептиду через линкер формулы -С(О)-(СН ₂)_n-C(O)-, n=0-7.

Подобным образом, в Европейской патентной заявке № ЕР1118336 описаны конъюгаты аналогов соматостатина например, октреотида, ланреотида и вапреотида, и цитотоксического лекарственного средства, такого как паклитаксел, доксорубицин или камптотецин, через спейсер, который, как указано, имеет структуру -С(О)-(СН ₂)_n-C(O)-, n=0-7.

В публикации патентной заявки США № 2002/0115596 описаны конъюгаты цитотоксических агентов и олигопептидов, причем указано, что аминокислотные последовательности этих пептидов расщепляются преимущественно свободным специфическим антигеном предстательной железы. Сообщается, что такие конъюгаты применимы для лечения рака предстательной железы и доброкачественной гиперплазии предстательной железы.

В публикации патентной заявки США № 2003/0064984 описаны конъюгаты цитотоксических аналогов СС-1065 и дуокармицинов с расщепляемыми линкерными плечами и нацеливающим агентом, таким как антитело или пептид. Показано, что эти цитотоксические аналоги высвобождаются при расщеплении этого линкера.

В международной патентной заявке № WO 02/34237 описаны конъюгаты активных агентов, ковалентно присоединенных непосредственно к полипептиду. Утверждается, что этот полипептид стабилизирует активный агент, например, в желудке, посредством конформационной защиты.

Однако остается существенная потребность в нацеленных цитотоксических лекарственных средствах с улучшенными свойствами в отношении специфичности нацеливания, системной токсичности и фармакокинетики.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Данное изобретение обеспечивает цитотоксические соединения направленного действия (нацеленные), содержащие цитотоксическую часть молекулы, связанную с нацеливающей частью, такой, например, как лиганд биологического рецептора. Эти две части молекулы связаны через линкер, например, как описано формулой I:

Х-В¹-В ²-В³-В⁴-Z (I)

где Х означает цитотоксический или цитостатический агент;

каждый из В¹, В², В³ и В⁴ означает, независимо для каждого случая, (Doc)_m, (Aepa)_n, -(C(О)-А1-А2-А3-А4-А5-С(О)) _s- или (аминокислота)_р,

каждый из А1 и А5 означает, независимо для каждого случая, СR¹ R²;

каждый из R¹ и R ² означает, независимо для каждого случая, Н, F, Br, Cl, I, C(_1-30)алкил, C(_2-30)алкенил, замещенный C(_1-30)алкил, замещенный С(_2-30)алкенил, SR³, S(O)R⁴ или S(O)₂R⁵ , или R¹ и R² вместе могут образовывать С(_3-30)циклоалкил, С(_3-30)гетероцикл или С(_5-30)арильное кольцо;

каждый R ³, R⁴ и R⁵ означает, независимо для каждого случая, C(_1-30)алкил, C(_2-30)алкенил, замещенный C(_1-30)алкил или замещенный С(_2-30 )алкенил;

каждый из А², А³ и А⁴ означает, независимо для каждого случая, СR ⁶R⁷, O, S, (CH₂)_t или отсутствует;

каждый или R⁶ и R ⁷ означает, независимо для каждого случая, H, F, Br, Cl, I, C(_1-30)алкил, C(_2-30)алкенил, замещенный C(_1-30)алкил, замещенный С(_2-30)алкенил, SR³, S(O)R⁴ или S(O)₂R⁵ , или R⁶ и R⁷ вместе могут образовывать кольцевую систему;

m равно, независимо для каждого случая, 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10;

n равно, независимо для каждого случая, 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10;

р равно, независимо для каждого случая, 0, 1 или 2;

s равно, независимо для каждого случая, 1, 2, 3, 4 и 5;

t равно, независимо для каждого случая, 0, 1, 2 или 3;

Z означает лиганд биологического рецептора, его аналог или производное указанного лиганда или указанного аналога;

при условии, что:

когда Х является доксорубицином или производным доксорубицина, по меньшей мере одно из m и n не равно 0, и

когда Х является паклитакселом или производным паклитаксела, В ¹ является (аминокислота)_р и р равно 1 или 2.

Первый предпочтительный вариант осуществления связан с соединением в соответствии с формулой (I), в котором Х означает цитотоксическую часть молекулы. Более предпочтительно Х означает антрациклин. Еще более предпочтительно, Х означает камптотецин, производное камптотецина, паклитаксел, производное паклитаксела, доксорубицин или производное доксорубицина; при условии, что когда Х является доксорубицином или производным доксорубицина, по меньшей мере одно из m и n не равно 0, и когда Х является паклитакселом или производным паклитаксела, В¹ является (аминокислота)_р и р равно 1 или 2.

В дополнительном предпочтительном варианте осуществления указанного первого предпочтительного варианта осуществления данное изобретение связано с соединениями формулы (I), в которых

Х означает камптотецин или производное камптотецина, причем указанное производное камптотецина представляет собой

или Х означает паклитаксел или производное паклитаксела, причем указанное производное паклитаксела представляет собой

или Х означает доксорубицин или производное доксорубицина, причем указанное производное доксорубицина представляет собой

Второй предпочтительный вариант осуществления связан с соединением в соответствии с формулой (I), в котором лиганд Z является соматостатином, бомбезином или LHRH или их аналогом или производным указанного лиганда или указанного аналога.

В следующем предпочтительном варианте указанного второго предпочтительного варианта осуществления данное изобретение связано с соединениями формулы (I), в которых Z означает

аналог соматостатина в соответствии с формулой:

-DPhe-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH₂;

-DPhe-цикло(Cys-3ITyr-DTrp-Lys-Val-Cys)-Thr-NH ₂;

-DPhe-цикло(Cys-3ITyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂;

-DPhe-цикло(Cys-3ITyr-DTrp-Lys-Thr-Cys)-Thr-NH ₂;

-Lys-DTyr-DTyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂;

-Caeg-цикло(DCys-3Pal-DTrp-Lys-DCys)-Thr(Bzl)-Tyr-NH ₂;

-D2Nal-цикло[Cys-Tyr-DTrp-Lys-Val-Cys]-Thr-NH ₂;

-DPhe-цикло[Cys-Phe-DTrp-Lys-Thr-Cys]-Thr-ол;

-цикло({4-(-NH-C2H4-NH-CO-O)Pro}-Phg-DTrp-Lys-Tyr(4-Bzl)-Phe) или

-DPhe-цикло[Cys-Tyr-DTrp-Lys-Val-Cys]-Trp-NH ₂;

или его фармацевтически приемлемой солью;

или аналог LHRH в соответствии с формулой:

Glp-His-Trp-Ser-Tyr-DLys(-)-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂;

Glp-His-Trp-Ser-Tyr-DOrn(-)-Leu-Arg-Pro-Gly-NH ₂;

Glp-His-Trp-Ser-Tyr-DDab(-)-Leu-Arg-Pro-Gly-NH ₂;

Glp-His-Trp-Ser-Tyr-DDap(-)-Leu-Arg-Pro-Gly-NH ₂;

Glp-His-Trp-Ser-Tyr-DApa(-)-Leu-Arg-Pro-Gly-NH ₂;

Glp-His-Trp-Ser-Tyr-DLys(-)-Leu-Arg-Pro-NHEt;

Glp-His-Trp-Ser-Tyr-DOrn(-)-Leu-Arg-Pro-NHEt;

Glp-His-Trp-Ser-Tyr-DDab(-)-Leu-Arg-Pro-NHEt;

Glp-His-Trp-Ser-Tyr-DDap(-)-Leu-Arg-Pro-NHEt;

Glp-His-Trp-Ser-His-DLys(-)-Trp-Tyr-Pro-Gly-NH ₂;

Glp-His-Trp-Ser-His-DOrn(-)-Trp-Tyr-Pro-Gly-NH ₂;

Glp-His-Trp-Ser-His-DDab(-)-Trp-Tyr-Pro-Gly-NH ₂ или

Glp-His-Trp-Ser-His-DDap(-)-Trp-Tyr-Pro-Gly-NH ₂;

или его фармацевтически приемлемой солью;

или аналог бомбезина в соответствии с формулой:

-Gln-Trp-Ala-Ala- Ala-His-Phe-Nle-NH₂; (SEQ ID NO:1)

-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu- (CH₂-NH)-Leu-NH₂; (SEQ ID NO:2)

-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu- (CH₂-NH)-Phe-NH₂; (SEQ ID NO:3)

-Gln-Trp-Ala-Ala- Ala-His-Leu-Leu-NH₂; (SEQ ID NO:4)

-Gln-Trp-Ala-Ala- Ala-His-Leu-Nle-NH₂; (SEQ ID NO:5)

-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Phe-Nle-NH₂; (SEQ ID NO:6)

-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Ala-Nle-NH₂; (SEQ ID NO:7)

-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-Ala-Phe-Nle-NH₂; (SEQ ID NO:8)

-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Leu-NH₂; (SEQ ID NO:9)

-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH₂; (SEQ ID NO:10)

-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Phe-Met-NH ₂; (SEQ ID NO:11)

-DAla-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Phe-Nle-NH₂;

-DPhe-Gln-Trp-Ala-Ala- Ala-His-Phe-Nle-NH₂;

-DPhe-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-Ala-Phe-Nle-NH₂;

-DPhe-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Phe-Nle-NH₂;

-DPhe-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Phe-Nle-NH₂;

-DPhe-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Ala-Nle-NH₂;

-DPhe-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Leu-Leu-NH₂;

-DPhe-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Leu-Nle-NH₂;

-DPhe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu- (CH₂-NH)-Leu-NH₂;

-DPhe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu- (CH₂-NH)-Phe-NH₂;

-DPhe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH₂;

-DPhe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Phe-Met-NH₂;

-DPhe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Leu-NH₂;

или его фармацевтически приемлемой солью.

Третий предпочтительный вариант осуществления связан с соединением в соответствии с формулой (I), где по меньшей мере одно из m и n не равно 0.

Четвертый предпочтительный вариант осуществления связан с соединением, структура которого конкретно здесь описана. Более предпочтительными являются соединения и промежуточные продукты, описанные в примерах 1-79 здесь. Еще более предпочтительными являются соединения примеров 19-25, 28-32, 40-42, 45-65 и 74-79.

Пятый предпочтительный вариант осуществления связан с соединением в соответствии с формулой:

или его фармацевтически приемлемой солью. Более предпочтительными являются соединения в соответствии с формулой

или их фармацевтически приемлемая соль. Еще более предпочтительными являются соединения формулы

или их фармацевтически приемлемая соль.

Шестой предпочтительный вариант осуществления связан с соединением, выбранным из соединений, перечисленных в таблице А.

Седьмой предпочтительный вариант осуществления связан с соединением, выбранным из соединений, перечисленных в таблице В.

Восьмой предпочтительный вариант осуществления связан с соединением, выбранным из соединений, перечисленных в таблице С.

Девятый предпочтительный вариант осуществления связан с соединением, выбранным из соединений, перечисленных в таблице D.

Десятый предпочтительный вариант осуществления связан с соединением, выбранным из соединений, перечисленных в таблице Е.

Одиннадцатый предпочтительный вариант осуществления связан с соединением, выбранным из соединений, перечисленных в таблице F.

Двенадцатый предпочтительный вариант осуществления связан с соединением, выбранным из соединений, перечисленных в таблице G.

Тринадцатый предпочтительный вариант осуществления связан с соединением, выбранным из соединений, перечисленных в таблице Н.

Четырнадцатый предпочтительный вариант осуществления связан с соединением, выбранным из соединений, перечисленных в таблице I.

Во втором аспекте согласно изобретению описана фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество нацеленного цитотоксического соединения, содержащего цитотоксическую часть молекулы, связанную с нацеливающей частью молекулы, такой, например, как лиганд биологического рецептора, или его фармацевтически приемлемая соль, и фармацевтически приемлемый носитель. Эти две молекулы связаны через линкер, например, как описано определяемой здесь формулой I.

В третьем аспекте согласно изобретению описан способ лечения заболевания у субъекта, нуждающегося в этом, предусматривающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества нацеленного цитотоксического соединения в соответствии с определяемой здесь формулой I или его фармацевтически приемлемой соли, причем указанное заболевание выбрано из группы, состоящей из фиброза, доброкачественной гиперплазии предстательной железы, атеросклероза, рестеноза, рака молочной железы, рака ободочной кишки, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, рака легкого, мелкоклеточного рака легкого, рака яичника, эпидермального рака и гемопоэтического рака.

В четвертом аспекте согласно изобретению описан способ лечения заболевания у субъекта, нуждающегося в этом, предусматривающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества нацеленного цитотоксического соединения в соответствии с определяемой здесь формулой I или его фармацевтически приемлемой соли, причем указанное заболевание выбрано из группы, состоящей из доброкачественной гиперплазии предстательной железы, рестеноза, рака молочной железы, рака ободочной кишки, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, рака легкого, мелкоклеточного рака легкого, рака яичника, эпидермального рака и гемопоэтического рака.

В пятом аспекте согласно изобретению описан способ лечения заболевания у субъекта, нуждающегося в этом, предусматривающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества нацеленного цитотоксического соединения в соответствии с определяемой здесь формулой I или его фармацевтически приемлемой соли, причем указанное заболевание характеризуется нежелательной пролиферацией клеток, которые экспрессируют один или несколько рецепторов соматостатинового типа.

В шестом аспекте согласно изобретению описан способ лечения заболевания у субъекта, нуждающегося в этом, предусматривающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества нацеленного цитотоксического соединения в соответствии с определяемой здесь формулой I, или его фармацевтически приемлемой соли, причем указанное заболевание характеризуется нежелательной пролиферацией клеток, которые экспрессируют один или несколько рецепторов бомбезинового типа.

В седьмом аспекте согласно изобретению описан способ лечения заболевания у субъекта, нуждающегося в этом, предусматривающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества нацеленного цитотоксического соединения в соответствии с определяемой здесь формулой I, или его фармацевтически приемлемой соли, причем указанное заболевание характеризуется нежелательной пролиферацией клеток, которые экспрессируют один или несколько рецепторов LHRH-типа.

В данном контексте термин «аминокислота» относится к любым природно встречающимся и неприродным аминокислотам, в том числе, но не только, к -аминокислотам, -аминокислотам, -аминокислотам, и аминокислоты могут быть либо D-аминокислотами, либо L-аминокислотами, если нет других указаний. За исключением N-концевой аминокислоты, все аббревиатуры (например, Ala) аминокислот в этом описании обозначают структуру -NH-C(R)(R')-CO-, где каждый из R и R', независимо означает водород или боковую цепь аминокислоты (например, R=СН₃ и R'=Н для Ala), или R и R' могут быть соединены с образованием кольцевой системы. Для N-концевой аминокислоты эта аббревиатура означает структуру (R²R³)-N-C(R)(R')-CO-, где R² и R³ имеют значения, определяемые в формуле (I).

Примерный перечень предпочтительных аминокислот включает в себя, но не ограничивается ими, Ala, Arg, Asp, Asn, Cys, Glu, pGlu, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, Val, -Ala, Act, Apc, GABA, Apn, Ahx, Ahp, Aoc, Anc, Adc, Aun, Ado, Acc, A3c, A4c, A5c, A6c, Aib, Orn, Dab, Dap, hArg, 4Pal, 3Pal, 2Pal, Abu, Cha, Cit, Nle, Nva, Taz, 2Thi, 3Thi, Dhp, Dmt, 2Fua, 3Hyp, 4Hyp, Inc, Inp, Ktp, hLeu, Oic, hPhe, Pip, Sar, Thz, Tic, Tle, Phg и Caeg.

Пептидная часть соединений согласно изобретению может быть также обозначена посредством другого формата, например (Tyr¹¹)Соматостатин(1-14)-NH ₂, с замененной аминокислотой (замененными аминокислотами) из природной последовательности, помещенными между первым набором скобок (например, Tyr¹¹ вместо Phe¹¹ в соматостатине). Числа между вторым набором скобок относятся к количеству аминокислот, присутствующих в этом пептиде (например, соматостатин (1-11) означает аминокислоты 1-11 пептидной последовательности для соматостатина). Обозначение NH₂ , например, в (Tyr¹¹)Соматостатин(1-14)-NH ₂ указывает на то, что С-конец этого пептида является амидированным. (Tyr¹¹)Соматостатин(1-14) или альтернативно (Tyr ¹¹)Соматостатин(1-14)-ОН указывает на то, что С-конец является свободной кислотой.

Алкил означает углеводородную группу, содержащую один или несколько атомов углерода, в которой множественные атомы углерода, если они присутствуют, соединены простыми связями. Алкильная углеводородная группа может иметь прямую цепь или содержит одно или несколько ответвлений или одну или несколько циклических групп.

Замещенный алкил означает алкил, в котором один или несколько атомов этой углеводородной группы замещены одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена (например, фтора, хлора, брома или иода), -ОН, -CN, -SH, -NH₂, -NHCH ₃, -NO₂, -C_1-2-алкила, замещенного 1-6 атомами галогена, -CF₃, -OCH₃, -OCF ₃ и -(СН₂)_0-4-СООН. В различных вариантах присутствуют 1, 2, 3 или 4 заместителя. Присутствие -(СН ₂)_0-4-СООН приводит к образованию алкилкарбоновой кислоты. Примеры алкилкарбоновых кислот, содержащих -(СН ₂)_0-4-СООН или состоящих из -(СН₂ )_0-4-СООН, включают в себя 2-норборнануксусную кислоту, трет-масляную кислоту и 3-циклопентилпропионовую кислоту.

«Гетероалкил» означает алкил, в котором один или несколько атомов углерода в углеводородной группе заменены одной или несколькими из следующих групп: амино, амидо, -О- или карбонил. В различных вариантах осуществления присутствуют 1 или 2 гетероатома.

Замещенный гетероалкил означает гетероалкил, в котором один или несколько атомов водорода углеводородной группы заменены одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена (т.е. фтора, хлора, брома и иода), -ОН, -CN, -SH, -NH₂, -NHCH₃, -NO₂, -C_1-2-алкила, замещенного 1-6 атомами галогена, -CF₃, -OCH₃ , -OCF₃ и -(СН₂)_0-4-СООН. В различных вариантах присутствуют 1, 2, 3 или 4 заместителя.

«Алкенил» означает углеводородную группу, состоящую из двух или более атомов углерода, в которой присутствуют одна или несколько двойных связей углерод-углерод. Алкенильная углеводородная группа может иметь прямую цепь или содержит одно или несколько ответвлений или циклических групп.

«Замещенный алкенил» означает алкенил, в котором один или несколько атомов водорода углеводородной группы заменены одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена (т.е. фтора, хлора, брома и иода), -ОН, -CN, -SH, -NH₂, -NHCH₃, -NO₂, -C_1-2 -алкила, замещенного 1-6 атомами галогена, -CF₃, -OCH ₃, -OCF₃ и -(СН₂)_0-4-СООН. В различных вариантах присутствуют 1, 2, 3 или 4 заместителя.

«Арил» означает необязательно замещенную ароматическую группу с по меньшей мере одним кольцом, имеющим конъюгированную пи-электронную систему, содержащую до двух конъюгированных или конденсированных кольцевых систем. Арил включает в себя карбоциклическую арильную, гетероциклическую арильную и биарильную группы. Предпочтительно арил является 5- или 6-членным кольцом. Предпочтительные атомы для гетероциклического арила являются одним или несколькими атомами серы, кислорода и/или азота. Примеры арила включают в себя фенил, 1-нафтил, 2-нафтил, индол, хинолин, 2-имидазол и 9-антрацен. Арильные заместители выбраны из группы, состоящей из -С_1-4 алкила, -С_1-4 алкокси, галогена (т.е. фтора, хлора, брома и иода), -ОН, -CN, -SH, -NH₂, -NO₂ , -C_1-2-алкила, замещенного 1-5 атомами галогена, -CF₃, -OCF₃ и -(СН₂)_0-4 -СООН. В различных вариантах присутствуют 1, 2, 3 или 4 заместителя.

«Алкиларил» означает «алкил», присоединенный к «арилу».

Термин циклоалкил включает в себя моноциклоалкильную группу или бициклоалкильную группу с указанным количеством атомов углерода, известную специалистам с квалификацией в данной области.

Термин гетероцикл включает в себя моноциклические и бициклические системы, имеющие один или несколько гетероатомов, таких как кислород, азот и/или сера. Эти кольцевые системы могут быть ароматическими, такими как, например, пиридин, индол, хинолин, пиримидин, тиофен (также известный как тиенил), фуран, бензотиофен, тетразол, дигидроиндол, индазол, N-формилиндол, бензимидазол, тиазол и тиадиазол. Эти кольцевые системы могут быть также неароматическими, такими как, например, пирролидин, пиперидин, морфолин и т.п.

Химику с обычной квалификацией в данной области будут известны некоторые комбинации содержащих гетероатом заместителей, перечисленных в данном изобретении, определяющих соединения, которые будут менее стабильными при физиологических условиях. Таким образом, такие соединения являются менее предпочтительными.

Doc означает 8-амино-3,6-диоксаоктановую кислоту, представленную структурой

.

Aepa означает 4-(2-аминоэтил)-1-карбоксиметилпиперазин, представленный структурой

.

Suc или succ означает сукцинил, представленный формулой

.

Glut или глутарил имеет следующую структуру

.

Камптотециновая часть молекулы имеет следующую структуру

.

Части производного камптотецина включают в себя, но не ограничиваются ими

Паклитакселовая часть молекулы имеет следующую структуру

Доксорубициновая часть молекулы имеет следующую структуру

Часть молекулы, образованная производным доксорубицина, включает в себя, но не ограничиваются ею

DLys(-) представлен структурой

.

DOrn(-) представлен структурой

.

DDab(-) представлен структурой

.

DDap(-) представлен структурой

.

DApa(-) представлен структурой

.

Некоторые используемые здесь аббревиатуры определяются следующим образом:

Abu - -аминомасляная кислота

Асс - 1-амино-1-цикло(С ₃-С₉)алкилкарбоновая кислота

А3с - 1-амино-1-циклопропанкарбоновая кислота

А4с - 1-амино-1-циклобутанкарбоновая кислота

А5с - 1-амино-1-циклопентанкарбоновая кислота

А6с - 1-амино-1-циклогексанкарбоновая кислота

Асt - 4-амино-4-карбокситетрагидропиран, представленный структурой

Aib - -аминоизомасляная кислота

Ala или А - аланин

-Ala - бета-аланин

Арс означает структуру

Arg или R - аргинин

hArg - гомоаргинин

Asn или N - аспарагин

Asp или D - аспарагиновая кислота

Ava - 5-аминовалериановая кислота

Cha - -циклогесилаланин

Cys или С - цистеин

Dab - 2,4-диаминомасляная кислота

Dap - 2,3-диаминопропионовая кислота

Dhp - 3,4-дегидропролин

Dmt - 5,5-диметилтиазолидин-4-карбоновая кислота

Doc - 8-амино-3,6-диоксаоктановая кислота, показанная структурой

2Fua - -(2-фурил)аланин

Gln или Q - глутамин

Glu или Е - глутаминовая кислота

pGlu или Glp - пироглутаминовая кислота

Gly или G - глицин

His или Н - гистидин

3Hyp - транс-3-гидрокси-L-пролин, т.е. (2S,3S)-3-гидроксипирролидин-2-карбоновая кислота

4Hyp - 4-гидроксипролин, т.е. (2S,4R)-4-гидроксипирролидин-2-карбоновая кислота

Ile или I - изолейцин

Inc - индолин-2-карбоновая кислота

Inp - изонипекотиновая кислота

Ktp - 4-кетопролин

Leu или L - лейцин

hLeu - гомолейцин

Lys или K - лизин

Met или М - метионин

Nle - норлейцин

Nva - норвалин

Oic - октагидроиндол-2-карбоновая кислота

Orn - орнитин

2Pal - -(2-пиридинил)аланин

3Pal - -(3-пиридинил)аланин

4Pal - -(4-пиридинил)аланин

Phe или F - фенилаланин

hPhe - гомофенилаланин

Pip - пипеколиновая кислота

Pro или Р - пролин

Sar - саркозин или N-метилглицин

Ser или S - серин

Taz - -(4-тиазолил)аланин, показанный структурой

2Thi - -(2-тиенил)аланин

3Thi - -(3-тиенил)аланин

Thr или Т - треонин

Thz - тиазолидин-4-карбоновая кислота

Tic - 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3-карбоновая кислота

Tle - трет-лейцин

Trp или W - триптофан

Tyr или Y - тирозин

Val или V - валин

Gaba - 4-аминомасляная кислота

Apn - 5-аминопентановая кислота

Ahx - 6-аминогексановая кислота

Ahp - 7-аминогептановая кислота

Aoc - 8-аминооктановая кислота

Anc - 9-аминононановая кислота

Adc - 10-аминодекановая кислота

Aun - 11-аминоундекановая кислота

Ado - 12-аминододекановая кислота

Phg - фенилглицин

Caeg - N-(2-аминоэтил)-N-(2-цитозинил-1-оксоэтил)глицин, показанный структурой

Некоторые другие используемые здесь аббревиатуры определяются следующим образом:

Aloc: аллилоксикарбонил

Вос: трет-бутилоксикарбонил

Bhoc: бензгидрилоксикарбонил

Bzl: бензил

DCM: дихлорметан

Dde: 1-(4,4-диметил-2,6-диоксоциклогекс-1-илидин)этил

DIC: N,N-диизопропилкарбодиимид

DIЕA: диизопропилэтиламин

Dmab: 4-{N-(1-(4,4-диметил-2,6-диоксоциклогексилиден)-3-метилбутил)амино}бензил

DMAP: 4-(диметиламино)пиридин

DMF: диметилформамид

DNP: 2,4-динитрофенил

Et: этил

Fmoc: флуоренилметилоксикарбонил

HBTU: гексафторфосфат 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония

cHex: циклогексил

HOAT: гексафторфосфат О-(7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония

HOВt: 1-гидроксибензотриазол

Mmt: 4-метокситритил

NMP: N-метилпирролидон

Pbf: 2,2,4,6,7-пентаметилгидробензофуран-5-сульфонил

tBu: трет-бутил

TIS: триизопропилсилан

TOS: тозил

trt: тритил

TFA: трифторуксусная кислота

TFFH: гексафторфосфат тетраметилфторфорамидиния

Z: бензилоксикарбонил

Греческая буква «пси» используется здесь для указания того, что пептидная связь заменена псевдопептидной связью. При обозначении аминокислотной последовательности термин используется в контексте -А- -(Х-Х')-В, где А представляет собой аминоацильный радикал, карбонильная группа которого модифицирована до Х, а В представляет собой аминоацильный радикал, -аминогруппа которого модифицирована до Х'. Х и Х' служат символами элементов последовательности, разделенных связью например-Leu- -(CH₂-NH)-Leu.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

В данном изобретении описаны нацеленные цитотоксические соединения (направленного действия), содержащие цитотоксическую

часть молекулы, связанную с нацеливающей частью, такой, например, как лиганд биологического рецептора, и способы, относящиеся к их терапевтическому применению для лечения неоплазии, гиперплазии и других состояний, связанных с нежелательной пролиферацией клеток.

Примерами пептидов соматостатина, применимых в данном изобретении, являются описанные здесь пептиды. Дополнительными примерами являются пептиды, охватываемые формулами, или пептиды, специально указанные в публикациях, приведенных ниже, каждая из которых тем самым включена в качестве ссылки в ее полном виде:

Заявка РСТ № WO 03/057214 (2003)

Заявка на патент США № 20030191134 (2003)

Заявка на патент США № 20030083241 (2003)

Патент США № 6316414 (2001)

Заявка РСТ № WO 92/10215 (2002)

Заявка РСТ № WO 99/22735 (1999)

Заявка РСТ № WO 98/08100 (1998)

Заявка РСТ № WO 98/44921 (1998)

Заявка РСТ № WO 98/45285 (1998)

Заявка РСТ № WO 98/44922 (1998)

Заявка на Европейский патент № Р5 164 EU (Автор: G. Keri);

VanBinst, G. et al., Peptide Research 5:8 (1992);

Horvath, A. et al., Abstract, Conformations of Somatostatin Analogs Having Antitumor Activity , 22^nd European peptide Symposium, September 13-19, 1992, Interlaken, Switzerland;

Заявка РСТ № WO 91/09056 (1991);

Заявка на Европейский патент № 0363589 А2 (1990);

Патент США № 4904642 (1990);

Патент США № 4871717 (1989);

Патент США № 4853371 (1989);

Патент США № 4725577 (1988);

Патент США № 4684620 (1987);

Патент США № 4650787 (1987);

Патент США № 4603120 (1986);

Патент США № 4585755 (1986);

Заявка на Европейский патент № 0203031 А2 (1986);

Патент США № 4522813 (1985);

Патент США № 4486415 (1984);

Патент США № 4485101 (1984);

Патент США № 4435385 (1984);

Патент США № 4395403 (1983);

Патент США № 44369179 (1983);

Патент США № 4360516 (1982);

Патент США № 4358439 (1982);

Патент США № 4328214 (1982);

Патент США № 4316890 (1982);

Патент США № 4310518 (1982);

Патент США № 4291022 (1981);

Патент США № 4238481 (1980);

Патент США № 4235886 (1980);

Патент США № 4224199 (1980);

Патент США № 4211693 (1980);

Патент США № 4190648 (1980);

Патент США № 4146612 (1979);

Патент США № 4133782 (1979);

Патент США № 5506339 (1996);

Патент США № 4261885 (1981);

Патент США № 4728638 (1988);

Патент США № 4282143 (1981);

Патент США № 4215039 (1980);

Патент США № 4209426 (1980);

Патент США № 4190575 (1980);

Европейский патент № 0389180 (1990);

Заявка на Европейский патент № 0505680 (1982);

Заявка на Европейский патент № 0083305 (1982);

Заявка на Европейский патент № 0030920 (1980);

Заявка РСТ № WO 88/05052 (1988);

Заявка РСТ № WO 90/12811 (1990);

Заявка РСТ № WO 97/01579 (1997);

Заявка РСТ № WO 91/180016 (1991);

Заявка Соединенного Королевства № GB 2095261 (1981) и

Французская заявка № FR 2552655 (1983).

Примеры пептидов LНRН (рилизинг-фактор лютеинизирующего гормона), применимых в данном изобретении, описаны здесь. Дополнительными примерами являются пептиды, охватываемые формулами, или пептиды, специально указанные в публикациях, приведенных ниже, каждая из которых тем самым включена в качестве ссылки в ее полном виде:

Заявка на Европейский патент № 0081877 (1983)

Заявка на Европейский патент № 0328089 (1989)

Заявка на Европейский патент № 0417454 (1991)

Заявка на Европейский патент № 0626170 (1994)

Заявка на Европейский патент № 0832107 (1998)

Заявка на Европейский патент № 1340768 (2003)

Заявка на патент США № 2003040482 (2003)

Патент США № 4317815 (1982)

Патент США № 4431635 (1984)

Патент США № 4581169 (1986)

Патент США № 4628044 (1986)

Патент США № 4642332 (1987)

Патент США № 4656247 (1987)

Патент США № 4721775 (1988)

Патент США № 5075224 (1991)

Патент США № 5140009 (1992)

Патент США № 5484592 (1996)

Патент США № 5885966 (1999)

Патент США № 6284733 (2001)

Патент США № 6559282 (2003)

Заявка РСТ № WO 00/24764 (2000)

Заявка РСТ № WO 90/11298 (1990)

Заявка РСТ № WO 92/15330 (1992)

Заявка РСТ № WO 94/14841 (1994)

Заявка РСТ № WO 94/25060 (1994)

Заявка РСТ № WO 96/40757 (1996)

Примеры пептидов бомбезина, применимых в данном изобретении, описаны здесь. Дополнительными примерами являются пептиды, охватываемые формулами, или пептиды, специально указанные в публикациях, приведенных ниже, каждая из которых тем самым включена в качестве ссылки в ее полном виде:

Заявка на Европейский патент № 0309297 (1989)

Заявка на Европейский патент № 0339193 (1989)

Заявка на Европейский патент № 0402852 (1990)

Заявка на Европейский патент № 0434979 (1991)

Заявка на Европейский патент № 0468497 (1992)

Заявка на Европейский патент № 0835662 (1998)

Заявка на патент США № 2003050436 (2003)

Заявка на патент США № 2003166539 (2003)

Патент США № 5084555 (1992)

Патент США № 5100873 (1992)

Патент США № 5217955 (1993)

Патент США № 5369094 (1994)

Патент США № 5410018 (1995)

Патент США № 5620955 (1997)

Патент США № 5723578 (1998)

Патент США № 5843903 (1998)

Патент США № 5877277 (1999)

Патент США № 6156725 (2000)

Патент США № 6307017 (2001)

Заявка РСТ № WO 90/03980 (1990)

Заявка РСТ № WO 91/06563 (1991)

Заявка РСТ № WO 91/17181 (1991)

Заявка РСТ № WO 94/02018 (1994)

Заявка РСТ № WO 94/21674 (1994)

Способы синтеза пептидов соматостатина, LHRH и бомбезина хорошо документированы и находятся в рамках возможностей рядовых специалистов в данной области. Дополнительные процедуры синтеза обеспечены в следующих примерах. Следующие примеры иллюстрируют также способы синтеза нацеленных цитотоксических соединений согласно изобретению.

Пример 1

H-Lys(Boc)-DTyr(tBu)-DTyr(tBu)-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-DTrp(Boc)-Lys(Boc)-Abu-Cys(Trt)-Thr(tBu)-Rink Amide MBHA Resin

Указанный в заголовке конъюгат защищенный пептид-смола автоматически синтезировали на пептидном синтезаторе модели 433А Applied Biosystems (ABI) (Foster City, CA) с использованием флуоренилметоксикарбонил (Fmoc)-химии. Использовали амидную смолу МВНА (4-метилбензилгидриламин) Ринка (Nоvabiochem, San Diego, CA) с замещением 0,72 ммоль/г. Использовали следующие Fmoc-аминокислоты (AnaSpec, San Jose, CA): Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Cys(Trt)-ОН, Fmoc-Lys(Boc)-ОН, Fmoc-DTrp(Boc)-ОН, Fmoc-Tyr(tBu)-ОН, Fmoc-DTyr(tBu)-ОН, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Cys(Trt)-ОН, Fmoc-Thr(tBu)-ОН и Fmoc-Abu-ОН. Этот синтез проводили в масштабе 0,25 ммоль. Группы Fmoc удаляли обработкой 20% пиперидином в N-метилпирролидоне (NМР) в течение 30 минут. В каждой стадии связывания Fmoc-аминокислоту (4 экв., 1 ммоль) сначала преактивировали в 2 мл раствора, содержащего 0,45 М гексафторфосфат 2-(1 -Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,2,3-тетраметилурония (HBTU) и 0,45 М 1-гидроксибензотриазол (HOВТ) в N,N-диметилформамиде (ДМФ). Полученный активированный эфир аминокислоты, 1 мл диизопропилэтиламина (DIEA) и 1 мл NMP добавляли к этой смоле. Пептидный синтезатор ABI 433A программировали для выполнения следующего цикла реакций: (1) промывание NMP, (2) удаление защитной группы Fmoc 20% пиперидином в NMP в течение 30 минут, (3) промывание NMP, (4) связывание преактивированной Fmoc-аминокислоты в течение 1 часа. Смолу связывали последовательно в соответствии с этой последовательностью реакций. После сборки пептидной цепи Fmoc удаляли и эту смолу промывали полностью с использованием ДМФ и дихлорметана (ДХМ).

Пример 2

Н-Doc-Doc-Doc-Doc-Lys(Boc)-DTyr(tBu)-DTyr(tBu)-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-DTrp(Boc)-Lys(Boc)-Abu-Cys(Trt)-Thr(tBu)-Rink Amide MBHA Resin

Указанный в заголовке конъюгат защищенный пептид-смола синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 1. Fmoc-8-амино-3,6-диоксаоктановую кислоту (Fmoc-Doc-OH) покупали из Chem-Impex International, Wood Dale, IL. После сборки Н-Lys(Boc)-DTyr(tBu)-DTyr(tBu)-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-DTrp(Boc)-Lys(Boc)-Abu-Cys(Trt)-Thr(tBu)-Rink Amide MBHA Resin (в масштабе 0,45 ммоль) этот конъюгат защищенный пептид-смола переносили в реакционный сосуд на шейкере для ручного синтеза. Смолу встряхивали с ДМФ-раствором Fmoc-Doc-OH (1,5 экв. 0,75 ммоль), N,N-диизопропилкарбодиимидом (DIC, 1,5 экв., 0,75 ммоль) и HOВТ (1,5 экв., 0,75 ммоль) в течение 2 часов. Смолу промывали ДМФ и обрабатывали 20% пиперидином в ДМФ для удаления защитной Fmoc-группы. Остальные три остатка Doc последовательно связывали со смолой с использованием той же самой процедуры ручной операции. После удаления защитной Fmoc-группы 20% пиперидином в ДМФ комплекс защищенный пептид-смола промывали ДМФ и ДХМ.

Пример 3

Н-Doc-Doc-Doc-Doc-Doc-Doc-Lys(Boc)-DTyr(tBu)-DTyr(tBu)-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-DTrp(Boc)-Lys(Boc)-Abu-Cys(Trt)-Thr(tBu)-Rink Amide MBHA Resin

Указанный в заголовке конъюгат защищенный пептид-смола синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 2.

Пример 4

Н-Aeрa-Lys(Boc)-DTyr(tBu)-DTyr(tBu)-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-DTrp(Boc)-Lys(Boc)-Abu-Cys(Trt)-Thr(tBu)-Rink Amide MBHA Resin

Указанный в заголовке конъюгат защищенный пептид-смола синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 1. Fmoc-4-(2-аминоэтил)-1-карбоксиметилпиперазин (Fmoc-Аера-ОН) покупали из Neosystem, Strasbourg, France. После сборки Н-Lys(Boc)-DTyr(tBu)-DTyr(tBu)-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-DTrp(Boc)-Lys(Boc)-Abu-Cys(Trt)-Thr(tBu)-Rink Amide MBHA Resin этот конъюгат защищенный пептид-смола переносили в реакционный сосуд на шейкере для ручного синтеза. Fmoc-Аера-ОН (1,5 экв., 0,75 ммоль) преактивировали гексафторфосфатом О-(7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (HATU, 1,4 экв., 0,7 ммоль) и 1-гидрокси-7-азабензотриазолом (HOAT, 1,4 экв., 0,7 ммоль) в 2 мл ДМФ в течение 2 минут. Полученный активированный эфир Fmoc-Аера-ОН и 1 мл DIEA добавляли в реакционный сосуд и смесь перемешивали в течение 2 часов. Смолу промывали ДМФ и обрабатывали 20% пиперидином в ДМФ для удаления защитной Fmoc-группы. Конъюгат защищенный пептид-смола промывали ДМФ и ДХМ.

Пример 5

Н-Doc-Doc-Doc-Doc-Aepa-Lys(Boc)-DTyr(tBu)-DTyr(tBu)-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-DTrp(Boc)-Lys(Boc)-Abu-Cys(Trt)-Thr(tBu)-Rink Amide MBHA Resin

Указанный в заголовке конъюгат защищенный пептид-смола синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 4. Связывания Fmoc-Doc-OH выполняли в соответствии с соответствующей процедурой, описанной в примере 2.

Пример 6

Н-DPhe-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-DTrp(Boc)-Lys(Boc)-Abu-Cys(Trt)-Thr(tBu)-Rink Amide MBHA Resin

Указанный в заголовке конъюгат защищенный пептид-смола синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 1. Fmoc-DPhe-OH покупали из AnaSpec, San Jose, CA.

Пример 7

Н-Aepa-DPhe-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-DTrp(Boc)-Lys(Boc)-Abu-Cys(Trt)-Thr(tBu)-Rink Amide MBHA Resin

Указанный в заголовке конъюгат защищенный пептид-смола синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 4.

Пример 8

5-О-tBoc-глицил-5-(R)-этил-9,10-дифтор-1,4,5,13-тетрагидро-3Н,15Н-оксепино[3',4':6',7]индолизино[1,2-b]хинолин-3,15-дион

5-(R)-Этил-9,10-дифтор-1,4,5,13-тетрагидро-5-гидрокси-3Н,15Н-оксепино[3',4':6',7]индолизино[1,2-b]хинолин-3,15-дион (300 мг), Boc-Gly-OH (923 мг, 7 экв.) и 4-(диметиламино)пиридин (DMAP) (560,4 мг, 6 экв.) растворяли в смешанной системе растворителей ДХМ и ДМФ (30 мл, об./об., 30/0,5). К этому раствору добавляли гидрохлорид 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (EDC) (1,08 г, 7,5 экв.). Смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и растворители удаляли при пониженном давлении. Остаток растворяли в 100 мл ДХМ и промывали последовательно 10% водным раствором лимонной кислоты (20 мл × 2), насыщенным NaHCO ₃ (20 мл × 2) и солевым раствором (10 мл × 3). Органический слой сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали флеш-хроматографией на колонке силикагеля с использованием 10% метанола в ДХМ в качестве элюента с получением чистого продукта 5-О-tBoc-глицил-5-(R)-этил-9,10-дифтор-1,4,5,13-тетрагидро-3Н,15Н-оксепино[3',4':6',7]индолизино[1,2-b]хинолин-3,15-диона, 330 мг, ТСХ (силикагель, ДХМ/МеОН, 9/1): R_f=0,43. Анализ масс-спектрометрией с ионизацией распылением электронов (ESI MS) дал молекулярную массу при 556,4 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 555,5).

Пример 9

ТФУ-соль 5-О-глицил-5-(R)-этил-9,10-дифтор-1,4,5,13-тетрагидро-3Н,15Н-оксепино[3',4':6',7]индолизино[1,2-b]хинолин-3,15-диона

5-О-tBoc-глицил-5-(R)-этил-9,10-дифтор-1,4,5,13-тетрагидро-3Н,15Н-оксепино[3',4':6',7]индолизино[1,2-b]хинолин-3,15-дион (330 мг) обрабатывали 30% раствором трифторуксусной кислоты (ТФУ) в ДХМ в атмосфере азота в течение 1 часа. ТФУ и растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток растирали с холодным эфиром с получением светло-желтого порошка. ТСХ (силикагель, ДХМ/МеОН, 9/1): R_f=0,13. Анализ масс-спектрометрией с ионизацией распылением электронов (ESI MS) дал молекулярную массу при 456,0 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 455,4).

Пример 10

5-О-(N-глутарилглицил)-5-(R)-этил-9,10-дифтор-1,4,5,13-тетрагидро-3Н,15Н-оксепино[3',4':6',7]индолизино[1,2-b]хинолин-3,15-дион

Смесь 5-О-глицил-5-(R)-этил-9,10-дифтор-1,4,5,13-тетрагидро-3Н,15Н-оксепино[3',4':6',7]индолизино[1,2-b]хинолин-3,15-диона (208 мг, 0,37 ммоль), глутарового ангидрида (66 мг, 0,58 ммоль, 1,5 экв.) и триэтиламина (243 мл) в ДМФ (7 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток растворяли в воде (10 мл) и рН этого раствора доводили до 3 добавлением 0,5 н. раствора HCl при 0°С. Образовавшийся осадок собирали фильтрованием и промывали холодной водой и эфиром. После сушки при пониженном давлении получали твердое вещество (160 мг). Выход был 77%. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 570,0 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 569,5). Чистота была 98% на основе аналитического ЖХВР-анализа.

Пример 11

5-О-(N-Сукцинилглицил)-5-(R)-этил-9,10-дифтор-1,4,5,13-тетрагидро-3Н,15Н-оксепино[3',4':6',7]индолизино[1,2-b]хинолин-3,15-дион

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 10, с использованием янтарного ангидрида. Выход был 86%. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 556,2 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 555,50). Чистота была 96% на основе аналитического ЖХВР-анализа.

Пример 12

Камптотецин-20-(S)-[О-(tBoc-глицил)]

Камптотецин (0,79 г, 2,2 ммоль), Boc-Gly-OH (1,2 г, 6,8 ммоль, 3 экв.) и DMAP (0,83 г, 6,8 ммоль, 3 экв.) растворяли в смешанной системе растворителей ДХМ и ТГФ (18 мл, об./об., 5/1). Смесь охлаждали на бане со смесью воды со льдом. К смеси добавляли 1,3-диизопропилкарбодиимид (DIC) (1,1 мл, 6,8 ммоль, 3,1 экв.). После перемешивания при 0°С в течение 0,5 часов смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Раствор разбавляли 50 мл ДХМ и промывали последовательно 10% водным раствором лимонной кислоты (20 мл × 2), насыщенным NaHCO₃ (20 мл × 2) и солевым раствором (10 мл × 3). Органический слой сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали флеш-хроматографией на колонке силикагеля с использованием 4% метанола в ДХМ в качестве элюента с получением чистого продукта камптотецин-20-(S)-[О-(tBoc-глицила)] (1,07 г, белок твердое вещество). ТСХ (силикагель, ДХМ/МеОН, 9/1): R_f=0,6. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 506,3 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 505,53).

Пример 13

ТФУ-соль камптотецин-20-(S)-(О-глицила)

Камптотецин-20-(S)-[О-(Boc-глицил)] (1,07 г, 2,1 ммоль) обрабатывали 50% ТФУ в ДХМ в атмосфере N ₂ в течение 1 часа. ТФУ и растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток растирали с холодным эфиром. Образовавшийся остаток собирали фильтрованием и промывали холодным эфиром с получением светло-желтого порошка (0,9 г, 1,78 ммоль). Выход=83%. ТСХ (силикагель, ДХМ/МеОН, 9/1): R_f=0,23. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 406,2 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 405,41).

Пример 14

Камптотецин-20-(S)-[O-(N-сукцинилглицил)]

Смесь камптотецин-20-(S)-(О-глицил)-ТФУ (0,9 г, 1,7 ммоль), янтарного ангидрида (0,35 г, 3,5 ммоль, 2 экв.) и триэтиламина (0,72 мл, 3 экв.) в ДМФ (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 5 минут. Образовавшийся осадок собирали фильтрованием. Собранное твердое вещество суспендировали в холодной воде (10 мл). рН этой водной суспензии доводили до 2 добавлением 5% водного раствора лимонной кислоты. После перемешивания при 0°С в течение 0,5 часа осадок фильтровали, промывали холодной водой и эфиром и сушили при пониженном давлении. Получали 0,88 г (1,58 ммоль) твердого вещества. Выход был 99%. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 505,7 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 505,49). Чистота была 99% на основе анализа аналитической ЖХВР.

Пример 15

Камптотецин-20-(S)-[O-(N-глутарилглицил)]

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 14, с использованием глутарового ангидрида. Выход был 75%. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 520,5 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 519,52). Чистота была 98% на основе анализа аналитической ЖХВР.

Пример 16

Камптотецин-20-(S)-[О-(Boc-валил)]

К суспензии камптотецина (350 мг) и DMAP (180 мг) в ДХМ (10 мл) при 0°С добавляли ДХМ-раствор Вос-Val-F (2 экв.), который получали с использованием описанного в литературе способа (Carpino et al., J. Org. Chem., 56, 2611, 1991). После перемешивания при 0-5°С в течение 30 минут эту смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивание продолжали в течение ночи. Смесь разбавляли хлороформом (30 мл), промывали водой, 10% водным раствором лимонной кислоты и насыщенным NaHCO₃, сушили над MgSO₄ и фильтровали. После удаления растворителей при пониженном давлении остаток очищали хроматографией на колонке силикагеля с элюцией смесью хлороформ/ацетон (9:1). Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяли и концентрировали при пониженном давлении с получением твердого вещества.

Пример 17

ТФУ-соль камптотецин-20-(S)-(О-валила)

Камптотецин-20-(S)-[О-(Boc-валил)], полученный в примере 16, обрабатывали 35% ТФУ в хлороформе (10 мл) в течение 30 минут. ТФУ и растворитель удаляли в вакууме с получением твердого вещества. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 448,4 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 447,50).

Пример 18

Камптотецин-20-(S)-[O-(N-сукцинилвалил)]

К смеси ТФУ-соли камптотецин-20-(S)-(О-валила) (150 мг), янтарного ангидрида (4 экв.) и DMAP (2 экв.) в хлороформе (10 мл) добавляли триэтиламин (6 экв.). После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи эту смесь разбавляли хлороформом (20 мл). Полученный раствор промывали водой и водным раствором лимонной кислоты, сушили над MgSO₄ и фильтровали. Растворитель удаляли в вакууме и остаток растирали с ацетоном. Получали 120 мг указанного в заголовке соединения. ТСХ (сликагель, хлороформ/метанол, 9:1): R_f=0,22. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 548,2 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 547,57).

Пример 19

{5-(R)-Этил-9,10-дифтор-1,4,5,13-тетрагидро-3Н,15Н-оксепино[3',4':6',7]индолизино[1,2-b]хинолин-3,15-дион-5-О-глицилглутарил}-(Doc) ₆-Lys-DTyr-DTyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

Н-(Doc)₆-Lys(Boc)-DTyr(tBu)-DTyr(tBu)-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-DTrp(Boc)-Lys(Boc)-Abu-Cys(Trt)-Thr(tBu)-Rink Amide MBHA Resin (0,196 ммоль) примера 3 смешивали с 5-О-(N-глутарилглицил)-5-(R)-этил-9,10-дифтор-1,4,5,13-тетрагидро-3Н,15Н-оксепино[3',4':6',7]индолизино[1,2-b]хинолин-3,15-дионом (0,123 г, 0,22 ммоль, 1,1 экв.) (пример 10), DIC (136 мкл, 0,88 ммоль, 4,4 экв.) и 1-гидрокси-7-азабензотриазолом (НОАТ) (30 мг, 0,22 ммоль, 1,1 экв.) в 5 мл ДХМ. Смесь встряхивали в течение 2 дней. Смолу промывали последовательно ДМФ, метанолом и ДХМ. После сушки на воздухе эту смолу обрабатывали смесью ТФУ, Н ₂О и триизопропилсилана (TIS) (9,5 мл/0,85 мл/0,8 мл) в течение 2 часов. Смолу отфильтровывали и фильтрат выливали в 100 мл холодного эфира. Осадок собирали центрифугированием. Неочищенный продукт растворяли в 100 мл 5% водного раствора AcOH, к которому добавляли по каплям метанольный раствор иода, пока не поддерживалась желтая окраска. Реакционный раствор перемешивали в течение еще 1 часа. Добавляли 10% водный раствор Na₂S₂ O₃ для гашения избыточного иода. Неочищенный продукт в этом растворе очищали на препаративной ЖХВР-системе с колонкой (4×43 см) С₁₈ DYNAMAX-100 A°С (Varian, Walnut Creek, CA). Колонку элюировали линейным градиентом от 80% А и 20% В до 55% А и 45% В в течение 50 минут, где А был 0,1% ТФУ в воде, а В был 0,1% ТФУ в ацетонитриле. Фракции проверяли с использованием аналитической ЖХВР. Фракции, содержащие чистый продукт, объединяли и лиофилизировали досуха. Выход 25%. Чистота была 99,9% на основе анализа аналитической ЖХВР. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 2761,1 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 2761,04).

Пример 20

{5-(R)-Этил-9,10-дифтор-1,4,5,13-тетрагидро-3Н,15Н-оксепино[3',4':6',7]индолизино[1,2-b]хинолин-3,15-дион-5-О-глицилглутарил}-(Doc) ₄-Lys-DTyr-DTyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 19, с использованием Н-Doc-Doc-Doc-Doc-Lys(Boc)-DTyr(tBu)-DTyr(tBu)-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-DTrp(Boc)-Lys(Boc)-Abu-Cys(Trt)-Thr(tBu)-Rink Amide MBHA Resin примера 2. Выход был 21,4%. Чистота была 99% на основе анализа аналитической ЖХВР. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 2471,2 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 2471,727).

Пример 21

{5-(R)-Этил-9,10-дифтор-1,4,5,13-тетрагидро-3Н,15Н-оксепино[3',4':6',7]индолизино[1,2-b]хинолин-3,15-дион-5-О-глицилсукцинил}-Aepa-DPhe-цикло-(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 19, с использованием 5-О-(N-сукцинилглицил)-5-(R)-этил-9,10-дифтор-1,4,5,13-тетрагидро-3Н,15Н-оксепино[3',4':6',7]индолизино[1,2-b]хинолин-3,15-диона (примера 11) и Н-Aepa-DPhe-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-DTrp(Boc)-Lys(Boc)-Abu-Cys(Trt)-Thr(tBu)-Rink Amide MBHA Resin (примера 7). Выход был 48%. Чистота была 99,9% на основе анализа аналитической ЖХВР. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 1739,8 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 1740,14).

Пример 22

Камптотецин-20-(S)-O-глицилсукцинил)-Doc-Doc-Doc-Doc-Aepa-DPhe-цикло-(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 19, с использованием камптотецин-20-(S)-[O-(N-сукцинилглицила)] (примера 14) и Н-Doc-Doc-Doc-Doc-Aepa-DPhe-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-DTrp(Boc)-Lys(Boc)-Abu-Cys(Trt)-Thr(tBu)-Rink Amide MBHA Resin. Выход был 32%. Чистота была 99% на основе анализа аналитической ЖХВР. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 2269,0 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 2269,8).

Пример 23

Камптотецин-20-(S)-O-глицилглутарил-Aepa-Lys-DТyr-DTyr-цикло-(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 19, с использованием камптотецин-20-(S)-[O-(глутарилглицила)] (примера 15) и Н-Aeрa-Lys(Boc)-DTyr(tBu)-DTyr(tBu)-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-DTrp(Boc)-Lys(Boc)-Abu-Cys(Trt)-Thr(tBu)-Rink Amide MBHA Resin (примера 4). Выход был 11%. Чистота была 95% на основе анализа аналитической ЖХВР. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 2008,9 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 2009,2).

Пример 24

Камптотецин-20-(S)-O-валилсукцинил-DPhe-цикло-(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 19, с использованием камптотецин-20-(S)-[O-(N-сукцинилвалила)] (примера 18) и Н-DPhe-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-DTrp(Boc)-Lys(Boc)-Abu-Cys(Trt)-Thr(tBu)-Rink Amide MBHA Resin (примера 6). Получали 145 мг бледно-желтого твердого вещества. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 1562,4 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 1561,8).

Пример 25

{5-(R)-Этил-9,10-дифтор-1,4,5,13-тетрагидро-3Н,15Н-оксепино[3',4':6',7]индолизино[1,2-b]хинолин-3,15-дион-5-О-глицинилсукцинил}-DPhe-цикло-(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 19, с использованием 5-(R)-этил-9,10-дифтор-1,4,5,13-тетрагидро-3Н,15Н-оксепино[3',4':6',7]индолизино[1,2-b]хинолин-3,15-дион-5-О-(N-сукцинилглицила) (примера 11) и Н-DPhe-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-DTrp(Boc)-Lys(Boc)-Abu-Cys(Trt)-Thr(tBu)-Rink Amide MBHA Resin (примера 6). Получали желтое твердое вещество. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 1570,2 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 1569,72).

Пример 26

Н-Аера-(Doc)₄-Gln(Trt)-Trp(Boc)-Ala-Val- Ala-His(Trt)-Leu-Leu-Rink Amide MBHA resin (SEQ ID NO:4)

Указанный в заголовке конъюгат защищенный пептид-смола синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной для примера 5. Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Ala-OH и Fmoc- Ala-OH покупали из AnaSpec (San Jose, CA).

Пример 27

Н-Аера-(Doc)₄-DPhe-Gln(Trt)-Trp(Boc)-Ala-Val- Ala-His(Trt)-Leu-Leu-Rink Amide MBHA resin

Указанный в заголовке конъюгат защищенный пептид-смола синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной для примера 26.

Пример 28

Камптотецин-20-(S)-O-глицинилсукцинил-Аера-(Doc) ₄-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Leu-Leu-NH₂ (SEQ ID NO:4)

(SEQ ID NO:4)

Смесь Н-Аера-(Doc)₄-Gln(Trt)-Trp(Boc)-Ala-Val- Ala-His(Trt)-Leu-Leu-Rink Amide MBHA resin (0,125 ммоль) примера 26, камптотецин-20-(S)-[O-(N-глицилсукцинила)] (примера 14) (0,138 ммоль, 1,1 экв.), DIC (0,55 ммоль, 4,4 экв.) и HOВt (0,275 ммоль, 2,2 экв.) в ДХМ (7 мл) и ДМФ (7 мл) встряхивали при комнатной температуре в течение 5 дней. Пепетид отщепляли от смолы с использованием раствора ТФУ, Н₂О и TIS (9,5 мл/0,85 мл/0,8 мл) в течение 2 часов. Смолу отфильтровывали, и пептид осаждали диэтиловым эфиром. После центрифугирования этой суспензии получали осадок неочищенного пептида. Неочищенный продукт очищали на системе препаративной ЖХВР с колонкой С ₁₈ Microsorb, с элюцией линейным градиентом от 100% А и 0% В до 20% А и 80% В в течение 80 минут. А был 0,1% ТФУ в воде, а В был 0,1% ТФУ в ацетонитриле. Фракции проверяли с использованием аналитической ЖХВР. Фракции, содержащие чистый продукт, объединяли и лиофилизировали досуха. Чистота была 96,1% на основе анализа аналитической ЖХВР. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 2172,9 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 2173,44).

Пример 29

Камптотецин-20-(S)-O-глицинилсукцинил-Аера-(Doc) ₄-DPhe-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Leu-Leu-NH₂

Указанный в заголовке пептид синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной для примера 28. Чистота была 99,9% на основе анализа аналитической ЖХВР. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 2321,1 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 2320,62).

Пример 30

Камптотецин-20-(S)-O-глицинилсукцинил-Аера-(Doc) ₂-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Leu-Leu-NH₂ (SEQ ID NO:4)

(SEQ ID NO:4)

Указанный в заголовке пептид синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной для примера 28. Чистота была 99,9% на основе анализа аналитической ЖХВР. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 1882,8 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 1883,13).

Пример 31

Камптотецин-20-(S)-O-глицинилсукцинил-Аера-(Doc)₂-DPhe-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Leu-Leu-NH₂

Указанный в заголовке пептид синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной для примера 28. Чистота была 99,9% на основе анализа аналитической ЖХВР. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 2030,7 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 2030,30).

Пример 32

Камптотецин-20-(S)-O-глицинилсукцинил-Аера-(Doc) ₄-Gaba-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Leu-Nle-NH₂ (SEQ ID NO:12)

(SEQ ID NO:12)

Указанный в заголовке пептид синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной для примера 28, с использованием Aepa-(Doc) ₄-Gaba-Gln(Trt)-Trp(Boc)-Ala-Val- Ala-His(Trt)-Leu-Nle-Rink Amide MBHA resin (SEQ ID NO:12).

Пример 33

pGlu-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-DLys[N -Aepa]-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Rink Amide MBHA resin

Указанный в заголовке конъюгат пептид-смола синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 1. Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-DLys(Dde)-OH покупали из Novabiochem, San Diego, CA. pGlu-OH был из Chem-Impex International, Wood Dale, IL. Синтез проводили в масштабе 0,25 ммоль. Fmoc-группы удаляли обработкой 20% пиперидином в N-метилпирролидоне (NMP) в течение 30 минут. После завершения сборки pGlu-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-DLys(Dde)-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Rink Amide MBHA resin этот конъюгат защищенный пептид-смола переносили в реакционный сосуд на шейкере для ручного синтеза. Защитную группу Dde на остатке DLys удаляли с использованием 2% гидразина в ДМФ в течение 0,5 часа. Смолу полностью промывали ДМФ, МеОН и ДХМ и встряхивали в течение 2 часов с раствором преактивированного эфира Fmoc-Aepa-OH (описанного в примере 4) в ДМФ, содержащем 0,5 мл DIEA. Смолу промывали ДМФ и обрабатывали 20% пиперидином в ДМФ для удаления защитной группы Fmoc на остатке Aepa. Этот конъюгат защищенный пептид-смола промывали полностью с использованием ДМФ и ДХМ.

Пример 34

pGlu-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-DLys[N -Aepa-(Doc)₄-]-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Rink Amide MBHA resin

Указанный в заголовке пептид синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной для примера 2, с использованием pGlu-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-DLys[N -Aepa]-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Rink Amide MBHA resin (примера 33).

Пример 35

Н-(Doc)₄-Aepa-Caeg-DCys(Trt)-3Pal-DTrp(Boc)-Lys(Boc)-Dcys(Trt)-Thr(Bzl)-Tyr(tBu)-Rink Amide MBHA resin

Указанный в заголовке конъюгат защищенный пептид-смола синтезируют по существу в соответствии с процедурой для примера 5. Fmoc-Thr(Bzl)-OH, Fmoc-DCys(Trt)-OH и Fmoc-3Pal-OH получают из Chem-Impex International, Wood Dale, IL. Fmoc-DTrp(Boc)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH и Fmoc-Tyr(tBu)-OH получают из AnaSpec, San Jose, CA. Fmoc-Caeg(Bhog)-OH получают из PepSeptive Biosystems, Framingham, Mass.

Пример 36

Н-(Doc)₄-Aepa-DPhe-Cys(Trt)-3ITyr-DTrp(Boc)-Lys(Boc)-Val-Cys(Trt)-Thr(tBu)-Rink Amide MBHA Resin

Указанный в заголовке конъюгат защищенный пептид-смола синтезируют по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 5. Fmoc-3ITyr-OH и Fmoc-DPhe-OH получают из Chem-Impex International, Wood Dale, IL.

Пример 37

Паклитаксел-2'-О-глицил

К раствору Вос-Gly-OH (53 мг) и паклитаксела (215 мг) в 10 мл дихлорметана добавляли 4-диметиламинопиридин (DMAP, 10 мг) с последующим добавлением EDC (58 мг). После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи реакционную смесь разбавляли 20 мл дихлорметана и смесь промывали 10% водным раствором лимонной кислоты, насыщенным NaHCO₃ и водой, сушили над MgSO ₄ и фильтровали. Растворитель удаляли в вакууме. Неочищенный продукт обрабатывали 30% ТФУ в дихлорметане в течение 45 минут при комнатной температуре. ТФУ и растворитель удаляли в вакууме с получением твердого вещества, 0,256 г. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 911,0 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 911,1).

Пример 38

Паклитаксел-2'-О-(N-глицилсукцинил)

Смесь ТФУ-соли паклитаксел-2'-О-глицила (127 мг, 1 экв.) и янтарного ангидрида (150 мг, 12 экв.) в 5 мл пиридина перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Растворитель удаляли в вакууме. Остаток растирали с водой в течение 1 часа и осадок собирали фильтрованием, промывали водой и сушили с получением твердого вещества (94,8 мг). Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 1010,9 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 1011,06).

Пример 39

Паклитаксел-2'-О-(N-валилсукцинил)

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурами, описанными в примерах 37 и 38, с использованием Вос-Val-OH. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 1052,5 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 1053,27).

Пример 40

Паклитаксел-2'-О-Gly-сукцинил-Аepa-Lys-DTyr-DTyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

Смесь Н-Aeрa-Lys(Boc)-DTyr(tBu)-DTyr(tBu)-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-DTrp(Boc)-Lys(Boc)-Abu-Cys(Trt)-Thr(tBu)-Rink Amide MBHA Resin (0,1 ммоль) (примера 4), паклитаксел-2'-О-(N-глицилсукцинила (примера 39) (1,1 экв.), DIC (136 мкл, 4,4 экв.) и НОАТ (30 мг, 1,1 экв.) в 5 мл ДХМ встряхивали в течение 2 дней. Смолу промывали последовательно ДМФ, метанолом и ДХМ. После сушки на воздухе эту смолу обрабатывали смесью ТФУ, Н₂О и триизопропилсилана (TIS) (9,5 мл/0,85 мл/0,8 мл) в течение 2 часов. Смолу отфильтровывали и фильтрат выливали в 100 мл холодного эфира. Осадок собирали после центрифугирования. Неочищенный продукт растворяли в смешанной системе растворителей (100 мл 5% водного раствора уксусной кислоты и 30 мл ацетонитрила). К раствору добавляли по каплям метанольный раствор иода, пока не поддерживалась желтая окраска. Реакционный раствор перемешивали в течение еще 45 минут. Добавляли 10% водный раствор Na₂S₂O₃ для гашения избыточного иода. Неочищенный продукт в этом растворе очищали на препаративной ЖХВР-системе с колонкой (4×43 см) С ₁₈ DYNAMAX-100 A°С (Varian, Walnut Creek, CA). Колонку элюировали линейным градиентом от 80% А и 20% В до 55% А и 45% В в течение 50 минут, где А был 0,1% ТФУ в воде, а В был 0,1% ТФУ в ацетонитриле. Фракции проверяли с использованием аналитической ЖХВР. Фракции, содержащие чистый продукт, объединяли и лиофилизировали досуха. Чистота была 98% на основе анализа аналитической ЖХВР. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 2500,9 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 2501,0).

Пример 41

Паклитаксел-2'-О-Val-сукцинил-DPhe-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

Указанный в заголовке пептид синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 40. Чистота была 99% на основе анализа аналитической ЖХВР. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 2066,2 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 2067,4).

Пример 42

Паклитаксел-2'-О-Val-сукцинил-Аepa-Lys-DTyr-DTyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

Указанный в заголовке пептид синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 40. Чистота была 95% на основе анализа аналитической ЖХВР. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 2544,3 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 2543,9).

Пример 43

Эфир N-Boc-доксорубицин-14-О-(Fmoc-глицина)

К раствору доксорубицина-HCl (190 мг) в ДМФ (5 мл) добавляют (ВОС)₂О (1,2 экв.) с последующим добавлением диизопропилэтиламина (2,5 экв.). После перемешивания в течение 3 часов летучие вещества удаляют в вакууме и остаток обрабатывают водой. Твердое вещество собирают фильтрованием, промывают водой и сушат. Полученный продукт растворяют в ДМФ (10 мл). К нему добавляют Fmoc-Gly-OH (1,2 экв.), DMAP (0,2 экв.) и EDC (1,2 экв.). Эту смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 часов. После выпаривания растворителя остаток распределяют между смесью хлороформ-метанол и водой. Органический слой сушат над MgSO₄ и фильтруют. Растворители удаляют в вакууме и остаток хроматографируют на силикагеле с элюцией смесью хлороформ-метанол (9:1). Фракции, содержащие желаемый продукт, объединяют и растворители упаривают в вакууме.

Пример 44

Эфир N-BOC-доксорубицина-14-О-[(N-сукцинил)глицина]

К раствору эфира N-Boc-доксорубицин-14-О-(Fmoc-глицина) (100 мг) в ДМФ (5 мл) добавляют 1 мл пиперидина. После перемешивания в течение 2 часов при комнатной температуре эту смесь разбавляют хлороформом (20 мл). Смесь промывают солевым раствором, сушат над MgSO₄ и фильтруют. Растворители удаляют в вакууме для малого объема (~5 мл). К смеси добавляют янтарный ангидрид (4 экв.), DMAP (2 экв.) и триэтиламин (4 экв.). Этот раствор перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Летучие вещества удаляют в вакууме. Остаток растирают с 5% водной лимонной кислотой. Осадок собирают фильтрованием, промывают водой и сушат.

Пример 45

pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-DLys[N -(доксорубицин-14-О-глицилсукцинил-Aepa-(Doc) ₄-)]-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной для примера 28, с использованием pGlu-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-DLys[N -Aepa-(Doc)₄-]-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Rink Amide MBHA resin (примера 34) и эфира N-BOC-доксорубицина-14-О-[(N-сукцинил)глицина] (примера 44).

Пример 46

pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-DLys[N -(доксорубицин-14-О-Gly-сукцинил-(Doc)₄ -Gaba-)]-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной для примера 45. FMOC-Gaba-OH получали из Novabiochem, San Diego, CA.

Пример 47

Доксорубицин-14-О-глицилсукцинил-(Doc) ₄-Aepa-Caeg-цикло(DCys-3Pal-DTrp-Lys-DCys)-Thr(Bzl)-Tyr-NH ₂

Указанное в заголовке соединение синтезируют по существу в соответствии с процедурой, описанной для примера 19. Используют Н-(Doc)₄-Aepa-Caeg-DCys(Trt)-3Pal-DTrp(Boc)-Lys(Boc)-Dcys(Trt)-Thr(Bzl)-Tyr(tBu)-Rink Amide MBHA resin (примера 35) и эфир N-BOC-доксорубицина-14-О-[(N-сукцинил)глицина] (примера 44).

Пример 48

Паклитаксел-2'-О-глицилсукцинил-(Doc)₄-Aepa-DPhe-цикло[Cys-3ITyr-DTrp-Lys-Val-Cys]-Thr-NH ₂

Указанное в заголовке соединение синтезируют по существу в соответствии с процедурой, описанной для примера 40, с использованием Н-(Doc)₄-Aepa-DPhe-Cys(Trt)-3ITyr-DTrp(Boc)-Lys(Boc)-Val-Cys(Trt)-Thr(tBu)-Rink Amide MBHA Resin (примера 36) и паклитаксел-2'-О-(N-глицилсукцинила) (примера 38).

Пример 49

Паклитаксел-2'-О-глицилсукцинил-Aepa-(Doc)₂-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Phe-Nle-NH₂ (SEQ ID NO:6)

(SEQ ID NO:6)

Указанное в заголовке соединение синтезируют по существу в соответствии с процедурой, описанной для примера 28, с использованием H-Aepa-(Doc) ₂-Gln(Trt)-Trp(Boc)-Ala-Val- Ala-His(Trt)-Phe-Nle-Rink Amide MBHA resin (SEQ ID NO:6) и паклитаксел-2'-О-(N-глицилсукцинила) (примера 38).

Пример 50

pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-DLys[N -(паклитаксел-2'-О-глицилсукцинил-Aepa-(Doc) ₄-)]-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной для примера 45, с использованием pGlu-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-DLys[N -Aepa-(Doc)₄-]-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Rink Amide MBHA resin (примера 34) и 2'-О-(N-глицилсукцинил)паклитаксела (примера 38).

Пример 51

pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-DLys[N -(камптотецин-20-(S)-О-глицилсукцинил-(Doc)₄ -Aepa-)]-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 50, с использованием камптотецин-20-(S)-О-[N-сукцинилглицила)] (примера 14).

Пример 52

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной для примера 19. Выход=11%. Чистота была 99,9% на основе анализа аналитической ЖХВР. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 1891,8 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 1891,1).

Пример 53

Камптотецин-Gly-глутарил-Lys-DTyr-DTyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 19. Выход=23%. Чистота была 99% на основе анализа аналитической ЖХВР. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 1841,9 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 1841,1).

Пример 54

Камптотецин-Gly-сукцинил-(Doc)₆ -DPhe-c(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH₂

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 19. Выход = 18%. Чистота была 98% на основе анализа аналитической ЖХВР. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 2390,0 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 2390,7).

Пример 55

Камптотецин-Gly-глутарил-Lys-Lys-Lys-DТyr-DТyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 19. Выход=12%. Чистота была 100% на основе анализа аналитической ЖХВР. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 2097,0 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 2097,4).

Пример 56

Камптотецин-Gly-сукцинил-(Doc) ₄-DPhe-c(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH₂

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 19. Выход=31%. Чистота была 100% на основе анализа аналитической ЖХВР. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 2100,9 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 2100,3).

Пример 57

Каптотецин-Gly-сукцинил-Aepa-DPhe-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 19. Выход=21%. Чистота была 97% на основе анализа аналитической ЖХВР. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 1688,0 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 1688,9).

Пример 58

Камптотецин-Abu-сукцинил-(Doc) ₄-Lys-DTyr-DTyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 19. Выход=23%. Чистота была 95% на основе анализа аналитической ЖХВР. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 2435,2 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 2435,8).

Пример 59

Камптотецин-глутарил-(Doc) ₂-Lys-DTyr-DTyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 19. Выход=11%. Чистота была 95% на основе анализа аналитической ЖХВР. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 2074,0 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 2074,4).

Пример 60

Камптотецин-глутарил-Doc-Lys-DTyr-DTyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-

Thr-NH₂

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 19. Выход=16%. Чистота была 95% на основе анализа аналитической ЖХВР. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 1929,5 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 1929,2).

Пример 61

Камптотецин-20-глицинилсукциноил-DPhe-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 19. Выход=15,6%. Чистота была 94% на основе анализа аналитической ЖХВР. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 1520,1 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 1520,71).

Пример 62

{5-(R)-Этил-9,10-дифтор-1,4,5,13-тетрагидро-3Н,15Н-оксепино[3',4':6',7]индолизино[1,2-b]хинолин-3,15-дион-5-О-глицилсукцинил}-(Doc) ₄-Aepa-DPhe-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 19. Выход=25%. Чистота была 97% на основе анализа аналитической ЖХВР. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 2320,0 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 2319,6).

Пример 63

{5-(R)-Этил-9,10-дифтор-1,4,5,13-тетрагидро-3Н,15Н-оксепино[3',4':6',7]индолизино[1,2-b]хинолин-3,15-дион-5-О-глицилглутарил}-Aepa-Lys-DTyr-DTyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 19. Выход=24%. Чистота была 95% на основе анализа аналитической ЖХВР. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 2059,4 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 2060,3).

Пример 64

{5-(R)-Этил-9,10-дифтор-1,4,5,13-тетрагидро-3Н,15Н-оксепино[3',4':6',7]индолизино[1,2-b]хинолин-3,15-дион-5-О-глицилсукцинил}-(Doc) ₄-Aepa-Lys-DTyr-DTyr-c(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 19. Выход=48%. Чистота была 99,9% на основе анализа аналитической ЖХВР. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 2626,0 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 2626,9).

Пример 65

Камптотецин-20-глутарил-(Doc) ₄-Lys-DTyr-DTyr-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 19. Выход=10%. Чистота была 98,9% на основе анализа аналитической ЖХВР. Анализ ESI MS давал молекулярную массу при 2365,0 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 2365,0).

Пример 66

Н-DPhe-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-DTrp(Boc)-Lys(Aloc)-Abu-Cys(Trt)-Thr(tBu)-Rink Amide MBHA resin

Указанный в заголовке пептид автоматически синтезировали на пептидном синтезаторе модели 433 А Applied Biosystems (Foster City, CA) на основе флуоренилметилоксикарбонил (Fmoc)-химии. Использовали амидную МВНА-смолу Ринка (Rink Amide MBHA resin) (Nova Biochem, San Diego, CA) с замещением 0,72 ммоль/г. Fmoc-аминокислоты (AnaSpec, San Jose, CA) использовали со следующей защитой боковых цепей: Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Aloc)-OH, Fmoc-DTrp(Boc)-OH, Fmoc-Tyr(OtBu)-OH, Fmoc-DPhe-OH и Fmoc-Abu-OH. Синтез проводили в масштабе 0,25 ммоль. Fmoc-группы удаляли обработкой 20% пиперидином в N-метилпирролидоне (NMP) в течение 30 минут. В каждой стадии связывания, Fmoc-аминокислоту (4 экв., 1 ммоль) сначала пре-активировали 0,45 М гексафторфосфатом 2-(1-Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,2,3-тетраметилурония/1-гидроксибензотриазолом (HBTU/HOВТ) в ДМФ. Этот активированный эфир аминокислоты с 1 мл диизопропилэтиламина (DIEA) и NMP добавляли к смоле. Пептидный синтезатор ABI 433A программировали для выполнения следующих циклов реакций: (1) промывание NMP, (2) удаление защитной группы Fmoc 20% пиперидином в NMP в течение 30 минут, (3) промывание NMP, (4) связывание преактивированной Fmoc-аминокислоты в течение 1 часа. Отдельные связывания применяли к Cys(Trt)² , Tyr(tBu)³ и DTrp(Boc)⁴. Для всех остальных аминокислот использовали двойное связывание. Смолу связывали последовательно в соответствии с этой последовательностью реакций. После сборки пептидной цепи Fmoc удаляли и эту смолу промывали полностью с использованием ДМФ и ДХМ.

Пример 67

Fmoc-Aepa-DPhe-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-DTrp(Boc)-Lys(Aloc)-Abu-Cys(Trt)-Thr(tBu)-Rink Amide MBHA resin

Указанный в заголовке пептид синтезировали с использованием в качестве исходного продукта пептида из примера 66. Fmoc-Aepa-OH (Neosystem Laboratoire, Gennevilliers, France, 1,5 экв., 0,75 ммоль) преактивировали с использованием [гексафторфосфата O-(7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония] (HATU, 1,4 экв., 0,7 ммоль) и 1-гидрокси-7-азабензотриазола (НОАТ, 1,4 экв., 0,7 ммоль) в 2 мл ДМФ в течение 5 минут. Описанную выше смолу переносили в небольшой реакционный сосуд и встряхивали с этим активированным эфиром Fmoc-Aepa-OH и 1 мл DIEA на шейкере в течение 2 часов. Смолу тщательно промывали ДМФ и ДХМ.

Пример 68

H-Doc-Doc-Doc-Doc-Aepa-Dphe-Cys(Trt)-Тyr(tBu)-DTrp(Boc)-Lys(Aloс)-Abu-Cys(Trt)-Thr(tBu)-Rink Amide MBHA resin

Указанный в заголовке пептид синтезировали с использованием в качестве исходного продукта пептида из примера 66. Смолу промывали ДМФ и обрабатывали 25% пиперидином в ДМФ для удаления Fmoc. Эту смолу смешивали с ДМФ-раствором Fmoc-Doc-OH (Chem-Impex International, Wood Dale, IL., 1,5 экв., 0,75 ммоль), N,N-диизопропилкарбодиимидом (DIC, 1,5 экв., 0,75 ммоль) и HOBt (1,5 экв., 0,75 ммоль) в течение 2 часов. Вторую - четвертую Fmoc-Doc-OH связывали со смолой с использованием такой же процедуры, какая описана в связывании первой Fmoc-Doc-OH. Этот процесс повторяли, пока не была завершена сборка пептидной цепи.

Конечную Fmoc удаляли 25% пиперидином в ДМФ. Смолу промывали ДМФ и ДХМ.

Пример 69

H-Doc-Doc-Doc-Doc-Aepa-DPhe-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys(Aloс)-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

Этот пептид отщепляли от смолы с использованием 19 мл ТФУ (трифторуксусной кислоты, Halocarbon Products Corp. River Edge, NJ), 1,6 мл TIS (триизопропилсилана, Aldrich) и 1,7 мл воды в течение 2 часов. Эту смолу фильтровали и пептид осаждали выливанием в эфир. Осадок растворяли в 150 мл 5% уксусной кислоты и 30 мл ацетонитрила.I₂ (20 мг/мл в МеОН) добавляли по каплям, пока не наблюдали стойкой красной окраски. Колбу помещали в баню с горячей водопроводной водой и перемешивали в течение 2 часов. Реакцию гасили с использованием 10% Na₂SSO ₃. Пептид очищали с использованием колонки С₁₈ Phenomenex градиентом 5-60% CH₃CN, где буфер А является 0,1% ТФУ в воде и буфер В является 0,1% ТФУ в CH₃CN, на протяжении 60 минут. Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 186 мг (выход 40%) белого порошка. MS (распыление электронов): 1722,2.

Пример 70

Н-Doc-Doc-Doc-Aepa-DPhe-Cys(Trt)-Tyr(tBU)-DTrp(Boc)-Lys(Aloc)-Abu-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-Rink Amide MBHA resin

Указанный пептид синтезировали с использованием в качестве исходного продукта пептида из примера 67. Смолу промывали ДМФ и обрабатывали 25% пиперидином в ДМФ для удаления Fmoc. Эту смолу смешивали с ДМФ-раствором Fmoc-Doc-OH (Chem-Impex International, Wood Dale, IL., 1,5 экв., 0,75 ммоль), N,N-диизопропилкарбодиимидом (DIC, 1,5 экв., 0,75 ммоль) и HOВt (1,5 экв., 0,75 ммоль) в течение 2 часов. Вторую и третью Fmoc-Doc-OH связывали со смолой с использованием такой же процедуры, какая описана в связывании первой Fmoc-Doc-OH. Этот процесс повторяли, пока не была завершена сборка пептидной цепи. Конечную Fmoc удаляли 25% пиперидином в ДМФ. Смолу промывали ДМФ и ДХМ.

Пример 71

Н-Doc-Doc-Doc-Aepa-DPhe-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys(Aloc)-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

Этот пептид отщепляли от смолы с использованием 19 мл ТФУ (трифторуксусной кислоты, Halocarbon Products Corp. River Edge, NJ), 1,6 мл TIS (триизопропилсилана, Aldrich) и 1,7 мл воды в течение 2 часов. Эту смолу фильтровали и пептид осаждали выливанием в эфир. Осадок растворяли в 150 мл 5% уксусной кислоты и 30 мл ацетонитрила. I₂ (20 мг/мл в МеОН) добавляли по каплям, пока не наблюдали стойкой красной окраски. Колбу помещали в баню с горячей водопроводной водой и перемешивали в течение 2 часов. Реакцию гасили с использованием 10% Na₂SSO ₃. Пептид очищали с использованием колонки С₁₈ Phenomenex градиентом 5-60% CH₃CN, где буфер А является 0,1% ТФУ в воде и буфер В является 0,1% ТФУ в CH₃CN, на протяжении 60 минут. Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением 180 мг (выход 42%) белого порошка. MS (распыление электронов): 1722,2.

Пример 72

Паклитаксел-2'-глутарат

К раствору паклитаксела (HandeTech USA, Inc. Houston, Texas, 1 г, 1,17 ммоль) в 10 мл пиридина добавляли глутаровый ангидрид (Aldrich, 1,6 г, 14,1 ммоль, 12 экв.). Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов и затем упаривали при пониженном давлении. Добавляли 20 мл воды. Липкое твердое вещество собирали фильтрованием. Перекристаллизация из смеси ацетон/вода давала 0,842 г белого твердого вещества, 0,869 ммоль, выход 74%. MS (распыление электронов): 969,0.

Пример 73

Паклитаксел-2'-Doc-Suc-OH

К раствору паклитаксела (1 г, 1,17 ммоль) и Вос-Doc-OH (0,31 г, 1,17 ммоль) в 25 мл ДХМ добавляли DIC (0,241 мл, 1,54 ммоль) с последующим добавлением DMAP (50 мг, 0,4 ммоль). Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. Раствор промывали 3×10% лимонной кислотой, 3× насыщенным NaHCO₃, 1× насыщенным NaCl и сушили над MgSO₄, фильтровали и упаривали. Полученный остаток растворяли в EtOAc и затем осаждали гексаном. Продукт собирали фильтрованием и сушили при пониженном давлении. Получали твердое вещество (1,19 г, 1,08 ммоль). Выход был 92%. MS (распыление электронов): m/z=1099,7 (+1). Чистота была 95% согласно ЖХВР. Полученный Вос-Doc-паклитаксел (1,19 г, 1,08 ммоль) растворяли в 20 мл муравьиной кислоты, перемешивали в течение 30 минут и затем упаривали. Продукт растворяли в 15 мл пиридина. К этому раствору добавляли янтарный ангидрид (1,29 г, 13 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Пиридин удаляли упариванием при пониженном давлении. Остаток растирали с водой и собирали (0,99 г, 0,91 ммоль, выход 84%). MS (распыление электронов) давал 1099,4(+1), 1121,6 (Na+1). Чистота была 75% согласно ЖХВР.

Пример 74

Паклитаксел-2'-глутарил-(Doc)₄-Aepa-DPhe-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys(Aloc)-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

К ДМФ (10 мл)-раствору пептида (125 мг, 0,067 ммоль) из примера 69 добавляли паклитаксел-2'-Glut-OH (примера 72, 65 мг, 0,067 ммоль), HOВТ (20 мг, 0,147 ммоль), ВОР (бензотриазол-1-ил-окси-трис-(диметиламино)фосфония гексафторфосфат) (29 мг, 0,067 ммоль) и DIEA (8 экв., 93 мкл). Этот раствор перемешивали в течение ночи и затем упаривали при пониженном давлении. Остаток растворяли в минимальном количестве МеОН и осаждали эфиром. Получали твердое вещество (108 мг, 0,04 ммоль). Выход был 60%. MS (распыление электронов) показал 1409,5(+2). Для удаления Aloc из Lys этот пептид растворяли в смеси ДМФ/ТГФ (безводной 15 мл/15 мл). К раствору добавляли ледяную уксусную кислоту (15 мкл, 5 экв.), Pd(PPh₃)₄ (тетракис(трифенилфосфин)палладий(0)) (12 мг, 0,3 экв.) и Bu₃SnH (гидрид трибутилолова, или трибутилстаннан) (2×31 мкл, 3 экв.) при 0°С. После перемешивания в течение 1 часа этот раствор гасили с использованием 0,5 М НСl в эфире (0,7 мл, 10 экв.). Пептид осаждали эфиром. Неочищенный пептид очищали на колонке PLRP-S (Polimer Labs, 100А, 8 микрон) с использованием градиента 5-90% на протяжении 1 часа, где растворитель А был 5% МеОН в воде, а растворитель В был CH ₃CN. Чистые фракции объединяли и лиофилизировали с получением 42 мг этого пептида. MS (распыление электронов) давал 2731,4 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 2732,1). Чистота была 99,9% на основе ЖХВР-анализа.

Пример 75

Паклитаксел-2'-Doc-Suc-(Doc)₃-Аера-DРhе-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

К ДМФ (10 мл)-раствору пептида (200 мг, 0,12 ммоль) из примера 71 добавляли паклитаксел-2'-Doc-Suc-OH (примера 73, 140 мг, 0,128 ммоль), НОВТ (39 мг, 0,281 ммоль), ВОР (74 мг, 0,166 ммоль) и DIEA (8 экв., 177 мкл). Этот раствор перемешивали в течение ночи и затем упаривали при пониженном давлении. Получали твердое вещество (355 мг, 0,126 ммоль).

Для удаления Aloc из Lys этот пептид растворяли в смеси ДМФ/ТГФ (безводной 15 мл/15 мл). К раствору добавляли ледяную уксусную кислоту (19 мкл, 5 экв.), Pd(PPh₃ )₄ (12 мг, 0,3 экв.) и Bu₃SnH (2×54 мкл, 3 экв.) при 0°С. Этот раствор перемешивали в течение 1 часа и затем гасили с использованием 0,5 М HCl в эфире (0,7 мл, 10 экв.). Пептид осаждали эфиром. Очистку проводили на колонке PLRP-S (Polimer Labs, 100A, 8 микрон) с использованием градиента 5-90% на протяжении 1 часа, где растворитель А был 5% МеОН в воде, а растворитель В был CH₃CN. Чистые фракции объединяли и лиофилизировали. MS (распыление электронов) давал 2717,3 (в соответствии с рассчитанной молекулярной массой 2718,1). Чистота была 99,9% на основе ЖХВР-анализа.

Пример 76

Паклитаксел-Sar-Suc-(Doc)₄-Aepa-DPhe-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 28, с использованием 2'-О-(N-сукцинил-N-метилглицил) -паклитаксела (примера 38) и Н-Doc-Doc-Doc-Doc-Aepa-DPhe-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys(Aloc)-Abu-Cys)-Thr-NH ₂ (примера 69). Выход был 18,8% и чистота была 95% на основе ЖХВР-анализа. Было определено, что молекулярная масса равна 2789,2.

Пример 77

Паклитаксел-Suc-(Doc) ₄-Gaba-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Leu-Nle-NH₂ (SEQ ID NO:12)

(SEQ ID NO:12)

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 28, с использованием паклитаксел-2'-сукцинила, полученного, как описано в примере 72, с использованием янтарного ангидрида вместо глутарового ангидрида и Н-Doc-Doc-Doc-Doc-Gaba-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Leu-Nle-NH₂ (SEQ ID NO:12), где этот пептид был получен по существу, как описано в примере 2. Выход был 12,1% и чистота была 97% на основе ЖХВР-анализа. Было определено, что молекулярная масса равна 2537,8.

Пример 78

Паклитаксел-Sar-Suc-(Doc)₄-Aepa-Gaba-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Leu-Nle-NH₂ (SEQ ID NO:12)

(SEQ ID NO:12)

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 28, с использованием паклитаксел-2'-О-(N-сукцинил-N-метилглицила), полученного по существу, как описано в примере 38, с использованием Boc-Sar-OH вместо Boc-Gly-OH и Н-(Doc)₄-Aepa-Gaba-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Leu-Nle-NH₂ (SEQ ID NO:12), где этот пептид был получен по существу, как описано в примере 1, с последующим связыванием с остатком Aepa, как описано в примере 4, с последующим связыванием с четырьмя остатками Doc, как описано в примере 5). Выход был 13,4% и чистота была 98% на основе ЖХВР-анализа. Было определено, что молекулярная масса равна 2778,1.

Пример 79

Камптотецин-Gly-Suc-(Doc) ₄-Aepa-Gaba-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Leu-Nle-NH₂ (SEQ ID NO:12)

(SEQ ID NO:12)

Указанное в заголовке соединение синтезировали по существу в соответствии с процедурой, описанной в примере 28, с использованием камптотецин-20-(S)-[О-(N-сукцинилглицила)] (примера 14) и Н-(Doc)₄-Aepa-Gaba-Gln-Trp-Ala-Val- Ala-His-Leu-Nle-NH₂ (примера 78, SEQ ID NO:12). Выход был 14,4% и чистота была 99,4% на основе ЖХВР-анализа. Масс-спектрометрией было определено, что молекулярная масса равна 2258.

Синтез других соединений

Соединения, перечисленные ниже в таблицах А-I, могут быть синтезированы в соответствии с вышеописанными процедурами.

Биологические анализы

Анализ связывания рецептор соматостатина-радиолиганд

Мембраны для анализов связывания рецепторов in vitro получали гомогенизацией (Установка Polytron 6, 15 секунд) клеток СНО-К1, экспрессирующих подтипы рецепторов соматостатина человека (hSSTR-1, hSSTR-2, hSSTR-3, hSSTR-4 или hSSTR-5), в охлажденном на льду 50 мМ Трис-HCl и центрифугированием дважды при 39000 g (10 минут) с немедленным ресуспендированием в свежем буфере. Конечные осадки ресуспендировали в 10 мМ Трис-HCl для анализа. Для анализов hSSTR-1, hSSTR-3 и hSSTR-4 аликвоты препаратов мембран инкубировали (90 мин/25^оС) с 0,05 нМ [¹²⁵ I-Tyr11]SRIF-14 в 50 мМ HEPES (рН 7,4), содержащем БСА (0,2%); MgCl₂ (5 мМ). Конечный объем анализа был 0,3 мл. Для анализов hSSTR-2 и hSSTR-5 использовали [¹²⁵I]-[4-(2-гидроксиэтил)]-1-пиперазинилацетил-DPhe-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂ (0,05 нМ) и [¹²⁵I]-DPhe-цикло(Cys-Tyr-DTrp-Lys-Val-Cys)-Thr-NH ₂ в качестве радиолигандов, соответственно, и периоды времени инкубации были 90 мин/25°С. Инкубации останавливали быстрым фильтрованием через фильтры GF/C (предварительно замоченные в 0,3% полиэтиленимине) с использованием фильтрационной установки Бранделя. Затем каждую пробирку и каждый фильтр промывали три раза аликвотами по 5 мл охлажденного на льду буфера. Специфическое связывание определяли в виде общего связанного радиолиганда минус радиолиганд, связанный в присутствии 1000 нМ SRIF-14 (для hSSTR-1, hSSTR-3, hSSTR-4 или hSSTR5) или 1000 нМ DPhe-c(Cys-Tyr-DTup-Lys-Abu-Cys)-Thr-NH ₂ для hSSTR-2.

Анализы роста in vitro

Для анализов пролиферации in vitro культивированные клетки СНО-К1 или клетки СНО-К1, экспрессирующие рецептор hSSTR-2, высевали в пластиковые 24-луночные чашки в среде RPMI 1640 (DMEM), содержащей 10% фетальную телячью сыворотку (ФТС), при плотности приблизительно 10⁴ клеток на лунку/1,0 мл. Тест-пептиды добавляли при желаемой концентрации и поддерживали в культуре (5% СО₂, 37°С, увлажненный воздух) в течение одного дня - трех дней. Клетки промывали бессывороточной средой RPMI, трипсинизировали, ресуспендировали в RPMI 1640 (+ 10% ФТС) и считали с использованием счетчика Коултера при разведении 1:20.

Связывание радиолиганда LHRH

Мембраны получали для исследований связывания радиолиганда гомогенизацией клеток СНО-К1, экспрессирующих крысиный рекомбинантный рецептор LHRH, в 20 мл охлажденного на льду 50 мМ Трис-HCl с использованием Polytron Brinkman (Westbury, NY; установка 6, 15 сек). Гомогенаты промывали дважды центрифугированием (39000 g/10 мин) и конечные осадки ресуспендировали в 50 мМ Трис-HCl, содержащем 5 мМ MgCl ₂ и 0,1% БСА (бычий сывороточный альбумин). Для анализа аликвоты (0,4 мл) инкубировали с 0,05 нМ [¹²⁵I]D-Trp6 LHRH (2200 Ки/ммоль) с 0,05 мл немеченого конкурирующего тест-пептида или без него. После 60 минут инкубации (4°С) связанный [ ¹²⁵I]D-Trp6 LHRH отделяли от свободного быстрым фильтрованием через фильтры GF/B (Brandel, Gaithersburg, MD), которые были предварительно замочены в 0,5% полиэтиленимине/0,1% БСА. Затем эти фильтры промывали три раза аликвотами по 5 мл охлажденного на льду 50 мМ Трис-HCl и связанную радиоактивность, уловленную на этих фильтрах, считали с использованием гамма-спектрометрии (Wallac LKB, Gaithersburg, MD). Специфическое связывание определяли в виде общего связанного [¹²⁵I]D-Trp6-LHRH минус радиолиганд, связанный в присутствии 1000 нМ D-Trp6 LHRH (Bachem Torrence, CA).

Связывание радиолиганда бомбезином/GRP

Мембраны получали для исследований связывания радиолиганда гомогенизацией клеток крысиной поджелудочной железы AR42J, экспрессирующих нативный рецептор бомбезина/GRP, в 20 мл охлажденного на льду 50 мМ Трис-HCl с использованием Polytron Brinkman (Westbury, NY; установка 6, 15 сек). Гомогенаты промывали дважды центрифугированием (39000 g/10 мин) и конечные осадки ресуспендировали в 50 мМ Трис-HCl, содержащем 2,5 мМ MgCl ₂ и 0,1% БСА. Для анализа аликвоты (0,4 мл) инкубировали с 0,05 нМ [¹²⁵I-Tyr4]бомбезином (2200 Ки/ммоль, New England Nuclear, Boston, MA) с 0,05 мл немеченого конкурирующего тест-пептида или без него. После 30 минут инкубации (4°С) связанный [¹²⁵I-Tyr4]бомбезин отделяли от свободного быстрым фильтрованием через фильтры GF/B (Brandel, Gaithersburg, MD), которые были предварительно замочены в 0,3% полиэтиленимине. Затем эти фильтры промывали три раза аликвотами по 5 мл охлажденного на льду 50 мМ Трис-HCl и связанную радиоактивность, уловленную на этих фильтрах, считали с использованием гамма-спектрометрии (Wallac LKB, Gaithersburg, MD). Специфическое связывание определяли в виде общего связанного [¹²⁵I-Tyr4]бомбезина минус радиолиганд, связанный в присутствии 1000 нМ бомбезина (Bachem Torrence, CA).

Некоторые из соединений согласно изобретению имеют по меньшей мере один асимметричный центр. Дополнительные асимметричные центры могут присутствовать в молекуле в зависимости от природы различных заместителей этой молекулы. Каждый такой асимметричный центр будет давать два оптических изомера, и предполагается, что все такие оптические изомеры, в разделенном виде, чистые или частично очищенные оптические изомеры, рацемические смеси или смеси их диастереомеров включены в объем согласно изобретению.

Соединения согласно изобретению обычно могут быть обеспечены в форме их фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей, таких как соли, произведенные с использованием неорганических и органических кислот. Примерами таких кислот являются хлористоводородная, азотная, серная, фосфорная, муравьиная, уксусная, трифторуксусная, пропионовая, малеиновая, янтарная, D-винная, L-винная, малоновая, метансульфоновая, и т.п. Кроме того, некоторые соединения, содержащие кислотную группу, такую как карбокси, могут быть выделены в форме их неорганической соли, в которой противоион может быть выбран из натрия, калия, лития, кальция, магния и т.п., а также из органических оснований.

Фармацевтически приемлемые соли могут быть образованы взятием приблизительно 1 эквивалента соединения согласно изобретению и контактированием его с приблизительно 1 эквивалентом или более подходящей соответствующей кислоты соли, которая является желательной. Обработка и выделение полученной соли хорошо известны специалистам с обычной квалификацией в данной области.

Соединения согласно изобретению могут быть введены пероральным способом, парентеральным (например, внутримышечной, внутрибрюшинной, внутривенной или подкожной инъекцией или в виде имлпантата), назальным, вагинальным, ректальным, сублингвальным или топическим (местным) способами введения и могут быть приготовлены с фармацевтически приемлемыми носителями для обеспечения дозированных форм, подходящих для каждого способа введения. Таким образом, данное изобретение описывает фармацевтические композиции, содержащие, в качестве активного ингредиента, по меньшей мере одно соединение согласно изобретению вместе с фармацевтически приемлемым носителем.

Твердые дозированные формы для перорального введения могут включать в себя капсулы, таблетки, пилюли, порошки и гранулы. В таких твердых дозированных формах активное соединение смешивают по меньшей мере с одним инертным фармацевтически приемлемым носителем, таким как сахароза, лактоза или крахмал. Такие дозированные формы могут также содержать, что является нормальной практикой, дополнительные вещества, другие, чем такие инертные разбавители, например, смазывающие агенты, такие как стеарат магния. В случае капсул, таблеток и пилюль, дозированные формы могут также содержать буферящие агенты. Таблетки и пилюли могут дополнительно быть приготовлены с кишечно-растворимыми (энетеросолюбильными) покрытиями.

Жидкие дозированные формы для перорального введения включают в себя фармацевтически приемлемые эмульсии, растворы, суспензии, сиропы, эликсиры, содержащие инертные разбавители, обычно используемые в данной области, такие как вода. Кроме таких инертных разбавителей, композиции могут также включать в себя адъюванты, такие как увлажняющие агенты, эмульгирующие и суспендирующие агенты и подслащивающие, вкусовые и ароматизирующие агенты.

Препараты согласно изобретению для парентерального введения включают в себя стерильные или неводные растворы, суспензии или эмульсии. Примерами неводных растворителей или носителей являются пролипропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, такие как оливковое масло и кукурузное масло, желатин и инъецируемые органические эфиры, такие как этилолеат. Такие дозированные формы могут также содержать адъюванты, такие как консервирующие, увлажняющие, эмульгирующие и диспергирующие агенты. Они могут быть стерилизованы, например, фильтрацией через удерживающий бактерии фильтр, включением стерилизующих агентов в эти композиции, облучением этих композиций или нагреванием этих композиций. Они могут быть изготовлены в форме стерильных твердых композиций, которые могут быть растворены в стерильной воде или некоторой другой стерильной инъекционной среде непосредственно перед использованием.

Композициями для ректального или вагинального введения являются предпочтительно суппозитории, которые могут содержать, кроме активного вещества, эксципиенты, такие как какао-масло или воск для суппозиториев.

Композиции для назального или сублингвального введения также готовят со стандартными эксципиентами, хорошо известными в данной области.

Обычно эффективная доза активного ингредиента в композициях согласно изобретению может варьироваться; необходимо, чтобы количество активного ингредиента было таким, чтобы была получена подходящая дозированная форма. Выбранная доза зависит от желаемого терапевтического действия, от способа введения и от продолжительности лечения, все из которых находятся в сфере знания обычного специалиста с квалификацией в данной области. Обычно, людям и другим животным, например, млекопитающим, вводят уровни доз между 0,0001 и 100 мг/кг массы тела один раз в день.

Предпочтительными диапазонами доз являются 0,01-10 мг/кг массы тела. Такие дозы могут вводиться, например, ежедневно в виде единственной дозы или дозы, разделенной на множественные дозы.

ДРУГИЕ ВАРИАНТЫ

Различные модификации и вариации описанных здесь способа и системы согласно изобретению будут очевидными специалистам с квалификацией в данной области без отхода от объема и сущности согласно изобретению. Хотя данное изобретение было описано в связи с конкретными желаемыми вариантами, должно быть понятно, что не следует понимать, что изобретение, заявленное таким образом, должно чрезмерно ограничиваться такими конкретными вариантами. В самом деле, предполагается, что различные модификации желаемых способов проведения согласно изобретению, которые являются очевидными специалистам с квалификацией в области медицины, иммунологии, фармакологии, эндокринологии или родственных областей, находятся в пределах объема согласно изобретению.

Все упоминаемые в данном описании публикации, включены здесь в качестве ссылки в такой же степени, как если бы описание каждой независимой публикации было специально обеспечено здесь.