равномерно меченный тритием тилозин

Классы МПК:C07B59/00 Введение изотопов элементов в органические соединения
C07D407/14 содержащие три или более гетероциклических кольца
Автор(ы):, ,
Патентообладатель(и):Институт молекулярной генетики Российской академии наук (ИМГ РАН) (статус государственного учреждения) (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2008-03-19
публикация патента:

Изобретение относится к новому меченному тритием аналогу физиологически активного соединения - равномерно меченному тритием тилозину формулы

равномерно меченный тритием тилозин, патент № 2360896

Технический результат - расширение ассортимента меченых аналогов физиологически активных соединений, используемых в органической химии, в биологии и в медицине. Данное соединение является сильнодействующим антибиотиком. 1 ил.

Рисунки к патенту РФ 2360896

равномерно меченный тритием тилозин, патент № 2360896

Изобретение относится к области органической химии и может найти применение в аналитической химии, биоорганической химии, биохимии и прикладной медицине.

Для изучения физиологически активных соединения бывают необходимы их меченые аналоги.

Известно, что замена соединений на их меченые аналоги не приводит к изменению каких-либо свойств исходного соединения (Evans Е.А. - Tritium and its compounds London Butterworths, 1974, p.48) [1].

Известен тилозин формулы

равномерно меченный тритием тилозин, патент № 2360896

Данное соединение является сильно действующим антибиотиком (J.W.Corcoran et al., J. Antibiot. 30, 1012 (1977)) [2].

Однако его меченный тритием аналог не описан.

Техническим результатом, достигаемым настоящим изобретением, является расширение ассортимента меченых аналогов физиологически активных веществ.

Достигается указанный технический результат получением нового меченого физиологически активного соединения - равномерно меченного тритием тилозина.

На чертеже показано распределение радиоактивности и оптического поглощения на длине волны 280 нм при анализе меченого тилозина после первой стадии очистки. Условия анализа: колонка Reprosil pur C18aq, 5 мкм, 4*150 мм, условия элюирования:

Элюент АМеОН-50 мМ NH4H2PO4 pH 2.8, (6:4)
Элюент В Метанол
Градиент Линейный, от 0 до 25% элюента В за 10 мин
равномерно меченный тритием тилозин, патент № 2360896 изократический участок 25% элюента В
равномерно меченный тритием тилозин, патент № 2360896 от 10 до 15 мин, подача элюента 1
равномерно меченный тритием тилозин, патент № 2360896 мл/мин
Время удерживания меченого тилозина 5.52 мин

Ниже приведен пример реализации изобретения

В первую камеру реакционной двукамерной ампулы помещали 10 мкмоля тилозина, 20 мг окиси палладия и 25 мг 5% PdO/BaSO4, во вторую - 200 мкл абсолютного диоксана и 5 мкл триэтиламина. Вторую камеру замораживали жидким азотом и ампулу вакуумировали до давления 0.1 Па и заполняли газообразным тритием до давления 333 гПа. Затем первую камеру нагревали до 70°С. Окись палладия восстанавливалась, тритиевая вода перемораживалась во вторую камеру Реакционную ампулу вакуумировали до давления 0.1 Па, продолжая нагревать первую ампулу до 70°С, и заполняли аргоном. Затем содержимое второй камеры переливали в первую камеру, которую запаивали. Таким образом реакционная смесь состояла из восстановленного катализатора, 100% тритиевой воды, триэтиламина и раствора тилозина в диоксане. Содержимое ампулы нагревали в течение 20 мин при 150°C. Затем ампулу вскрывали, тритиевую воду, триэтиламин и диоксан отгоняли под вакуумом в специальный приемник, остаток растворяли в 3 мл метанола и катализатор отделяли фильтрованием. Катализатор промывали метанолом (5×1 мл). Лабильный тритий удаляли несколько раз, растворяя полученный меченый тилозин в метаноле (5×2 мл) и упаривая последний.

Первый этап очистки меченого тилозина проводили методом ВЭЖХ (колонка Kromasil 100C 18.8×150 мм, скорость потока 2 мл/мин, система: смесь метанола с аммоний фосфатным буфером, рН 2.8, 6:4, время удерживания 7.2 мин). Анализ меченого тилозина после первой очистки проводили методом ВЭЖХ (радиохимическая чистота - около 70%) (см. чертеж).

На хроматограмме приведены два канала: поглощение элюента на длине волны 215 нм (UV215) и радиоактивность элюента (Rad). Оба канала выражены в относительных единицах (мВ, непосредственно выдаваемых детекторами). На хроматограмму наложен профиль градиента - содержание элюента В (0равномерно меченный тритием тилозин, патент № 2360896 25%).

На чертеже показано изменение оптического поглощения и радиоактивности при хроматографии реакционной смеси, образовавшейся после введения тритиевой метки и видно, что тилозин содержит тритиевую метку и хорошо отделяется от изомерных продуктов. Поэтому после повторной очистки получен препарат с радиохимической чистотой 97-99%.

Перед дальнейшей очисткой и после окончательной очистки меченого тилозина элюент обессоливали. Для этого из раствора меченого тилозина в элюенте при пониженном давлении удаляли метанол, затем меченый тилозин адсорбировали на патроне Sep-Pack C18, пропуская его водный раствор, затем патрон промывали 2 мл воды и смывали меченый тилозин 3 мл метанола.

Повторную очистку меченого тилозина проводили методом ВЭЖХ на той же колонке, что и первичную, но в указанных ниже условиях градиента:

Элюент АМеОН-50 мМ NH4H2PO4 рН 2.8, (6:4)
Элюент В Метанол
Градиент Линейный, от 0 до 100% элюента В за
равномерно меченный тритием тилозин, патент № 2360896 30 мин, скорость потока 2 мл/мин
Время удерживания меченого тилозина 12.5 мин

Для приема и обработки хроматографических данных использовался программно-аппаратный комплекс «МультиХром» (ЗАО «Амперсенд», Россия) на базе IBM PC/AT. Радиоактивность измеряли на сцинтилляционном счетчике с эффективностью регистрации трития 30% в диоксановом сцинтилляторе.

Общий выход меченого препарата после второй стадии очистки составил 17%, молярная радиоактивность 5-7 Ки/моль. Радиохимическая чистота 97-99%.

Таким образом, получено новое равномерно меченное тритием физиологически активное соединение.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Равномерно меченный тритием тилозин формулы:

равномерно меченный тритием тилозин, патент № 2360896


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2360896

patent-2360896.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс C07B59/00 Введение изотопов элементов в органические соединения

Патенты РФ в классе C07B59/00:
реагенты и способы введения радиоактивной метки -  патент 2524284 (27.07.2014)
меченые молекулярные визуализирующие агенты, способы получения и способы применения -  патент 2523411 (20.07.2014)
равномерномеченный тритием пиро-glu-his-pro-nh2 -  патент 2513852 (20.04.2014)
лиганды для визуализации иннервации сердца -  патент 2506256 (10.02.2014)
равномерномеченный тритием (3as,5s,6r,7ar,7bs,9as,10r,12as,12bs)-10-[(2s,3r,4r,5s)-3,4-дигидрокси-5,6-диметил-2-гептанил]-5,6-дигидрокси-7а,9а-диметилгексадекангидро-3н-бензо[c]индено[5,4-е]оксепин-3-он -  патент 2499786 (27.11.2013)
способ увеличения радиоактивности меченных тритием органических соединений при их получении с помощью метода термической активации трития -  патент 2499785 (27.11.2013)
селективное введение радиоактивной метки в биомолекулы -  патент 2491958 (10.09.2013)
способ получения дитритийдифторбензола источника фторированных нуклеогенных фенил-катионов -  патент 2479561 (20.04.2013)
способ получения радиоактивного, меченного фтором органического соединения -  патент 2476423 (27.02.2013)
способ получения (13c2-карбонил)диметилфталата -  патент 2470008 (20.12.2012)

Класс C07D407/14 содержащие три или более гетероциклических кольца

Патенты РФ в классе C07D407/14:
соединения, ингибирующие (блокирующие) горький вкус, способы их применения и получения -  патент 2522456 (10.07.2014)
новые соединения, применение и получение их -  патент 2493152 (20.09.2013)
безгалогеновые, основанные на безоксазине, отверждаемые композиции с высокой температурой стеклования -  патент 2480465 (27.04.2013)
гидроксилированные и метоксилированные циклопента[d]пиримидины в качестве ингибиторов акт протеинкиназ -  патент 2478632 (10.04.2013)
полициклические производные индазола и их применение в качестве ингибиторов erk для лечения рака -  патент 2475484 (20.02.2013)
аминосоединения и их медицинское применение -  патент 2470929 (27.12.2012)
производное хинолона или его фармацевтически приемлемая соль -  патент 2440987 (27.01.2012)
производные нитрофурана, обладающие антибактериальным действием -  патент 2425044 (27.07.2011)
пирид-2-оны, применимые как ингибиторы протеинкиназ семейства тес для лечения воспалительных, пролиферативных и иммунологически-опосредованных заболеваний -  патент 2423351 (10.07.2011)
гетероциклические ингибиторы аспартилпротеазы -  патент 2405774 (10.12.2010)


Наверх