способ прогнозирования эффективности аутогемохимиоиммунотерапии у больных с рецидивами и метастазами рака шейки матки

Формула изобретения

Способ прогнозирования эффективности аутогемохимиоиммунотерапии у больных с рецидивами и метастазами рака шейки матки, включающий химиотерапию, биохимическое исследование, отличающийся тем, что до начала химиотерапевтического лечения у больных определяют в плазме крови содержание производных оксида азота - пероксинитрита и нитрозилгемоглобина, и при более чем трехкратном относительно доноров снижении уровня пероксинитрита и увеличенном в 3 раза уровне нитрозилгемоглобина прогнозируют отсутствие или низкую эффективность лечения, а при нормальных или увеличенных значениях уровня пероксинитрита и незначительно сниженном уровне нитрозилгемоглобина прогнозируют выраженную регрессию опухоли.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к биохимическим исследованиям в онкологии, и может быть использовано в качестве прогностического фактора при лечении аутогемохимиоиммунотерапией онкологических больных.

Известен способ определения индивидуальной чувствительности больных раком яичников 3-4 степени к химиотерапии (см. авторское свидетельство № 1827639 от 15.07.1993, опубл. Бюл. № 26 от 15.07.1993), включающий определение в крови уровня фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов. Этот способ прогнозирования опухолевого процесса изучен только у больных раком яичников и для его выполнения необходим радиоиммунный анализ, требующий дорогостоящих импортных оборудования и тест-наборов.

Известен способ прогнозирования эффективности аутогемохимиотерапии у больных раком органов полости рта и глотки (см. патент № 2253354 от 10.06.2005, опубл. № 16 от 10.06.2005), выбранный в качестве прототипа. Способ включает определение в крови содержания гормонов щитовидной железы - трийодтиронина и тироксина, и гормона гипофиза тиреотропина, вычисление отношения суммы концентраций трийодтиронина и тироксина к концентрации тиреотропина, и при его значении в пределах 166-408 прогнозируют эффективное, а при 34-106 - не эффективное лечение. Однако этот способ изучен только у больных раком органов полости рта и глотки и требует для проведения исследования импортного оборудования, особых условий для осуществления радиоиммунного анализа, дорогостоящих, импортных тест-наборов и серийного режима выполнения исследований с длительным промежутком времен для накопления материала.

Таким образом, представленные способы прогнозирования, хотя и достаточно эффективны, но сложны по выполнению и разработаны для больных с другими локализациями опухолевого процесса.

Целью изобретения является определение эффективности аутогемохимиоиммунотерапии у больных с рецидивами и метастазами рака шейки матки до начала ее проведения.

Поставленная цель достигается тем, что у больных до начала аутогемохимиоиммунотерапевтического лечения определяют в плазме крови содержание производных оксида азота - пероксинитрита и нитрозилгемоглобина, и при более чем трехкратном относительно доноров снижении уровня пероксинитрита и увеличенном в 3 раза уровне нитрозилгемоглобина прогнозируют отсутствие или низкую эффективность лечения, а при нормальных или увеличенных значениях уровня пероксинитрита и незначительно сниженном уровне нитрозилггемоглобина прогнозируют выраженную регрессию опухоли.

Изобретение: «Способ прогнозирования эффективности аутогемохимиоиммунотерапии у больных с рецидивами и метастазами рака шейки матки» является новым, так как оно неизвестно из уровня медицины в области биохимических исследований в онкологии в качестве прогностического критерия.

Новизна изобретения заключается в том, что у больных до начала лечения определяют в плазме крови содержание производных оксида азота - пероксинитрита и нитрозилгемоглобина, и при более чем трехкратном относительно доноров снижении уровня пероксинитрита и увеличенном в 3 раза уровне нитрозилгемоглобина прогнозируют отсутствие или низкую эффективность лечения, а при нормальных или увеличенных значениях уровня пероксинитрита и незначительно сниженном уровне нитрозилггемоглобина прогнозируют выраженную регрессию опухоли.

Используемый подход к поиску предикторов эффективности химиотерапии определяется тем, что пероксинитрит и нитрозилгемоглобин представляют собой важнейшие метаболиты оксида азота (NO), являющегося одним из ключевых регуляторов физиологических функций организма. Пероксинитрит (ONOO^- ) образуется в результате реакции супероксидного анион-радикала (О^- ₂) с NO и выступает в качестве чрезвычайно токсического соединения. Нитрозилгемоглобин выполняет функцию депонирования оксида азота и внутриклеточного антиоксиданта, обеспечивающего защиту от пероксинитрита (см. Ванин А.Ф. Динитрозильные комплексы железа - эндогенные сигнальные агенты в клетках и тканях животных и человека (Гипотеза) // Биофизика. 2004. Т. 49. Вып.4. С.581-586; Зинчук В.В. Участие оксида азота в формировании кислородсвязывающих свойств гемоглобина // Успехи физиологических наук. 2003. Т. 34. № 2. С.33-45). Кроме того, примененный нами для изучения причинно-следственных отношений между состоянием больных и различными показателями крови метод дисперсионного анализа показал, что из всех рассмотренных биохимических показателей, среди которых были показатели состояния мембран, эндогенной интоксикации и некоторых других звеньев свободнорадикального окисления, наибольшее влияние состояние больных оказывает именно на уровень нитрозилгемоглобина, нитротирозина (также обладающего способностью депонировать оксид азота) и пероксинитрита.

Изобретение является промышленно применимым, так как может быть использовано в здравоохранении, медицинских учреждениях, занимающихся лечением онкологических больных, НИИ онкологии и онкодиспансерах, поскольку оно просто в исполнении и не требует больших материальных затрат.

Изобретение: «Способ прогнозирования эффективности аутогемохимиоиммунотерапии у больных с рецидивами и метастазами рака шейки матки» выполняется следующим образом.

В плазме крови больных с рецидивами и метастазами рака шейки матки при их поступлении в отделение гинекологии и в динамике аутогемохимиоиммунотерапии определяли уровень пероксинитрита и нитрозилгемоглобина. Уровень в плазме крови пероксинитрита и нитрозилгемоглобина определяли спектрометрически на отечественном спектрофлюориметре Флюорат-02-панорама при следующих длинах волн: пероксинитрит - 302 нм, нитрозилгемоглобин - 545 нм. Уровень продуктов NO рассчитывали с использованием выведенных молярных коэффициентов экстинции (см. Степуро И.И., Чайковская Н.А., Солодунов А.А., Арцукевич А.Н. Образование NO в процессе окисления серроформ гемоглобина нитритом // Биохимия. 1997. Т. 62. Вып.9. С.1122-1129; Лобышева И.И., Сереженков В.А., Ванин А.Ф. Взаимодействие динитрозильных тиолсодержащих комплексов железа с пероксинитритом и перекисью водорода in vitro // Биохимия. 1999. Т. 64. Вып.2. С.194-200) и выражали пероксинитрит в нмолях на 1 мг белка, а нитрозилгемоглобин в нмолях - на 1 мг гемоглобина. Полученные результаты сравнивали со значениями показателей в группе женщин без онкопатологии (доноры). Все больные получали не менее трех курсов аутогемохимиоиммунотерапии препаратами цисплатин, циклофосфан, доксорубицин и ронколейкин с последующей оценкой эффективности лекарственной терапии по степени регрессии опухоли. У пролеченных больных регрессия опухоли колебалась от 0 до 100%. Полученные результаты по регрессии опухоли были проанализированы в соответствии с величиной исходного (до начала химиотерапии) уровня пероксинитрита и нитрозилгемоглобина (см. таблицу).

Таблица 1 Уровень пероксинитрита и нитрозилгемоглобина у больных раком шейки матки с выраженной регрессией опухоли и со стабилизацией процесса при аутогемохимиоиммунотерапии
	Пероксинитрит, нмоль/мг белка М±m(n)	NO-гемоглобин, нмоль/мг гемогл. M±m(n)
Доноры	85,51±5,31 (15)	21,93±1,28 (13)
I группа (регрессия опухоли) До лечения	166±19,5 (7) Р=0,0001	16,77±1,58 (7) Р=0,0238
II группа (стабилизация процесса) До лечения	23,8±1,13 (5) Р=0,0003 Р1,2=0,0002	73,24±4,08 (5) Р=0,000000 P1,2,2=0,000000
I группа После лечения	79,5±3,74 (7) Р>0,1 Р1=0,0046	29,84±3,59 (7) P=0,0195 P1=0,0061
II группа После лечения	141±6,88 (5) Р=0,0002 Р1=0,000000 Р1,2=0,000000	23,87±2,75 (5) P>0,1 P1=0,000000 P1,2>0,1

Примечание: Р - достоверность различий по сравнению с донорами;

P₁ - достоверность различий по сравнению со значениями до лечения;

P_1,2 - достоверность различий между I и II группами.

Было установлено, что у 7 больных (58%), у которых до начала лечения уровень пероксинитрита превышал норму в среднем на 94% с пределами 80,4-248,8 нмоль/мг, а уровень нитрозилгемоглобина был в среднем снижен на 24% с пределами 11,8-22,69 нмоль/мг, аутогемохимиоиммунотерапия сопровождалась 50-100%-й регрессией опухоли. У остальных 5 больных (42%) средние фоновые значения для пероксинитрита составили 23,8±1,13 с пределами 20,83-26,79 нмоль/мг (ниже нормы на 72%), а для нитрозилгемоглобина - 73,24±4,08 с пределами 64,84-84,65 нмоль/мг (превысили норму на 234%) и имела место лишь стабилизация процесса.

Результаты сравнительного анализа свидетельствуют о том, что фоновые значения пероксинитрита и нитрозилгемоглобина можно использовать в качестве высокоинформативных предикторов чувствительности рецидивов рака шейки матки к аутогемохимиоиммунотерапии. При изначально резко сниженном уровне пероксинитрита и увеличенном содержании нитрозилгемоглобина можно ожидать отсутствие или слабовыраженный эффект и, возможно, пересмотреть схему лечения. Напротив, изначально увеличенный или нормальный уровень пероксинитрита и отсутствие увеличения нитрозилгемоглобина позволяет прогнозировать выраженную регрессию опухоли. При этом у больных в процессе высокоэффективного лечения имеет место снижение уровня пероксинитрита, определенную роль в этом может играть умеренное увеличение содержания нитрозилгемоглобина, тогда как в процессе малоэффективной АГХИТ наблюдается увеличение агрессивного свободнорадикального соединения - пероксинитрита (см. таблицу).

Примеры

Пример 1. Больная С., 1978 г.р., и.б. № 11386/ф, поступила в гинекологическое отделение РНИОИ 6.09.2006 г.с диагнозом: Рак шейки матки St. II гр. 2. Состояние после комбинированного лечения в 2005 г. Генерализация процесса. Множественные двусторонние метастазы в легкие. До начала лечения исследован уровень в плазме крови пероксинитрита и нитрозилгемоглобина, составивший 26,79 нмоль/мг белка и 64,84 нмоль/мг гемоглобина соответственно. Проведено шесть курсов аутогемохимиоиммунотерапии - АГХИТ (каждый из которых включал введение 150 мг цисплатина, 600 мг циклофосфана, 30 мг доксорубицина и 10 млн ME ронколейкина). После краткосрочного незначительного улучшения общего состояния больной (после 1-го курса купирование болевого синдрома в области грудины, одышки, после 2-го курса частичная регрессия метастатических очагов в легких) стабилизация процесса на фоне 3-5 курсов и прогрессирование процесса после проведения 6 курсов АГХИТ. Биохимические исследования, проводившиеся в динамике АГХИТ, выявили увеличение уровня пероксинитрита до 160,12 нмоль/мг белка (в 1,9 раза выше нормы -85,51±5,31) и снижение уровня нитрозилгемоглобина до 19,13 нмоль/мг гемоглобина (норма 21,93±1,28).

Таким образом, сниженный относительно доноров (в 3,2 раза) уровень пероксинитрита и увеличенный (в 3 раза) уровень нитрозилгемоглобина до начала химиотерапии сочетаются с низкой эффективностью лечения, что сопровождается резким увеличением в процессе химиотерапии пероксинитрита, являющегося одним из наиболее агрессивных свободнорадикальных соединений.

Пример 2. Больная Б., 1961 г.р., и.б. № 23812/х, поступила в гинекологическое отделение РНИОИ 22.12.2006 г. с диагнозом: Рак шейки матки St. III гр.2. Состояние после сочетанно-лучевого лечения в 2004 г. Генерализация процесса. Двусторонние множественные метастазы в легких. До начала лечения исследован уровень в плазме крови пероксинитрита и нитрозилгемоглобина, составивший 161,31 нмоль/мг белка и 21,89 нмоль/мг гемоглобина соответственно. Начиная с 25.12.06 проведено три курса АГХИТ, в процессе каждого из которых больная получала 150 мг цисплатина, 600 мг циклофосфана, 30 мг доксорубицина и 10 млн ME ронколейкина. При обследовании больной через 2 недели после проведения 2-го курса АГХИТ установлено, что по данным компьютерной томографии размеры очагов в обоих легких уменьшились в 2 раза (регрессия на 50%), улучшилось общее состояние больной, купировалась одышка. Проведенное 14.02.2007 г.(перед началом 2-го курса) биохимическое исследование выявило нормализацию уровня пероксинитрита, составившего 95,2 нмоль/мг, и умеренное увеличение нитрозилгемоглобина до 30,55 нмоль/мг гемоглобина.

Пример 3. Больная К., 1967 г.р., и.б. № 3088/ф, поступила в гинекологическое отделение РНИОИ 18.01.2007 г. с диагнозом: Рак шейки матки St. I Б гр. 2. Состояние после комбинированного лечения в 2005 г.Метастаз в правом параметрии. Лимфостаз правой нижней конечности. До начала лечения исследован уровень в плазме крови пероксинитрита и нитрозилгемоглобина, составивший 80,4 нмоль/мг белка и 15,83 нмоль/мг гемоглобина соответственно. Получила 3 курса АГХИТ (по 100 мг цисплатина, 400 мг циклофосфана, 45 мг блеомицина и 10 млн ME ронколейкина). После трех курсов регрессия опухоли составила 80%, купированы болевой синдром в правой подвздошной области. Лимфостаз правой нижней конечности не отмечен. Биохимические исследования, проводившиеся в динамике АГХИТ, (перед началом 2-го и 3-го курсов) выявили уровень пероксинитрита 67,26 и 76,2 нмоль/мг и нитрозилгемоглобина 19,13 и 39,84 нмоль/мг гемоглобина.

Таким образом, нормальный или увеличенный уровень пероксинитрита и незначительно сниженный уровень нитрозилгемоглобина до начала лечения сочетаются с высокой степенью регрессии опухоли под влиянием аутогемохимиоиммунотерапии, что сопровождается нормализацией в процессе химиотерапии уровня пероксинитрита и оптимально повышенным уровнем нитрозилгемоглобина, выполняющим защитную функцию.

Технико-экономическая эффективность «Способа прогнозирования эффективности аутогемохимиоиммунотерапии у больных с рецидивами и метастазами рака шейки матки» заключается в том, что определение эффективности аутогемохимиоиммунотерапии перед началом ее применения позволяет прогнозировать эффект будущего лечения и таким образом избавит больную от проведения малоэффективного этапа лечения и применения препаратов, обладающих побочным (токсическим) влиянием на организм, позволяет индивидуально планировать наиболее эффективную тактику противоопухолевого лечения. Проведение предлагаемого биохимического исследования просто по исполнению, занимает мало времени (в течение 1 часа с момента взятия крови), доступно, не требует материальных затрат на препараты и дорогостоящей аппаратуры.