ПАТЕНТНЫЙ ПОИСК В РФ
НОВЫЕ ПАТЕНТЫ, ЗАЯВКИ НА ПАТЕНТ
БИБЛИОТЕКА ПАТЕНТОВ НА ИЗОБРЕТЕНИЯ

фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины, способ ее получения и ее применение

Классы МПК:A61K36/8945 Dioscorea (диоскорея), например ямс (ньям), китайский ямс или водный ямс
A61K31/7048  содержащие кислород в качестве гетероатома, например лейкоглюкозан, гесперидин, эритромицин, нистатин
A61P9/10 для лечения ишемических или атеросклеротических заболеваний, например антиангинозные средства, коронарные вазодилататоры, средства для лечения инфаркта миокарда, ретинопатии, цереброваскулярной недостаточности почечного артериосклероза
A61P9/06 средства против аритмии
A61P3/06 средства против повышенного содержания жира в крови (гиперлипемии)
Автор(ы):, , , , , ,
Патентообладатель(и):ЧЕНГДУ ДЬАО ФАРМАСЬЮТИКАЛ ГРУП Ко., Лтд. (CN)
Приоритеты:
подача заявки:
2005-09-29
публикация патента:

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к средствам для лечения и предупреждения церебро-сердечно-сосудистых заболеваний. Фармацевтическая композиция для лечения и предупреждения церебросердечно-сосудистых заболеваний, содержащая определенные стероидные сапонины в определенном количестве. Способ приготовления фармацевтической композиции, при котором взвешивают фуростаноловый сапонин и спиростаноловый сапонин, смешивают их в определенном соотношении, добавляют фармацевтически приемлемые адъюванты. Способ приготовления фармацевтической композиции, при котором берут корневища определенных растений, разрезают корневища или разламывают их, экстрагируют, охлаждают, фильтруют экстракт, пропускают фильтрат через колонку с абсорбирующей смолой, отбрасывают элюат, промывают колонку водой, отбрасывают промывочную воду; элюируют колонку, собирают и концентрируют элюат; добавляют спирт к концентрированному раствору, собирают фильтрат после фильтрации; концентрируют и сушат фильтрат, добавляют фармацевтически приемлемые адъюванты. Применение фармацевтической композиции для изготовления фармацевтического препарата для лечения и предупреждения церебросердечно-сосудистых заболеваний. Вышеописанная композиция эффективна для лечения и предупреждения церебро-сердечно-сосудистых заболеваний, обладает высокой стабильностью. 4 н. и 13 з.п. ф-лы, 4 ил., 8 табл. фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337

Рисунки к патенту РФ 2349337

фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей стероидные сапонины, в частности к фармацевтической композиции, содержащей стероидные сапонины, экстрагированные преимущественно из сырья Dioscorea panthaica Prain et Burkill и Dioscorea nipponica Makino.

Предшествующий уровень техники

Стероидные сапонины представляют собой класс важных биоактивных веществ в растениях. Исследование стероидного сапонина занимает важное место в химии природных продуктов. Агликон стероидного сапонина представляет собой спиростанол или фуростанол, содержащий 27 атомов углерода, и встречается главным образом в таких однодольных растениях, как лилейные (Liliaceae), амариллисовые (Amaryllidaceae) и диоскорейные (Dioscoreaceae).

Под травой Dioscorea panthaica Prain et Burkill (вид из рода Dioscorea, семейства Dioscoreaceae) подразумеваются корневища травянистого растения Dioscorea panthaica Prain et Burkill, которое имеет много других названий, таких как куркума, куркума длинная (curcumae longae), корневище купены лекарственной (tendrilleaf solomonseal rhizome) и клубень куркумы (Turmeric Root Tuber). Она распространена на юго-западе Китая и в провинциях Хубэй (Hubei) и Хунань (Hunan) этой страны и оказывает воздействие на регуляцию qi (жизненной энергии) для облегчения боли и детумесценции путем детоксификации, так что ее часто прописывают при ператодинии (peratodynia), рвоте, диарее, болях в животе, травмах, переломах, кожных заболеваниях и укусах ядовитых змей [Chinese Materia Medica, Vol 8 р8.247, составленный Chinese Materia Medica Editorial Committee, State Traditional Chinese Medical Administration Bureau, и опубликованный Shanghai Science и Technology Press в 1999 г.]. Под травой Dioscorea nipponica Makino (вид из рода Dioscorea, Dioscoreaceae) подразумеваются корневища травянистого растения Dioscorea nipponica Makino, которое также имеет много других названий, таких как куркума, аконит (monkshood vine root-bark) и т.д. Она распространена на севере, северо-востоке и северо-западе Китая, а также в провинциях Хэнань (Непап), Хубэй, Шаньдун (Shandong), Цзянсу (Jiangsu), Аньхой (Anhui), Чжэцзян (Zhejiang), Цзянси (Jiangxi) и Сычуань (Sichuan) этой страны. Она способствует избавлению от ревматизма и удалению мокроты, стимулирует кровообращение для удаления меридианной обструкции и останавливает кашель, так что ее часто прописывают при ревматической артралгии, онемении конечностей, торакальной обструкции, боли в сердце, хроническом трахеите, травмах, переломах, малярии, сибирской язве (anthracia) и опухании [Chinese Mater/a Medica, vol 8, p238, составленный Chinese Materia Medica Editorial Committee, State Traditional Chinese Medical Administration Bureau, и опубликованный Shanghai Science и Technology Press в 1999 г.]. Dioscorea nipponica Makino также описана на стр.435-436, часть I, издание 1977 г., Фармакопеи Китайской Народной Республики.

В настоящее время исследования Dioscorea panthaica Prain et Burkill и Dioscorea nipponica Makino проводят редко. Bogang Li с соавт. сообщил о выделении и идентификации двух видов водонерастворимых стероидных сапонинов: диосцина и грациллина из Dioscorea panthaica Prain et Burkill. [Bogang Li etal. ACTA BOTANICA SINICA 1986, 28(4): 409-411]. Три вида стероидных сапонинов выделены Mei Dong с соавт. из Dioscorea panthaica Prain et Burkill, их структуры были идентифицированы как псевдопростероидные сапонины (Диосцин 1) и DI-9 (Диосцин 6) [Mei Dong et al. ACTA MEDICA SINICA 2001, 36(1): 42-45]. Появились также сообщения, что Yiwei Fang с соавт. получил из Dioscorea nipponica Makino и идентифицировал два вида водонерастворимых стероидных сапонинов: диосцин и грациллин, которые оба являются компонентами пергексилина [Yiwei Fang et al. ACTA MEDICA SINICA 1982, 17(5): 388-391]. Два вида стероидных сапонинов также экстрагированы и получены из Dioscorea nipponica Makino, из них один является водонерастворимым, а другой - водорастворимым, их структуры определены как грациллины [Shuhu Du et al. ACTA MEDICA SINICA 2002, 37(4): 267-270]. В другом исследовании раскрыты структурные формулы восьми видов стероидных сапонинов, экстрагированных из общих диосцинов [Bogang Li; Zhengzhi Zhou. Traditional Chinese Drug Research & Clinical Pharmacology 1994, 13(2): 75-76]. Указанные восемь видов стероидных сапонинов являются активными компонентами для лечения заболевания коронарных артерий, включая диосцины, протодиосцины, протограциллины и грациллины. В китайской патентной заявке CN020128119.X раскрыто новое применение шести видов спиростаноловых стероидных сапонинов для лечения сердечно-сосудистых заболеваний. В китайской патентной заявке CN02112159.1 раскрыто новое применение композиции, содержащей диосгенины для лечения ишемии миокарда, стенокардии и инфаркта миокарда. До сих пор только два вида компонентов: псевдопротодиосцин (I) и диосцин (II) были выделены и идентифицированы из трав Dioscorea panthaica Prain et Burkill и Dioscorea nipponica Makino.

Хотя в вышеупомянутых ссылках раскрыто, что Dioscorea panthaica Prain et Burkill и Dioscorea nipponica Makino содержат несколько видов стероидных сапонинов, которые эффективны при лечении сердечно-сосудистых заболеваний, исследования относятся только к химическим исследованиям эффективных компонентов вышеуказанных двух растений, и некоторые из этих компонентов имеют незначительную ценность в фармацевтических препаратах из-за их низкого содержания в растениях. Как все знают, обычно очень трудно и дорого получать эффективные и чистые химические соединения из растений. При этом, для того чтобы избежать неожиданных побочных эффектов и уменьшить затраты, и для удобства применения, в обычной практике не используют чистые эффективные соединения из травянистых растений, а используют экстракты травянистых растений в качестве сырья для фармацевтических препаратов. Один из недостатков такой практики состоит в том, что различия сезонов сбора растений и площадей для их выращивания будут приводить к изменениям в содержании эффективных компонентов. Однако неопределенность основных эффективных компонентов и их содержания будет приводить к большим трудностям в качественном контроле фармацевтических препаратов. Поэтому для поддержания стабильности качества растительного лекарственного средства важно получить ясное представление об основных компонентах и их содержании в травянистых растениях. Вследствие технических ограничений и разнообразия стероидных сапонинов в видах растений, до сих пор не существует полного обзора основных эффективных компонентов стероидных сапонинов и их содержания и чистоты.

Традиционный способ получения общих стероидных сапонинов представляет собой следующее: после горячей экстракции метанолом или этанолом полученный спиртовой раствор концентрируют; после удаления метанола или этанола раствор обезжиривают хлороформом, экстрагируют нормальным бутиловым спиртом, содержащим воду. Общие стероидные сапонины получают после конденсирования раствора. Способ, описанный выше, имеет следующие недостатки: 1) низкий выход и высокая стоимость; 2) продолжительное время изготовления; 3) необходимость в большом количестве органических растворителей, которые могут представлять собой риск из-за воспламенения или отравления продукции и приводят к серьезному загрязнению окружающей среды; 4) большой расход энергии, являющийся результатом концентрирования и обезвоживания нормального бутилового спирта с высокой температурой кипения; 5) неудовлетворительное качество цвета и блеска продуктов и непригодность для промышленного производства. Общие стероидные сапонины, приготовленные традиционными методами, не стабильны по содержанию, что будет приводить к нестабильности действия лекарств, изготовленных из них.

Сущность изобретения

Для того чтобы преодолеть вышеупомянутые недостатки, в настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины. В настоящем изобретении также предложен способ ее приготовления и ее применение.

В настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины, она содержит 5-25 частей по массе фуростанолового сапонина, представленного общей формулой А и/или общей формулой В, и 1-10 частей по массе спиростанолового сапонина или сапогенина, представленного общей формулой С.

фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337

где в общей формуле А

фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337

фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337

где в общей формуле B:

фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337

где в общей формуле C:

фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337

Более предпочтительно, она содержит следующие соединения:

в общей формуле А:

фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337

тогда соединение, представленное общей формулой А, представляет собой псевдопротодиосцин (I);

фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337

тогда соединение, представленное общей формулой А, представляет собой псевдопротограциллин (II);

в общей формуле В:

фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337

тогда соединение, представленное общей формулой В, представляет собой

протодиосцин (IV);

фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337

тогда соединение, представленное общей формулой В, представляет собой протограциллин (V);

в общей формуле С:

фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337

тогда соединение, представленное общей формулой С, представляет собой диосцин (III).

В одном воплощении композиция по настоящему изобретению содержит 5-22 частей псевдопротодиосцина (I) и/или протодиосцина (IV), 1-3 частей псевдопротограциллина (II) и/или протограциллина (V) и 1-8 частей диосцина (III).

Предпочтительно, она содержит 5-20 частей псевдопротодиосцина (I), 1-3 части псевдопротограциллина (II) и 1-5 частей диосцина (III).

Более предпочтительно, она содержит 12-18 частей псевдопротодиосцина (I), 1 часть псевдопротограциллина (II) и 1,2-2,5 частей диосцина (III).

Стероидные сапонины, используемые в данной композиции, получены из экстрактов Dioscorea panthaica Prain et Burkill и Dioscorea nipponica Makino, которые обе относятся к видам диоскореи (Dioscorea) семейства диоскорейных (Dioscoreaceae).

При этом в указанном экстракте общих стероидных сапонинов содержание общих стероидных сапонинов составляет более 80% (масс./масс.) и не менее 65% (масс./масс.) в пересчете на диосцин.

При этом в указанном экстракте общее содержание трех видов стероидных сапонинов, то есть псевдопродиосцина (I), псевдопротограциллина (II) и диосцина (III), составляет не менее 50% (масс./масс.) от содержания общих стероидных сапонинов.

Указанный экстракт имеет ВЭЖХ-хроматограмму, как показано на фиг.1, где характеристические пики хроматограммы соответствуют: времени удерживания для псевдопротодиосцина (I), составляющему 28,27 мин; времени удерживания для псевдопротограциллина (II), составляющему 29,5 мин, и времени удерживания для диосцина (III), составляющему 27,10 мин.

Условия хроматографии: хроматографическая колонка - Alltima C18 4,6×250 мм, 5 м; градиентная элюция; определение с помощью испарительного детектора светорассеяния; температура дрейфовой трубки - 100°С; скорость потока газа - 2,0 л/мин.

Указанный экстракт приготавливают следующими способами:

а) Берут корневища Dioscorea panthaica Prain et Burkill и Dioscorea nipponica Makino или корневища свежесобранных травянистых растений Dioscorea panthaica Prain et Burkill и Dioscorea nipponica Makino в качестве сырья. После разрезания и измельчения корневищ экстрагируют смешанным раствором, содержащим воду, метанол, этанол, н-бутанол, или смешанным раствором, содержащим один или более чем один другой низший спирт, при этом количество указанного смешанного раствора должно быть в 24-48 раз больше количества сырья.

б) Охлаждают и фильтруют экстракт, приготовленный на стадии (а), пропускают фильтрат через колонку с абсорбирующей смолой, отбрасывают элюат и промывают колонку водой до тех пор, пока элюат не станет бесцветным, отбрасывают промывочную воду.

в) Элюируют колонку с абсорбирующей смолой, которую промывают водой на стадии (б), одним или более чем одним растворителем, выбранным из группы, состоящей из этанола, метанола, ацетона, 50%-90% этанола, 30-80% водного метанола и 60-95% водного ацетона; собирают и концентрируют элюат.

г) Добавляют 60-95% спирта к концентрированному раствору, полученному на стадии (в), для осаждения спиртом, фильтруют и собирают фильтрат, и продукт получают после концентрирования и сушки фильтрата.

При этом стадия (б) вышеуказанного способа дополнительно включает стадию концентрирования при пониженном давлении перед охлаждением и фильтрацией, когда экстракт содержит метанол, этанол, н-бутанол или другие низшие спирты.

Растворитель, используемый на стадии (в), может представлять собой один или более чем один растворитель, выбранный из воды, метанола, этанола, н-бутанола или других низших спиртов или их смеси. Экстракцию осуществляют путем замачивания или с помощью ультразвукового резонанса при комнатной температуре, или путем замачивания или кипячения при нагревании. Экстракцию можно проводить один или несколько раз.

Смолы, используемые на стадии (б), могут представлять собой один или более чем один вид смолы, выбранной из группы, состоящей из HPD 100, HPD300, LD40 , D101 и их смесей. Растворитель для элюции может представлять собой один или более чем один растворитель, выбранный из группы, состоящей из воды, метанола, этанола, ацетона, водного метанола, водного этанола и водного ацетона. Элюция может представлять собой либо элюцию концентрацией, либо градиентную элюцию.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению содержит стероидные сапонины или их экстракты в качестве активного ингредиента и фармацевтически приемлемые адъюванты.

При этом фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть приготовлена в различных формах, таких как таблетка, капсула, мягкая капсула, гранула, пероральная жидкость, капельная пилюля и инъекция.

В настоящем изобретении также предложен способ приготовления фармацевтической композиции, включающий следующие стадии.

Берут и взвешивают фуростаноловые сапонины общей формулы А и/или общей формулы В и спиростаноловый сапонин общей формулы С и смешивают их в соотношении 5-25 частей по массе фуростанолового сапонина и 1-10 частей по массе спиростанолового сапонина. Добавляют фармацевтически приемлемые адъюванты и готовят фармацевтическую композицию.

Кроме того, фармацевтическая композиция, предложенная в настоящем изобретении, может быть также приготовлена следующим способом.

а) Берут корневища Dioscorea panthaica Prain et Burkill и Dioscorea nipponica Makino или корневища тех же свежесобранных травянистых растений в качестве сырья. После разрезания или разламывания корневища экстрагируют одним или более чем одним растворителем, выбранным из группы, состоящей из воды, метанола, этанола, w-бутанола и других низших спиртов, при этом количество растворителя должно быть в 24-48 раз больше количества сырья.

б) Охлаждают и фильтруют экстракт, приготовленный на стадии (а), пропускают фильтрат через колонку с абсорбирующей смолой, отбрасывают элюат и промывают колонку водой до тех пор, пока элюат не станет бесцветным, отбрасывают промывочную воду.

в) Элюируют колонку с абсорбирующей смолой, которую промывали водой на стадии (б), одним или более чем одним растворителем, выбранным из группы, состоящей из этанола, метанола, ацетона, 50%-90% этанола, 30-80% водного метанола и 60-95% водного ацетона, собирают и концентрируют элюат.

г) Добавляют 60-95% спирта к концентрированному раствору, полученному на стадии (в), для осаждения спиртом, фильтруют и собирают фильтрат.

д) Концентрируют и сушат фильтрат, полученный на стадии (г), и добавляют фармацевтически приемлемые адъюванты для получения фармацевтической композиции в общепринятых формах.

При этом на стадии (б) он дополнительно включает стадию концентрирования при пониженном давлении перед охлаждением и фильтрацией, когда экстракт содержит метанол, этанол, н-бутанол или другие низшие спирты.

В настоящем изобретении также предложено применение фармацевтической композиции для изготовления фармацевтического препарата для лечения и предупреждения церебро-сердечно-сосудистых заболеваний. При этом указанный фармацевтический препарат относится к препаратам для лечения заболевания коронарных артерий, стенокардии, инфаркта миокарда, аритмии, гиперлипемии или ишемического цереброваскулярного заболевания.

После определения трех стероидных сапониновых компонентов в фармацевтической композиции по настоящему изобретению доказано, что она обладает высокой стабильностью и надежностью терапевтического эффекта. При этом предложен способ определения трех стероидных сапонинов с достоверной контролируемостью. Кроме того, при суточной дозировке 300-600 мг, которая является наименьшей дозировкой, лекарство по данному изобретению является новым вариантом для применения в клиниках.

Очевидно, что на основании вышеприведенного раскрытия настоящего изобретения и с учетом известного уровня техники и рутинных средств, принятых в данной области техники, можно делать многочисленные модификации, замены или изменения в настоящем изобретении при условии не отклоняться от основных идей способов, упомянутых выше.

Следующие варианты осуществления изобретения предложены для дополнительной иллюстрации настоящего изобретения, но это никоим образом не следует понимать как ограничение объема объектов настоящего изобретения. Любая технология, осуществленная на основе описания настоящего изобретения, относится к объему настоящего изобретения.

Краткое описание графических материалов

На фиг.1 представлена ВЭЖХ-спектрограмма для образца протодиосцина и смеси соединений 1-8, где пики, пронумерованные 1-8, соответствуют соединениям 1-8.

На фиг.2 представлена ВЭЖХ-спектрограмма для композиции примера 1, где пик №1 соответствует соединению 1, пик №6 соответствует соединению 2, пик №7 соответствует соединению 9, пик №8 соответствует соединению 3 и пик №11 соответствует соединению 5.

На фиг.3 представлена ВЭЖХ-спектрограмма для композиции примера 2, где пик №1 соответствует соединению 1, пик №6 соответствует соединению 2 пик №7 соответствует соединению 9, пик №8 соответствует соединению 3 и пик №10 соответствует соединению 5.

На фиг.4 представлена ВЭЖХ-спектрограмма для композиции примера 3, где пик №1 соответствует соединению 1, пик №6 соответствует соединению 2, пик №7 соответствует соединению 9, пик №8 соответствует соединению 3 и пик №10 соответствует соединению 5.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения

Пример 1. Приготовление фармацевтической композиции по настоящему изобретению:

100 кг высушенных корневищ Dioscorea nipponica Makino брали и измельчали. Дефлегмацию проводили 95%-ным этанолом (1200 л×3) в течение 3 ч в первый раз и затем в течение 2 ч во второй и третий раз соответственно. После фильтрации экстракт собирали и этанол регенерировали. Добавляя воду до концентрации 2 г/мл, экстракт охлаждали в течение 24 ч перед центрифугированием. Надосадочную жидкость пропускали через адсорбционную колонку со смолой HPD300, которую затем промывали водой до тех пор, пока элюат не становился бесцветным перед элюцией 70%-ным этанолом. Часть, элюированную 70%-ным этанолом, собирали и концентрировали. К концентрированному раствору добавляли 75%-ный этанол для осаждения перед фильтрацией. Фильтрат собирали, концентрировали и сушили. После сушки путем дегидратации в вакууме, получали продукт общих стероидных сапонинов Dioscorea nipponica Makino. Выход составлял 2,32%, а содержание общих стероидных сапонинов составляло 85% (масс./масс.).

Пример 2. Приготовление фармацевтической композиции по настоящему изобретению:

100 кг высушенных корневищ травы Dioscorea panthaica Prain et Burkill брали и нарезали. Их кипятили 4 раза с добавлением 12-кратного избытка воды. Время приготовления первого отвара составляет 3 ч и затем 2 ч для второго, третьего и четвертого раза соответственно. После фильтрации экстракт собирали и выдерживали до тех пор, пока он не охладится до комнатной температуры. После центрифугирования надосадочную жидкость пропускали через колонку с макропористой адсорбирующей смолой [HPD 100/LD100=7:3 (масс./масс.)], которую затем промывали водой до тех пор, пока элюат не становился бесцветным перед элюцией 10%-ным этанолом. Элюцию 75%-ным этанолом осуществляли в конце и часть, элюированную 75%-ным этанолом, собирали и концентрировали. К концентрированному раствору добавляли 80%-ный этанол для осаждения перед фильтрацией. Фильтрат собирали, концентрировали и сушили до тех пор, пока фильтрат не терял запаха после регенерации этанола. После повторного обезвоживания способом распылительной сушки получали продукт общих стероидных сапонинов Dioscorea panthaica Prain et Burkill. Выход составлял 1,5%, а содержание общих стероидных сапонинов составляло 90% (масс./масс.).

Пример 3. Приготовление фармацевтической композиции по настоящему изобретению:

400 кг сухих корневищ свежей Dioscorea nipponica Makino брали и нарезали. Их кипятили 3 раза с добавлением 8-кратного избытка воды. Время приготовления первого отвара составляет 3 ч и затем 2 ч во второй и третий раз соответственно. После фильтрации экстракт собирали и выдерживали до тех пор, пока он не охладится до комнатной температуры. После центрифугирования надосадочную жидкость пропускали через колонку с макропористой адсорбирующей смолой [HPD 100/LD100=6:4 (масс./масс.)], которую затем промывали и тщательно промывали обратным потоком воды перед элюцией 10%-ным этанолом. Элюцию 80%-ным этанолом осуществляли в конце и часть, элюированную 80%-ным этанолом, собирали и концентрировали. К концентрированному раствору добавляли 90%-ный этанол для осаждения спиртом перед фильтрацией. Фильтрат собирали, концентрировали и сушили до тех пор, пока фильтрат не терял запаха после регенерации этанола. После повторного обезвоживания способом распылительной сушки получали продукт общих стероидных сапонинов Dioscorea nipponica Makino с выходом 0,56%, и их содержание составляло 95% (масс./масс.).

Пример 4. Получение и идентификация соединений в фармацевтической композиции по настоящему изобретению:

1278 г очищенного экстракта, полученного в примере 1, брали и диспергировали в 11100 мл воды. Экстракцию осуществляли последовательно этилацетатом (7500 мл × 4) и м-бутанолом (7500 мл × 5), получая 102 г этилацетатного экстракта и 503 г н-бутанолового экстракта. 236 г часть н-бутанолового экстракта брали для хроматографии на колонке с силикагелем (10,5×52 см, 2000 г) и затем постепенно элюировали смесью хлороформ-метанол-вода (9:1:0,1). Каждая колба содержала 500 мл элюента, собрали всего 160 частей. Соединение 8 (140 мг) выделяли с Фр. 16-21, и соединение 7 (427 мг) выделяли с Фр. 41-45, и соединение 6 (30 г) - с Фр. 56-65, соединение 5 (8,62 г) - с Фр. 94-104, которое представляет собой стероидный сапонин (111) по настоящему изобретению. Фр. 113-127 объединяли как Е (26 г), которую разделяли на колонках с силикагелем (6,5×71 см, 800 г) и элюировали смесью хлороформ-метанол (5:1), насыщенной водой. С Е, проходящей через колонку, объединяли Фр. 14-20 как В (4 г), и после очистки октадецилсиланом (ODS) получали соединение 4 (1,3 г). Фр. 128-143 объединяли как F (63 г), которую разделяли на колонках с силикагелем (7×52 см, 850 г) и элюировали смесью хлороформ-метанол (5:1), насыщенной водой. F, проходящую через колонку, объединяли с Фр. 36-60 как А (10 г), и после ODS очистки получали соединение 3 (115 мг). F, проходящую через колонку, объединяли с Фр. 61-68 как В (11 г), и после ODS очистки получали соединение 9 (105 мг), которое представляло собой стероидный сапонин (II) по настоящему изобретению. F, проходящую через колонку, объединяли с Фр. 69-78 как С (10 г) и после ODS очистки получали соединение 2 (2,89 г), которое представляло собой стероидный сапонин (I) по настоящему изобретению.

Силикагель, используемый для колоночной хроматографии (160-200 М, 200-300 М), и силикагель GF254, используемый для ТСХ, являются продуктами Qingdao Oceanic Chemical Factory. ODS силикагель с обращенной фазой (Cosmosil 75 C18-OPN) является продуктом Japan Nacalai Tesque Company, а пластина силикагеля с обращенной фазой RP-18F254 является продуктом Merck.

Используя современный способ из ряда МС, 1H-ЯМР, 13 С-ЯМР, DEPT (Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer, неискаженное усиление переносом поляризации), HMQC (heteronuclear multiple quantum correlation, гетероядерная многоквантовая корреляция) и НМВС (heteronuclear multiple bond correlation, гетероядерная многополосная корреляция) и в комбинации с физическими и химическими параметрами, структуры соединений были идентифицированы следующим образом:

Используемый масс-спектрометр представлял собой Finnigan LCQDECA, a используемый анализатор на основе ядерного магнитного резонанса представлял собой Bruker AM-400 с TMS (тетраметилсилан) в качестве внутреннего стандарта.

Соединение 9 (псевдопротограциллин)

Данные 13С-ЯМР соединения 9 сравнивали с данными 13С-ЯМР псевдопротодиосцина[3] и грациллина[4]. Результаты показали, что сигнал связи сахара с 26-С соединения 9 и химический сдвиг в его агликоновой части полностью соответствовали тому же для псевдопродиосцина, и дополнительные сигналы сахара полностью соответствовали сигналам грациллина. Соответственно, предположили, что соединение 9 представляло собой продукт протограциллиновой дегидратации одной молекулы H2O в С20 22 (а именно псевдопротограциллин (II)). В спектре НМВС 1-Н-glc"" (фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 4.83) коррелирует с агликоном 26-С (фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 с 74.7), 1-H-rha" (фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 н 6,40) и 1-Н-glc"' (фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 н 5,10) с 2-C-glc' (фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 C 76,8) и 3-C-glc' (фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 с 89,3) соответственно, и 1-Н-glc' (фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 С 4,95) с 3-С (фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 С 77,7). Все это также подтвердило предполагаемое выше положение связи и последовательность сахара.

Таким образом, структура соединения 9 идентифицирована как 26-O-фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 -D-глюкопиранозил-3фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 ,26 глико-25(R)-фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 5,20(22)-диен-фуро-3-O-[фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 -L-рамнопиранозил(1фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 2)]-[(фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 -D-глюкопиранозил(1фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 3)]-фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 -D-глюкопиранозид, а именно псевдопротограциллин (II).

Соединение 8 (триллин): Белые игольчатые кристаллы. ESI-MS m/z: 577 [M+H]+, 415 [M-glc+Н] +, 397 [M-glc-H2O+H] +, 1151 [2M-H]-, 575 [М-Н] -; данные 1H-ЯМР (400 МГц, C 5D5N): фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 1.11 (3H, d, СН3-21, J=6.8 Гц), 0.87 (3H, s, СН3-19), 0.80 (3H, s, СН 3-18), 0.67 (3H, d, СН3-27, J=4.6 Гц) представляют 4 сигнала метилового протона агликона диосцина. 13С-ЯМР (100 МГц, C5 D5N) показан в Таблице 1. Агликоновую часть сравнивали с агликоновой частью диосцина, где в С-3 фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 71.7фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 78.6, в С-2 фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 31.4фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 30.2, в С-4 фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 42.3фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 39.3, все показывают, что С-3 часть агликона связана с сахаром. Данные 13С-ЯМР соединения 8 (как показано в Таблице 3) соответствуют данным 13 С-ЯМР, сообщенным в ссылках 1 и 2.

Соединение 7 (Прогенин II: 3-O-[фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 -L-рамнопираноза(1фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 4)]-фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 -D-глюкопираноза-диосцин): Белые игольчатые кристаллы. ESI-MS m/z: 723 [М+Н]+, 577 [M-rha+Н] +, 415 [M-rha-glc+Н]+, 397 [M-rha-glu-H 2O+H]+, 721 [М-Н] -, 575 [M-rha-H]-; данные 1H-ЯМР (400 МГц, C5D 5N): фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 1.11 (3H, d, СН3-21, J=6.9 Гц), 0.88 (3H, s, СНз-19), 0.80 (3H, s, СН3-18), 0.66 (3H, d, СН3-27, J=5.2 Гц) представляют 4 сигнала метилового протона агликона диосцина. Аномерный протон фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 4.94 (1 Н, d, J=7.7 Гц) глюкозы показывает, что он относится к фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 -типу, а аномерный протон 6,54 (1 Н, (фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 r, s) рамнозы показывает, что он относится к фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 -типу. Данные 13С-ЯМР соединения 7 (как показано в Таблице 3) соответствуют данным, сообщенным в ссылках 1 и 2.

Соединение 6 (Прогенин III: 3-0-[фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 -L-рамнопираноза(1фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 2)]-фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 -D-глюкопираноза-диосцин): Белый порошок. ESI-MS m/z: 723 [М+Н]+, 577 [M-rha+H]+ , 415 [M-rha-glc+H]+, 397 [M-rha-glc-H 2O+H]+; данные 1 H-ЯМР (400 МГц, C5D5 N): фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 1.11 (3H, d, СН3-21, J=7.0 Гц), 1.02 (3H, s, СН3-19), 0.80 (3H, s, СН 3-18), 0.66 (3H, d, СН3-27, J=5.0 Гц) представляют 4 сигнала метилового протона агликона диосцина. фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 6.36 (1Н, br, s) рамнозы показывает, что он относится к фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 -типу. фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 5.04 (1Н, d, J=9.0 Гц) глюкозы показывает, что он относится к фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 -типу. Данные 13С-ЯМР соединения 6 (см. Таблицу 3) соответствуют данным, сообщенным в ссылках 1 и 2.

Соединение 5 (диосцин): Белые игольчатые кристаллы. ESI-MS m/z: 891 [M+Na]+, 869 [М+Н] +, 577 [M-rha-rha+Н]+, 437 [M-rha-rha-glc+Na] +, 903 [M+Cl]-, 867 [M-Н] -, 721 [M-rha-H]-; данные 1H-ЯМР (400 МГц, C5D 5N): фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 1.74 (3H, d, J=6.5 Гц), 1.60 (3H, d, J=6.2 Гц) представляют 2 сигнала метилового протона рамнозы соответственно, фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 6.37 (1Н, br, s), 5.83 (1Н, br, s) показывают, что эти две рамнозы относятся к фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 -типу. фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 4.92 (1 Н, d, J=6.4 Гц) показывает, что глюкоза относится к фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 -типу. Данные фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 1.11 (3H, d, СН3-21, J=6.8 Гц), 1.02 (3H, s, СН3-19), 0.79 (3H, s, СН 3-18), 0.66 (3H, d, СН3-27, J=4.9 Гц) представляют 4 сигнала метилового протона агликона диосцина соответственно. Данные 13С-ЯМР соединения 5 (см. Таблицу 4) соответствуют данным, сообщенным в ссылке 1, и представляют диосцин.

Соединение 4 (3b,26-диол-(25R)фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 5,20(22)-диен-фуро-26-O-фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 -D-глюкопиранозид): Белый порошок. ESI-MS m/z: 907 [M+Na] +, 885 [M+H]+, 723 [M-glc+Н] +, 577 [M-glc-rha+H]+, 437 [M-glc-rha-glc+Na] +, 883 [M-H]-; данные 1H-ЯМР (400 МГц, C5D 5N): фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 1.61 (3H, s, СН3-21), 0.99 (3H, d, СН3-27, J=6.4 Гц), 0.89 (3H, s, СН 3-19), 0.70 (3H, s, СН3-18) представляют 4 сигнала метилового протона агликона диосцина. фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 4.95 (1Н, d, J=7.5 Гц), 4.82 (1Н, d, J=6.1 Гц) показывают, что глюкоза в соединении 4 относится к фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 -типу, и 6 5.90 (1Н, br, s) показывает, что рамноза в соединении 4 относится к фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 -типу. В данных 13С-ЯМР соединения 4 агликоновую часть сравнивали с агликоновой частью соединения 7, где в С-3 фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 71.2фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 78.3, демонстрируя, что помимо того, что С-26 связан с сахаром, С-3 также связан с сахаром. Данные 13 С-ЯМР соединения 4 соответствуют данным, сообщенным в ссылке 4.

Соединение 3 (26-O-фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 -D-глюкопираноза-3фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 ,26-диол-(25R)-фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 5,20(22)-3-O-{[фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 -L-(25R)-пиранорамноза(1фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 4)]-фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 -D-глюкопиранозид}): Белый порошок. ESI-MS m/z: 907 [M+Na] +, 885 [М+Н]+, 723 [M-glc+Н] +, 577 [M-glc-rha+H]+, данные 1H-ЯМР (600 МГц, C5D 5N): фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 1.62 (3H, s, СН3-21), 1.02 (3H, d, СН3-27, J=6.5 Гц), 0.88 (3H, s, СН 3-19), 0.70 (3H, s, СН3-18) представляют 4 сигнала метилового протона агликона диосцина. фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 1.77 (3H, d, J=6.0 Гц) показывает сигнал на конце метилового протона рамнозы. Данные 13С-ЯМР соединения 3 представлены в таблице 4. Агликоновая часть является такой же, как и агликоновая часть соединения 8. Данные ЯМР соединения 3 соответствуют данным, сообщенным в ссылке 5.

Соединение 2 (псевдопротодиосцин): Белый порошок. ESI-MS m/z: 1053 [M+Na] +, 723 [M-rha-glc+H]+, 577 [M-rha-glc-rha+Н] +, 415 [М-rha-glc-rha-glc+H]+, 1029 [M-H]-, 883 [M-rha-H]- ; данные 1H-ЯМР (400 МГц, C 5D5N): фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 1.61 (3H, s, СН3-21), 1.03 (3H, s, СН3-19), 0.99 (3H, d, СН 3-27, J=6.8 Гц), 0.70 (3H, s, СН3 -18) представляют 4 сигнала метилового протона агликона диосцина. Данные фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 1.74 (3Н, d, J=7.2 Гц), 1.60 (3H, d, J=7.7 Гц) представляют 2 сигнала метилового протона рамнозы соответственно, фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 6.37 (1Н, br, s), 5.83 (1Н, br, s) показывают, что эти две рамнозы относятся к фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 -типу. Данные фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 4.92 (1Н, d, J=6.9 Гц), 4.81 (1Н, d, J=7.7 Гц) показывают, что эти две глюкозы относятся к фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 -типу. Данные 13С-ЯМР соединения 2 (см. Таблицу 4) соответствуют данным, сообщенным в ссылке 5.

Соединение 1 (протодиосцин). Относительно способов разделения и идентификации для ссылки можно использовать Bogang Li; Zhengzhi Zhou. Traditional Chinese Drug Research & Clinical Pharmacology 1994, 13(2): 75-76.

фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337

Что касается вышеупомянутых способов, то все соединения в фармацевтической композиции по настоящему изобретению могут быть выделены и идентифицированы.

Пример 5. Качественный контроль фармацевтической композиции по настоящему изобретению

9 эталонных веществ, структуры которых были подтверждены, вводили в виде смешанного образца для ВЭЖХ-анализа в следующих хроматографических условиях: хроматографическая колонка: Alltima C18 4,6×250 мм, 5 м, градиентная элюция; определение с помощью испарительного детектора светорассеяния; температура дрейфовой трубки: 100°С; скорость потока газа: 2,0 л/мин. Схема градиентной элюции выглядит следующим образом:

Таблица 2.

Схема градиентной элюции
  0 (мин)30 (мин)50 (мин)60 (мин)80 (мин)
Ацетонитрил15% 40%40% 100%100%
Вода85%60% 60%0100%

Хроматограмма показана на фиг.1.

После ВЭЖХ-анализа композиций, полученных в примерах 1, 2 и 3, хроматограммы показаны на фиг.1, фиг.2, фиг.3. Для вычисления процентного содержания соединений I, II и III использовали способ внешнего стандарта с логарифмическим уравнением, как показано в Таблице 3.

Таблица 3.

Процентное содержание соединений I, II, и III в общих стероидных сапонинах.
 Соединение (I) %Соединение (II) % Соединение (III) %
Пример 1 59,84,75,7
Пример 263,8 4,86,8
Пример 358,46,8 9,5

После завершения определения 20 партий образцов фармацевтической композиции по настоящему изобретению было показано (см. Таблицу 4), что содержание трех ее соединений было относительно стабильным, и, таким образом, они были выбраны в качестве показателей качественного контроля и подвергались достаточно строгому контролю.

Таблица 4.

Процентное содержание каждого стероидного сапонина из композиции по настоящему изобретению относительно массы общих стероидных сапонинов.
№ партииПротодиосцин (%) Псевдопротодиосцин (%)Псевдопротограциллин (%)Соединение 3Диосцин (%)
12,1 60,66,2 8,17,8
2 0,860,2 5,39,49,3
31,6 61,85,98,4 7,0
43,9 58,46,8 6,89,5
5 1,566,6 6,81,66,8
69,8 63,04,70,86 6,2
77,7 63,84,8 1,06,8
8 3,065,7 5,60,98,4
98,6 63,24,91,1 6,3
106,3 64,85,4 1,16,3
11 11,261,2 5,21,25,8
129,8 60,66,11,2 7,2
138,7 62,25,3 1,17,2
14 2,267,7 5,61,16,5
157,7 63,55,01,1 6,8
1613,4 59,84,7 1,45,7
17 2,068,6 5,81,05,4
183,3 66,94,91,7 6,4
193,2 66,04,7 1,68,1
20 6,562,4 4,51,57,2
2110,1 60,25,31,3 7,1
236,7 65,84,5 0,95,7
24 2,968,1 5,01,15,9

В вышеуказанном анализе подтвердили, что псевдопротодиосцин (I), псевдопротограциллин (II), диосцин (III) все находились в постоянной пропорции в фармацевтической композиции по настоящему изобретению. Определяя непосредственно содержание этих трех соединений, можно контролировать качество лекарственного средства по настоящему изобретению. В разном сырье и в разных процедурах экстрагирования сырья псевдопротодиосцин (I) и протодиосцин (IV) в указанной выше таблице могли превращаться друг в друга. Тем не менее, тесты подтвердили, что в одной и той же партии сырья и при одном и том же способе получения содержание псевдопротодиосцина (I) и протодиосцина (IV) было в основном постоянным и содержание псевдопротограциллина (II) и протограциллин (V) также. Одно из соединений или два из них с более высоким содержанием можно было использовать в качестве соединения для качественного контроля. Таким образом, псевдопротодиосцин (I) и/или протодиосцин (IV), псевдопротограциллин (II) и/или протограциллин (V), диосцин (III) все находились в постоянной пропорции, и благодаря непосредственному определению содержания этих трех соединений, можно было контролировать качество лекарственного средства по настоящему изобретению.

Пример 6. Получение капсул, содержащих фармацевтическую композицию по настоящему изобретению

Ингредиенты капсулы (для 1000 капсул):

Общий стероидный сапонин (полученный в примере 2)100 г
Крахмал 150 г

Стероидный сапонин и крахмал брали в пропорции, указанной выше. После смешивания лекарство помещали в капсулы, каждая из которых содержит 250 мг, и назначали перорально для лечения церебросердечно-сосудистых заболеваний с режимом приема 1-2 капсулы 3 раза в сутки в течение двух месяцев.

Стероидный сапонин, содержащийся в каждой капсуле, не должен составлять менее 65,0 мг в пересчете на содержание диосцина.

Пример 7. Приготовление таблеток

Ингредиенты таблетки (для 1000 таблеток):

Общий стероидный сапонин (полученный как в примере 2)100 г
НРМСLV10030 г
Лактоза70 г
Стеарат магния1 г

Общий стероидный сапонин, НРМС (гидроксипропилметилцеллюлозу) и лактозу в качестве связующего агента смешивали и объединяли с 75%-ным этанолом во влажных гранулах, которые просеивали через сито с 22 меш. После сушки при 50°С в течение 3 ч гранулы снова просеивали через сито с 22 меш перед добавлением стеарата магния и формованием в таблетки, каждая из которых имела массу 0,15 г. Данное лекарственное средство может быть назначено перорально для церебросердечно-сосудистых заболеваний с режимом приема 1-2 таблетки 3 раза в сутки в течение двух месяцев.

Каждая таблетка содержит не менее 65,0 мг стероидного сапонина в пересчете на содержание диосцина.

Пример 8. Приготовление инъекций

Ингредиенты для инъекций (для 1000 мл):

Общий стероидный сапонин 50 г
Tween 80 10 мл
Хлорид натрия 8 г

К общему стероидному сапонину добавляли 10% Na2СО3 со значением рН, доведенным до 7,0-7,5. После охлаждения и фильтрации добавляли TWEEN 80 и NaCl и добавляли воду для инъекций до 1000 мл. После фильтрации с помощью воронки с фильтром из пористого стекла G 3 фасовали и герметически закрывали. Конечный продукт получали после влажной стерилизации при 100°С. Инъекция может быть назначена подкожно для лечения церебросердечно-сосудистых заболеваний в с режимом введения 1-2 мл два раза в сутки в течение двух месяцев.

Каждая инъекция содержит не менее 65,0 мг стероидного сапонина в пересчете на содержание диосцина.

Мягкие капсулы и капельные пилюли указанного выше состава могут быть приготовлены согласно стандартному способу с добавлением общепринятого носителя.

Благоприятные результаты для фармацевтической композиции по настоящему изобретению были подтверждены в следующих фармакодинамических тестах.

Тест 1. Действие псевдопротограциллина (II) на острый инфаркт миокарда у крысы.

Псевдопротограциллин (II), полученный в примере 4, использовали в релевантных фармакологических тестах следующим образом:

Крыс Wistar, каждую массой 180-220 г, распределяли случайным образом на 3 группы, а именно контрольную группу, группу с высокой дозой псевдопротограциллина и группу с низкой дозой псевдопротограциллина, каждая из которых включала по 12 крыс. Крысам в контрольной группе посредством желудочной инфузии вводили дистиллированную воду. Крысам в других тест-группах вводили посредством желудочной инфузии релевантную лечебную жидкость (приготовленную с дистиллированной водой) соответственно с высокой дозой (3 мг/кг) или низкой дозой (1,5 мг/кг), указанной в следующей таблице для каждой группы. Инфузию проводили один раз в сутки и продолжали в течение одной недели. Через 1 час после последнего введения крысам давали уретан 1 г/кг для абдоминальной анестезии. Животное фиксировали на спине и кожу рассекали вдоль средней линии грудины, вдоль левого края которой делали надрез для того, чтобы быстро извлечь сердце. Перевязку сосудов осуществляли немедленно на уровне основания передней нисходящей ветви левой коронарной артерии перед тем, как поместить сердце обратно в грудную клетку, которую затем закрывали наложением шва, и спонтанное дыхание восстанавливалось. Тест прекращали через 3 часа после наложения шва, и сердце нарезали в поперечном направлении ниже линии наложения шва. 5 срезов окрашивали нитротетразолием синим и использовали анализатор цветных патологических изображений (MPIAS-500) для измерения площадей нормального миокарда и инфаркта миокарда на фиксированном расстоянии между изображениями и для наблюдения степени инфаркта миокарда. После статистической обработки (t-критерий) результаты были представлены в Таблице 5.

Таблица 5.

Действие псевдопротограциллина (II) на инфаркт миокарда, индуцированный ишемией миокарда (X±s)
ГруппаДозировка мг/кгПлощадь инфаркта, мм 2Масса инфаркта, г Процент площади инфаркта в желудочке (%) Процент площади инфаркта в сердце (%)
Контроль 112,23±9,46 0,301±0,05532,9±3,1 128,6±1,5
Высокая доза3380,56±7,69** 0,227±0,032**24,5±2,6** 20,74±1,9**
Низкая доза1,591,3±11,49* 0,241±0,045*28,1±1,9* 25,2±2,3*

В сравнении с контрольной группой: *Р<0,05, **Р<0,01

Результаты в Таблице 5 показали, что в группах, обработанных соединением (II) в высокой дозе или в низкой дозе, площадь и масса инфаркта миокарда, проценты площади инфаркта в желудочке и во всем сердце значительно снижаются по сравнению с контрольной группой (Р<0,01 и Р<0,05 соответственно), и имеется зависимость эффекта от дозы, что указывает на то, что новое соединение псевдопротограциллин (II) по настоящему изобретению может минимизировать объем инфаркта миокарда, уменьшать площадь инфаркта и массу инфарктной зоны и оказывает очевидное воздействие на защиту миокарда.

Вышеуказанный фармакодинамический тест демонстрирует не только то, что соединение псевдопротограциллин (II) в фармацевтической композиции по настоящему изобретению является новым соединением, но также строго доказывает, что новое соединение может быть приготовлено независимо в виде агента с определенным фармакодинамическим действием.

Тест 2. Действие фармацевтической композиции по настоящему изобретению на стенокардию, липиды крови и агрегацию тромбоцитов

1084 пациентов с торакальной обструкцией (стенокардия) участвовали в рандомизированном, двойном слепом и контролируемом клиническом испытании. Они были распределены случайным образом на группы А1, А2, A3, А4, таблетки Fufangdanshen и изосорбид-динитрат.

Все пациенты, которым вводили лекарства, подвергались тестам соразмерно (сравнимо) в зависимости от пола, возраста, течения заболевания и осложнений. Результаты подтвердили, что пациенты в группах, примающих капсулы А1, А2, A3 и А4, и в группе, примающей таблетку Fufangdanshen и изосорбид-динитрат, имели при сравнении неочевидные различия, принимая в внимание их пол, возраст, течение заболевания и осложнения.

6 лекарств, помеченных как А1, А2, A3, А4, В и С, все были помещены во внешне одинаковые капсулы. Пять из этих лекарств принимали перорально по 1 капсуле 3 раза в сутки. Один терапевтический курс для этих 5 лекарств составлял 8 недель. В течение периода введения этих 6 лекарств все пациенты прекращали принимать какое-либо лекарство, которое могло оказывать влияние на их коронарный кровоток, липиды крови и кровяное давление. При необходимости, указанное лекарство можно было применять временно, но как только состояние улучшалось, указанное лекарство следовало отменить, и дозу следовало зарегистрировать.

А1, А2 и A3 представляли собой капсулы, содержащие фармацевтическую композицию, полученную в примере 1, примере 2 и примере 3 и приготовленную способом, описанным в примере 6. А4 представляло собой капсулы, содержащие композицию, экстрагированную согласно известным из уровня техники процедурам и приготовленную способом, описанным в примере 6. Содержание общего стероидного сапонина в каждой капсуле А1, А2, A3 и А4 было одинаковым. Доза составляла 200 мг каждый раз, 3 раза в сутки. В представляло собой таблетку Fufangdanshen, доза которой составляла 3 таблетки, 3 раза в сутки. С представляло собой лекарство изосорбид-динитрат, и доза для него составляла 5 мг 3 раза в сутки.

Все пациенты должны были отказаться от приема лекарств, которые оказывают влияние на коронарную болезнь сердца, за 3 суток перед приемом тестируемых лекарств и должны были иметь анализы крови и мочи, данные функционального исследования печени и почек и анализы липидов крови, ЭКГ в состоянии покоя и после нагрузки. После лечения все вышеуказанные показатели снова проверялись.

Во время лечения все лекарства для снижения кровяного давления и жиров крови и для расширения коронарной артерии должны быть отменены. Только пациентам с повторяющимися приступами стенокардии и тяжелыми сердечными аритмиями можно было временно назначить нитроглицериновые лекарства, и дозировка и время прекращения приема должны быть зарегистрированы.

Критерии оценки терапевтических эффектов: Стандарт терапии коронарной болезни сердца и стенокардии, и электрокардиограммы, измененный в 1979 г. на Национальном научном симпозиуме по лечению и предупреждению коронарной болезни сердца, стенокардии и аритмии в комбинации с традиционной китайской медициной и западной медициной, утвердили для терапевтической оценки.

Результаты показаны в таблицах 6 и 7:

фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337

Согласно Ridit-анализу, все р-значения в группах А1, А2 и A3 были меньше 0,01 в сравнении с р-значениями в группе В и в группе С соответственно. Согласно X2 -анализу, группы А1, А2 и A3 продемонстрировали индекс очевидной эффективности в сравнении с группой В, Р<0,05; группы А1, А2 и A3 продемонстрировали индекс очевидной эффективности в сравнении с группой С, Р<0,01. Результаты показали, что терапевтические эффекты капсул, изготовленных из композиции, полученной в примере 1, примере 2 и примере 3 по настоящему изобретению, лучше терапевтических эффектов таблетки Fufangdanshen (В) и изосорбид-динитрата (С). Индексы общей эффективности, выражающейся в облегчении стенокардии, составляли 89,9%, 90,5% и 90,4% соответственно и достоверно, доказывая, что эффективное и стабильное фармакодинамическое действие достигалось путем контролирования 3 компонентов.

В сравнении с общепринятыми способами, способы получения по настоящему изобретению снижают стоимость более чем на 35% и увеличивают выход на 13%. При одинаковом количестве сырья фармакодинамическое действие увеличивалось на 5%, когда фармацевтическую композицию по настоящему изобретению использовали в клиническом наблюдении 258 пациентов.

Действие на ишемию миокарда

Сравнение фармацевтической композиции по настоящему изобретению через 8 недель курса лечения показано в Таблице 7.

фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337

Согласно Ridit-анализу терапевтические эффекты на ишемию миокарда в группах А1, А2 и A3 не имели никаких очевидных различий с эффектами в изосорбид-динитратной группе соответственно (все Р>0,05), но превышали эффекты в группе таблетки Fufangdanshen (все Р<0,01). Согласно X2-анализу, индексы очевидного эффекта в группах А1, А2 и A3 были выше, чем индексы в группе Fufangdanshen, P<0,05, но без каких-либо различий с индексами в изосорбид-динитратной группе, все р<0,05, что указывает на то, что капсулы, изготовленные из фармацевтической композиции по настоящему изобретению, полученные как в примере 1, примере 2 и примере 3, обладали лучшими терапевтическими эффектами на стенокардию, чем таблетки Fufangdanshen (В), и оказывали эквивалентный эффект в изосорбид-динитратной группе (С). Общие эффекты на ST-Т сегменты ЭКГ в состоянии покоя составляли соответственно 55,5%, 56,0% и 54,8%, демонстрируя, что эффекты были определенными и очевидными, и стабильные фармакодинамические действия достигались путем контролирования 3 компонентов. Эффекты фармацевтической композиции по настоящему изобретению были на 5% выше относительно композиций, приготовленных в соответствии с процедурами из уровня техники.

Действие на липиды крови

Среди 164 пациентов с гиперхолестеринемией и 162 пациентов с гипертриглицеридемией до лечения, 78 пациентов с гиперхолестеринемией возвращались к норме и 87 пациентов с гипертриглицеридемией также возвращались к норме после лечения. Холестерин в их крови снижался от 6,8±1,1 ммоль/л (до лечения) до 6,3±1,1 ммоль/л (после лечения). Триглицерид в их крови снижался от 2,4±0,8 ммоль/л (до лечения) до 1,9±0,7 ммоль/л (после лечения). Различия имели большую достоверность (Р<0,01) по t-критерию.

Действие на агрегацию тромбоцитов

Фармацевтическая композиция имела отчетливый эффект на агрегацию тромбоцитов, индуцированную аденозиндифосфатом (АДФ) и аднефрином (адреналином). АДФ снижала скорость агрегации тромбоцитов с 68%±15% (до лечения композицией) до 60%±15% (после лечения композицией); аднефрин снижал скорость агрегации от 73%±15% (до лечения композицией) до 64%±12% (после лечения), что указывает на большую достоверность различия по t-критерию (Р<0,01).

Было показано благоприятное влияние фармацевтической композиции по настоящему изобретению на клинические симптомы пациентов с коронарной болезнью сердца

Таблица 8.

Улучшение основных симптомов до и после лечения капсулами, содержащими фармацевтическую композицию по настоящему изобретению
 Общее кол-во Очевидно эффективноЭффективно Эффекта нетУхудшение Индекс очевидной эффективности (%)Общий индекс эффективности (%)
Дискомфорт в груди244112 21212 04687
Учащенное сердцебиение225 123193 31155 86
Одышка263 104203 59140 77
Акратия226 68155 69230 68
Головокружение 20683147 58140 71
Головная боль 16858117 49234 70

Побочные эффекты

Среди 825 пациентов в этом тесте: 5 имели головокружение во время введения, 9 имели желудочный или кишечный дискомфорт, 2 имели головную боль, и 1 ощущал изнурение (усталость). Все пациенты с вышеупомянутыми побочными эффектами не подвергались лечению и общепринятым анализам крови и мочи, при этом функциональные исследования печени и почек показали норму до и после лечения.

Ясно показано вышеупомянутыми процедурами получения, определением структур, количественным контролем и фармакодинимическими тестами, что одновременный контроль трех соединений фармацевтической композиции по настоящему изобретению, а именно псевдопродиосцина (I), псевдопротограциллина (II) и диосцина (III), и их эффективный качественный контроль могут увеличить фармакодинамическое действие и стабильность изготовленных из них лекарств в сочетании с их минимизированной дозировкой и удобным применением.

Ссылки:

1. Р.К.AGRAWAL, D.C.JAIN, R.K.GUPTA et al, CARBON-13-NMR SPECTROSCOPY OF STEROIDAL SAPOGENINS AND STEROIDAL SAPONINS. Phytochemistry, 1985, 24(11): 2479-2496.

2. Chenji Xu. Research and development of medicinal plants for steroid hormone drugs in Chinese cinnamonvine resourses. Sichuan Press of Science and Technology 2000.

3. Mei Dong et al. TWO novel furostanol saponins from the rhizomes of Dioscorea panthaica Prain et Burkill and their cytotoxic activity. Tetrahedron, 2001, 57, 501-506.

4. Zhongliang Zhou, RitaAquino, Francesco et al. Oligofurostanosides from Asparagus cochinchinensis. Planta Medica. 1988, 50(4): 344-346.

5. Mei Dong et al. Separation and identification of steroidal saponins from Dioscorea panthaica Prain et Burkill. ACTA MEDICA SINICA 2001, 36(1): 42-45.

6. Shuhu Du et al. Separation and identification of steroidal saponins from Dioscorea nipponica Makino. ACTA MEDICA SINICA 2002, 37(4): 267-270.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Фармацевтическая композиция для лечения и предупреждения церебросердечно-сосудистых заболеваний, содержащая стероидные сапонины, включающая 5-25 частей по массе фуростанолового сапонина, представленного общей формулой А и/или общей формулой В; 1-10 частей по массе спиростанолового сапонина или сапогенина, представленного общей формулой С,

фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337

фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337

фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337

где в общей формуле А, R1 =фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 H, фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337

фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 или фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337

в общей формуле B: фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 или фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337

в общей формуле C: R3=фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 H, -glc, фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337

фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337 или фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337

2. Фармацевтическая композиция по п.1, где

в общей формуле А: когда R1=фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337

тогда соединение, представленное формулой А, представляет собой псевдопротодиосцин (I);

когда R1 =фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337

тогда соединение, представленное формулой А, представляет собой псевдопротограциллин (II);

в общей формуле В, когда R2=фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337

тогда соединение, представленное формулой В, представляет собой протодиосцин (IV);

когда R2 =фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337

тогда соединение, представленное формулой В, представляет собой протограциллин (V);

в общей формуле С, когда R 3=фармацевтическая композиция, содержащая стероидные сапонины,   способ ее получения и ее применение, патент № 2349337

тогда соединение, представленное формулой С, представляет собой диосцин (III), и указанная композиция содержит 5-22 мас.ч. псевдопротодиосцина (I) и/или протодиосцина (IV);

1-3 мас.ч. псевдопротограциллина (II) и/или протограциллина (V); и 1-8 мас.ч. диосцина (III).

3. Фармацевтическая композиция по п.2, содержащая 5-20 мас.ч. псевдопротодиосцина (I), 1-3 мас.ч. псевдопротограциллина (II), и 1-5 мас.ч. диосцина (III).

4. Фармацевтическая композиция по п.3, содержащая 12-18 мас.ч. псевдопротодиосцина (I), 1 мас.ч. псевдопротограциллина (II), и 1,2-2,5 мас.ч. диосцина (III).

5. Фармацевтическая композиция по п.1, где указанные стероидные сапонины происходят из экстрактов Dioscorea panthaica Prain et Burkill и Dioscorea nipponica Makino, которые обе относятся к видам диоскореи (Dioscorea) семейства диоскорейных (Dioscoreaceae).

6. Фармацевтическая композиция по п.5, где в указанном экстракте содержание общего стероидного сапонина составляет не менее 65% (мас./мас.) в пересчете на диосцин.

7. Фармацевтическая композиция по п.5, где в указанном экстракте общее содержание трех видов стероидных сапонинов: псевдопродиосцина (I), псевдопротограциллина (II) и диосцина (III) составляет не менее 50% (мас./мас.) содержания общих стероидных сапонинов.

8. Фармацевтическая композиция по п.5, где указанный экстракт имеет ВЭЖХ-хроматограмму, представленную на фиг.1, на которой характеристические пики указанной ВЭЖХ-хроматограммы соответствуют времени удерживания для псевдопротодиосцина (I) 28,27 мин; времени удерживания для псевдопротограциллина (II) 29,5 мин; времени удерживания для диосцина (III) 57,10 мин;

при следующих условиях хроматографии ВЭЖХ:

хроматографическая колонка: Alltima С18 4,6×250 мм, 5 м; градиентная элюция; определение с помощью испарительного детектора светорассеяния; температура дрейфовой трубки: 100°С; скорость потока газа: 2,0 л/мин.

9. Фармацевтическая композиция по п.5, где указанный экстракт получен способом, при котором а) берут корневища Dioscorea panthaica Prain et Burkill и Dioscorea nipponica Makino или корневища свежесобранных Dioscorea panthaica Prain et Burkill и Dioscorea nipponica Makino в качестве сырья; разрезают и измельчают корневища; экстрагируют одним или более чем одним растворителем, выбранным из группы, состоящей из воды, метанола, этанола, н-бутанола и других низших спиртов, при этом количество указанного растворителя в 24-48 раз больше количества сырья; б) охлаждают и фильтруют экстракт, приготовленный на стадии (а); пропускают фильтрат через колонку с абсорбирующей смолой, отбрасывают элюат и промывают колонку водой до тех пор, пока элюат не станет бесцветным; отбрасывают промывочную воду; в) элюируют колонку с абсорбирующей смолой, которую промывают водой на стадии (б), одним или более чем одним растворителем, выбранным из группы, состоящей из этанола, метанола, ацетона, 50-90% этанола, 30-80% водного метанола и 60-95% водного ацетона; собирают и концентрируют элюат; г) добавляют 60-95% спирта к концентрированному раствору, полученному на стадии (в), для осаждения спиртом, фильтруют и собирают фильтрат; концентрируют и сушат фильтрат с получением продукта.

10. Фармацевтическая композиция по п.9, где на стадии (б) способ дополнительно включает стадию концентрирования при пониженном давлении перед охлаждением и фильтрацией, когда экстракт содержит метанол, этанол, н-бутанол или другие низшие спирты.

11. Фармацевтическая композиция по п.1, где стероидные сапонины получены из экстрактов или находятся в составе экстрактов Dioscorea panthaica Prain et Burkill и Dioscorea nipponica Makino, дополнительно содержащая фармацевтически приемлемые адъюванты.

12. Фармацевтическая композиция по п.11, которая находится в форме таблетки, капсулы, мягкой капсулы, гранулы, пероральной жидкости, капельной пилюли или инъекции.

13. Способ приготовления фармацевтической композиции, охарактеризованной в п.11, в котором берут и взвешивают фуростаноловый сапонин общей формулы А и/или общей формулы В и спиростаноловый сапонин общей формулы С, смешивают их в соотношении по массе 5-25 ч. фуростанолового сапонина и 1-10 ч. спиростанолового сапонина; добавляют фармацевтически приемлемые адъюванты для получения фармацевтической композиции.

14. Способ приготовления фармацевтической композиции, охарактеризованной в п.11, в котором а) берут корневища трав Dioscorea panthaica Prain et Burkill и Dioscorea nipponica Makino или корневища свежесобранных Dioscorea panthaica Prain et Burkill и Dioscorea nipponica Makino в качестве сырья, разрезают корневища или разламывают их, экстрагируют одним или более чем одним растворителем, выбранным из группы, состоящей из воды, метанола, этанола, н-бутанола и других низших спиртов, количество которых в 24-48 раз больше количества сырья; б) охлаждают и фильтруют экстракт, приготовленный на стадии (а), пропускают фильтрат через колонку с абсорбирующей смолой, отбрасывают элюат и промывают колонку водой до тех пор, пока элюат не станет бесцветным; отбрасывают промывочную воду; в) элюируют колонку с абсорбирующей смолой, которую промывали водой на стадии (б), одним или более чем одним растворителем, выбранным из группы, состоящей из этанола, метанола, ацетона, 50-90% этанола, 30-80% водного метанола и 60-95% водного ацетона, собирают и концентрируют элюат; г) добавляют 60-95% спирта к концентрированному раствору, полученному на стадии (в), для осаждения спиртом, собирают фильтрат после фильтрации; д) концентрируют и сушат фильтрат, полученный на стадии (г), добавляют фармацевтически приемлемые адъюванты для получения фармацевтической композиции.

15. Способ по п.14, дополнительно включающий на стадии (б) концентрированно при пониженном давлении перед охлаждением и фильтрацией, когда экстракт содержит метанол, этанол, н-бутанол или другие низшие спирты.

16. Применение фармацевтической композиции, охарактеризованной в любом из пп.1-12, для изготовления фармацевтического препарата для лечения и предупреждения церебро-сердечно-сосудистых заболеваний.

17. Применение по п.16, где указанные заболевания представляют собой коронарную болезнь сердца, стенокардию, инфаркт миокарда, аритмию, гиперлипидемию или ишемические цереброваскулярные заболевания.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2349337

patent-2349337.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс A61K36/8945 Dioscorea (диоскорея), например ямс (ньям), китайский ямс или водный ямс

Класс A61K31/7048  содержащие кислород в качестве гетероатома, например лейкоглюкозан, гесперидин, эритромицин, нистатин

Патенты РФ в классе A61K31/7048:
способ получения таблеток рутина -  патент 2523562 (20.07.2014)
способ предупреждения иксодового клещевого боррелиоза у детей -  патент 2519143 (10.06.2014)
противопаразитарное средство для сельскохозяйственных животных -  патент 2519085 (10.06.2014)
антибактериальная инъекционная фармацевтическая композиция -  патент 2512683 (10.04.2014)
гидраты солей эритромицина, их получение и применение -  патент 2510659 (10.04.2014)
способ эмпирического лечения женщин с воспалительными заболеваниями органов малого таза -  патент 2505296 (27.01.2014)
терапевтическое применение зеаксантина, обладающего специфической антиапоптозной активностью для каспазы-3, и композиции, его содержащие -  патент 2504366 (20.01.2014)
твердая лекарственная форма азитромицина -  патент 2498805 (20.11.2013)
антимикробные композиции с контролируемым высвобождением для лечения ушных заболеваний -  патент 2495662 (20.10.2013)
способ лечения синдрома хронической усталости -  патент 2493839 (27.09.2013)

Класс A61P9/10 для лечения ишемических или атеросклеротических заболеваний, например антиангинозные средства, коронарные вазодилататоры, средства для лечения инфаркта миокарда, ретинопатии, цереброваскулярной недостаточности почечного артериосклероза

Патенты РФ в классе A61P9/10:
хиназолиноны как ингибиторы пролилгидроксилазы -  патент 2528412 (20.09.2014)
ингибиторы поли(адф-рибозо)полимеразы-1 человека на основе производных урацила -  патент 2527457 (27.08.2014)
средство, обладающее кардиопротекторным действием, и галогениды 1,3-дизамещенных 2-аминобензимидазолия -  патент 2526902 (27.08.2014)
способ проведения предупреждающего обезболивания у больных осложненным инфарктом миокарда -  патент 2526801 (27.08.2014)
производное сложного эфира тиенопиридина, содержащее цианогруппу, способ его получения, его применение и композиция на его основе -  патент 2526624 (27.08.2014)
средство для стимуляции васкуляризации сердечной мышцы при постинфарктном ее ремоделировании в эксперименте -  патент 2526466 (20.08.2014)
способ повышения фармакологической активности действующего вещества лекарственного средства и фармацевтическая композиция -  патент 2526153 (20.08.2014)
способ лечения больных облитерирующим атеросклерозом артерий нижних конечностей с сочетанной ибс -  патент 2525157 (10.08.2014)
способ раннего выявления высокого риска развития нарушения толерантности к глюкозе у больных стабильной стенокардией напряжения на фоне бета-адреноблокаторов без дополнительных вазодилатирующих свойств -  патент 2523691 (20.07.2014)
способ лечения хронической сердечной недостаточности и фармацевтическая композиция для лечения хронической сердечной недостаточности -  патент 2523451 (20.07.2014)

Класс A61P9/06 средства против аритмии

Патенты РФ в классе A61P9/06:
адгезивный пластырь, содержащий бисопролол -  патент 2526194 (20.08.2014)
средство для лечения аритмии сердца -  патент 2513580 (20.04.2014)
способ повышения биоцидного и лечебного действия крема-суспензии с линкоспектином -  патент 2505285 (27.01.2014)
2'-броманилид n-бутилпирролидин-2-карбоновой кислоты гидрохлорид, проявляющий антиаритмическую активность -  патент 2504539 (20.01.2014)
синтетический антиген, обладающий способностью связывать аутоантитела к мускариновому м2-рецептору -  патент 2502743 (27.12.2013)
замещенные n-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-n-(аминоалкил)амиды нитробензойных кислот -  патент 2500666 (10.12.2013)
фармацевтическая комбинация для профилактики и лечения хронических нарушений вегетативной регуляции ритма сердца и способ профилактики и лечения с помощью фармацевтической комбинации -  патент 2493836 (27.09.2013)
лекарственное средство с антиаритмическим и антифибрилляторным действием -  патент 2477144 (10.03.2013)
способ профилактики нарушений ритма сердца при кардиохирургических операциях -  патент 2467754 (27.11.2012)
фармацевтическая композиция для регуляции калиевых каналов в клетке сердечной мышцы, способ ее получения и ее применения -  патент 2463070 (10.10.2012)

Класс A61P3/06 средства против повышенного содержания жира в крови (гиперлипемии)

Патенты РФ в классе A61P3/06:
антагонисты pcsk9 -  патент 2528735 (20.09.2014)
хиназолиноны как ингибиторы пролилгидроксилазы -  патент 2528412 (20.09.2014)
экстракт семян fraxinus excelsior и его терапевтическое применение -  патент 2523905 (27.07.2014)
способ профилактики и лечения нарушений обмена веществ по типу липидемии в сочетании с инсулиннезависимым сахарным диабетом методом питьевой бальнеотерапии с использованием природной минеральной галогенсодержащей воды -  патент 2523886 (27.07.2014)
способ лечения и повышения качества жизни больных с синдромом диспепсии в сочетании с ожирением -  патент 2523558 (20.07.2014)
фитокомплекс из плодов бергамота, способ производства и применение в качестве пищевой добавки и в области фармакологии -  патент 2523384 (20.07.2014)
замещенные аминоинданы и их аналоги, и их применение в фармацевтике -  патент 2522586 (20.07.2014)
соединение для лечения метаболических расстройств -  патент 2521284 (27.06.2014)
фармацевтическая композиция, средство для профилактики и лечения метаболического синдрома и диабетической нефропатии и способ его получения -  патент 2519744 (20.06.2014)
композиции и способы понижения уровня триглицеридов без повышения уровня хс-лпнп у субъекта, получающего сопутствующую терапию -  патент 2519043 (10.06.2014)


Наверх