способ прогнозирования нарушений фертильности у мужчин

Формула изобретения

Способ прогнозирования мужского бесплодия путем проточной цитометрии спермы, отличающийся тем, что исследуют соотношения лимфоцитов с фенотипом CD25+ и CD95+ в эякуляте, и при его значениях менее 0,71 и более 1,20 прогноз фертильности признается неблагоприятным.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, и может быть использовано для диагностики и лечения мужского бесплодия.

По данным литературы классическим методом оценки мужской фертильности является лабораторная оценка концентрации, морфологии и подвижности сперматозоидов по детально разработанным критериям ВОЗ [WHO laboratory manual for the examination of human sperm and semen-cervical mucus interaction. - WHO, 4-th edn.: Cambridqe univerciti pres; 1999. - 128 p.]. Однако механистическая трактовка клинической спермограммы далеко не всегда соответствует реальному состоянию мужской фертильности. Известны случаи бесплодия при нормозооспермии [Божедомов В.А., Лоран О.Б., Сухих Г.Т. Этиология и патогенез мужского аутоиммунного бесплодия. Часть 1. Андрология и генитальная хирургия. 2001, № 1, С.72-77]. Кроме того, констатация состоявшихся нарушений спермограммы свидетельствует об уже произошедших процессах и не имеет большого прогностического значения на практике.

Божедомов В.А. с соавт. (2001) [Божедомов В.А., Лоран О.Б., Сухих Г.Т. Этиология и патогенез мужского аутоиммунного бесплодия. Часть 2. Андрология и генитальная хирургия. 2001, № 1, С.78-87] предлагал использовать в качестве прогностического критерия определение относительного количества подвижных сперматозоидов, покрытых антиспермальными антителами (АСАТ). По их мнению, негативный прогноз фертильности констатируется при превышении указанным показателем уровня в 10%. В качестве методов детекции сперматозоидов, покрытых АСАТ, предлагалось применение проточной цитофлуорометрии или MAR (mixer agglutination reaction) [Jager S., Kremer J., van Sloshteren-Draaisma T.A simple method of screening for antisperm antibodies in the human male. Int. J. Fertil. - 1978. - V.23. - P.12-21]. Однако нарушение фертильности вследствие появления АСАТ в сперме является частной причиной мужского бесплодия, встречается при ряде заболеваний и не носит универсального характера.

По мнению Fujisawa М. и Ishikawa Т. (2003) [Fujisawa M, Ishikawa T. Soluble forms of Fas and Fas ligand concentrations in the seminal plasma of infertile men with varicocele. J. Urol. 2003 Dec; 170 (6 Pt 1): 2363 - 5], ключевым физиологическим регулятором, лимитирующим размер популяции герминативных клеток в яичке, является апоптоз. Имеется высокая достоверная корреляция между апоптозом спермы и мужским бесплодием. Наиболее распространенный метод идентификации клеток, вступивших на путь апоптоза, состоит в обнаружении свободных 3-ОН концов в разорванных молекулах фрагментированной ДНК с помощью терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазы (TdT). Известный по сокращенному названию TUNEL (TdT-mediated nick end labeling), этот метод дает возможность определять апоптотические клетки не только in vivo, но и подсчитывать их в суспензиях с помощью проточной цитофлуорометрии или радиометрии [Gavrivlly Y., Shrman Y., Bensasson S.A. Identification of programmed cell death in situ via specific labeling of nuclear DNA fragmentation. J. Cell. Biol. - 1992, vol.119, p.493-501].

Этот способ был избран в качестве прототипа.

Предлагаемый способ прогнозирования нарушений фертильности у мужчин основан на иммунологическом исследовании спермы и заключается в вычислении специального индекса, рассчитываемого как отношение относительного количества лимфоцитов эякулята с фенотипом CD25+ к лимфоцитам с фенотипом CD95+, определяемых методом проточной цитометрии с помощью моноклональных антител анти-СD25 и анти-СD95.

Технический результат предлагаемого способа заключается в повышении точности прогнозирования результатов консервативного лечения бесплодия у мужчин на основе анализа соотношения лимфоцитов с фенотипом CD25+ и CD95+ в эякуляте. Позитивный прогноз мужской фертильности констатируется при значении данного соотношения от 0,71 до 1,20. При выходе показателя за указанные пределы прогноз фертильности неблагоприятен.

Предлагаемый способ использован в процессе обследования 24 мужчин, обратившихся по поводу бесплодного брака. Результаты исследований сведены в таблицу.

После применения предлагаемого способа прогнозирования мужского бесплодия, точный прогноз результатов лечения был определен у всех обратившихся, причем прогноз, установленный на основании анализа соотношения лимфоцитов с фенотипом CD25+и CD95+ в эякуляте (заявляемый способ), совпал с прогнозом, базирующимся на основании контрольного обследования пациентов после лечения.

Новизна предлагаемого способа заключается в том, что впервые на основании анализа соотношения лимфоцитов с фенотипом CD25+и CD95+ в эякуляте предлагается способ прогнозирования нарушений фертильности у мужчин.

Примеры из практики клинического применения способа.

Пример 1

Больной Ж., 32 года.

Жалобы на бесплодие в браке, периодические умеренные боли в промежности, мошонке, нижних отделах живота.

Из анамнеза: Бесплодный брак в течении 2 лет, ранее не лечился. Супруге 28 лет, гинекологически здорова, ранее беременностей не имела.

Объективно: Гиперстеник, физическое развитие удовлетворительное, оволосение по мужскому типу. Наружные половые органы без особенностей.

Осмотр per rectum: Простата нормальных размеров и формы, несколько тестоватой консистенции, умеренно болезненная при пальпации.

УЗИ простаты, мочевого пузыря, семенных пузырьков и мошонки: Мочевой пузырь с ровным внутренним контуром, физиологической емкости. Простата с четкими контурами, размеры 28×40×34 мм, неравномерно повышенной эхоплотности, однородной структуры, междолевая бороздка выражена. Семенные пузырьки симметричны, размеры: левый 11 мм, правый 9 мм, содержимое их гомогенно. Яички находятся в мошонке, с ровными четкими контурами, структура яичек однородна, эхоплотность равномерная. Размеры яичек: правое 37×20 мм, левое 39×23 мм.

Мазок из уретры:

Лейкоциты 1-2-0 в поле зрения

Эпителий полиморфный - ++

Tr - не выявлено

Gn - не выявлено

Секрет простаты:

Лейкоциты: 20-25 в поле зрения,

Эритроциты - нет

Лецитиновые зерна - ++

Спермограмма:
Объем эякулята		3,5 мл
Вязкость		N
Лейкоциты		Единичные
Сперматогенный эпителий		1%
Количество сперматозоидов в 1 мл		150000000
Подвижность категории А		0%
Подвижность категории В		40%
Подвижность категории С		35%
Подвижность категории D		25%
Патологические формы		75%
Иммунограмма эякулята.
Показатель	Лимфоциты, %
CD25+	8,2
CD95+	8,86
CD25+/CD95+	0,93

ПЦР: Инфекций, передающихся половым путем, не выявлено.

Бактериологический анализ секрета простаты:

Sthaemolit. - <10² - КОЕмл.

Клинический диагноз: Хронический простатит (категория III-A), первичное бесплодие, астенозооспермия.

Пациенту назначено стандартное лечение по поводу хронического простатита категории III-A (ципрофлоксацин, нимесулид, доксазозин, эскузан, массаж простаты).

Контрольная спермограмма (через 3 месяца после лечения):
Количество спермы	5 мл
Вязкость	N
Лейкоциты	Единичные
Сперматогенный эпителий	2%
Количество сперматозоидов в 1 мл	155000000
Подвижность категории А	15%
Подвижность категории В	38%
Подвижность категории С	30%
Подвижность категории D	17%
Патологические формы	71%

Из эпикриза:

Больной Ж., д-з: Хронический простатит (категория III-A), первичное бесплодие, астенозооспермия. После проведенного курса лечения достигнута положительная динамика показателей спермограммы.

Из катамнеза: через 8 мес после завершения курса лечения в семейной паре наступило спонтанное зачатие.

Пример 2

Больной К., 29 лет.

Жалобы на бесплодие в браке, периодические умеренные боли в промежности и мошонке, учащение мочеиспусканий.

Из анамнеза: Бесплодный брак в течении 2,5 лет, ранее не лечился. Супруге 27 лет, гинекологически здорова, ранее беременностей не имела.

Объективно: Нормостеник, физическое развитие удовлетворительное, оволосение по мужскому типу. Наружные половые органы развиты правильно, без особенностей.

Осмотр per rectum: Простата умеренно увеличена, несколько тестоватой консистенции, болезненная при пальпации.

УЗИ простаты, семенных пузырьков и мошонки: Простата с четкими контурами, размеры 35×36×34 мм, неравномерно повышенной эхоплотности, однородной структуры, междолевая бороздка выражена. Семенные пузырьки симметричны, размеры:

левый 10 мм, правый 8 мм, содержимое их гомогенно. Яички находятся в мошонке, с ровными четкими контурами, структура яичек однородна. Размеры яичек: правое 35×22 мм, левое 34×23 мм.

Мазок из уретры:

Лейкоциты 1-2-0 в поле зрения

Эпителий полиморфный - ++

Tr - не выявлено

Gn - не выявлено

Секрет простаты:

Лейкоциты: 20-25-30 в поле зрения,

Эритроциты - нет

Лецитиновые зерна - ++

Спермограмма:
Объем эякулята	3,5 мл
Вязкость	N
Лейкоциты	Единичные
Сперматогенный эпителий	1%
Количество сперматозоидов в 1 мл	145000000
Подвижность категории А	5%
Подвижность категории В	30%
Подвижность категории С	40%
Подвижность категории D	25%
Патологические формы	76%

ПЦР: Инфекций, передающихся половым путем, не выявлено.

Бактериологический анализ секрета простаты:

St.epidermid. - <10² - КОЕмл

Иммунограмма эякулята.
Показатель	Лимфоциты, %
CD25+	7,91
CD95+	3,05
CD25+/CD95+	2,59

Клинический диагноз: Хронический простатит (категория III-A), первичное бесплодие, астенозооспермия.

Пациенту назначено стандартное лечение по поводу хронического простатита категории III-A (ципрофлоксацин, доксазозин, эскузан, свечи с индометацином, массаж простаты).

Из эпикриза:

Больной К., д-з: Хронический простатит (категория III-A), первичное бесплодие, астенозооспермия. После проведенного курса лечения несмотря на клиническое улучшение, не достигнута положительная динамика показателей спермограммы.

Контрольная спермограмма (через 3 месяца после лечения):
Количество спермы	4 мл
Вязкость	N
Лейкоциты	Единичные
Сперматогенный эпителий	2%
Количество сперматозоидов в 1 мл	153000000
Подвижность категории А	5%
Подвижность категории В	28%
Подвижность категории С	32%
Подвижность категории D	35%
Патологические формы	77%

Из катамнеза: через 12 мес. после завершения курса лечения зачатие не наступило. Рекомендована консультация врача-репродуктолога для решения вопроса о направлении семейной пары на ВРТ.

Таблица 1
Способ прогнозирования нарушений фертильности у мужчин. Величина соотношения CD25+/CD95+ в эякуляте у наблюдаемых мужчин и взаимосвязь этого показателя с результатами лечения.
№	CD25+/CD95+	Характеристика спермограммы после лечения	Фертильность
1	0,28	без изменений	бесплодный брак
2	0,42	ухудшение	бесплодный брак
3	0,45	ухудшение	бесплодный брак
4	0,48	без изменений	бесплодный брак
5	0,50	без изменений	бесплодный брак
6	0,52	без изменений	бесплодный брак
7	0,65	без изменений	бесплодный брак
8	0,71	улучшение	фертилен
9	0,73	улучшение	фертилен
10	0,74	улучшение	фертилен
11	0,76	улучшение	фертилен
12	0,84	улучшение	фертилен
13	0,88	улучшение	фертилен
14	0,92	улучшение	фертилен
15	0,93	улучшение	фертилен
16	1,00	улучшение	фертилен
17	1,20	улучшение	фертилен
18	1,22	без изменений	бесплодный брак
19	1,36	ухудшение	бесплодный брак
20	1,63	ухудшение	бесплодный брак
21	1,77	без изменений	бесплодный брак
22	2,04	без изменений	бесплодный брак
23	2,48	ухудшение	бесплодный брак
24	3,75	без изменений	бесплодный брак