способ определения половой принадлежности мочи при судебно-медицинской экспертизе следов мочи

Формула изобретения

1. Способ определения половой принадлежности мочи при судебно-медицинской экспертизе следов мочи, включающий цитологическое исследование препаратов из следов мочи, отличающийся тем, что в цитологических препаратах определяют количество клеток, анализируют их морфологические признаки, определяют наличие гликогена в клетках и устанавливают происхождение мочи от женщин при количестве клеток десятки на препарат, морфологическом разнообразии клеток и наличии гликогена в 20-60% клеток; происхождение мочи от мужчин устанавливают при количестве клеток единицы на препарат, морфологическом однообразии клеток и наличии гликогена в количестве клеток до 5%.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что при наличии 1-2 из трех идентифицирующих половую принадлежность признаков дополнительно окрашивают препарат амидочерным 10Б, приготовленным на смеси Карнуа, затем опять анализируют морфологические признаки и устанавливают происхождение мочи от женщин при неравномерности окрашивания цитоплазмы, «вспененности» цитоплазмы, отсутствии включений, мелкозубчатых и завернутых краях клеточной мембраны, а происхождение мочи от мужчин устанавливают при однородной неинтенсивно окрашенной цитоплазме, содержащей включения, ровных краях клеток.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что морфологическое разнообразие клеток в моче женщин подразумевает присутствие клеток различных слоев многослойного плоского неороговевающего эпителия, в том числе влагалищного; а морфологическое однообразие клеток в моче мужчин подразумевает большое количество безъядерных клеток поверхностных слоев кожи с примесью единичных на препарат уретральных клеток.

Описание изобретения к патенту

Предлагаемое изобретение относится к медицине, а именно к судебной медицине, и может быть использовано при судебно-медицинских экспертизах следов мочи на вещественных доказательствах.

Разработка новых способов определения половой принадлежности мочи при судебно-медицинской экспертизе является актуальной задачей, так как количество таких экспертиз постоянно возрастает, а следственные органы нуждаются в более конкретных результатах, полученных при производстве соответствующих экспертиз.

В настоящее время можно говорить о том, что известен практически один способ определения половой принадлежности мочи, который включает выявление в клеточных ядрах мужской (Y-хроматин) или женской (Х-хроматин) половой метки. Этот способ выбран нами в качестве прототипа (Ревнитская Л.А., Силкина С.Ю. К вопросу об установлении видовой и половой принадлежности мочи. // Актуальные проблемы морфологии. Сборник научных трудов. Красноярск, 2003, с.178-181).

Однако диагностические возможности способа-прототипа ограничены. При отсутствии ядер в клетках (например, в роговых чешуйках кожи) половая принадлежность по способу-прототипу установлена быть не может. Также диагностика половой принадлежности ограничивается состоянием клеточных ядер: в ядрах, находящихся в состоянии пикноза, половые метки не выявляются.

В задачу предлагаемого изобретения положено расширение диагностических возможностей и обеспечение определения половой принадлежности мочи в случаях невозможности выявления Y-хроматина и Х-хроматина в клеточных ядрах.

Поставленная задача достигается тем, что в цитологических препаратах определяют количество клеток, анализируют их морфологические признаки, определяют наличие гликогена в клетках и устанавливают происхождение мочи от женщин при количестве клеток десятки на препарат, морфологическом разнообразии клеток и наличии гликогена в 20-60% клеток; происхождение мочи от мужчин устанавливают при количестве клеток единицы на препарат, морфологическом однообразии клеток и наличии гликогена в количестве клеток до 5%.

При наличии 1-2 из 3^х идентифицирующих половую принадлежность признаков дополнительно окрашивают препарат амидочерным 10Б, приготовленным на смеси Карнуа, затем опять анализируют морфологические признаки и устанавливают происхождение мочи от женщин при неравномерности окрашивания цитоплазмы, «вспененности» цитоплазмы, отсутствии включений, мелкозубчатых и завернутых краях клеточной мембраны, а происхождение мочи от мужчин устанавливают при однородной неинтенсивно окрашенной цитоплазме, содержащей включения, ровных краях клеток.

Под морфологическим разнообразием клеток в моче женщин подразумевает присутствие клеток различных слоев многослойного плоского неороговевающего эпителия, в том числе влагалищного; а морфологическое однообразие клеток в моче мужчин подразумевает большое количество безъядерных клеток поверхностных слоев кожи с примесью единичных на препарат уретральных клеток.

Предлагаемый способ был разработан при изучении 240 цитологических препаратов, приготовленных из пятен мочи мужчин (100) и женщин (140). Пятна размерами 5×5 см помещали в 15% раствор уксусной кислоты на 18 часов. После извлечения материала осадок трехкратно центрифугировали при 1500 об/мин. Осадок переносили на предметные стекла, высушивали, 10 мин фиксировали этиловым спиртом.

Препараты в течение 10 минут окрашивали 0,0005% раствором акрихина, 20-30 сек промывали проточной водой и микроскопировали на люминесцентном микроскопе с объективами водной иммерсии 40-60х.

Было установлено, что препараты из следов мочи женщин и мужчин отличаются по количеству клеток, их морфологическому разнообразию и количеству гликогена.

Оказалось, что цитологическая картина всех препаратов мочи, полученной от мужчин и женщин, различается по характеру осадка.

В моче мужчин во всех препаратах в одном поле зрения обнаружены единичные (от 0 до 1-2) клетки полигональной формы, размеров без ядер (клетки поверхностных слоев эпидермиса). В 80 препаратах из изученных найдено от 1 до 10 клеток на препарат клеток полигональной или овальной формы с ровными незавернутыми краями, с эксцентрично расположенными ядрами овальной формы, ядерно-цитоплазматический индекс 1:7-1:10 (клетки уретрального эпителия). Все клетки имели интенсивно и гомогенно окрашенные ядра, различить в которых хроматиновую субстанцию и половые метки не представлялось возможным.

При окраске клеток раствором Люголя до 5% ядросодержащих клеток содержали гликоген.

В моче женщин в одном поле зрения найдены десятки клеток полигональной формы, с завернутыми, мелкозубчатыми краями, с центрально-расположенным ядром округлой формы, ядерно-цитоплазматический индекс 1:7-1:10. Все клетки имели интенсивно и гомогенно окрашенные ядра, различить в которых хроматиновую субстанцию и половые метки не представлялось возможным (клетки многослойного плоского неороговевающего эпителия, в том числе влагалищного).

При окраске раствором Люголя в 20-60% из них был найден гликоген.

Для более полного изучения морфологических признаков многослойного плоского неороговевающего эпителия была применена методика окраски раствором амидочерного 10Б, приготовленным на смеси Карнуа, разработанная в ГУЗ НОБСМЭ и избирательно окрашивающая белки (А.Л.Федоровцев. Диагностическое и идентификационное значение следов-наложений на орудиях травмы и некоторых других вещественных доказательствах: Автореф. дис.... докт. мед. наук. - М., 2003. - 43 с.).

После окраски раствором амидочерного 10Б, приготовленным на смеси Карнуа, в течение 10 минут и промывания препаратов в проточной воде в течение 10 сек. проводилась микроскопия в проходящем свете (об. 40х, ок. 15х). Во всех препаратах мочи женщин были установлены следующие признаки: округлая форма ядра с его центральной локализацией, ядерно-цитоплазматический индекс 1:7-1:10, мелкозубчатые, завернутые края клеток, неравномерное окрашивание цитоплазмы, отсутствие включений, в части клеток цитоплазма как бы «вспенена» (клетки влагалищного эпителия).

При окраске амидочерным 10Б, приготовленным на смеси Карнуа, клетки эпителия у мужчин отличалась от таковых у женщин: цитоплазма окрашена неинтенсивно и равномерно, имеются немногочисленные белковые включения размером 2-4 мкм. Ядра клеток преимущественно овальной формы, лежат эксцентрично.

На фиг.1 приведена фотография осадка мочи женщины (об. ВИ 40х, ок. 15х, окраска 0,0005% раствором акрихина).

На фиг.2 приведена фотография осадка мочи мужчины (об. ВИ 40х, ок. 15х, окраска 0,0005% раствором акрихина).

На фиг.3 приведена фотография осадка мочи женщины (об. 20х, ок. 15х, окраска раствором Люголя).

На фиг.4 приведена фотография осадка мочи мужчины (об. 20х, ок. 15х, окраска раствором Люголя).

На фиг.1-4 обозначено:

1 - клетки многослойного плоского неороговевающего эпителия;

2 - эпидермальные чешуйки (клетки поверхностных слоев кожи);

3 - клетки содержащие гликоген;

4 - клетки без гликогена.

Способ осуществляется следующим образом.

Из пятен мочи на текстильных материалах вырезают кусочки величиной 5×5 см, которые помещают в центрифужные пробирки и на 18 часов заливают 15% раствором уксусной кислоты. После извлечения материал тщательно отжимают, осадок трехкратно центрифугируют при 1500 об/мин, переносят на предметные стекла, высушивают и 10 мин фиксируют этиловым спиртом.

Препараты в течение 10 минут окрашивают 0,0005% раствором акрихина, 20-30 сек промывают проточной водой и микроскопируют на люминесцентном микроскопе с объективами водной иммерсии 40-60х.

1) Цитологическая картина препаратов осадка мочи, полученной от мужчин и женщин, различается по морфологической картине:

а) в моче мужчин во всех препаратах в одном поле зрения обнаруживаются единичные (1-2 не в каждом поле зрения) клетки полигональной формы, без ядер (клетки поверхностных слоев эпидермиса). Еще реже (до 10 на препарат) встречаются клетки полигональной или овальной формы с эксцентрично расположенным ядром овальной формы, ядерно-цитоплазматический индекс 1:7-1:10 (клетки уретрального эпителия). При окраске клеток раствором Люголя встречаемость гликогенсодержащих клеток составляет до 5%. Т.е. принадлежность мочи мужчине устанавливают по следующим трем идентифицирующим признакам: при количестве клеток единицы на препарат, морфологическом однообразии клеток и наличии гликогена в количестве клеток до 5%.

б) в моче женщин в одном поле зрения обнаруживаются десятки клеток полигональной формы, с завернутыми, мелкозубчатыми краями, различных размеров, с центрально расположенным ядром округлой формы, ядерно-цитоплазматический индекс 1:7-1:10 (клетки поверхностных слоев многослойного плоского неороговевающего эпителия, в том числе влагалищного). При окраске раствором Люголя в 20-60% из них содержится гликоген. Т.е. принадлежность мочи женщине устанавливают по следующим трем идентифицирующим признакам: при количестве клеток десятки на препарат, морфологическом разнообразии клеток и наличии гликогена в 20-60% клеток.

2) При наличии 1-2 из трех идентифицирующих признаков применяют методику окраски раствором амидочерного 10Б, приготовленным на смеси Карнуа, разработанную в ГУЗ НОБСМЭ и избирательно окрашивающую белки (А.Л.Федоровцев. Диагностическое и идентификационное значение следов-наложений на орудиях травмы и некоторых других вещественных доказательствах: Автореф. дис.... докт. мед. наук, - М., 2003. - 43 с.).

а) после 10-минутной окраски раствором амидочерного 10Б, приготовленным на смеси Карнуа, и промывания препаратов в проточной воде в течение 10 сек проводится микроскопия в проходящем свете (об. 40х, ок. 15х). В случаях исследования мочи, происходящей от женщин, устанавливаются следующие признаки: округлая форма ядра с его центральной локализацией, мелкозубчатые, завернутые края клеток, неравномерное окрашивание цитоплазмы, отсутствие включений, в части клеток цитоплазма как бы «вспенена» (клетки влагалищного эпителия);

б) окраска эпителия у мужчин амидочерным 10Б, приготовленным на смеси Карнуа, выявляет следующие признаки: цитоплазма окрашена неинтенсивно и равномерно, имеются немногочисленные включения размерами 2-4 мкм, ядра клеток преимущественно овальной формы, лежат эксцентрично.

Данные подтверждены изучением 240 цитологических препаратов, приготовленных из пятен мочи 60 здоровых мужчин и женщин в возрасте от 3 до 76 лет с помощью цитологической методики и окрашенных растворами акрихина, Люголя и амидочерного 10Б, приготовленным на смеси Карнуа.

При этом положительный результат получен в 100% случаев.

Таким образом, исследования показали, что альтернативным способом определения половой принадлежности мочи у женщин является выявление в изучаемых следах десятков клеток многослойного плоского неороговевающего эпителия, в том числе влагалищного, в 20-60% которых содержится гликоген.

А у мужчин - выявление единичных безъядерных клеток поверхностных слоев эпидермиса с примесью уретральных клеток, содержащих гликоген в количестве до 5% клеток.

Способ апробирован и внедрен в практику работы судебно-биологического и цитологического отделений лаборатории ГУЗ НОБСМЭ.

Пример 1. Исследование №84.

Исследовалось пятно мочи женщины 42 лет. Пятно желтого цвета, на фрагменте марли, сложенной в 8 слоев, размерами 5×5 см экстрагировали 15% раствором уксусной кислоты в течение 20 часов. Кусочки марли извлекали и тщательно отжимали, осадок трехкратно центрифугировали в 15% растворе уксусной кислоты в течение 10 минут при 1500 об/мин. Из осадка готовили цитологические препараты, которые фиксировали этиловым спиртом и 10 минут окрашивали 0,0005% раствором акрихина. Микроскопию проводили на люминесцентном микроскопе МИКМЕД-2 вар. 12 (об. ВИ 40х, ок. 15х).

В препарате найдено 60 клеток полигональной формы с округлыми центрально-расположенными ядрами, ядерно-цитоплазматический индекс 1:8-1:10, мелкозубчатые иногда завернутые края цитоплазмы. Все клетки имели плотные гомогенно окрашенные ядра, различить в которых хроматиновую субстанцию не представлялось возможным.

Для выявления гликогена препарат окрашивали раствором Люголя и микроскопировали в проходящем свете микроскопа МИКМЕД-2 вар. 12 (об. 20х, ок. 15х). При этом цитоплазма 30 клеток из 60 окрасилась в красновато-коричневые тона (клетки влагалищного эпителия, содержащие гликоген).

Вывод. Пятно мочи принадлежит женщине, поскольку в препарате найдены десятки клеток, которые имеют морфологическое разнообразие (клетки различных слоев многослойного плоского неороговевающего эпителия, в том числе влагалищные) при наличии гликогена в 50% клеток.

Пример 2. Исследование №104.

Исследовалось пятно мочи женщины 22 лет. Пятно желтого цвета, на фрагменте марли, сложенной в 8 слоев, размерами 5×5 см экстрагировали 15% раствором уксусной кислоты в течение 20 часов. Кусочки марли извлекали и тщательно отжимали, осадок трехкратно центрифугировали в 15% растворе уксусной кислоты в течение 10 минут при 1500 об/мин. Из осадка готовили цитологические препараты, которые фиксировали этиловым спиртом и 10 минут окрашивали 0,0005% раствором акрихина. Микроскопию проводили на люминесцентном микроскопе МИКМЕД-2 вар. 12 (об. ВИ 40х, ок. 15х).

В препарате найдено 45 клеток полигональной формы с округлым центрально-расположенным ядром, ядерно-цитоплазматический индекс 1:9-1:10, мелкозубчатые иногда завернутые края цитоплазмы. Все клетки имели плотные ядра.

Для выявления гликогена препарат окрашивали раствором Люголя и микроскопировали в проходящем свете микроскопа МИКМЕД-2 вар. 12 (об. 20х, ок. 15х). При этом цитоплазма 15 клеток из 45 окрасилась в красновато-коричневые тона (клетки влагалищного эпителия).

Вывод. Пятно мочи принадлежит женщине, поскольку в препарате найдены десятки клеток, которые имеют морфологическое разнообразие (клетки различных слоев многослойного плоского неороговевающего эпителия, в том числе влагалищные) при наличии гликогена в 33% клеток.

Пример №3. Исследование №101.

Исследовалось пятно мочи мужчины, возраст 31 год. Пятно желтого цвета, на фрагменте марли, сложенной в 8 слоев, размерами 5×5 см экстрагировали 15% раствором уксусной кислоты в течение 20 часов. Кусочки марли извлекали и тщательно отжимали, осадок трехкратно центрифугировали в 15% растворе уксусной кислоты в течение 10 минут при 1500 об/мин. Из осадка готовили цитологические препараты, которые фиксировали этиловым спиртом и 10 минут окрашивали 0,0005% раствором акрихина. Микроскопию проводили на люминесцентном микроскопе МИКМЕД-2 вар. 12 (об. ВИ 40х, ок. 15х).

В препарате найдено 2 клетки полигональной формы с эксцентрично расположенными ядрами овальной формы, хроматиновая субстанция неразличима. Кроме того, найдены 11 клеток полигональной формы без ядер.

Для выявления гликогена препарат окрашивали раствором Люголя и микроскопировали в проходящем свете микроскопа МИКМЕД-2 вар. 12 (об. 20х, ок. 15х). Клеток, окрашенных в красновато-коричневые тона, не найдено.

Вывод. Пятно мочи принадлежит мужчине, поскольку в нем найдены единичные клетки, имеется морфологическое однообразие клеток, гликоген отсутствует.

Пример №4. Исследование №25.

Исследовалось пятно мочи женщины 52 лет. Пятно желтого цвета, на фрагменте марли, сложенной в 8 слоев, размерами 5×5 см экстрагировали 15% раствором уксусной кислоты в течение 20 часов. Кусочки марли извлекали и тщательно отжимали, осадок трехкратно центрифугировали в 15% растворе уксусной кислоты в течение 10 минут при 1500 об/мин. Из осадка готовили цитологические препараты, которые фиксировали этиловым спиртом и 10 минут окрашивали 0,0005% раствором акрихина. Микроскопию проводили на люминесцентном микроскопе МИКМЕД-2 вар. 12 (об. ВИ 40х, ок. 15х).

В препарате найдено 9 клеток полигональной формы с округлыми центрально-расположенными ядрами, ядерно-цитоплазматический индекс 1:9-1:10, с мелкозубчатыми, завернутыми краями цитоплазмы. Все клетки имели плотные ядра.

Для выявления гликогена препарат окрашивали раствором Люголя и микроскопировали в проходящем свете микроскопа МИКМЕД-2 вар. 12 (об. ВИ 20х, ок. 15х). При этом цитоплазма 5 клеток из 9 окрасились в красновато-коричневые тона (клетки влагалищного эпителия).

Поскольку обнаружено всего 9 клеток, для решения вопроса об их региональном происхождении препарат 10 минут окрашивали 0,05% раствором амидочерного 10Б, приготовленным на смеси Карнуа, и исследовали в проходящем свете микроскопа МИКМЕД-2 вар. 12 (об. 40х, ок. 15х). При этом цитоплазма клеток окрасилась неравномерно и интенсивно в синие тона, «вспенена», включения отсутствовали.

Вывод. Пятно мочи принадлежит женщине, несмотря на то, что найдены единичные клетки различных слоев многослойного плоского неороговевающего эпителия, 55% которых содержат гликоген, при дополнительной окраске амидочерным 10Б найдены признаки, характерные для влагалищного эпителия («вспененность» цитоплазмы, неравномерное окрашивание, отсутствие включений).

Пример №5. Исследование №53.

Исследовалось пятно мочи мужчины, возраст 71 год. Пятно желтого цвета, на фрагменте марли, сложенной в 8 слоев, размерами 5×5 см экстрагировали 15% раствором уксусной кислоты в течение 20 часов. Кусочки марли извлекали и тщательно отжимали, осадок трехкратно центрифугировали в 15% растворе уксусной кислоты в течение 10 минут при 1500 об/мин. Из осадка готовили цитологические препараты, которые фиксировали этиловым спиртом и 10 минут окрашивали 0,0005% раствором акрихина. Микроскопию проводили на люминесцентном микроскопе МИКМЕД-2 вар. 12 (об. ВИ 40х, ок. 15х).

В препарате найдено 12 клеток полигональной формы с эксцентрично расположенными ядрами овальной формы, ядерно-цитоплазматический индекс 1:9-1:10. Кроме того, найдены единичные (до 1-2 в поле зрения) клетки полигональной формы без ядер.

Для выявления гликогена препарат окрашивали раствором Люголя и микроскопировали в проходящем свете микроскопа МИКМЕД-2 вар. 12 (об. 20х, ок. 15х). При этом цитоплазма 2 клеток из 12 окрасились в красновато-коричневые тона.

Для решения вопроса о региональном происхождении клеток препарат окрашивали 10 мин 0,05% раствором амидочерного 10Б, приготовленным на смеси Карнуа, и исследовали в проходящем свете микроскопа МИКМЕД-2 вар. 12 (об. 40х, ок. 15х). При этом края клеток были ровные, цитоплазма клеток окрасилась равномерно в бледно-синие тона, имелись включения размерами 2-4 мкм.

Вывод. Пятно мочи принадлежит мужчине, поскольку в нем, несмотря на количество клеток больше 10, содержащих гликоген в 16%, имеются все признаки уретрального эпителия (края клеток ровные, цитоплазма равномерно окрашена в светло-синие тона, имеются включения размерами 2-4 мкм).