способ определения количественного состава многокомпонентного лекарственного препарата жаропонижающего, аналгезирующего, противопростудного действия

Формула изобретения

Способ определения количественного состава многокомпонентного лекарственного препарата жаропонижающего, аналгезирующего, противопростудного действия методом обращенно-фазовой ВЭЖХ с ультрафиолетовым спектрофотометрическим детектором и обращенно-фазовой хроматографической колонкой в режиме линейного градиента концентрации ацетонитрила в подвижной фазе в течение анализа с использованием в качестве подвижной фазы смеси ацетонитрила с фосфатным буферным раствором, отличающийся тем, что при анализе препарата, содержащего анальгин, кофеин, кодеин, фенобарбитал и напроксен, фосфатный буферный раствор вводится в подвижную фазу с самого начала анализа, а его концентрация в течение всего анализа постоянна и равна 0,004-0,008 М.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), а именно к способам определения количественного состава многокомпонентных лекарственных препаратов жаропонижающего, аналгезирующего, противопростудного действия, и может быть использовано в практике контрольно-аналитических лабораторий фармацевтических предприятий и аптечной сети. Способ относится к числу массовых.

Многокомпонентные лекарственные препараты широко распространены в медицинской практике. В состав препарата жаропонижающего, аналгезирующего, противопростудного действия «Пенталгин Н» входят, наряду с анальгином (0,3 г), напроксеном (0,1 г), кофеином (0,05 г), наркотические и сильнодействующие вещества - кодеин (0,008 г) и фенобарбитал (0,01 г). В связи с этим проблема обеспечения и контроля качества этого препарата чрезвычайно актуальна, а ее успешное решение невозможно без эффективных способов определения его количественного состава. В то же время задача разработки таких способов очень сложна, что обусловлено и комплексным составом анализируемого препарата и большой разницей в содержании некоторых компонентов. Так, в таблетках «Пенталгин Н» содержание анальгина превышает количество кодеина в 37 раз а фенобарбитала - в 30 раз. Анализ таблеток затруднен и различием химических свойств компонентов: кодеин - основание, напроксен - кислота, а также нестабильностью анальгина в водно-органических растворах. По этим причинам одновременное обнаружение и количественное определение всех действующих компонентов препарата является сложной задачей.

Этим можно объяснить тот факт, что, несмотря на бурное развитие в последние годы новейших методов анализа сложных лекарственных препаратов и прежде всего ВЭЖХ, в научной литературе не описан способ количественного анализа таблеток «Пенталгин Н».

Известен способ определения количественного состава сложных лекарственных препаратов, содержащих пропифеназон, методом обращенно-фазовой ВЭЖХ (Е.Н.Вергейчик, Н.С.Онегова. ВЭЖХ в анализе сложных лекарственных препаратов, содержащих пропифеназон. Фармация. - 2001. - Т.50, №3. - С.24-26). Авторы публикации предлагают способ определения количественного состава таблеток «Каффетин», содержащих 0,250 г парацетамола, 0,210 г пропифеназона, 0,050 г кофеина и 0,010 г кодеина фосфата в одной таблетке. Поскольку в анализируемых таблетках содержание кодеина фосфата по отношению к пропифеназону и парацетамолу в 21-25 раз меньше, разработчики проводят анализ в 3 стадии. На первой стадии раствор испытуемых таблеток и раствор рабочих стандартных образцов (РСО) хроматографируют в изократическом режиме с использованием в качестве подвижной фазы (ПФ) смесь ацетонитрил - вода - диэтиламин (3:2,2:0,2) и определяют парацетамол (время удерживания 3,08 мин), кофеин (4,0 мин) и пропифеназон (5,73 мин). На второй стадии раствор испытуемых таблеток в воде подкисляют 10% серной кислотой до рН 2,0, трижды проводят экстракцию порциями по 10 мл этилацетата, а экстракты, содержащие парацетамол, кофеин и пропифеназон, отбрасывают. На третьей стадии к водному раствору, содержащему кодеина фосфат, добавляют 25% раствор аммиака до рН 9-10 и трижды экстрагируют кодеин порциями по 10 мл хлороформа. Объединенные хлороформные экстракты выпаривают, сухой остаток растворяют в ацетонитриле и в полученном растворе определяют кодеин при описанных выше условиях хроматографирования (время удерживания 4,41 мин). Элюируемые вещества детектируют при 238 и 276 нм.

Недостатками способа являются его многостадийность и, как следствие, трудоемкость, длительность и неудовлетворительная точность определения кодеина фосфата (степень извлечения кодеина из таблеток, по данным авторов способа, 89-93%).

Известен также способ определения количественного состава таблеток «Спазмовералгин нео», содержащих бромизовал (0,250 г), парацетамол (0,150 г), кофеин (0,050 г), папаверина гидрохлорид (0,030 г), фенобарбитал (0,020 г), кодеина фосфат (0,008 г), эфедрина гидрохлорид и атропина сульфат (содержание в таблетке двух последних компонентов в публикации не указано), методом обращенно-фазовой ВЭЖХ в изократическом режиме элюирования с использованием колонки, заполненной сорбентом с привитыми нитрильными группами, подвижной фазы (ПФ) состава ацетонитрил - 0,05 М фосфатный буферный раствор (рН 4,0) в соотношении 15: 85 и детектирования при 230 нм (С.Г.Ларионова, Н.Н.Дементьева, Е.Б.Нечаева, П.В.Назаренко, Г.А.Нестерова. Оптимизация условий анализа таблеток сложного состава аналгезирующего и спазмолитического действия. Фармация. - 2002. - Т.51, №1. - С.16-19). В этой работе авторы одновременно определяют бромизовал, кодеина фосфат (соотношение содержаний 31:1), парацетамол, кофеин, фенобарбитал и папаверина гидрохлорид. Недостаток способа связан с особенностями изократического элюирования и заключается в неудовлетворительном разрешении пиков веществ, элюирующихся из колонки первыми (в интервале коэффициентов емкости k от 0,4 до 1,4 элюируются 7 веществ) и относительно высоком удерживании пика папаверина, элюирующегося последним (k=7,0). Неудовлетворительное разделение пиков определяемых веществ отрицательно влияет и на точность их количественного определения.

Наиболее близким к заявляемому изобретению по составу анализируемых препаратов, поставленной задаче, техническому решению и достигаемым результатам является способ определения количественного состава многокомпонентного лекарственного препарата «Пенталгин ФС» (Г.Б.Голубицкий, Е.В.Будко, М.В.Покровский, Е.Ф.Прохода и Е.В.Захарова. Способ количественного анализа многокомпонентных лекарственных препаратов жаропонижающего, аналгезирующего, противопростудного действия. Заявка №2003118797/15 (019970). Приоритет от 23.06.2003 г.), в котором анализ проводят методом обращенно-фазовой ВЭЖХ в режиме линейного градиента, наклон и продолжительность которого определены свойствами компонентов анализируемого препарата. В качестве ПФ используют смеси ацетонитрила с буферным раствором (0,025 М раствор калия фосфата однозамещенного - КН₂PO₄, рН которого доводят до 3,0 добавлением концентрированной ортофосфорной кислоты); смеси ацетонитрила с водой; воды. В этом способе улучшения разделения анальгина, кодеина и кофеина основано на хроматографических свойствах кодеина, изученных нами предварительно: с применяемой в работе обращенной фазы Nova-Pak С 18 кодеин не элюируется смесями ацетонитрил - вода. В соответствии с этим хроматографическим свойством кодеина на начальном этапе градиента вводится ПФ, содержащая только ацетонитрил и воду, а фосфатный буферный раствор с рН 3,0 вводится в ПФ после выхода всех пиков, кроме кодеина. Недостатком способа является нестабильность хроматографических условий в течение одного анализа, что обусловлено изменением рН и ионной силы ПФ и снижает воспроизводимость количественных результатов.

На фиг.1 приведена хроматограмма раствора таблеток «Пенталгин Н», полученная с использованием такого режима. Очевидно, что недостатком является и неполное разделение пиков кодеина и продукта разложения анальгина (выходит непосредственно перед кодеином), что снижает точность определения этого наркотического вещества.

Задачей настоящего изобретения является разработка одностадийного способа определения количественного состава таблеток «Пенталгин Н» с обеспечением полного разделения пиков кодеина, кофеина, анальгина и продукта его разложения.

Поставленная задача достигается методом обращенно-фазовой ВЭЖХ с ультрафиолетовым спектрофотометрическим детектором с помощью предлагаемого способа, который заключается в том, что анализ ведут в режиме линейного градиента концентрации ацетонитрила в подвижной фазе в течение анализа с использованием в качестве ПФ смеси ацетонитрила с с фосфатным буферным раствором, отличающегося тем, что при анализе препарата, содержащего анальгин, кофеин, кодеин, фенобарбитал и напроксен, фосфатный буферный раствор вводится в ПФ с самого начала анализа, а его концентрация в течение всего анализа постоянна и равна 0,004-0,008 М.

Авторами данной заявки экспериментально установлено, что такая концентрация фосфатного буферного раствора обеспечивает оптимальное разделение анальгина, кофеина и кодеина, а также оптимальные время элюирования и симметрию пика напроксена (фиг.2). При выходе за пределы указанного диапазона хроматографическая картина ухудшается: при уменьшении до 0,003 М время удерживания пика напроксена снижается при ухудшении его симметрии («хвост» спереди - это отрицательно сказывается на воспроизводимости расчета площади пика) (фиг.3). При увеличении до 0,0125 М разделение анальгина, кофеина и кодеина становится неполным (фиг.4), до 0,025 М - эти три вещества элюируются как один пик (фиг.5).

По отношению к указанным результатам следует отметить, что широко изучена зависимость удерживания ранообразных классов веществ от концентрации ацетонитрила в подвижной фазе и, следовательно, прогнозирование соответствующих закономерностей можно отнести к очевидным. Зависимость хроматографических свойств веществ от концентрации солей в подвижной фазе, используемая нами при разработке заявляемых способов, исследована значительно хуже. Кроме того, эта зависимость значительно сложнее и имеет индивидуальный характер для каждого отдельного вещества (так, увеличение концентрации калия фосфата 1-замещенного в ПФ снижает удерживание кодеина, но увеличивает удерживание напроксена). Поэтому предсказания в соответствии с этой зависимостью не носят очевидный характер, тем более, когда речь идет о разделении группы веществ, как в рассматриваемом нами случае.

Указанные факты позволяют утверждать, что предлагаемый способ обладает новизной и соответствующим изобретательским уровнем.

Способ осуществляется следующим образом: раствор испытуемого препарата и раствор рабочего стандартного образца (РСО) последовательно хроматографируют на жидкостном хроматографе с ультрафиолетовым (УФ) детектором и обращенно-фазовой хроматографической колонкой в режиме линейного градиента концентрации ацетонитрила в подвижной фазе в течение анализа с использованием в качестве ПФ смеси ацетонитрила с с фосфатным буферным раствором, отличающийся тем, что фосфатный буферный раствор вводится в ПФ с самого начала анализа, а его концентрация в течение всего анализа постоянна и равна 0,004-0,008 М.

Способ иллюстрируется следующим примером.

Количественное определение анальгина, напроксена, кофеина, кодеина и фенобарбитала в таблетках «Пенталгин Н».

Для приготовления испытуемого раствора около 0,146 г (точная навеска) тщательно растертых таблеток и 0,5 г натрия сульфита хч помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляют 10 мл ацетонитрила и 10 мл воды и перемешивают в течение 3 минут. Полученный раствор доводят до метки водой, перемешивают и фильтруют через гидрофильный мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм (например, фирмы «Миллипор»), отбрасывая первые 5 мл фильтрата.

Для приготовления раствора РСО около 0,060 г анальгина (точная навеска) и 0,5 г натрия сульфита хч помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляют 7,0 мл ацетонитрила, 5,0 мл раствора РСО-2, 10 мл воды и перемешивают до растворения веществ. Полученный раствор доводят до метки водой, перемешивают и фильтруют через гидрофильный мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм (например, фирмы «Миллипор»), отбрасывая первые 5 мл фильтрата.

Для приготовления раствора РСО-2 около 0,200 г кофеина, около 0,032 г кодеина фосфата, высушенных до постоянной массы при 105°С, около 0,400 г напроксена и около 0,040 г фенобарбитала и (точные навески) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляют 50 мл ацетонитрила и 20 мл воды и перемешивают до растворения веществ. Полученный раствор доводят водой до метки и перемешивают.

По 5,0 мкл испытуемого раствора и раствора РСО последовательно хроматографируют на жидкостном хроматографе с УФ-детектором и колонкой 3,9×150 мм с сорбентом Nova-Pak С 18 с размером частиц 4 мкм в режиме линейного градиента с использованием в качестве ПФ элюентов А (смесь ацетонитрила, 0,025 М фосфатного буферного раствора и воды в объемном соотношении 10:25:65) и В (смесь ацетонитрила, 0,025 М фосфатного буферного раствора и воды в объемном соотношении 60:25:15). Таким образом, концентрация фосфатного буферного раствора в ПФ в течение анализа остается постоянной и равной 25·0,025/100=0,00625 М, что соответствует примерно середине интервала оптимальных концентраций. Получают не менее 3 хроматограмм каждого раствора.

Состав ПФ в течение анализа изменяется по следующей программе:

Время, мин	Элюент А, %	Элюент В, %
0,0	100,0	0,0
10,0	0,0	100,0
11,0	0,0	100,0
12,0	100,0	0,0
15,0	100,0	0,0

Расход подвижной фазы 1,0 мл/мин. Длина волны детектирования - 212 нм.

Рассчитывают площади пиков определяемых компонентов и находят количество каждого компонента в анализируемых таблетках по формуле:

где S_к и S _ст - средние значения площадей пиков определяемых компонентов на хроматограммах растворов испытуемого и РСО соответственно;

m_ст, m_c и m _н - массы стандарта определяемого вещества в растворе РСО, средняя масса таблетки и масса навески растертых таблеток, взятой для приготовления испытуемого раствора соответственно, в граммах.