композиция для приготовления питательной среды для выделения и культивирования микобактерий

Формула изобретения

Композиция для приготовления питательной среды для выделения и культивирования микобактерий, содержащая яйца куриные, желтки куриных яиц, молоко, картофельный отвар, пептон, глицерин, калий фосфорно-кислый двузамещенный, натрий лимонно-кислый, магний серно-кислый, малахитовый зеленый, алкан и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит 10%-ный раствор фитопрепарата «Люцевита» при следующем соотношении компонентов,г:

Яйца куриные	400,0-500,0
Желтки куриных яиц	90,0-100,0
Молоко, мл	140,0-160,0
Картофельный отвар, мл	140,0-160,0
2%-ный раствор малахитового зеленого	10,0-12,5
Калий фосфорно-кислый двузамещенный	0,14-0,16
Натрий лимонно-кислый	0,14-0,16
Магний серно-кислый	0,14-0,16
Пептон	0,8-1,0
Глицерин	3,2-4,0
Алкан	15,3-30,6
Вода дистиллированная, мл	До 140,0-160,0
10%-ный раствор фитопрепарата «Люцевита», мл	0,25-0,5

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и может быть использовано для лабораторной диагностики туберкулеза.

Известна плотная питательная среда для выделения из биоматериала животных и культивирования микобактерий туберкулеза (ФАСТ-ЗЛ), содержащая яйца куриные, желтки яиц, молоко, картофельный отвар, глицерин, пептон, малахитовый зеленый, раствор минеральных солей и один из алканов с длиной цепи от С₁₄-С ₁₆ (1).

Однако известная среда не позволяет выявлять микобактерии с ослабленной жизнеспособностью.

Цель изобретения - повышение выделяемости микобактерий туберкулеза при посевах проб биологического материала и объектов внешней среды.

Это достигается тем, что в среду Фаст-3Л перед посевом в качестве стимулятора роста микобактерий дополнительно вводят 10% стерильный раствор фитопрепарата «Люцевита» в дозе 0,25-0,5 мл на пробирку, содержащую 4-5 мл среды. Фитопрепарат изготовляется в ЗАО «Люцевита» регистрационный номер №004836.Р.643.09.2002.

Фитопрепарат «Люцевита» - это биологически активный на основе экстракта люцерны, полученный обработкой его экстрагентом, содержащим смесь солей Mn, Со, Cr, V, Zn, Fe, Cu, Ti и Мо.

Фитопрепарат «Люцевита» содержит до 20 жизненно необходимых аминокислот, витамины группы В, Е, К, макро- и микроэлементы, карбоновые (янтарная, щавелевая) и фенолкарбоновые кислоты, белки, углеводы, сапонины, изофлавоны (2).

«Люцевита», добавленная в питательную среду Фаст-ЗЛ, благотворно влияет на рост и размножение микобактерий, особенно патогенных, у которых снижена биохимическая активность, и они значительно медленнее размножаются, содержат меньше энзимов и ростовых веществ. Внесение дополнительно в питательные среды биологически активных добавок позволяет обогатить их состав по белкам, витаминам, макро- и микроэлементам, которые необходимы для построения клеточного материала и повышения ферментативной активности микобактерий.

Пример

Было испытано влияние различных доз "Люцевита" на выделяемость микобактерий из различных объектов.

С этой целью были приготовлены питательные среды при следующем соотношении компонентов, г:

Яйца куриные	400,0-500,0
Желтки куриных яиц	90,0-100,0
Молоко, мл	140,0-160,0
Картофельный отвар, мл	140,0-160,0
2%-ный раствор малахитового зеленого	10,0-12,5
Солевой раствор:
Калий фосфорнокислый двузамещенный	0,14-0,16
Натрий лимоннокислый	0,14-0,16
Магний сернокислый	0,14-0,16
Пептона	0,8-1,0
Глицерина	3,2-4,0
Алкан	15,3-30,6
Вода дистиллированная, мл	До 140,0-160,0
10%-ный раствор фитопрепарата «Люцевита», мл	По 0,03; 0,12; 0,25; 0,5

В качестве контроля использовали питательную среду Фаст-ЗЛ без добавления фитопрепарата.

Исследуемым материалом служили лимфатические узлы, молоко, навоз от коров, положительно реагировавших на ППД-туберкулин для млекопитающих. Предварительную предпосевную обработку проводили по методу А.П.Аликаевой. После посева пробирки помещали в термостат и инкубировали при 38°С в течение 60 дней. Результаты исследований представлены в таблице.

Влияние различных доз фитопрепарата «Люцевита» на выделяемость микобактерий из биоматериала
Исследуемый материал	Количество проб	Рост на питательной среде Фаст-ЗЛ
		контроль		с добавлением "Люцевита"
		кол-во	%	0,03		0,12		0,25		0,5
				кол-во	%	кол-во	%	кол-во	%	кол-во	%
Лимфатические узлы	9	6	66,7	4	44,4	8	88,8	9	100	9	100
Молоко	26	11	42,3	8	30,8	16	61,5	25	88,5	24	92,3
Навоз	25	11	44,0	5	19,2	10	38,5	13	50,0	23	92,0

Данные опыта показывают, что добавление в среду фитопрепарата в дозе 0,03 мл не оказывает влияния на повышение выделяемости микобактерий. При добавлении "Люцевита" в дозе 0,12 мл повышается выделяемость микобактерий из молока до 61,5% и из лимфоузлов до 88,8%. Наиболее высокие результаты во всех случаях получены при добавлении "Люцевита" в дозе 0,25-0,5 мл. Рост культур микобактерий отмечается в 88,5-100,0% случаев.

Таким образом, предлагаемая питательная среда, которая дополнительно содержит биологически активную добавку фитопрепарата «Люцевита» в дозе 0,25-0,5 мл на пробирку, способствует повышению выделяемости микобактерий при посеве проб биоматериала (лимфатические узлы, молоко) и объектов внешней среды (корма, навоз), что позволяет сделать вывод о соответствии заявляемого решения критериям новизна, изобретательский уровень, промышленная применяемость.

Источники информации

1. А.С. №2059728 С12Q 1/04. Питательная среда для выделения из биоматериала животных и культивирования микобактерий туберкулеза. Авт.: Ходун Л.М., Таллер Л.А. и др.

2. Патент РФ №2176918 СЗ. Биологически активный препарат на основе экстракта люцерны и способ его получения. Авт.: Грищенко В.В., Жолнин А.В., Камынин А.В. и др.