способ определения количественного состава многокомпонентного лекарственного препарата противопростудного, антиаллергического действия

Формула изобретения

Способ определения количественного состава многокомпонентного лекарственного препарата методом обращенно-фазовой ВЭЖХ с ультрафиолетовым спектрофотометрическим детектором и обращенно-фазовой хроматографической колонкой в режиме линейного градиента концентрации ацетонитрила в подвижной фазе в течение анализа с использованием в качестве подвижной фазы смеси ацетонитрила с фосфатным буферным раствором, отличающийся тем, что при анализе препарата противопростудного, антиаллергического действия, содержащего аскорбиновую кислоту, парацетамол, фенирамина малеат и фенилэфрина гидрохлорид, в качестве растворителя пробы используют 0,1%-ный раствор ортофосфорной кислоты с добавлением 5 об.% ацетонитрила, а детектирование ведут при длине волны 273 нм.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), а именно к способам определения количественного состава многокомпонентных лекарственных препаратов противопростудного, антиаллергического действия, и может быть использовано в практике контрольно-аналитических лабораторий фармацевтических предприятий и аптечной сети. Способ относится к числу массовых.

В состав препарата противопростудного, антиаллергического действия «Инфлюнорм» в качестве действующих веществ входят аскорбиновая кислота (АК) (0,05 г), парацетамол (0,325 г), фенирамина малеат (0,02 г), фенилэфрина г/х (0,01 г) и вспомогательные вещества и наполнители (до 15 г). В связи с комплексным составом анализируемого препарата проблема обеспечения и контроля качества этого препарата, с одной стороны, чрезвычайно актуальна, а с другой - очень сложна. Анализ затруднен и различием химических свойств компонентов (кислоты, основания, нейтральные соединения), и нестабильностью АК в водных растворах.

В литературе не описаны методы анализа препаратов, идентичных по составу порошку «Инфлюнорм».

Наиболее близким к заявляемому изобретению по составу анализируемых препаратов, поставленной задаче, техническому решению и достигаемым результатам является способ определения количественного состава многокомпонентного лекарственного препарата «Пенталгин от простуды» (Г.Б.Голубицкий, Е.В.Будко, М.В.Покровский, Е.Ф.Прохода и Е.В.Захарова. Способ количественного анализа многокомпонентных лекарственных препаратов жаропонижающего, аналгезирующего, противопростудного действия. Патент РФ 2267115), в котором анализ проводят методом обращенно-фазовой ВЭЖХ в режиме линейного градиента, наклон и продолжительность которого определены свойствами компонентов анализируемого препарата. В качестве ПФ используют смеси ацетонитрила с буферным раствором (0,025 М раствор калия фосфата однозамещенного - КН ₂PO₄, рН которого доводят до 3,0 добавлением концентрированной ортофосфорной кислоты). В этом способе для повышения стабильности АК в качестве растворителя в испытуемом растворе используют 0,025 М фосфатный буферный раствор и добавляют 1,0 мг/мл сульфита натрия. Детектирование всех препаратов ведут при 216 нм, что обеспечивает оптимальную чувствительность для всех определяемых веществ, в том числе для кодеина фосфата, содержащегося в препарате в относительно малых количествах.

При воспроизведении описанного способа для препарата «Инфлюнорм» было установлено, что указанные условия не являются оптимальными с точки зрения стабильности АК. Это связано с тем, что «Инфлюнорм» содержит большее количество вспомогательных веществ кислого характера, чем гранулированный порошок «Пенталгин от простуды». Эти вспомогательные вещества сдвигают рН испытуемого раствора в область относительной нестабильности АК, что снижает точность ее определения. Кроме этого, эти вещества дают на хроматограмме испытуемого раствора пики, частично перекрывающиеся с пиком АК, что также ухудшает достоверность результатов (фиг.1).

Задачей настоящего изобретения является разработка способа определения количественного состава гранулированного порошка «Инфлюнорм» с обеспечением оптимальной стабильности АК и полного разделения ее пиков с пиками вспомогательных веществ.

Поставленная задача достигается методом обращенно-фазовой ВЭЖХ с ультрафиолетовым спектрофотометрическим детектором с помощью предлагаемого способа, который заключается в том, что анализ ведут в режиме линейного градиента концентрации ацетонитрила в подвижной фазе в течение анализа с использованием в качестве ПФ смеси ацетонитрила с с фосфатным буферным раствором, отличающегося тем, что при анализе препарата, содержащего АК, парацетамол, фенирамина малеат и фенилэфрина г/х, в качестве растворителя пробы используют 0,1% раствор ортофосфорной кислоты с добавлением 5 об.% ацетонитрила, а детектирование ведут при длине волны 273 нм.

Авторами данной заявки экспериментально установлено, что такой состав растворителя обеспечивает максимальную стабильность АК в водно-органическом растворе. Представленная зависимость константы скорости разложения АК от рН (фиг.2 и табл.1) имеет плато максимальных значений в диапазоне 4÷6 и показывает минимальную скорость разложения в кислой и слабощелочной средах. Эта зависимость подтверждает обоснованность условий, выбранных ранее для гранулированного порошка «Пенталгин от простуды». В то же время для порошка «Инфлюнорм» более целесообразен выбор растворителя с низким рН в связи с присутствием в порошке кислотных компонентов.

Кроме того, авторами данной заявки установлено, что скорость разложения аскорбиновой кислоты уменьшается в присутствии ацетонитрила (табл.2). Так, при добавлении к раствору АК 5 об.% CH₃CN скорость деструкции снижается более чем в 60 раз. При большем содержании CH₃ CN исследование не проводили, поскольку введение органического растворителя в больших количествах нецелесообразно по практическим соображениям (в частности, ухудшается растворимость АК).

Измерение поглощения определяемых веществ при 273 нм позволяет обеспечить не только приемлемую чувствительность определения, но и оптимальную его селективность. При этой длине волны вспомогательные компоненты порошка не поглощают и не мешают определению АК (фиг.3). Кроме этого, эта длина волны более предпочтительна и для детектирования парацетамола, так как при ней высота его пика составляет около 1,4 ед. ОП и нет опасности выхода за пределы линейного динамического диапазона спектрофотометрического детектора, что имеет место при 216 нм (высота пика более 2,0 ед. ОП).

Найденные авторами настоящей заявки условия анализа порошка «Инфлюнорм» не являются заранее определенными и не вытекают с очевидностью из существующего уровня техники. Для их регламетации требовалось провести систематическое исследование, что и было выполнено в данной работе. Это позволяет утверждать, что предлагаемый способ обладает новизной и соответствующим изобретательским уровнем.

Способ осуществляется следующим образом: раствор испытуемого препарата и раствор рабочего стандартного образца (РСО) последовательно хроматографируют на жидкостном хроматографе с ультрафиолетовым (УФ) детектором и обращенно-фазовой хроматографической колонкой в режиме линейного градиента концентрации ацетонитрила в подвижной фазе в течение анализа с использованием в качестве ПФ смеси ацетонитрила с с фосфатным буферным раствором, отличающийся тем, что при анализе препарата, содержащего АК, парацетамол, фенирамина малеат и фенилэфрина г/х, в качестве растворителя пробы используют 0,1% раствор ортофосфорной кислоты с добавлением 5 об.% ацетонитрила, а детектирование ведут при длине волны 273 нм.

Способ иллюстрируется следующим примером.

Количественное определение аскорбиновой кислоты, парацетамола, фенирамина малеата и фенилэфрина г/х в гранулированном порошке «Инфлюнорм».

Для приготовления испытуемого раствора около 7,500 г (точная навеска) анализируемого порошка помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляют 10 мл 0,1% раствора Н ₃PO₄ и 5 мл CH₃ CN и перемешивают в течение 3 минут. Полученный раствор доводят до метки 0,1% раствором Н₃PO ₄, перемешивают и фильтруют через гидрофильный мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм (например, фирмы «Миллипор»), отбрасывая первые 5 мл фильтрата.

Для приготовления раствора РСО около 0,360 г парацетамола и 0,05 г АК (точные навески) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляют 5,0 мл СН ₃CN, 10 мл 0,1% раствора Н₃PO ₄, 10,0 мл раствора РСО-2, и перемешивают до растворения веществ. Полученный раствор доводят до метки 0,1% раствором Н ₃PO₄, перемешивают и фильтруют через гидрофильный мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм (например, фирмы «Миллипор»), отбрасывая первые 5 мл фильтрата.

Для приготовления раствора РСО-2 около 0,100 г фенирамина малеата и около 0,050 г фенилэфрина г/х (точные навески) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляют 5 мл CH₃ CN и 20 мл воды и перемешивают до растворения веществ. Полученный раствор доводят водой до метки и перемешивают.

По 5,0 мкл испытуемого раствора и раствора РСО последовательно хроматографируют на жидкостном хроматографе с УФ-детектором и колонкой 4,6×150 мм с защитной предколонкой 4,6×12,5 мм, заполненными сорбентом Zorbax SB C8 с размером частиц 3,5 мкм в режиме линейного градиента с использованием в качестве ПФ элюентов А (0,025 М фосфатный буферный раствор, рН котрого доведен до 3,0 добавлением Н ₃PO₄) и В (смесь CH ₃CN и 0,025 М фосфатного буферного раствора с рН 3,0 в объемном соотношении 2:3). Получают не менее 3 хроматограмм каждого раствора.

Состав ПФ в течение анализа изменяется по следующей программе:

Время, мин	Элюент А, %	Элюент В, %
0,0	100,0	0,0
10,0	0,0	100,0
11,0	0,0	100,0
12,0	100,0	0,0
15,0	100,0	0,0

Расход подвижной фазы 1,0 мл/мин. Длина волны детектирования - 273 нм Рассчитывают площади пиков определяемых компонентов и находят количество каждого компонента в анализируемом порошке по формуле

где S_к и S _ст - средние значения площадей пиков определяемых компонентов на хроматограммах растворов испытуемого и РСО соответственно;

m_ст, m_с и m _н - массы стандарта определяемого вещества в растворе РСО, масса дозы порошка и масса навески порошка, взятой для приготовления испытуемого раствора, соответственно, в граммах.

В таблице 3 представлены метрологические характеристики анализа модельных смесей, содержащих все действующие и все вспомогательные вещества порошка. Видно, что относительная погрешность анализа всех компонентов, рассчитанная по методу «введено-найдено», значительно меньше интервалов допустимых содержаний этих компонентов и во всех случаях меньше 1,0%. Таким образом, способ обеспечивает достоверность результатов.

В таблице 4 представлены результаты анализа порошка (опытные лабораторные работы) и их метрологические характеристики. Все образцы соответствуют требованиям нормативной документации по содержанию действующих веществ. Воспроизводимость результатов анализа высокая.

Константы скорости разложения аскорбиновой кислоты при разных рН водных растворов (n=10; Р=0,95). Состав растворов: с_AK=0,25 мг/мл; рН 1,4 - 0,1% Н₃РО₄; 2,9÷8,4 - 0,05М К₂HPO₄+Н ₃PO₄ до необходимого рН.

Таблица 1
Состав раствора		k×10 3, мин-1	s k 2×106	sk×10 3	, %
рН 0,05М КН 2PO4	1,4	0,44	0,0036	0,06	8,14
	2,9	2,11	0,0196	0,14	4,00
	3,9	4,97	0,0049	0,07	0,83
	4,4	8,31	0,0961	0,31	2,28
	5,6	8,47	0,2704	0,52	3,80
	6,8	1,89	0,0196	0,14	4,58
	7,2	0,47	0,0025	0,05	6,86
	7,8	0,99	0,0025	0,05	3,07
	8,4	0,72	0,0009	0,03	2,26

Константы скорости разложения аскорбиновой кислоты при разном содержании ацетонитрила в растворе. c _АК=0,25 мг/мл; рН 5,6 (n=10; Р=0,95)

Таблица 2
Состав раствора		k×10 3, мин-1	s k 2×106	sk×10 3	, %
с(СН 3CN), об.%	0	8,47	0,0900	0,3	2,8
	0,2	1,98	0,0064	0,08	2,6
	1,0	1,04	0,0016	0,04	2,4
	5,0	0,14	0,0009	0,03	15,2

Метрологические характеристики методики определения аскорбиновой кислоты, парацетамола, фенирамина малеата и фенилэфрина г/х в гранулированном порошке «Инфлюнорм»

Таблица 3
Компоненты		Метрологические характеристики
		smax, г	s 2 max	max, %	е r ср, %	еr, %	e r max, %	Kкорр
Аскорбиновая кислота	Ароматизатор «лимон»	1,6*10 -4	2,5*10-8	3,0	-0383	0,244	-2,17	0,994
	-«- апельсин»	1,7*10-4	2,9*10 -8	3,0	-0,871	0,202	-2,17	0,987
	-«- «малина»	1,9*10-4	3,8*10 -8	3,2	-0,219	0,284	2,46	0,970
Парацетамол	Ароматизатор «лимон»	6,9*10 -4	4,7*10-7	1,7	-0,238	0,280	1,66	0,992
	-«- апельсин»	7,7*10-4	5,9*10 -7	2,1	0,119	0,248	1,66	0,993
	-«- «малина»	6,9*10-4	4,8*10 -7	3,4	0,232	0,255	1,66	0,994
Фенилэфрина г/х	Ароматизатор «лимон»	2,0*10 -5	3,0*10-10	1,4	-0,541	0,221	-2,16	0,998
	-«- апельсин»	1,8*10-5	3,2*10 -10	1,6	-0,060	0,158	-1,66	0,999
	-«- «малина»	4,5*10-5	2,1*10 -9	3,7	0,205	0,191	2,49	0,999
Фенирамина малеат	Ароматизатор «лимон»	4,0*10 -5	1,6*10-9	1,4	-0,241	0,226	1,76	0,998
	-«- апельсин»	4,8*10-5	23*10 -9	2,1	0,156	0,160	1,76	0,999
	-«- «малина»	9,7*10-5	9,4*10 -9	4,0	0,294	0,228	2,47	0,991
Обозначения: smax - максимальное значение стандартного отклонения среднего результата; s2 max - максимальное значение дисперсии среднего результата; max - максимальное значение относительного доверительного интервала; er ср - среднее значение относительной погрешности; e r max - максимальное значение относительной погрешности; еr - доверительный интевал относительной погрешности; Ккорр - коэффициент корреляции линейной зависимости площади хроматографического пика от введенного количества.

Результаты анализа гранулированного порошка «Инфлюнорм» (опытные лабораторные работы с ароматизатором «Лимон» (а), «Апельсин» (б) и «Малина» (в).

Таблица 4
Компоненты	Содержание в одной дозе порошка (15 г), г (n=18; Р=0,95)
	Норма по НД	Xср	S	Sxcp	Хср	, %
Аскорбиновая кислота	0,045-0,055	а) 0,04974 б) 0,05104 в) 0,04930	0,00088 0,00151 0,00163	0,00021 0,00036 0,00038	0,00044 0,00075 0,00081	0,88 1,47 1,64
Парацетамол	0,308-0,341	а) 0,3184 б) 0,3157 в) 0,3124	0,00221 0,00220 0,00514	0,00052 0,00052 0,00121	0,00110 0,00109 0,00256	0,35 0,35 0,82
Фенирамина малеат	0,0185-0,0215	а) 0,02024 б) 0,01930 в) 0,01943	0,00023 0,00013 0,00038	0,00005 0,00003 0,00009	0,00011 0,00006 0,00019	0,57 0,33 0,97
Фенилэфрина г/х	0,009-0,0011	а) 0,01056 б) 0,00982 в) 0,01041	0,00013 0,00015 0,00022	0,00003 0,00004 0,00005	0,00006 0,00007 0,00011	0,61 0,76 1,05