способ дифференциальной диагностики первичного и вторичного рака печени

Формула изобретения

Способ дифференциальной диагностики гепатоцеллюлярного рака от холангиоцеллюлярного рака и метастазов рака в печени путем цитологического метода исследования и дополняемого цитохимическим методом, отличающийся тем, что исследуют 3 препарата материала трепан-биопсии опухоли, причем клеточный состав первого препарата окрашивают смесью азур-эозина, второго препарата - альциановым синим, третьего препарата - суданом III; выявляя при их микроскопировании в первом препарате клетки с признаками злокачественности и качественно оценивая наличие или отсутствие в них во 2 препарате включений муцина и в третьем препарате - включений липидов и их производных и при выявлении при микроскопировании злокачественно перерожденных гепатоцитов в первом препарате их относят к трабекулярной или цирротической формам гепатоцеллюлярного рака; при выявлении в первом препарате метаплазированных опухолевых клеток при наличии муцина в опухолевых клетках второго препарата с одновременным выявлением в них внутриклеточных жирных кислот в третьем препарате диагностируют гепатоцеллюлярную аденокарциному и отличают ее клеточные формы от клеточных форм холангиоцеллюлярного рака или метастазов железистого рака в печени, для которых характерно наличие слизи в клетках второго препарата и отсутствие внутриклеточных липидов в третьем препарате; при выявлении в первом препарате анапластических клеточных форм, утративших характерные для гепатоцитов признаки, при отсутствии муцина в клетках второго препарата и наличии внутриклеточных скоплений жирных кислот в третьем препарате диагностируют анапластическую форму гепатоцеллюлярного рака и отличают ее клеточные формы от клеточных форм холангиоцеллюлярного рака и метастазов рака в печени, с характерным в них наличием слизи в клетках второго препарата и отсутствием жирных кислот в опухолевых клетках третьего препарата.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, в частности к патологической анатомии и онкологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики.

Известен способ дифференциальной цитологической диагностики первичных и вторичных опухолей печени (Абрамов М.Г. Клиническая цитология. - М.: Медгиз, 1962. - 412 с.), при котором материал толстоигольной пункционной биопсии печени отпечатывали на предметное стекло и окрашивали смесью азур-эозина.

Известен способ дифференциальной гистологической диагностики первичного и вторичного рака печени (Хмельницкий О.К., Калашников С.А. Гистологическая диагностика пункционной и краевой биопсий печени. - Л.: ЛенГИДУВ, 1970. - 77 с.), при котором гистологический препарат из материала толстоигольной пункционной биопсии готовили с использованием осмиевой проводки или замораживающего микротома с окраской гематоксилином и эозином и дополнительной окраской на жирные кислоты.

Недостатками указанных способов является длительная дорогостоящая осмиевая проводка или технически трудный способ приготовления замороженных срезов из мелких кусочков биоптата.

Цель достигается тем, что применяют способ дифференциальной диагностики гепатоцеллюлярного рака от холангиоцеллюлярного рака и метастазов железистого рака в печени путем цитологического метода исследования и дополняемого цитохимическим методом, отличающегося тем, что исследуют 3 препарата материала трепан-биопсии опухоли, причем клеточный состав первого препарата окрашивают смесью азур-эозина, второго препарата - альциановым синим, третьего препарата - суданом III, выявляя при их микроскопировании клетки с признаками злокачественности и качественно оценивая наличие или отсутствие в них во 2 препарате включений муцина сине-голубого цвета и в третьем препарате - включений липидов от желтовато-красного до бледно-желтого цвета.

От полученного по стандартной методике под контролем ультразвукового аппарата с помощью полуавтоматических одноразовых игл трепан-биоптата хирургическим скальпелем отрезают 3 кусочка. Каждый из 3 кусочков размещают по одному на одно предметное обезжиренное стекло. Биоптат закрепляют на обезжиренном предметном стекле, аккуратно раздавливая и одновременно размазывая по его поверхности. Оставшийся твердый столбик длиной 12 мм помещают в 10% раствор формалина и направляют для гистологического исследования. Фиксированный в 96% растворе этилового спирта материал первого цитологического препарата окрашивают основными красителями (например, смесью азур-эозина - краской Романовского). Фиксированный в 96% растворе этилового спирта материал второго цитологического препарата используют для цитохимического исследования для выявления муцина (например, окраска альциановым синим). Фиксированный в 70% растворе этилового спирта материал третьего цитологического препарата используют для цитохимического исследования для выявления липидов и их производных (например, окраска суданом III).

Выявление при микроскопировании злокачественно-перерожденных гепатоцитов в первом препарате позволяет отнести их к трабекулярной или цирротической формам гепатоцеллюлярного рака. При выявлении в первом препарате метаплазированных опухолевых клеток паренхимы печени дополнительно исследуют второй и третий препараты. Наличие муцина в опухолевых клетках второго препарата с одновременным выявлением внутриклеточных жирных кислот в третьем препарате позволяет диагностировать гепатоцеллюлярную аденокарциному и отличить ее клеточные формы от клеточных форм холангиоцеллюлярного рака или метастаза железистого рака в печени, для которых характерно наличие слизи в опухолевых клетках второго препарата и отсутствие липидов в опухолевых клетках третьего препарата. При выявлении в первом препарате анапластических клеточных форм паренхимы печени, утративших характерные для гепатоцитов признаки, отсутствие муцина в клетках второго препарата и внутриклеточное скопление жирных кислот в третьем препарате позволяют диагностировать анапластическую форму гепатоцеллюлярного рака и отличить ее клеточные формы от клеточных форм холангиоцеллюлярного рака и метастазов железистого рака в печени с характерным наличием слизи в клетках второго препарата и отсутствием жирных кислот в опухолевых клетках третьего препарата.

Применение цитохимического метода позволяет получить результат морфологического исследования в течение 1 часа после биопсии печени в отличие от 4 суток при применении гистохимического метода.

Окраска цитологических препаратов суданом III устраняет необходимость использования сохраняющих жирные кислоты дорогостоящей и редко применяемой в повседневной практике осмиевой проводки гистологического материала или трудоемкой в техническом плане подготовки гистологического препарата из маленького кусочка трепан-биоптата на замораживающем микротоме. Стоимость реактивов для цитохимического метода исследования в 10 раз дешевле стоимости реактивов для осмиевой проводки гистологического препарата.

Способ дифференциальной диагностики гепатоцеллюлярного рака от холангиоцеллюлярного рака и метастазов железистого рака в печени путем цитологического и цитохимического методов исследования материала трепан-биопсий опухолей печени апробирован в 218 случаях. Совпадения гистологического и цитологического методов исследования трепан-биоптата отмечены во всех наблюдениях. Из них приводимые цитологические и цитохимические критерии в 29 случаях позволили отличить гепатоцеллюлярную форму первичного рака печени (в 16 случаях диагностирован трабекулярный, в 6 - цирротический варианты гепатоцеллюлярного рака, в 6 - гепатоцеллюлярная аденокарцинома, в 1 - анапластический вариант гепатоцеллюлярного рака) от 9 случаев холангиоцеллюлярного рака и от 180 случаев метастазов железистого рака различных первичных локализаций.