способ получения препарата фактора свертывания viii крови человека

Классы МПК:A61K38/37 факторы VIII
A61K38/36 факторы свертывания или фибринолиза крови
A61K35/14 кровь
Автор(ы):, , , ,
Патентообладатель(и):Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам "Микроген" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2006-08-31
публикация патента:

Изобретение относится к биотехнологии и касается способов получения фактора VIII свертывающей системы крови человека. Препарат фактора свертывания VIII крови человека получают с помощью получения криопреципитата из плазмы крови, вирусинактивирующей обработки, далее очистки раствора криопреципитата, концентрирования, стерилизующей фильтрации, розлива и высушивания. При этом криопреципитат получают с использованием проточной воды с температурой (4±2)°C при разморозке свежезамороженной плазмы, вирусинактивирующую обработку проводят с использованием сольвент-детергентного метода, хроматографическую очистку вирусинактивированного раствора криопреципитата проводят с использованием сорбента с интервалом фракционирования до 20000 кДа, при скорости потока (20±15) см/ч, с последующим концентрированием ультрафильтрацией на полых волокнах. Добавляют стабилизаторы, в качестве которых используют альбумин в конечной концентрации (5±3) г/л, сахара и аминокислоты до конечной концентрации (10±3) г/л. При высушивании начальная температура препарата составляет минус (25±15)°С, конечная температура составляет (25±8)°С, общая длительность процесса высушивания препарата составляет (45±7) ч. Изобретение обеспечивает повышение стабильности выхода фактора VIII, упрощение технологической схемы производства.

Изобретение относится к биотехнологии и касается способов получения препаратов фактора VIII свертывающей системы крови человека.

Настоящий способ позволяет получать препарат, представляющий собой фактор VIII свертывания крови человека, выделенный методом криофракционирования с последующей хроматографической очисткой из плазмы для фракционирования (ФС 42-0091-02) и применяемый в качестве лекарственного средства.

Известен способ получения очищенных препаратов фактора VIII свертывающей системы крови путем получения криопреципитата из плазмы крови, вирусинактивирующей обработки раствора криопреципитата, хроматографической очистки раствора криопреципитата методом ионообменной хроматографии, стерилизующей фильтрации, розлива, высушивания методом сублимации (Е.П.Иванов, В.Н.Гапанович, А.В.Литвинчук, И.А.Лисовая; НИР I кв. 1996 г. - VI кв. 1997 г.; Новое в трансфузиологии, выпуск 26, Дереза Т.Л., Фетисова Л.В., Ажигирова М.А.).

Однако указанный способ обладает следующими недостатками.

1. Нестабилен выход фактора VIII по отношению к содержанию фактора VIII в исходном криопреципитате (65-100%).

2. При хроматографической очистке применяется дорогостоящий сорбент.

Задачей предлагаемого изобретения является повышение стабильности выхода фактора VIII, упрощение технологической схемы производства, использование более дешевого хроматографического сорбента, повышение рентабельности производства препарата.

Поставленная задача решается путем разработки нового способа, включающего получение криопреципитата из плазмы крови, очистку раствора криопреципитата, концентрирование, стерилизующую фильтрацию, розлив и высушивание.

Новым в предлагаемом способе является то, что криопреципитат получают с использованием проточной воды при разморозке свежезамороженной плазмы, очистку проводят гель-хроматографией с последующим концентрированием ультрафильтрацией на полых волокнах, добавляют стабилизаторы, в качестве которых используют альбумин, сахара и аминокислоты, высушивание стерильного концентрата элюата, содержащего фактор VIII, проводят путем замораживания продукта до температуры минус (25±15)°С и последующего повышения температуры на (5±2)°С каждый час до температуры (25±8)°С.

Сущность способа заключается в следующем.

Свежезамороженную плазму размораживают в проточной воде с температурой (4±2)°С. После полного исчезновения льда и образования осадка в контейнерах с плазмой контейнеры немедленно вскрывают и плазму с осадком закачивают в реактор. Смесь из реактора под давлением стерильного сжатого воздуха (0,022±0,002) МПа поступает на проточные центрифуги. После центрифугирования осадок извлекают из роторов суперцентрифуг и немедленно замораживают при температуре минус (70±10)°С. Полученный осадок, именуемый в дальнейшем криопреципитат, состоит из белков плазмы крови, нерастворимых при температуре плазмы (4±2)°С. Из одного литра плазмы получают от 9 до 11 г криопреципитата.

Центрифугат, представляющий собой криообедненную плазму крови, собирают в емкость и в дальнейшем используют для изготовления других препаратов крови. Выход с данной стадии составляет 38-43% от содержания фактора VIII в исходной плазме. Затем производят очистку раствора криопреципитата следующим образом: в емкость с замороженным криопреципитатом добавляют (40±20) мМ цитратный буфер, рН 6,8-7,5. Затем криопреципитат с цитратным буфером оттаивают на водяной бане при температуре (25±1)°С. Оттаявший раствор криопреципитата центрифугируют, отделяют супернатант раствора криопреципитата и передают его для осветляющей фильтрации. Осветляющую фильтрацию проводят на фильтре, заправленном мембранами с диаметром пор 3,0-10 мкм. Из бака супернатант раствора криопреципитата фильтруют под давлением (0,055±0,005) МПа. В емкость с осветленным супернатантом раствора криопреципитата добавляют раствор гепарина в соотношении 0,3 кг криопреципитата / 7000-10000 Ед гепарина и перемешивают. Затем проводят вирусинактивирующую обработку с использованием сольвент-детергентного метода. При этом супернатант раствора криопреципитата обрабатывают три-н-бутилфосфатом и Твином 80 в конечных концентрациях 0,3% и 1% соответственно в течение (6±2) часов при температуре (30±2)°С и постоянном перемешивании. Также вирусинактивирующую обработку проводят с использованием медного фенантролинового буфера. При этом супернатант раствора криопреципитата обрабатывают раствором медного фенантролинового буфера в соотношении 1 часть медного фенантролинового буфера/40 частей супернатанта раствора криопреципитата. Медный фенантролиновый буфер (CuPH) готовят посредством смешивания 10 мл 0,1 М гистидина, 8 мл 0,01 М сульфата меди 5-водного и 8 мл 0,5 М 1,10-фенантролина. Объем доводят до 200 мл водой для инъекций. Затем проводят хроматографическую очистку вирусинактивированного раствора криопреципитата с использованием сорбента с интервалом фракционирования до 20000 кДа при скорости потока 20±15 см/ч.

После процесса хроматографической очистки элюат, содержащий VIII фактор, собирают в стерильные флаконы и добавляют альбумин до конечной концентрации (5±3) г/л, аланин, или аргинин, или глицин, или гистидин до конечной концентрации (10±3) г/л, мальтозу, или глюкозу, или сорбитол или сахарозу до конечной концентрации (10±3) г/л и замораживают при температуре минус (60±30)°С.

Далее элюат, содержащий фактор VIII, размораживают при температуре (20±1)°С и сливают его в емкость. Затем проводят осветляющую фильтрацию через мембраны с диаметром пор 3,0-10,0 мкм под давлением (0,055±0,005) МПа. Выход с данной стадии составляет 80-85% от содержания фактора VIII в исходном криопреципитате. Затем проводят концентрирование.

Концентрирование проводят методом ультрафильтрации на установке для мембранной фильтрации с использованием мембран, у которых порог отсечения составляет не более 200 кДа. Для этого ультрафильтрационную установку заполняют элюатом, содержащим фактор VIII, и начинают процесс концентрации. Элюат, содержащий фактор VIII, поступая на установку из емкости, циркулирует по замкнутому контуру, создавая тангенциальный поток вдоль волокон по внутренней их части. Часть элюата, содержащего фактор VIII, уходит без фильтрации и возвращается в бутыль. Эта часть раствора называется концентратом и содержит весь материал, задерживающийся в соответствии с размером пор. При каждом цикле пропускания элюата, содержащего фактор VIII, часть проходит через мембраны и направляется в отдельную емкость. Эта часть называется пермеатом, который является отходом производства и содержит воду с растворенными в ней солями. Пермеат периодически (не реже, чем через 15 мин) проверяют на содержание белка. Для этого смешивают в пробирке равные объемы пермеата и 20% раствора трихлоруксусной кислоты. Образование осадка в пробирке указывает на нарушение целостности мембран. Элюат, содержащий фактор VIII, концентрируют до значений от 10 до 15 ME фактора VIII в 1 мл элюата, или от 20 и более ME фактора VIII в 1 мл элюата. Выход с данной стадии составляет 95-99% от содержания фактора VIII в исходном элюате, содержащем фактор VIII. Затем проводят стерилизующую фильтрацию одновременно с процессом розлива препарата во флаконы. Фильтрационная система состоит из емкости, фильтра и капсулы. Монтаж системы проводят с соблюдением правил асептики. После этого концентрат элюата, содержащий фактор VIII, из емкости под давлением (0,055±0,005) МПа фильтруют через фильтр, заправленный мембранами с размером пор 3,0-10,0 мкм, а затем через фильтр, заправленный мембранами с размером пор 0,45 мкм, 0,22 мкм. Стерильный раствор концентрата элюата разливают во флаконы.

Выход с данной стадии составляет 83-85% от содержания фактора VIII в исходном концентрате элюата, содержащем фактор VIII.

Высушивание стерильного концентрата элюата, содержащего фактор VIII, начинают с замораживания продукта при температуре минус (25±5)°С. Затем повышают температуру на (5±2)°С каждый час до температуры (25±8)°С. Конечная температура продукта должна быть (25±8)°С. Общая длительность процесса высушивания препарата 45±7 ч. Остаточная влажность препарата должна быть 2,2±0,2%.

Выход с данной стадии составляет 80-90% от содержания фактора VIII в стерильном концентрате элюата, содержащем фактор VIII.

Пример 1.

Свежезамороженную плазму размораживали в проточной воде с температурой 2°С. После полного исчезновения льда и образования осадка в контейнерах с плазмой контейнеры немедленно вскрывали и плазму с осадком закачивали в реактор. Смесь из реактора под давлением стерильного сжатого воздуха 0,020 МПа поступала на проточные центрифуги. После центрифугирования осадок извлекали из роторов суперцентрифуг и немедленно замораживали при температуре минус 60°С.

Центрифугат собирали в емкость и в дальнейшем использовали для изготовления препаратов иммуноглобулина и альбумина.

Выход с данной стадии составил 38% от содержания фактора VIII в исходной плазме. Затем производили очистку раствора криопреципитата следующим образом: в емкость с замороженным криопреципитатом добавляли 20 мМ цитратный буфер, рН 6,8. Затем криопреципитат с цитратным буфером оттаивали на водяной бане при температуре 24°С. Оттаявший раствор криопреципитата центрифугировали, отделяли супернатант раствора криопреципитата и передавали его для осветляющей фильтрации. Осветляющую фильтрацию проводили на фильтре, заправленном мембранами с диаметром пор 3,0 мкм. Из бака супернатант раствора криопреципитата фильтровали под давлением 0,05 МПа в стерильную емкость. В емкость с осветленным супернатантом раствора криопреципитата добавляли раствор гепарина в соотношении 0,3 кг криопреципитата/7000 Ед гепарина и перемешивали. Затем проводили вирусинактивирующую обработку с использованием сольвент-детергентного метода. При этом супернатант раствора криопреципитата обрабатывали три-н-бутилфосфатом и Твином 80 в конечных концентрациях 0,3% и 1% соответственно в течение (6±2) часов при температуре (3±2)°С и постоянном слабом перемешивании. Затем проводили хроматографическую очистку вирусинактивированного раствора криопреципитата с использованием сорбента с интервалом фракционирования до 20000 кДа при скорости потока 5 см/ч.

После процесса хроматографической очистки элюат, содержащий VIII фактор, собирали в стерильные флаконы и добавляли альбумин до конечной концентрации 2 г/л, глицин до конечной концентрации 7 г/л, сахарозу до конечной концентрации 7 г/л и замораживали при температуре минус 40°С. Далее элюат, содержащий фактор VIII, размораживали при температуре 19°С и сливали его в емкость. Затем проводили осветляющую фильтрацию через мембраны с диаметром пор 3,0 мкм под давлением 0,05 МПа в стерильную емкость. Выход с данной стадии составлял 80% от содержания фактора VIII в исходном криопреципитате. Затем проводили концентрирование.

Концентрирование проводили методом ультрафильтрации на установке для мембранной фильтрации с использованием мембран, у которых порог отсечения составляет не более 200 кДа. Для этого ультрафильтрационную установку заполняли элюатом, содержащим фактор VIII, и начинали процесс концентрации. Элюат, содержащий фактор VIII, поступая на установку из емкости, циркулировал по замкнутому контуру, создавая тангенциальный поток вдоль волокон по внутренней их части. Пермеат через каждые 15 мин проверяли на содержание белка. Для этого смешивали в пробирке равные объемы пермеата и 20% раствора трихлоруксусной кислоты. Элюат, содержащий фактор VIII, концентрировали до 13 ME фактора VIII в 1 мл. Выход с данной стадии составлял 99% от содержания фактора VIII в исходном элюате, содержащем фактор VIII. Затем проводили стерилизующую фильтрацию одновременно с процессом розлива препарата во флаконы. Фильтрационная система состояла из емкости, фильтра и капсулы. Монтаж системы проводили с соблюдением правил асептики. После этого концентрат элюата, содержащий фактор VIII, из емкости под давлением 0,05 МПа фильтровали через фильтр, заправленный мембранами с размером пор 3,0 мкм, а затем через фильтр, заправленный мембранами с размером пор 0,45 мкм, 0,22 мкм. Стерильный раствор концентрата элюата разливали во флаконы.

Выход с данной стадии составлял 83% от содержания фактора VIII в исходном концентрате элюата, содержащем фактор VIII.

Высушивание стерильного концентрата элюата, содержащего фактор VIII, начинали с замораживания продукта при температуре минус 10°С. Затем повышали температуру на 3°С каждый час до температуры 17°С. Конечная температура продукта составляла 17°С. Общая длительность процесса высушивания препарата составляла 38 ч. Остаточная влажность препарата составляла 2,4%.

Выход с данной стадии составлял 80% от содержания фактора VIII в стерильном концентрате элюата, содержащем фактор VIII.

Пример 2.

Свежезамороженную плазму размораживали в проточной воде с температурой 6°С. После полного исчезновения льда и образования осадка в контейнерах с плазмой контейнеры немедленно вскрывали и плазму с осадком закачивали в реактор. Смесь из реактора под давлением стерильного сжатого воздуха 0,024 МПа поступала на проточные центрифуги. После центрифугирования осадок извлекали из роторов суперцентрифуг и немедленно замораживали при температуре минус 80°С.

Центрифугат собирали в емкость и в дальнейшем использовали для изготовления препаратов иммуноглобулина и альбумина.

Выход с данной стадии составил 43% от содержания фактора VIII в исходной плазме. Затем производили очистку раствора криопреципитата следующим образом: в емкость с замороженным криопреципитатом добавляли 60 мМ цитратный буфер, рН 7,5. Затем криопреципитат с цитратным буфером оттаивали на водяной бане при температуре 26°С. Оттаявший раствор криопреципитата центрифугировали, отделяли супернатант раствора криопреципитата и передавали его для осветляющей фильтрации. Осветляющую фильтрацию проводили на фильтре, заправленном мембранами с диаметром пор 10,0 мкм. Из бака супернатант раствора криопреципитата фильтровали под давлением 0,06 МПа в стерильную емкость. В емкость с осветленным супернатантом раствора криопреципитата добавляли раствор гепарина в соотношении 0,3 кг криопреципитата/10000 Ед гепарина и перемешивали. Затем проводили вирусинактивирующую обработку с использованием медного фенантролинового буфера. При этом супернатант раствора криопреципитата обрабатывали раствором медного фенантролинового буфера в соотношении 1 часть медного фенантролинового буфером/40 частей супернатанта раствора криопреципитата. Медный фенантролиновый буфер (CuPH) готовили посредством смешивания 10 мл 0,1 М гистидина, 8 мл 0,01 М сульфата меди 5-водного и 8 мл 0,5 М 1,10-фенантролина. Объем доводили до 200 мл водой для инъекций. Затем проводили хроматографическую очистку вирусинактивированного раствора криопреципитата с использованием сорбента с интервалом фракционирования до 20000 кДа при скорости потока 35 см/ч.

После процесса хроматографической очистки элюат, содержащий VIII фактор, собирали в стерильные флаконы и добавляли альбумин до конечной концентрации 8 г/л, глицин до конечной концентрации 13 г/л, сахарозу до конечной концентрации 13 г/л и замораживали при температуре минус 80°С. Далее элюат, содержащий фактор VIII, размораживали при температуре 21°С и сливали его в емкость. Затем проводили осветляющую фильтрацию через мембраны с диаметром пор 10,0 мкм под давлением 0,06 МПа в стерильную емкость. Выход с данной стадии составлял 85% от содержания фактора VIII в исходном криопреципитате. Затем проводили концентрирование.

Концентрирование проводили методом ультрафильтрации на установке для мембранной фильтрации с использованием мембран, у которых порог отсечения составляет не более 200 кДа. Для этого ультрафильтрационную установку заполняли элюатом, содержащим фактор VIII, и начинали процесс концентрации. Элюат, содержащий фактор VIII, поступая на установку из емкости, циркулировал по замкнутому контуру, создавая тангенциальный поток вдоль волокон по внутренней их части. Пермеат через каждые 15 мин проверяли на содержание белка. Для этого смешивали в пробирке равные объемы пермеата и 20% раствора трихлоруксусной кислоты. Элюат, содержащий фактор VIII, концентрировали до 22 ME в 1 мл элюата. Выход с данной стадии составлял 95% от содержания фактора VIII в исходном элюате, содержащем фактор VIII. Затем проводили стерилизующую фильтрацию одновременно с процессом розлива препарата во флаконы. Фильтрационная система состояла из емкости, фильтра и капсулы. Монтаж системы проводили с соблюдением правил асептики. После этого концентрат элюата, содержащий фактор VIII, из емкости под давлением 0,06 МПа фильтровали через фильтр, заправленный мембранами с размером пор 10,0 мкм, а затем через фильтр, заправленный мембранами с размером пор 0,45 мкм, 0,22 мкм. Стерильный раствор концентрата элюата разливали во флаконы.

Выход с данной стадии составлял 85% от содержания фактора VIII в исходном концентрате элюата, содержащем фактор VIII.

Высушивание стерильного концентрата элюата, содержащего фактор VIII, начинали с замораживания продукта при температуре минус 40°С. Затем повышали температуру на 7°С каждый час до температуры 33°С. Конечная температура продукта составляла 33°С. Общая длительность процесса высушивания препарата составляла 52 ч. Остаточная влажность препарата составляла 2%.

Выход с данной стадии составлял 90% от содержания фактора VIII в стерильном концентрате элюата, содержащем фактор VIII.

Обоснование режимов выполнения заявляемого способа

Разморозка свежезамороженной плазмы в проточной воде с температурой (4±2)°С обеспечивает выход 38-43% от содержания фактора VIII в исходной плазме. Использование проточной воды с температурой ниже 2°С при разморозке свежезамороженной плазмы приводит к пролонгации процесса разморозки и, как следствие, к снижению выхода менее 38% от содержания фактора VIII в исходной плазме. Это обуславливает снижение рентабельности производства, так как уменьшается выход фактора VIII с литра свежезамороженной плазмы, а также усложнение технологической схемы, так как требуется дополнительное концентрированно элюата, содержащего фактор VIII.

Использование проточной воды с температурой выше 6°С при разморозке свежезамороженной плазмы приводит к нарушению процесса выпадения в осадок VIII фактора свертывания, в результате чего его выход в криопреципитате менее 38% от содержания фактора VIII в исходной плазме. Это приводит к снижению рентабельности производства.

При очистке криопреципитата в емкость с осветленным супернатантом раствора криопреципитата добавляют раствор гепарина в соотношении 0,3 кг криопреципитата/7000-10000 Ед гепарина и перемешивают. При добавлении раствора гепарина до конечной концентрации менее 7000 Ед на 0,3 кг криопреципитата выход с данной стадии составляет менее 80% от содержания фактора VIII в исходном криопреципитате, что снижает рентабельность производства препарата. При добавлении раствора гепарина до конечной концентрации более 10000 Ед на 0,3 кг криопреципитата снижается активность фактора VIII в элюате, содержащем фактор VIII, что приводит к усложнению технологической схемы, так как требуется дополнительное концентрированно элюата, содержащего фактор VIII.

При очистке вирусинактивированного раствора криопреципитата методом гель-хроматографии с использованием сорбента с интервалом фракционирования до 20000 кДа при скорости потока 20±5 см/ч обеспечивается выход 80-85% от содержания фактора VIII в исходном криопреципитате. При использовании сорбента с более высоким интервалом фракционирования усиливается взаимодействие молекул фактора VIII с сорбентом. В результате выход VIII фактора снижается и составляет менее 80% от его содержания в исходном криопреципитате. При скорости потока менее 5 см/ч увеличивается время хроматографической очистки, что приводит к усложнению технологической схемы и снижает рентабельность производства препарата. При скорости потока более 35 см/ч снижается качество хроматографической очистки элюата, содержащего фактор VIII, что приводит к усложнению технологической схемы за счет необходимости дополнительных стадий очистки.

При концентрировании элюата, содержащего фактор VIII методом ультрафильтрации на установке для мембранной фильтрации с использованием мембран, у которых порог отсечения составляет не более 200 кДа, выход составляет 95-99% от содержания фактора VIII в исходном элюате, содержащем фактор VIII. При концентрированиии элюата, содержащего фактор VIII с использованием мембран, у которых порог отсечения составляет более 200 кДа, часть молекул фактора VIII проходит через мембраны и попадает в пермеат, который является отходом производства. Это обуславливает снижение выхода фактора VIII менее 95% от содержания в исходном элюате, содержащем фактор VIII.

Добавление альбумина до конечной концентрации (5±3) г/л в элюат, содержащий VIII фактор, стабилизирует молекулу фактора VIII, повышая стабильность выхода фактора VIII после концентрирования, стерилизующей фильтрации и высушивания. Добавление альбумина до конечной концентрации менее 2 г/л обуславливает снижение стабильности молекул фактора VIII, в результате чего снижается выход фактора VIII после концентрирования, стерилизующей фильтрации и высушивания. Таким образом, снижается стабильность выхода VIII фактора свертывания в процессе производства препарата. Добавление альбумина до конечной концентрации более 8 г/л не повышает стабильность молекул фактора VIII, но увеличивает себестоимость препарата, следовательно, снижает рентабельность производства препарата.

Добавление аланина, или аргинина, или глицина, или гистидина до конечной концентрации (10±3) г/л в элюат, содержащий VIII фактор, стабилизирует молекулу фактора VIII, повышая стабильность выхода фактора VIII после концентрирования, стерилизующей фильтрации и высушивания. Добавление аланина, или аргинина, или глицина, или гистидина до конечной концентрации менее 7 г/л обуславливает снижение стабильности молекул фактора VIII, в результате чего снижается выход фактора VIII после концентрирования, стерилизующей фильтрации и высушивания. Таким образом снижается стабильность выхода VIII фактора свертывания в процессе производства препарата. Добавление аланина, или аргинина, или глицина, или гистидина до конечной концентрации более 13 г/л не повышает стабильность молекул фактора VIII, но увеличивает себестоимость препарата, следовательно, снижает рентабельность производства препарата.

Добавление мальтозы, или глюкозы, или сорбитола или сахарозы до конечной концентрации (10±3) г/л в элюат, содержащий VIII фактор стабилизирует молекулу фактора VIII, повышая стабильность выхода фактора VIII после концентрирования, стерилизующей фильтрации и высушивания. Добавление мальтозы, или глюкозы, или сорбитола или сахарозы до конечной концентрации менее 7 г/л обуславливает снижение стабильности молекул фактора VIII, в результате чего снижается выход фактора VIII после концентрирования, стерилизующей фильтрации и высушивания. Таким образом снижается стабильность выхода VIII фактора свертывания в процессе производства препарата. Добавление мальтозы, или глюкозы, или сорбитола, или сахарозы до конечной концентрации более 13 г/л не повышает стабильность молекул фактора VIII, но увеличивает себестоимость препарата, следовательно, снижает рентабельность производства препарата.

При проведении высушивания, включающего замораживание, при температуре минус (25±15)°С, повышение температуры на (5±2)°С в час до конечной температуры (25±8)°С и общей длительности процесса высушивания препарата 45±7 ч, выход составляет 80-90% от содержания фактора VIII в стерильном концентрате элюата, содержащем фактор VIII. Замораживание при температуре менее 10°С обуславливает снижение выхода менее 80% от содержания фактора VIII в стерильном концентрате элюата, содержащем фактор VIII. Замораживание при температуре более 40°С не повышает выход фактора VIII, но увеличивает себестоимость препарата, следовательно, снижает рентабельность производства препарата. При повышение температуры менее чем на 3°С в час или более чем на 7°С в час выход снижается и составляет менее 80% от содержания фактора VIII в стерильном концентрате элюата, содержащем фактор VIII. При длительности процесса высушивания менее 38 часов препарат имеет остаточную влажность более 2,4% и не соответствует требованиям ФСП, предъявляемым к данному препарату. При длительности процесса высушивания более 52 часов выход VIII фактора свертывания снижается и составляет менее 80% от содержания фактора VIII в стерильном концентрате элюата, содержащем фактор VIII.

Полученный заявляемым способом препарат фактора свертывания VIII крови человека обеспечивает увеличение содержания фактора VIII в плазме крови и временно устраняет дефект коагуляции у больных гемофилией А (наследственная кровоточивость, характеризующаяся недостаточной активностью специфического белка плазмы, фактора VIII свертывания крови) и предназначен для лечения и профилактики кровотечений у больных гемофилией А, в том числе и при проведении экстренного или планового хирургического вмешательства.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ получения препарата фактора свертывания VIII крови человека, заключающийся в получении криопреципитата из плазмы крови, вирусинактивирующей обработке, очистке раствора криопреципитата, концентрировании, стерилизующей фильтрации, розливе и высушивании, отличающийся тем, что криопреципитат получают с использованием проточной воды с температурой 4±2°С при разморозке свежезамороженной плазмы, вирусинактивирующую обработку проводят с использованием сольвент-детергентного метода перед очисткой раствора криопреципитата, хроматографическую очистку вирусинактивированного раствора криопреципитата проводят с использованием сорбента с интервалом фракционирования до 20000 кДа, при скорости потока 20±15 см/ч, с последующим концентрированием ультрафильтрацией на полых волокнах, добавлением стабилизаторов, в качестве которых используют альбумин в конечной концентрации 5±3 г/л, сахара и аминокислоты до конечной концентрации 10±3 г/л, при высушивании начальная температура препарата составляет минус 25±15°С, конечная температура составляет 25±8°С, общая длительность процесса высушивания препарата составляет 45±7 ч.


Скачать патент РФ Официальная публикация
патента РФ № 2324495

patent-2324495.pdf
Патентный поиск по классам МПК-8:

Класс A61K38/37 факторы VIII

Патенты РФ в классе A61K38/37:
новые защитные композиции для рекомбинантного фактора viii -  патент 2510279 (27.03.2014)
стабилизация жидких растворов рекомбинантного белка для хранения в замороженном состоянии -  патент 2469739 (20.12.2012)
способ получения концентрата фактора viii из плазмы крови человека -  патент 2445974 (27.03.2012)
сайт-направленная модификация fviii -  патент 2423380 (10.07.2011)
способ получения концентрата фактора фон виллебранда или комплекса "фактор viii/фактор фон виллебранда" и его применение -  патент 2417096 (27.04.2011)
выделенный полипептид ib альфа гликопротеина тромбоцитов человека, слитый белок, молекула днк (варианты), экспрессирующий вектор (варианты), клетка (варианты), способ экспрессии полипептида, способ экспрессии слитого белка, фармацевтическая композиция (варианты), способ ингибирования прикрепления клетки крови к биологической ткани в биологической системе, способ ингибирования прикрепления белка к биологической ткани в биологической системе и способ лечения нарушения -  патент 2403262 (10.11.2010)
композиции и способы терапии и диагностики рака молочной железы -  патент 2344831 (27.01.2009)
способ получения концентрата viii фактора свертывания крови человека и продукт его содержащий -  патент 2326689 (20.06.2008)
стабильная фармацевтическая композиция, содержащая фактор viii -  патент 2314825 (20.01.2008)
комбинированное применение полипептидов фактора vii и полипептидов фактора viii -  патент 2311923 (10.12.2007)

Класс A61K38/36 факторы свертывания или фибринолиза крови

Патенты РФ в классе A61K38/36:
модифицированный фактор виллебранда с удлиненным полупериодом существования in vivo, его применения и способы получения -  патент 2528855 (20.09.2014)
способ коррекции нарушений гемостаза при хроническом калькулезном холецистите на фоне хронического гепатита или цирроза печени -  патент 2526117 (20.08.2014)
очистка и применение фактора, способствующего заживлению ран -  патент 2520817 (27.06.2014)
биогель -  патент 2503464 (10.01.2014)
способ лечения глубоких ожогов на ранних этапах -  патент 2499603 (27.11.2013)
способ коррекции нарушений гемостаза у детей с гемангиомами печени -  патент 2483737 (10.06.2013)
способ лечения острых венозных тромбозов различной локализации на фоне геморрагических осложнений -  патент 2477636 (20.03.2013)
композиции на основе биосовместимых микрочастиц альгиновой кислоты, предназначенные для регулируемого высвобождения активных ингредиентов при внутривенном введении -  патент 2476235 (27.02.2013)
экспрессионная плазмидная днк pcid-proc, кодирующая протеин с человека, и клеточная линия dg-cid-proc-1, продуцирующая рекомбинантный протеин с человека -  патент 2469093 (10.12.2012)
способ герметизации межкишечного анастомоза -  патент 2464942 (27.10.2012)

Класс A61K35/14 кровь

Патенты РФ в классе A61K35/14:
биологический материал, подходящий для терапии остеоартроза, повреждения связок и для лечения патологических состояний суставов -  патент 2529803 (27.09.2014)
метод получения антилютеальной крови - алк, способ лечения и профилактики послеродовых акушерско-гинекологических заболеваний у коров -  патент 2526203 (20.08.2014)
способ активации регенерации миелоидной ткани старых лабораторных животных -  патент 2523574 (20.07.2014)
способ терапии ремиттирующего рассеянного склероза -  патент 2523058 (20.07.2014)
способ лечения хронических воспалительных заболеваний, сопровождающихся иммунодефицитными состояниями -  патент 2522972 (20.07.2014)
способ промышленного получения фибрин-мономера из плазмы крови -  патент 2522237 (10.07.2014)
способ пластики молочной железы -  патент 2521346 (27.06.2014)
очистка и применение фактора, способствующего заживлению ран -  патент 2520817 (27.06.2014)
способ выбора тактики ведения беременных с плацентарной недостаточностью и синдромом задержки роста плода -  патент 2517374 (27.05.2014)
средство для профилактики синдрома хронической усталости у мужчин -  патент 2517217 (27.05.2014)


Наверх